一种辣椒疫病的防控方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及农作物病害防治领域，特别是一种一种辣椒疫病的防控方法。
【背景技术】
[0002] 辣椒疫病是由辣椒疫霉病菌引起的、在世界范围内普遍发生的土传病害。该病害 最早是在1918年被发现在辣椒产区严重发生，随后该发病区域的辣椒疫病连年发生，且不 断蔓延至周围地区。目前，辣椒疫病在美洲、亚洲、欧洲等多个国家和地区普遍发生，已经成 为限制辣椒产业持续发展的重大病害之一。我国于1950年首次在江苏发现此病，随后，甘 肃省在1987年、陕西省在1989年发生了辣椒疫病大流行，现在辣椒疫病在我国辣椒产区已 经普遍发生，且有逐年加重和蔓延的趋势，已经成为严重限制辣椒产业发展的瓶颈。
[0003] 辣椒疫病的发生受气候、土壤类型、辣椒品种、灌溉方式以及田间管理水平等多种 因素影响，因该种病害造成的死苗率达15.1%，发生严重的可减产40-70%，甚至绝收。目前， 国内外用于防治辣椒疫病的方法主要有化学药剂防治、生物防治、选育抗病品种及农业措 施等。虽然对各项防治技术都存在长时间的研究和应用的报到，且仍在不断取得进步与发 展，但在生产层面大规模推广应用层面仍缺乏防效稳定、经济可行、可操作性的防控措施。
[0004] 生物炭(biochar)是由生物残体、有机废弃物等生物质在无氧或缺氧条件下高温 裂解(通常小于700°C)产生的固体产物，制炭过程中，原生物质的细微孔隙结构被完好地 保留在生物炭中，这种多孔性使得制备的生物炭具有较大的表面积;此外，羧基、酚羟基、羟 基、脂肪族双键以及芳香化等典型结构，使得生物炭具备了极强的吸附能力、抗氧化能力 和抗生物分解能力等，从而使得生物炭广泛应用于农业、工业、环境、能源等领域。生物炭在 土壤中的应用效果主要有:改善土壤团粒结构，降低土壤酸度，提高土壤保水、保肥性和养 分利用率，促进菌根真菌、根瘤菌及其他有益微生物的生长繁殖，促进植物生长和提高产 量，防控植物植物病害，吸附土壤中的重金属和有机污染物等有毒有害物质。研究表明用城 市生活垃圾制备的生物炭施入土壤能减少青枯病菌引起的番前青枯病;Ogawa研究发现生 物炭和生物炭与堆肥混合物均能抑制细菌和真菌引起的土传病害，此外有报道公开使用桉 树木和温室有机废弃物制备的生物炭均能促进黄瓜生长并抑制立枯丝核菌引起的黄瓜猝 倒病。
[0005] 生物炭对土传病害的防控作用与其对土壤微生物性状的改善有较大相关性，主要 表现在：1)提高土壤或植物根际的微生物数量和微生物活性;2)促进菌根真菌在植物根部 的侵染与增殖;3)促进有益微生物的生长;4)改善微生物群落结构。生物炭对土壤微生物的 影响首先表现在增加土壤微生物数量和微生物活性，生物炭的多孔性为细菌、放线菌和真 菌的生存繁殖提供栖息地，且利于微生物躲避土壤掠夺性动物的侵袭，对土壤微生物有一 定保护作用；Steinbeiss报道生物炭促进土壤革兰氏阴性细菌的生长;Elad试验数据显示 生物炭能增加土壤中可培养细菌、放线菌、酵母菌和丝状真菌(包含木霉)等的数量。然而也 有相关研究显示，生物炭施用到土壤后对土传病害的防控效果不稳定，有时候甚至没有防 控效果。这主要原因是受生物炭的施用时间以及生物炭激发的土壤微生物的种类随机性较 大，可预见性较小，不能形成稳定抑制病害的土壤环境。
[0006] 绿色木霉由于其生长速度快、生物量大以及较强的生态竞争能力、对许多植物病 原真菌的生长抑制作用以及对作物生长的促进作用，江苏省农科院从土壤中筛选到一株保 藏号为CGMCC No. 9293的绿色木霉绿色木霉，并在申请号为201510361863.6，发明名称为 "高效防控西瓜枯萎病的方法及其专用微生物菌株"的专利文献中公开，该菌对西瓜枯萎病 菌有强烈的生长抑制作用，但是将该菌与生物炭混合施用，防治辣椒疫病，尚未见相关报 道。
【发明内容】
[0007] 针对上述问题，本发明提供一种操作简单、防效高达90-100%的防控辣椒疫病的方 法，本发明是这样实现的： 一种利用生物炭防控辣椒疫病的方法，具体步骤如下： 首先清除大田中前茬作物残体，按常规方法施化肥和有机肥，然后将绿色木霉菌与生 物炭混合，混合物以300-400公斤/亩的施用量均匀撒施，再将土壤旋耕20-25cm，浇水灌溉 至土壤水分含量为18-20%，放置10-30d后，再栽植辣椒；所述绿色木霉菌是指保藏号为 CGMCC No.9293的绿色木霉TV41菌。
[0008] 进一步，本发明中，所述将绿色木霉菌与生物炭混合是指:将生物炭粉碎后过2毫 米筛，然后加入保藏号为CGMCC No.9293的绿色木霉TV41菌剂混合，混合物中绿色木霉TV41 菌的含菌量为2X107cf u/g;所述生物炭是由玉米、小麦或水稻秸杆经500°C烧制后获得的。
