用于常温条件下长期保存和运输组织样本的核酸保护液的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种核酸保护液及其应用，特别是涉及一种核酸保护液及其在常温下保存和运输组织样本中的应用。
【背景技术】
[0002]核酸是生物特有的重要的大分子化合物，广泛存在于各类生物细胞中。核酸携带有生物遗传信息，准确的检测核酸是分子生物学样品分析的一个重要方面。然而，核酸在许多条件下均可能发生降解。造成核酸降解的外界物理因素如温度、湿度、紫外线等；化学因素如pH值、水解反应、氧化反应等；生物因素如酶解及微生物侵染等。
[0003]针对组织样品，目前保存样品的方式主要为样品采集后直接低温保存，如:液氮保存。这种方法有较大的限制性，一是采用低温保存成本较高；二是体现在对于特殊设备的需求上，例如液氮罐，如果不能将新鲜采集的样品立刻置于液氮中，核酸分子可能发生降解，也可能有其他影响因素使核酸状态发生改变，给后续的实验带来操作误差。
【发明内容】
[0004]为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供了一种新的核酸保护液及其在常温下保存和运输组织样本的应用。该核酸保护液的成本低；使用该核酸保护液，组织样本中的核酸在室温下的保存时间长，保存效果好。另外，该核酸保护液的制备方法简单、快速。
[0005]—种核酸保护液，按照以下方法制备:将包括以下组分的配方溶于水中使每升所述核酸保护液含有:
[0006]D-葡萄糖 4100-4300mg，4-轻乙基呢嘆乙横酸 2400-2500mg ；
[0007]NaCl 3700-3900mg，NaHC032000_2200mg，NaH2PO4110_125mg，KCl 350_400mg，CaCl2180-210mg，MgCl270_85mg ；
[0008]L-赖氨酸盐酸盐135_150mg，L-组氨酸盐酸盐75_85mg，L-异亮氨酸90_110mg，L-亮氨酸90-110mg，L_苏氨酸85_95mg，L-苯丙氨酸60_70mg，L-缴氨酸85_95mg，L-酪氨酸 65_75mg ；
[0009]氯化胆碱3-5mg，叶酸3_5mg，烟酰胺3_5mg，肌醇3_5mg，维生素A 0.15-0.2mg，维生素 H 0.15-0.2mg，维生素 E 0.15-0.2mg ；
[0010]Holo-人转铁蛋白90-110mg，牛血清蛋白90_110mg，丙谷二肽400_450mg，胰岛素15_20mg ；
[0011]肾上腺酮1.5-2.0mg，亚油酸 3.5-4.0mg，亚麻酸 2.5-3.0mg，黄体酮 0.07-0.13mg ;
[0012]青霉素(0.9-1.0) X 15单位，链霉素 90-100mg，两性霉素 B 0.2-0.3mg。
[0013]优选的，一种核酸保护液，按照以下方法制备:将包括以下组分的配方溶于水中使每升所述核酸保护液含有:
[0014]D-葡萄糖4200mg，4-羟乙基哌嗪乙磺酸2450mg ；
[0015]NaCl 3800mg，NaHC032083mg，NaH2PO4118mg，KCl 380mg，CaCl2190mg，MgCl273.2mg ；
[0016]L-赖氨酸盐酸盐138mg，L-组氨酸盐酸盐79.5mg，L-异亮氨酸lOOmg，L-亮氨酸10mg, L-苏氨酸90mg，L-苯丙氨酸62.5mg，L-缴氨酸90mg，L-酪氨酸68mg ；
[0017]氯化胆碱4mg，叶酸4mg，烟酰胺4mg，肌醇4mg，维生素A 0.19mg，维生素H0.19mg，维生素 E 0.19mg ；
[0018]Holo-人转铁蛋白lOOmg，牛血清蛋白lOOmg，丙谷二肽435mg，胰岛素18.8mg ；
[0019]肾上腺酮1.9mg，亚油酸3.8mg，亚麻酸2.8mg，黄体酮0.1mg ；
[0020]青霉素1.0X 15单位，链霉素lOOmg，两性霉素B 0.25mg。
[0021]本发明还提供了上述核酸保护液在常温下保存和运输组织样本中的应用。
[0022]本发明中的核酸优选DNA。
[0023]本发明核酸保护液适用于所有组织样本，尤其适用于人和除人以外的哺乳动物的神经细胞瘤组织的常温下保存和运输，不同的组织样本使用该核酸保护液的方式相同，即:取新鲜的组织样本，立即放入本发明核酸保护液中，常温条件(4-25°C)下保存即可。本发明核酸保护液使用时优选为现配现用。
