一种提高野外乌桕优良株系茎段再生效率的方法_2

文档序号:9265212阅读:来源:国知局
下步骤:
[0035]步骤一、取野外鸡爪桕优良株系的当年生茎段为外植体,茎段为未木质化或半木质化的茎段,经初步消毒后,在无菌操作台内进行表面消毒;初步消毒是将茎段去叶后分装于100ml烧杯中,于流水下冲洗lOmin,期间添加2ml洗涤液冲洗,并不断摇晃。表面消毒是指将初步消毒后的茎段经75%的酒精擦拭后,剪切成4cm长度的小段;再用75%酒精进行浸泡15s,无菌水冲洗3遍;再用75%酒精进行浸泡15s,无菌水冲洗3遍;之后再经质量百分比浓度为0.1%的HgCl2消毒2min,最后用无菌水冲洗6遍,表面消毒期间需不停地摇晃。取材于野外多年生乌桕优良株系的当年生枝条,一方面能保持母本植株的种质特性;另一方面取材方便、材料丰富;可以实现对野外乌桕优良单株的快繁,实现品种培育;外植体消毒程序简单,消毒时间短,对外植体的毒害较小,且污染率低,最高污染率仅为3.4%。
[0036]步骤二、将步骤一处理过后的外植体分切成若干切段后接种于丛生芽诱导培养基中,经过2周光照培养,茎段两端切口处诱导出不定芽丛;切段是将步骤一处理完成的外植体切去两端消毒损伤部位后,再分切成长度为0.4cm大小获得的。切段接种于丛生芽诱导培养基中的方式是水平接种于丛生芽诱导培养基中。丛生芽诱导培养基为MS培养基,其中含有0.05mg/L的6-BA、25g/L蔗糖和7.5g/L的琼脂,丛生芽诱导培养基的pH = 5.8。
[0037]发明人测试了切段接种方式是竖直接种的方案:将茎段经表面消毒后,切成0.5cm大小,水平或竖直接种于装有相同诱导培养基的3种培养容器:玻璃培养皿(9X9cm),10ml玻璃三角瓶,塑料培养瓶(7X9cm)中,放置于相同的培养条件下进行丛生芽诱导,4周后统计丛生芽诱导率及丛生芽生长情况,结果表明水平接种于诱导培养基中的茎段,两端诱导出大量的丛生芽,而竖直插入培养基中的茎段外植体仅一段长出丛生芽,芽的数量远远水平接种的外植体;且将外植体接种于培养皿中更利于丛生芽的诱导。
[0038]步骤三、将带有不定芽丛的茎段转接于增殖培养基中进行芽的增殖;增殖培养基为MS培养基,其中含有0.05mg/L的6_BA、25g/L的蔗糖和7.5g/L的琼脂,增殖培养基的pH = 5.8ο
[0039]步骤四、培养2周后转至丛生芽伸长培养基上进行芽的伸长培养;丛生芽伸长培养基为MS培养基,其中含有0.05mg/L的6_ΒΑ、0.0 lmg/L的IBA、25g/L的蔗糖和7.5g/L的琼脂,丛生芽伸长培养基的pH = 5.8。
[0040]步骤五、待芽长至2?3cm,转至生根培养基中进行生根;生根培养基为1/2MS培养基,其中含有0.lmg/L的IBA,0.0 lmg/L的NAA、20g/L的蔗糖和7.5g/L的琼脂,生根培养基的pH = 5.8。
[0041]步骤六、待幼苗长至3?4cm并带有2?4片真叶时,进行炼苗并移栽,获得健壮的乌桕再生植株。
[0042]实施例2
[0043]一种提高野外乌桕优良株系茎段再生效率的方法,其特征在于包括以下步骤:
[0044]步骤一、取野外鸡爪桕优良株系的当年生茎段为外植体,茎段为未木质化或半木质化的茎段,经初步消毒后,在无菌操作台内进行表面消毒;初步消毒是将茎段去叶后分装于100ml烧杯中,于流水下冲洗15min,期间添加4ml洗涤液冲洗,并不断摇晃。表面消毒是指将初步消毒后的茎段经75%的酒精擦拭后,剪切成6cm长度的小段;再用75%酒精进行浸泡25s,无菌水冲洗5遍;再用75%酒精进行浸泡25s,无菌水冲洗5遍;之后再经质量百分比浓度为0.1%的HgCl2消毒5min,最后用无菌水冲洗8遍,表面消毒期间需不停地摇晃。取材于野外多年生乌桕优良株系的当年生枝条,一方面能保持母本植株的种质特性;另一方面取材方便、材料丰富;可以实现对野外乌桕优良单株的快繁,实现品种培育;外植体消毒程序简单,消毒时间短,对外植体的毒害较小,且污染率低,最高污染率仅为3.4%。
