没有辛辣味且没有催泪成分生成的洋葱的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及辛辣味和催泪性极弱或者完全感觉不到的洋葱及其制造方法。
【背景技术】
[0002] 近年，提供小孩也容易食用的蔬菜或由健康志向的消费者发起的摄取生蔬菜的风 潮正在扩大，满足该要求成为蔬菜品种改良的一个潮流。但是，由于葱属植物，特别是洋葱 由于特有的辛辣味，成为生吃困难的蔬菜。
[0003] 已阐明属于洋葱的辛辣成分和催泪成分的催泪因子（lachrymatoryfactor) (LF) 是以伴随生洋葱组织的切断或破碎而进行的下述反应机理生成的（非专利文献1)。
[0004]
[0005] 即，伴随调制或加工而引起洋葱细胞破碎时，作为底物的trans-1-propenyl cysteinesulfoxide(PRENCS0)在蒜氨酸酶的作用下产生分解，由一分子的PRENCS0 分别生成一分子的次磺酸（1-propenylsulfenicacid)、丙酮酸、氨。接下来，生成 的次磺酸在催泪因子合成酶（LFS)的作用下，变为也是辛辣成分的催泪因子（LF、 propanethial-S-oxide) 〇
[0006] 作为辛辣味弱的洋葱，在日本国内有被称为"新洋葱"的极早熟的品种。极早熟品 种的洋葱，其特征在于，水分量多，干重少。由于该特征，PRENCS0浓度变低，生成的辛辣成 分（催泪因子）量变少。但是，尽管极早熟品种的洋葱的辛辣味弱，但是并不是完全没有辛 辣味，生吃时需要水浸。因此，存在不仅需要水浸的调制操作，而且由于水浸而营养成分流 出的问题。此外该品种还存在储藏性差，仅能在有限的时期内提供的问题。
[0007] 此外，作为生产辛辣味弱的品种的方法，也可以采取调整施肥，降低成为辛辣味来 源的底物量的方法。但是，即使使用该方法，底物也并非完全没有，通常在生吃时辛辣味并 没有变弱到感觉不到辛辣味的程度。
[0008] 另外，目前为止开发?报告了辛辣味少的洋葱。专利文献1公开了辛辣味少的长 日照洋葱，且示出了该洋葱组织破碎时的丙酮酸生成量为3.0~5.5μmol/gFW。此外，专 利文献2也公开了辛辣味少的长日照洋葱，且示出了该洋葱组织破碎时的丙酮酸生成量为 2. 5~5. 5μmol/gFW。但是，虽然这些洋葱的辛辣味的确弱，但是并非完全没有辛辣味，生 吃时需要水浸。
[0009] 因此，在该领域中仍然需求辛辣味和催泪性极弱或者完全感觉不到的洋葱。
[0010] 现有技术文献
[0011] 专利文献
[0012] 专利文献1:日本特表2009-501528号公报
[0013] 专利文献2:日本特表2011-510618号公报
[0014] 非专利文献
[0015]非专利文献 1:ImaiSetal.;Anonionenzymethatmakestheeyeswater. Nature, 419, 685 (2002).
【发明内容】
[0016] 本发明的目的在于提供辛辣味和催泪性极弱或者完全感觉不到的洋葱及其制造 方法。
[0017] 本发明人等为了解决上述课题进行深入研究，结果发现通过抑制洋葱细胞中的蒜 氨酸酶基因的表达，得到辛辣味和催泪性极弱或者完全感觉不到的洋葱，从而完成本发明。
[0018]SP，本发明具有以下特征。
[0019] [1]洋葱植物体或其后代、或者其部分，其特征在于，蒜氨酸酶基因的表达与以往 品种相比被抑制。
[0020] [2]根据[1]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，洋葱细胞破碎时的辛辣 成分和催泪成分的生成与以往品种相比降低。
[0021] [3]根据[1]或者[2]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，蒜氨酸酶基因含 有编码以下（a)-(c)的多肽的碱基序列：
[0022] (a)含有序列编号5所示的氨基酸序列的多肽；
[0023](b)含有在序列编号5所示的氨基酸序列中具有一个或者多个的氨基酸的缺失、 置换、插入和/或追加的氨基酸序列，且具有蒜氨酸酶活性的多肽；