[0024]与现有技术相比，本发明常温下保存和运输组织样本的核酸保护液具有如下有益效果:1、使用该核酸保护液，样品组织在室温下保存4-6周后，该组织仍可以可靠的、稳定的用于后续的DNA提取，经过保存的样品组织所提取的DNA总量和浓度均可达新鲜组织的80%以上；2、本发明核酸保护液的成本低，仅为目前通用的低温保存方法的10%。本发明液体细胞培养基的制备方法操作简单、快速。
【附图说明】
[0025]图1是人髓母细胞瘤新鲜组织使用实施例3制备得到的核酸保护液在常温下保存6周后提取的DNA和人髓母细胞瘤新鲜组织提取的DNA进行Agilent2200Tapestat1n毛细管电泳获得的电泳对比图，其中Al道是gDNA ladder, BI道是人髓母细胞瘤新鲜组织提取的DNA，Cl道是人髓母细胞瘤新鲜组织使用实施例3制备得到的核酸保护液在常温下保存6周后提取的DNA ；
[0026]图2是人星形细胞瘤新鲜组织使用实施例3制备得到的核酸保护液在常温下保存6周后提取的DNA和人星形细胞瘤新鲜组织提取的DNA进行Agilent2200Tapestat1n毛细管电泳获得的电泳对比图，其中Al道是gDNA ladder, BI道是人星形细胞瘤新鲜组织提取的DNA，Cl道是人星形细胞瘤新鲜组织使用实施例3制备得到的核酸保护液在常温下保存6周后提取的DNA ；
[0027]图3是人胶质细胞瘤新鲜组织使用实施例3制备得到的核酸保护液在常温下保存6周后提取的DNA和人胶质细胞瘤新鲜组织提取的DNA进行Agilent2200Tapestat1n毛细管电泳获得的电泳对比图，其中Al道是gDNA ladder, BI道是人胶质细胞瘤新鲜组织提取的DNA，Cl道是人胶质细胞瘤新鲜组织使用实施例3制备得到的核酸保护液在常温下保存6周后提取的DNA。
【具体实施方式】
[0028]下面结合附图，对本发明的【具体实施方式】进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受【具体实施方式】的限制。
[0029]本申请的实施例中人髓母细胞瘤组织、人星形细胞瘤组织和人胶质细胞瘤组织来源于病人手术切除后的新鲜离体组织。
[0030]实施例1
[0031]取配方量的以下各组分加入到灭菌后的容器中:
[0032]D-葡萄糖4100mg，4_轻乙基呢嘆乙磺酸2500mg ；
[0033]NaCl 3700mg，NaHC032 2 00mg，NaH2PO4IlOmg, KCl 400mg，CaCl2180mg，MgCl285mg ;
[0034]L-赖氨酸盐酸盐135mg，L-组氨酸盐酸盐85mg，L-异亮氨酸90mg，L-亮氨酸llOmg，L-苏氨酸85mg，L-苯丙氨酸70mg，L-缴氨酸85mg，L-酪氨酸75mg ；
[0035]氯化胆碱3mg，叶酸5mg，烟酰胺3mg，肌醇5mg，维生素A 0.15mg，维生素H 0.2mg，维生素E 0.15mg ；
[0036]Holo-人转铁蛋白90mg，牛血清蛋白llOmg，丙谷二肽400mg，胰岛素20mg ；
[0037]肾上腺酮1.5mg，亚油酸4.0mg,亚麻酸2.5mg，黄体酮0.13mg ；
[0038]青霉素0.9 X 15单位，链霉素lOOmg，两性霉素B 0.2mg ；
[0039]再补充水定容至IL即得。
[0040]实施例2
[0041]取配方量的以下各组分加入到灭菌后的容器中:
[0042]D-葡萄糖4300mg，4_羟乙基哌嗪乙磺酸2400mg ；
[0043]NaCl 3900mg，NaHC0320 00mg，NaH2P04125mg，KCl 350mg，CaCl2210mg，MgCl270mg ;
[0044]L-赖氨酸盐酸盐150mg，L-组氨酸盐酸盐75mg，L-异亮氨酸llOmg，L-亮氨酸90mg，L-苏氨酸95mg，L-苯丙氨酸60mg，L-缴氨酸95mg，L-酪氨酸65mg ；
[0045]氯化胆碱5mg，叶酸3mg，烟酰胺5mg，肌醇3mg，维生素A 0.2mg，维生素H 0.15mg，维生素E 0.2mg ；
[0046]Holo-人转铁蛋白llOmg，牛血清蛋白90mg，丙谷二肽450mg，胰岛素15mg ；
[0047]肾上腺酮2.0mg,亚油酸3.5mg，亚麻酸3.0mg,黄体酮0.07mg ；
[0048]青霉素1.0X 15单位，链霉素90mg，两性霉素B 0.3mg ；