诱导培养基、芽增殖培养基、生根培养基，培养基的PH值为5.7，培养基厚度为1.5 cm；
所述珠芽的芽诱导培养基:MS+2.0mg ? L 1 6-BA+0.5mg ? L ^AA+l.0mg ? L ^T+0.0lmg
?I71 TDZ +7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su+l.0 g ? L-1Ac，
所述芽增殖培养基:MS+1.0mg ? I71 6-BA+0.02mg ? I^TDZ+0.3mg ? L_1NAA+1.0g ? I71 蛋白胨 +7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su +1.5 g ? L-1Ac，
所述生根培养基:l/2MS+0.lmg ? I^NAA+0.8mg ? L_1IBA+ 7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su +1.5g * L_1Ac ；
3)材料消毒处理:将从植株上切下的珠芽用自来水进行表面冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，用自来水滴冲lh后去除珠芽外包皮，用双蒸水冲洗3遍，在超净工作台上用质量分数为75%酒精消毒30s，用质量分数为0.1%升汞消毒13min，无菌水冲4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分，放在灭过菌的培养皿上。
[0022]4)珠芽的芽诱导培养:将经消毒处理后的材料接种在珠芽的芽诱导培养基中进行诱导培养；培养条件:培养室温度为23°C，光照时间12h/d，光照强度为18001x，诱导培养时间30天；
5)芽增殖培养:将经步骤4)诱导得到的丛生芽，切成长l-2cm的块状，接种在芽增殖培养基中进行增殖培养；培养条件:培养室温度为23°C，光照时间12h/d，光照强度为18001x，增殖培养时间35天；
6)诱导生根培养:将经增殖培养出来的带有4片叶子、株高4cm的幼苗单株转移到生根培养基中；所述生根培养的培养条件:培养室温度为23°C，光照时间12h/d，光照强度为18001x，生根培养时间25天；
7)试管苗完成:当试管苗长至5cm高，有4条形态正常的根，有2片叶子，叶长5cm时，完成龙舌兰的植株再生培养。
[0023]将所述步骤7)完成的试管苗进行移栽:将试管苗放在自然光下炼苗4天，再打开瓶盖炼苗2天，用枪状镊把试管苗从培养瓶中逐渐取出并洗去附着在根部上的培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比=1:2的混合基质中，用带气孔的玻璃罩罩住移栽试管苗，温度控制在25°C，湿度应保持在70%，再生植株成活率在93%以上。
[0024]实施例3
一种龙舌兰珠芽诱导芽的方法，步骤如下:
1)取材方法:选取当年抽笞、饱满的金边龙舌兰(命areamericanaL.var.marginataalba Trel)的珠芽为材料；
2)培养基配制:分别配制珠芽的芽诱导培养基、芽增殖培养基、生根培养基，培养基的PH值为5.8，培养基厚度为1.6 cm；
所述珠芽的芽诱导培养基:MS+2.0mg ? L 1 6-BA+0.5mg ? L ^AA+l.0mg ? L ^T+0.0lmg
?I71 TDZ +7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su+l.0 g ? L-1Ac，
所述芽增殖培养基:MS+1.0mg ? I71 6-BA+0.02mg ? I^TDZ+0.3mg ? L_1NAA+1.0g ? I71 蛋白胨 +7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su +1.5 g ? L-1Ac，
所述生根培养基:l/2MS+0.lmg ? L_1NAA+1.0mg ? L_1IBA+ 7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su +1.5g * L_1Ac ；
3)材料消毒处理:将从植株上切下的珠芽用自来水进行表面冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，用自来水滴冲40分钟后去除珠芽外包皮，用双蒸水冲洗3遍，在超净工作台上用质量分数为75%酒精消毒40s，用质量分数为0.1%升汞消毒15min，无菌水冲4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分，放在灭过菌的培养皿上。
[0025]4)珠芽的芽诱导培养:将经消毒处理后的材料接种在珠芽的芽诱导培养基中进行诱导培养；培养条件:培养室温度为25°C，光照时间llh/d，光照强度为20001x，诱导培养时间35天；