[0045]步骤二、将步骤一处理过后的外植体分切成若干切段后接种于丛生芽诱导培养基中,经过2?3周光照培养,茎段两端切口处诱导出不定芽丛;切段是将步骤一处理完成的外植体切去两端消毒损伤部位后,再分切成长度为0.7cm大小获得的。切段接种于丛生芽诱导培养基中的方式是水平接种于丛生芽诱导培养基中。丛生芽诱导培养基为MS培养基,其中含有9.0mg/L的6-BA、0.02mg/L的IAA、25g/L蔗糖和7.5g/L的琼脂,丛生芽诱导培养基的pH = 5.8。
[0046]发明人测试了切段接种方式是竖直接种的方案:将茎段经表面消毒后,切成0.5cm大小,水平或竖直接种于装有相同诱导培养基的3种培养容器:玻璃培养皿(9X9cm),10ml玻璃三角瓶,塑料培养瓶(7X9cm)中,放置于相同的培养条件下进行丛生芽诱导,4周后统计丛生芽诱导率及丛生芽生长情况,结果表明水平接种于诱导培养基中的茎段,两端诱导出大量的丛生芽,而竖直插入培养基中的茎段外植体仅一段长出丛生芽,芽的数量远远水平接种的外植体;且将外植体接种于培养皿中更利于丛生芽的诱导。
[0047]步骤三、将带有不定芽丛的茎段转接于增殖培养基中进行芽的增殖;增殖培养基为MS培养基,其中含有2.0mg/L的6-BA、25g/L的蔗糖和7.5g/L的琼脂,增殖培养基的pH=5.8o
[0048]步骤四、培养3周后转至丛生芽伸长培养基上进行芽的伸长培养;丛生芽伸长培养基为MS培养基,其中含有1.5mg/L的6-BA、0.lmg/L的IBA、25g/L的蔗糖和7.5g/L的琼月旨,丛生芽伸长培养基的pH = 5.8。
[0049]步骤五、待芽长至2?3cm,转至生根培养基中进行生根;生根培养基为1/2MS培养基,其中含有0.5mg/L的IBA,0.05mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和7.5g/L的琼脂,生根培养基的pH = 5.8。
[0050]步骤六、待幼苗长至3?4cm并带有2?4片真叶时,进行炼苗并移栽,获得健壮的乌桕再生植株。
[0051]实施例3
[0052]一种提高野外乌桕优良株系茎段再生效率的方法,其特征在于包括以下步骤:
[0053]步骤一、取野外鸡爪桕优良株系的当年生茎段为外植体,茎段为未木质化或半木质化的茎段,经初步消毒后,在无菌操作台内进行表面消毒;初步消毒是将茎段去叶后分装于100ml烧杯中,于流水下冲洗12min,期间添加3ml洗涤液冲洗,并不断摇晃。表面消毒是指将初步消毒后的茎段经75%的酒精擦拭后,剪切成5cm长度的小段;再用75%酒精进行浸泡20s,无菌水冲洗4遍;再用75%酒精进行浸泡20s,无菌水冲洗4遍;之后再经质量百分比浓度为0.1%的HgCl2消毒3min,最后用无菌水冲洗7遍,表面消毒期间需不停地摇晃。取材于野外多年生乌桕优良株系的当年生枝条,一方面能保持母本植株的种质特性;另一方面取材方便、材料丰富;可以实现对野外乌桕优良单株的快繁,实现品种培育;外植体消毒程序简单,消毒时间短,对外植体的毒害较小,且污染率低,最高污染率仅为3.4%。
[0054]步骤二、将步骤一处理过后的外植体分切成若干切段后接种于丛生芽诱导培养基中,经过2?3周光照培养,茎段两端切口处诱导出不定芽丛;切段是将步骤一处理完成的外植体切去两端消毒损伤部位后,再分切成长度为0.5cm大小获得的。切段接种于丛生芽诱导培养基中的方式是水平接种于丛生芽诱导培养基中。丛生芽诱导培养基为MS培养基,其中含有0.7mg/L的6-ΒΑ、0.0 lmg/L的IAA、25g/L蔗糖和7.5g/L的琼脂,丛生芽诱导培养基的pH = 5.8。
[0055]发明人测试了切段接种方式是竖直接种的方案:将茎段经表面消毒后,切成0.5cm大小,水平或竖直接种于装有相同诱导培养基的3种培养容器:玻璃培养皿(9X9cm),10ml玻璃三角瓶,
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