[0024] (c)含有与序列编号5所示的氨基酸序列具有90%以上的同源性的氨基酸序列， 且具有蒜氨酸酶活性的多肽。
[0025] [4]洋葱植物体或者其部分的制造方法，其特征在于，该洋葱植物体或者其部分的 示示氣酸酶基因的表达与以往品种相比被抑制，该制造方法包括以下工序：
[0026](i)对洋葱种子进行突变诱导处理的工序，
[0027](ii)栽培突变诱导处理了的洋葱种子而得到洋葱植物体或者其部分的工序，以及
[0028](iii)从得到的洋葱植物体或者其部分，选拔显示以下的一个或多个特性的洋葱 植物体或者其部分的工序：
[0029]a)洋葱细胞破碎时的辛辣成分和催泪成分的生成与以往品种相比降低；
[0030] b)赫氣酸酶基因或者蛋白质的表达与以往品种相比被抑制；
[0031]c)洋葱细胞破碎时的丙酮酸的生成与以往品种相比降低；
[0032]d)洋葱细胞破碎后的残存PRENCS0量与以往品种相比多；以及
[0033]e)洋葱细胞破碎时的催泪因子（LF)的生成与以往品种相比降低。
[0034] [5]根据[4]的方法，其中，工序（iii)包括选拔至少显示特性b)的洋葱植物体或 者其部分的工序。
[0035][6]根据[4]的方法，其中，进一步包括以下工序（iv)，即重复进行一次或多次对 选拔的洋葱植物体进行自体繁殖交配并将得到的洋葱植物体或者其部分付诸于工序（iii) 的工序。
[0036] [7]根据[1]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，洋葱植物体的部分是以 NCHMB42219进行国际保藏的种子。
[0037] [8]根据[1]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，洋葱植物体的部分是以 FERMBP-22260进行国际保藏的愈合组织。
[0038] [9]洋葱植物体或者其部分，其特征在于，蒜氨酸酶基因的表达与以往品种相比被 抑制，是通过包括以下工序的方法而制造得到的，
[0039] (i)对洋葱种子进行突变诱导处理的工序，
[0040] (ii)栽培突变诱导处理了的洋葱种子，得到洋葱植物体或者其部分的工序，以及
[0041] (iii)从得到的洋葱植物体或者其部分，选拔显示以下的一个或多个特性的洋葱 植物体或者其部分的工序：
[0042]a)洋葱细胞破碎时的辛辣成分和催泪成分的生成与以往品种相比降低；
[0043] b)示示氣酸酶基因或者蛋白质的表达与以往品种相比被抑制；
[0044] c)洋葱细胞破碎时的丙酮酸的生成与以往品种相比降低；
[0045] d)洋葱细胞破碎后的残存PRENCS0量与以往品种相比多；以及
[0046] e)洋葱细胞破碎时的催泪因子（LF)的生成与以往品种相比降低。
[0047] [10]根据[9]的洋葱植物体或者其部分，其中，工序（iii)包括选拔至少显示特性 b)的洋葱植物体或者其部分的工序。
[0048][11]根据[9]的洋葱植物体或者其部分，所述方法进一步包括以下工序（iv)，即 重复进行一次或多次对选拔的洋葱植物体进行自体繁殖交配并将得到的洋葱付诸于工序 (iii)的工序。
[0049] [12]洋葱植物体或者其部分的制造方法，其特征在于，该洋葱植物体或者其部分 的示示氣酸酶基因的表达与以往品种相比被抑制，该制造方法包括将以赫氣酸酶基因的表达 与以往品种相比被抑制为特征的第一洋葱植物体与第二洋葱植物体进行交配。
[0050] [13]洋葱植物体或者其部分，其特征在于，蒜氨酸酶基因的表达与以往品种相比 被抑制，是通过以下方法而制造得到的，该方法包括将以蒜氨酸酶基因的表达与以往品种 相比被抑制为特征的第一洋葱植物体与第二洋葱植物体进行交配。
[0051] [14]洋葱植物体或其后代、或者其部分，其特征在于，是由以蒜氨酸酶基因的表达 与以往品种相比被抑制为特征的洋葱植物体的部分而得到的。
[0052] [15]根据[14]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，是由以蒜氨酸酶基因 的表达与以往品种相比被抑制为特征的洋葱植物体的种子或者愈合组织而得到的。