[0009] 进一步，本发明中，所述绿色木霉TV41菌剂是这样获得的： (1) 将保藏号为CGMCC No. 9293的绿色木霉TV41菌接种到试管斜面培养基PDA中，28±2 °C培养3天;再将绿色木霉菌株转接到TOB液体培养基中，装液量为80ml/250ml，然后于28 土 2°C温度下摇床培养3-4天，摇床的转速160rpm; (2) 培养结束后以5%的接种量V/W接入固体培养基中，于28± 2°C培养6-8天，期间每隔 2-3天翻拌一次，直至产孢； (3) 将绿色木霉菌连同固体培养基自然风干或30°C烘干，粉碎过10-20目筛，即获得绿 色木霉固体菌剂，其含菌量为l〇1(W1cfu/g; 所述的试管斜面培养基PDA配制方法为:称取马铃薯100克，去皮，切成块煮沸半小时， 然后用两层纱布过滤，再加葡萄糖10克，琼脂10克，溶化后补足水至500毫升，分装到25毫升 的试管中，每个试管5毫升培养基，121°C，灭菌15min后摆成斜面备用，斜面高度不超过试管 长度的三分之一； 所述的液体培养基TOB配制方法为:称取马铃薯100克，去皮，切成块煮沸半小时，然后 用两层纱布过滤，再加人葡萄糖10克，溶化后补足水至500毫升，分装到三角瓶中，每个250 毫升三角瓶装80毫升，121°C，灭菌15min后冷却备用； 所述固体培养基的配制方法为:将麸皮与不大于5_长度的稻草按照质量比7:3的均匀 混合，再加入去离子水使混合物中的水分含量为65%，然后121°C灭菌40min，冷却备用。
[0010] 本发明打破现有技术中在辣椒定植时、或定植后再使用菌剂的常规防治方法，通 过提前10-30天在土壤中施用含有绿色木霉的生物炭，使得土壤有充裕的时间形成以功能 微生物为优势种群的稳定的微生物区系，营造不利于病原菌生存的环境，继而防控辣椒疫 病，其有益效果体现于： (1) 基于生物炭可以改善土壤的物理、化学性状并激发土壤多种微生物活性的特征，本 发明在辣椒定植前10-30天施用猜杆生物炭改良辣椒疫病发生严重的土壤，营造不利于病 原菌生长繁殖的环境，减少病原菌数量，降低病害发生几率，提高对辣椒疫病的防控效果， 为秸杆生物炭的高附加值利用开辟新途径； (2) 施用的生物炭中含有广谱防病功能的绿色木霉菌剂，该绿色木霉在土壤中繁殖速 度快，且对辣椒疫霉有强烈的生长抑制作用，可以达到稳定、持续抑制病原菌数量增加、增 强病害防控效果的目的。整个施用过程简单，易于操作，适于大面积推广使用;施用的绿色 木霉在土壤和辣椒根际有较强的竞争和繁殖能力，优化辣椒的微生物区系组成，发挥对作 物促生、防病效果，为保护地土传病害防治和微生物资源的高效利用开辟新的途径。
[0011] (3)在辣椒移栽前10-30天施入含有绿色木霉的生物炭后，土壤有机质、速效磷和 速效钾含量增加，土壤细菌和真菌总体数量显著增加，土壤中可培养的拮抗微生物数量明 显增加，土壤多种酶学活性提高，辣椒疫霉数量减少，辣椒疫病的发病率比对照显著降低， 防效可达90-100%，辣椒植株生物量比不施用生物炭提高10-20%，对设施栽培土壤性状改良 和可持续利用以及设施农业的持续发展具有重要意义。
【附图说明】
[0012] 图1为实施例绿色木霉对辣椒疫霉病菌抑菌试验结果示意图。
[0013] 图2为实施例不同处理对辣椒疫病的防控效果示意图。
【具体实施方式】
[0014] 实施例中涉及的培养基配方： 试管斜面培养基PDA配制方法为:称取马铃薯100克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用 两层纱布过滤，再加葡萄糖10克，琼脂10克，溶化后补足水至500毫升，分装到25毫升的试管 中，每个试管5毫升培养基，121°C，灭菌15min后摆成斜面备用，斜面高度不超过试管长度的 三分之一。
[0015] PDA平板的配制方法为:称取马铃薯100克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用两层 纱布过滤，再加葡萄糖10克，琼脂10克，溶化后补足水至500毫升，平均分装到5个250毫升的 三角瓶中，121°C，灭菌15min后冷却到55-60°C，在超净工作台中将100毫升培养基均匀倒入 5个直径8.5厘米的无菌培养皿中，每个培养皿倒入约20毫升培养基，冷却后备用。
[0016] 液体培养基PDB配制方法为:称取马铃薯100克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用 两层纱布过滤，再加人葡萄糖10克，溶化后补足水至500毫升，分装到三角瓶中，每个250毫 升三角瓶装80毫升，121°C，灭菌15min后冷却备用。
[0017] 固体培养基的配制方法为:将麸皮与不大于5_长度的稻草按照质量比7: 3的均匀 混合，再加入去离子水使混合物中的水分含量为65%，然后121°C灭菌40min，冷却备用。
[0018] 实施例中涉及的菌剂来源： 实施例中所使用的绿色木霉菌(Trichoderma harzianum)为保藏号为CGMCC No. 9293 的绿色木霉TV41菌，由江苏省农业科学院提供。
[0019] 辣椒疫霉由中科院微生物菌种保藏中心提供。
[0020] 实施例1制备绿色木霉菌剂 a)菌种的活化 采用试管斜面保藏菌种的活化方法:将试管斜面保藏的绿色木霉菌挑取一块直径5mm 左右的菌丝块接种到试管斜面培养基PDA中活化，