一种果蔗化学消毒组培方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种果蔗化学消毒组培方法，属生 物技术领域。
【背景技术】
[0002] 果鹿（Saccharum officimarum. L)是甘鹿属热带种中具有大莖皮薄、质脆、汁多味 甜的一类品种，具有解渴充饥、清凉解毒、消除疲劳等功效。果蔗以其独特的风味，丰富的营 养及实用的药物价值，已成为人们越来越喜爱的水果。我国果蔗资源比较丰富，根据蔗茎的 颜色可分为黄皮果蔗、黑皮果蔗、白皮果蔗和青皮果蔗，其中以两广地区种植的黑皮果蔗最 为有名。
[0003] 近年来，果蔗的种植面积越来越大，但生产上也随之面临两个关键的问题：一是果 蔗受到多种病虫害侵染，市场上的果蔗种茎通常带有花叶病、宿根矮化病等病害，造成品种 退化，导致蔗茎缩短、节间变短、产量下降、品质变劣；二是果蔗属无性繁殖作物，繁殖系数 小，不利于良种的快速推广。应用脱毒种苗组培快繁技术既可以扩大其繁殖系数，从而实现 规模化繁殖；又能减轻病毒感染，有效控制病毒危害，保持果蔗的优良特性。因此探索果蔗 的组培快速繁殖方式具有重要意义。
[0004] 果蔗脱毒种苗组培快繁的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供 电成本、耗材和人工成本。常规的果蔗组织培养方法要求接种过程、培养过程都在无菌培养 基中进行，无菌消毒耗能大，人工操作成本高。如果能通过培养基改造，获得既保证果蔗组 织正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。由于 这种改造后的培养基不需要进行高温高压灭菌，一方面可以降低果蔗组织培养对设施设备 的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将 大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展果蔗组织培养，组培环节大为简化，人工操作 的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或 抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对果蔗生长产生毒害或抑制，即 不影响果蔗的正常生长，又从根本上简化了果蔗组织培养。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种果蔗化学消毒组培方法。
[0006] 本发明的目的是通过以下方法实现的。
[0007] 本发明的一种果蔗化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、种茎处理 及诱导培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：
[0008] 1.培养容器消毒：将培养瓶瓶盖及接种用的不锈钢盘在l〇〇mg/L次氯酸钠 +100mg/L丙酸1?的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；
[0009] 2?培养基配制：诱导培养基为MS+2. 0~5. 0mg/L 6-BA+0. 1~I. 0mg/L NAA+50~ 100mg/L次氯酸钠+50~100mg/L特美汀+50~100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3. 0g/L琼脂 粉，pH5. 8 ;增殖培养基为：MS+0. 5~2.Omg/L6-BA+O. 1~I.Omg/LNAA+50~lOOmg/L次 氯酸钠+50~lOOmg/L特美汀+50~lOOmg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.Og/L琼脂粉，pH5. 8 ; 壮苗培养基为 MS+0. 1~0? 5mg/L6-BA+1. 0-2.Omg/LKT+0. 5~I.Omg/LNAA+50~IOOmg/ L次氯酸钠+50~lOOmg/L特美汀+50~lOOmg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.Og/L琼脂粉， pH5. 8 ;生根培养基为1/2MS+3. 0~5.Omg/LNAA+50~100mg/L次氯酸钠+50~100mg/L 特美汀+50~100mg/L丙酸钙+20g/L蔗糖+3.Og/L琼脂粉，pH5. 8 ;所述MS培养基为1962 年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-节氨基嗓吟；所述NAA，指 萘 乙酸；所述KT，指6-糠氨基嘌吟；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培 养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定 容、然后用lmol/L的NaOH或lmol/L的HCl调pH值至5. 8,分装到消毒过的培养容器中，封 口，冷却凝固后备用；