[0053] [16]根据[15]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，种子是以ΜΠΜΒ42219 进行国际保藏的种子。
[0054] [17]根据[15]的洋葱植物体或其后代、或者其部分，其中，愈合组织是以FERM BP-22260进行国际保藏的愈合组织。
[0055] [18]测定洋葱植物体或者其部分的蒜氨酸酶基因的表达量来评价该洋葱植物体 或者其部分的辛辣味的方法。
[0056] [19]与以往品种相比辛辣成分和催泪成分的生成降低了的洋葱植物体或者其部 分的选择方法，其特征在于，包括测定洋葱植物体或者其部分的蒜氨酸酶基因的表达量，选 择该基因的表达与以往品种相比被抑制的洋葱植物体或者其部分。
[0057] 本说明书包含作为本申请优先权基础的日本国特许出愿2013-096551号说明书 和/或附图记载的内容。
[0058] 根据本发明，能够提供辛辣味和催泪性极弱或者完全感觉不到的洋葱及其制造方 法。
【附图说明】
[0059] 图1是表示从洋葱球采取分析试样的方法的简图。
[0060] 图2表示M4洋葱球的组织破碎时的丙酮酸生成量的测定结果。
[0061 ] 图3表示M4洋葱球的组织破碎3小时后的PRENCS0残存量的测定结果。
[0062] 图4表示M4洋葱球的组织破碎时的催泪成分（LF)生成量的测定结果。
[0063] 图5表示M4洋葱球的蒜氨酸酶蛋白质表达量的测定结果。
[0064] 图6表示M4洋葱球的蒜氨酸酶基因表达量的测定结果。
[0065] 图7表示M4洋葱球的组织破碎时添加蒜氨酸酶时的催泪成分（LF)生成量的测定 结果。
[0066] 图8是表示由洋葱球取出的中心部的幼芽部分（含有圆盘茎的萌芽叶部分）的照 片图。
[0067] 图9是表示将愈合组织通过再分化培养基培养得到的培养物的照片图。箭头表示 培养物中发现的滑面状的结构体。
[0068] 图10是表示由愈合组织再分化得到的植物体的照片图。
[0069] 图11表示#6系统的洋葱球与对照的洋葱球中的蒜氨酸酶基因的表达解析和注释 结果。
[0070] 图12表示在#6系统的洋葱球中表达显著被抑制的蒜氨酸酶基因编码的氨基酸 序列。
【具体实施方式】
[0071] 1.本发明的洋葱
[0072] 本发明的洋葱，其特征在于，蒜氨酸酶基因的表达被抑制。
[0073] 本发明中"洋葱植物体"，只要没有特别说明，是指洋葱植物体以及该植物体的部 分。作为"植物体的部分"，只要没有特别说明，是指洋葱的种子、球、鳞莖、叶、莖、芽、花、花 药、花粉、胚珠、以及来源于这些的细胞或组织、原生质体和愈合组织。洋葱的种子中包括以 NCHMB42219进行国际保藏的种子，洋葱的愈合组织中包括以FERMBP-22260进行国际保藏 的愈合组织。应予说明，本说明书中，洋葱球或者洋葱鳞茎有时简称为"洋葱"，这些术语可 以相互互换使用。
[0074] 此外，本发明中，洋葱植物体的"后代"是指，利用有性生殖和/或无性生殖，具有 使用本发明的洋葱植物体或者其部分进行制造的过程的洋葱植物体，是指具有蒜氨酸酶基 因的表达与以往品种相比被抑制这一特征的洋葱植物体。
[0075] 本发明的洋葱植物体及其后代，可以按照使用的品种的常见栽培方法进行栽培， 可以种子繁殖。应予说明，已知常见植物中，由其组织的一部分，能够诱导愈合组织。而且， 这样诱导的愈合组织，通过调节培养的培养基组成和培养条件，容易再分化，能够再生成与 由种子发育的情况在性质上没有差异的植物体。该性质当然也适用于洋葱，在来自于由球 的生长点或花粉、胚珠、花药、幼芽等制作的愈合组织的基础上，能够进行植物体的再分化， 这样再分化的植物体或从该植物体得到的种子具有与由种子发育而来的植物体或由该植 物体得到的种子相同的性质。
[0076] 本发明中"洋葱细胞"是指洋葱植物体、优选为洋葱球或者洋葱鳞茎中含有的细 胞。
[0077] 本发明中"蒜氨酸酶基因"，只要没有特别说明，是指包含一个或多个的单核苷酸 多态性（SNP)的多个蒜氨酸酶基因的总称。
[0078] 优选本发明中"蒜氨酸酶基因"是主要参与辛辣成分和催泪成分的生成的特定的 蒜氨酸酶基因。对于这样的特定的蒜氨酸酶基因而言，使用由下述的感官评价、丙酮酸生成 量