5)芽增殖培养:将经步骤4)诱导得到的丛生芽，切成长l-2cm的块状，接种在芽增殖培养基中进行增殖培养；培养条件:培养室温度为25°C，光照时间llh/d，光照强度为20001x，增殖培养时间45天；
6)诱导生根培养:将经增殖培养出来的带有3片叶子、株高3cm的幼苗单株转移到生根培养基中；所述生根培养的培养条件:培养室温度为25°C，光照时间llh/d，光照强度为20001x，生根培养时间30天；
7)试管苗完成:当试管苗长至6cm高，有5条形态正常的根，有3片叶子，叶长6cm时，完成龙舌兰的植株再生培养。
[0026]将所述步骤7)完成的试管苗进行移栽:将试管苗放在自然光下炼苗5天，再打开瓶盖炼苗I天，用枪状镊把试管苗从培养瓶中逐渐取出并洗去附着在根部上的培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比=1:2的混合基质中，用带气孔的玻璃罩罩住移栽试管苗，温度控制在28°C，湿度应保持在75%，再生植株成活率在93%以上。
【主权项】
1.一种龙舌兰珠芽诱导方法，其特征在于:所述方法包括以下步骤: 1)取材方法:选取当年抽苔、饱满的龙舌兰珠芽为材料，采摘后置3-5°C冰箱冷藏保存备用; 2)培养基配制:分别配制珠芽的芽诱导培养基、芽增殖培养基、生根培养基，培养基的PH值为5.6-5.8，培养基厚度为1.4?1.6 cm ；所述珠芽的芽诱导培养基:MS+2.0mg.L 1 6-BA+0.5mg.L 1NAA+!.0mg.L ^T+0.0lmg? L-1 TDZ +7.0g.L_1Ag+20g.L^1Su+1.0 g.L^1Ac,所述芽增殖培养基:MS+1.0mg.Γ1 6-BA+0.02mg.I^TDZ+0.3mg.L^1NAA+1.0g.Γ1 蛋白胨 +7.0g.L_1Ag+20g.L-1Su +1.5 g.L^1Ac,所述生根培养基:l/2MS+0.1mg.L_1NAA+0.5-1.0mg.L-1IBA+ 7.0g.L_1Ag+20g.L-1Su+1.5 g.L-1Ac ； 3)材料消毒处理:将珠芽用自来水进行表面冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，用自来水滴冲0.5-lh后去除珠芽外包皮，用双蒸水冲洗2-3遍，在超净工作台上用质量分数为75%酒精消毒20-40s，用质量分数为0.1%升汞消毒12-15min，无菌水冲3_4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分，放在灭过菌的培养皿上； 4)珠芽的芽诱导培养:将经消毒处理后的材料接种在珠芽的芽诱导培养基中进行诱导培养；培养条件:培养室温度为23±2°C，光照时间ll_12h/d，光照强度为1500-20001x ； 5)芽增殖培养:将经步骤4)诱导得到的丛生芽，切成长l_2cm的块状，接种在芽增殖培养基中进行增殖培养；培养条件:培养室温度为23±2°C，光照时间ll_12h/d，光照强度为 1500-20001x ； 6)诱导生根培养:将经增殖培养出来的带有2-4片叶子、株高2-4cm的幼苗单株转移到生根培养基中；所述生根培养的培养条件:培养室温度为23±2°C，光照时间ll-12h/d，光照强度为1500-20001x ； 7)试管苗完成:当试管苗长至4-6cm高，有3-5条形态正常的根，有2_3片叶子，叶长4-6cm时，完成龙舌兰的植株再生培养。
2.根据权利要求1所述的龙舌兰珠芽诱导方法，其特征在于:将所述步骤7)完成的试管苗进行移栽:将试管苗放在自然光下炼苗3-5天，再打开瓶盖炼苗1-2天，用枪状镊把试管苗从培养瓶中逐渐取出并洗去附着在根部上的培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比=1:2的混合基质中，用带气孔的玻璃罩罩住移栽试管苗，温度控制在20-28°C，湿度应保持在 65% -75%。
3.根据权利要求1所述的龙舌兰珠芽诱导方法，其特征在于:所述龙舌兰为金边龙舌兰{Agave americanaL.var.marginataalba TreI)。
【专利摘要】本发明具体涉及一种龙舌兰珠芽诱导方法。该方法包括取材、培养基配制、材料消毒处理、珠芽的芽诱导培养、增殖培养、诱导生根和植株再生。本发明目的是提供一种龙舌兰珠芽诱导方法，为规模化、产业化提供技术支持。本发明选取饱满的龙舌兰珠芽作为诱导材料，在无菌条件下诱导培养20～30天可萌发出生长健壮新芽；经35～50天增殖培养可产生大量增殖芽体，扩繁系数高，增殖时间短，大大缩短了生长过程，经25-35天诱导生根后可成苗、移栽成活率高达93%以上；节约了大量成本，成苗移植后成活率高，苗健壮挺拔，长势良好，整齐一致。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104839027
【申请号】CN201510290075
【发明人】杨志坚, 何碧珠, 吴仁烨, 翁丹婷, 王和义
【申请人】福建农林大学
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月1日