[0010] 3.种茎处理及诱导培养：选择无病虫害果蔗植株，在蔗茎中部取具有饱满蔗芽的 双芽茎段，洗净并用800~1000倍稀释的多菌灵浸泡30~40min，清水洗净后放入恒温水 浴锅中，50~52°C热水处理25~30min，期间不断搅拌使蔗茎受热均匀；然后，取出种茎用 无菌泥炭土覆盖，覆盖厚度以刚露出蔗芽为宜，保持湿润，并在30~37°C和1200~15001x 光照条件下培养；待种茎发芽后，取健壮的植株，从最高肥厚带往下30cm处切下，用体积 比为75 %的酒精表面消毒，剥离外层叶鞘，取含生长点0. 5~1.0 cm长的芽尖，接种到诱 导培养基上，30d后可形成大量的丛生芽；培养室温度为25~28°C，光照12h，光照强度为 1200 ~15001x ;
[0011] 4.增殖培养：将外植体诱导培养的丛生芽接种到增殖培养基中，丛生芽逐步发育 成不具根的幼苗，每15d转接一次，大量增殖不具根的幼苗；培养室温度为25~28°C，光照 12h，光照强度为1200~15001x ;
[0012] 5.壮苗培养：将增殖培养的不具根的幼苗接种到壮苗培养基上，20d后获得丛生 苗；培养室温度为25~28°C，光照12h，光照强度为1200~15001x ;
[0013] 6.生根培养：取壮苗培养出的高度为4~6cm且茎粗不小于0. 2cm的丛生苗，将 丛生苗切成单株，接种到生根培养基上，15d后形成完整植株；培养室温度为25~28°C，光 照12h，光照强度为1200~15001x ;
[0014] 7.瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多 菌灵浸泡30~50min，移栽至大棚内的基质中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为 22~28°C。所述基质中各组成成份的重量比为草木灰：沙子：耕作土 = 1:1:1。
[0015] 本发明的应用效果：
[0016] 由于本发明的化学消毒组培方法，是利用化学试剂添加到各种培养基中，达到灭 菌或抑菌的作用，所以，配制的培养基是无需高温高压灭菌。因此，在果蔗诱导培养、增殖培 养、壮苗培养、生根培养各个阶段的影响，除了要考虑常用的评价指标外，还要考虑污染率 的问题。
[0017] 1.诱导培养：通过实验证实，本发明的一种果蔗的化学消毒组培方法与常规的果 蔗组培方法相比，在诱导培养阶段的外植体培养的成活率、污染率和死亡率都没有太大差 异。
[0018] 表1本发明的化学消毒组培方法对果蔗诱导培养的影响
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[0020] 2.增殖培养：如表2所示，增殖倍数和污染率二个指标都没有太大差异。在瓶苗 的生长状况看，本发明的化学消毒组培方法的培养基由于不经过高温高压灭菌，激素和营 养元素损失较少，其果蔗组培苗更绿，更壮。
[0021] 表2本发明的化学消毒组培方法对果蔗增殖倍数和污染率的影响
[0022]
[0023] 3.壮苗培养：从表3可以看出，本发明的果蔗化学消毒组培方法的每瓶平均壮苗 数明显高于常规的果蔗组培方法，瓶苗也更壮、更绿。在污染率方面没有差异。
[0024] 表3本发明的化学消毒组培方法对果蔗壮苗数和污染率的影响
[0025]
[0026] *苗高不小于4cm且莖粗不小于0. 2cm的瓶苗为壮苗。
[0027] 4.本发明的化学消毒组培方法对果蔗生根率和污染率的影响：在生根过程中，本 发明的化学消毒组培方法与常规的果蔗组培方法相比，结果如表4所示，生根率和污染率 都没有差异；从瓶苗的生长状况看，用本发明的方法，果蔗组培苗茎更粗，叶片更浓绿。
[0028] 表4.本发明的化学消毒组培方法与常规组培方法的果蔗瓶苗生根情况比较结果
[0029]
[0030] 5.成本分析：本发明的化学消毒组培方法与常规组培的成本分析见表5。
[0031] 本发明的化学消毒组培省去了高压灭菌环节，简化了组培程序，提高了工作效率。 从可以直接计算出来的费用来算，每年可以节约5万元左右（以每天配制50L培养基计 算）。另外，还有一些不容易计算的项目，如高压锅维修，安全，节约空间等。
[0032]表5本发明的果蔗化学消毒组培方法与常规组培的成本分析表
[0033]
[0034] 本发明具有如下有益效果：
[0035] 1.本发明的果蔗化学消毒组培方法中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌， 减少了工作量和能源消耗，简化了果蔗组培环节，降低了果蔗组培成本。
[0036] 2.本发明的果蔗化学消毒组培方法，操作简单，只要按不同的培养基配方配制即 可，实用性强，推广性好。
[0037] 3.本发明的果蔗化学消毒组培方法与常规的果蔗组培方法对比，可以降低成本 10%以上。
【具体实施方式】
[0038] 为