一种瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物种子萌发方法，特别是一种瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法。
【背景技术】
[0002]瘤毛猜牙菜为龙胆科猜牙菜属植物瘤毛猜牙菜Swertia pseudochinensis Hara的干燥全草，俗称“当药”，主产于中国、朝鲜、俄罗斯。味苦，性寒。具有清热解毒，利湿，健胃的功效。主要用于治疗黄疸型肝炎，痢疾，胃痛，消化不良，牙痛，目赤，头痛，口疮；外用可治疮肿。瘤毛獐牙菜为蒙医传统药物，蒙药名为查干一铁木尔一地格达或比拉出特一地格达，主治胆结石，黄疸，食积，肝热，伤热，胃热，应用历史悠久，在蒙医药中有着不可替代的位置。当药在我国主产于北方各省，如河北承德、甘肃定西、呼伦贝尔盟、兴安盟北部，锡林郭勒盟的太仆寺旗和多伦县、伊克昭盟等地，而在南方较少见，产量较少，无法满足市场需求，为了保证市场供应平衡以及人们的身体健康，瘤毛獐牙菜的保护以及扩大繁殖已经刻不容缓。
[0003]在初步的繁殖育苗工作中发现，瘤毛獐牙菜的种子萌发极其困难，严重制约了种苗的供应与品质。而现在组织培养技术发展已经较为成熟，可成为生产优质种苗的有效途径，经组织培养后再移栽大田可大大提高瘤毛獐牙菜的存活率。但瘤毛獐牙菜种子细小，在开展它的组织培养研宄时，常因消毒过度导致种子损伤而无法萌发，成为了制约其通过组织培养方式大量生产种苗的关键因素。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法，它能够提高瘤毛獐芽菜种子在无菌条件下萌发，为通过组织培养技术生产瘤毛獐芽菜组培苗奠定基础。
[0005]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法，包括以下步骤:
[0006](I)种子消毒:将瘤毛獐芽菜种子冲洗干净，放入15-35% (v/v)的84消毒液中浸泡消毒5-15分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子；
[0007](2)无菌萌发:将步骤(I)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23?27°C，光照强度15001ux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0008]本发明的突出优点在于:
[0009](I)采用所述的瘤毛獐芽菜种子消毒方法消毒，对种子的损伤较小，培养后种子易于萌发。
[0010](2)采用所述的瘤毛獐芽菜种子无菌萌发方法进行种子萌发培养，具有种子萌发时间短，发芽率高的特点。
[0011](3)本发明还具有操作简单、方便快捷、成本低等突出优点，通过组织培养途径切实有效地保护及促进瘤毛獐芽菜资源的可持续利用。
【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
[0013]实施例1
[0014]本发明所述的瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法的一个实例，包括以下步骤:
[0015](I)种子消毒:将瘤毛獐芽菜种子冲洗干净，放入15% (v/v)的84消毒液中浸泡消毒15分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子；
[0016](2)无菌萌发:将步骤(I)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23?27°C，光照强度15001ux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，经统计，发芽率为89%。
[0017]实施例2
[0018]本发明所述的瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0019](I)种子消毒:将瘤毛獐芽菜种子冲洗干净，放入25% (v/v)的84消毒液中浸泡消毒10分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子；
[0020](2)无菌萌发:将步骤(I)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23?27°C，光照强度15001ux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，经统计，发芽率为85%。
[0021]实施例3
[0022]本发明所述的瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法的再一个实例，包括以下步骤:
[0023](I)种子消毒:将瘤毛獐芽菜种子冲洗干净，放入35% (v/v)的84消毒液中浸泡消毒5分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子；
[0024](2)无菌萌发:将步骤(I)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23?27°C，光照强度15001ux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，经统计，发芽率为82%。
[0025]实施例4
[0026]本发明所述的瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法的又一个实例，包括以下步骤:
[0027](I)种子消毒:将瘤毛獐芽菜种子冲洗干净，放入20% (v/v)的84消毒液中浸泡消毒8分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子；
[0028](2)无菌萌发:将步骤(I)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23?27°C，光照强度15001ux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为
5.8，经统计，发芽率为91 %。
【主权项】
1.一种瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)种子消毒:将瘤毛獐芽菜种子冲洗干净，放入15-35%(v/v)的84消毒液中浸泡消毒5-15分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子； (2)无菌萌发:将步骤(I)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23?27°C，光照强度15001uX，光照时间为12?14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种瘤毛獐芽菜种子无菌萌发的方法，包括如下步骤：(1)将瘤毛獐芽菜的种子冲洗干净，放入15-35％(v/v)的84消毒液中浸泡消毒5-15分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3次后获得消毒种子；(2)将步骤(1)获得的消毒种子接种到MS培养基培养，在培养温度为23～27℃，光照强度1500lux，光照时间为12～14小时/天的条件下培养15天，种子萌发获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。采用本发明所述的无菌萌发方法，发芽率达到82～91％，有效地解决了瘤毛獐芽菜组织培养种子萌发困难的问题，为实现瘤毛獐芽菜资源的可持续利用奠定了基础。
【IPC分类】A01C1-02, A01C1-08
【公开号】CN104838767
【申请号】CN201510220535
【发明人】马云桐, 韦坤华, 李彦
【申请人】马云桐, 韦坤华, 李彦
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年5月4日