20min，精密称取0.5g，置100mL 锥形瓶中，加甲醇20ml，置80°C水浴锅上回流化，放冷至室溫，过滤，滤液于25ml容量瓶中， 用甲醇定容;摇匀后经打8硅胶小柱做脱脂处理，即先用5ml蒸馈水活化小柱，即用5ml甲醇预 先淋洗，再用IOml蒸馈水洗脱后，将样品提取液直接上柱，弃取初滤液，收集续滤液为供试 品溶液。
[0063] 1.3.色谱条件
[0064] 色谱柱为Kromas i 1 Cis (250mm X 4.60mm，加皿）；流动相为甲醇-水-0.02 %憐酸，梯 度洗脱，0~50min，甲醇20%~80%;50min~55min，甲醇至100%;表4检测波长：260皿;柱 溫为室溫。
[0065] 表4梯度洗脱程序
[006引1.4.方法学考察
[0069] 精密度实验:精确吸取上述各对照品溶液，进样20化，重复5次，根据所得峰面积值 计算，测得5种药效成分峰面积的RSD见表2。
[0070] 重复性实验:精密称定同一批样品，按供试品溶液制备方法分别制备5份供试品溶 液，进行重复性实验，求得RSD值见表2。
[0071] 稳定性实验:取上述供试品溶液，分别间隔2小时进样，每次20山，重复5次，进行测 定方法的稳定性实验，求得RSD值见表5。
[0072] 表5六种药效成分的精密度、重复性、稳定性(RSD%)
[0074] 标准曲线的绘制
[0075] 依据待测样品含量范围，分别配制含有不同质量浓度的6种对照品溶液进行测定。 W相应组分的色谱峰面积(Y)对其含量(X，yg)绘制标准曲线。并计算相关系数(见表6)。
[0076] 表6六种药效成分的回归曲线、相关系数及线性范围
[0077]
[007引2.结果
[0079] 2.1. W青海玉树及四川地区野生的川西猜牙菜和都兰香日德地区种植的川西猜 牙菜为样品，分全草、根、茎、叶、花5个部位。样品采收期均为2010年9月中旬。实验用川西猜 牙菜样品由中国科学院西北高原生物研究所鉴定。
[0080] 在选定的色谱条件下测定样品，进样量为20化，根据峰面积计算不同地区野生与 栽培的川西猜牙菜全草、根、茎、叶、花各部位巧巾主要药效成分的含量。结果如表7所示。
[0081] 表7样品测定结果(含量/% )
[0083] 结果显示;不同地区的野生与栽培的川西猜牙菜中不同部位3种药效成分的含量 分布基本一致。
[0084] 野生种中3种药效成分均在花的部位含量最高，并且随根、茎、叶、花各部位其含量 依次升高。种植种中的芒果巧的含量在茎、叶、花中均较高，其余巧中成分的含量分布与野生 种一致。
[0085] 种植种中龙胆苦巧的含量明显高于野生种。
【主权项】
1. 一种藏茵陈的种植方法，其特征在于，所述藏茵陈的种植方法包括以下步骤： 1) 育苗:沙土与种子混拌育苗； 2) 选地，整地，按每株地下根茎的发育状况进行分株，按每株带2~3苗或带1~2芽，分 株，株间距15cm~30cm; 3) 田间管理:分为间苗、搭棚遮荫、中耕除草、灌溉以及合理施肥； 4) 采收及加工:种植的第二年夏、秋季花期及花后期均可采割，晒干或阴干。2. 如权利要求1所述的种植方法，其特征在于，所述的种植方法还包括步骤5)采收种 子，然后消毒并保存种子。3. 如权利要求1或2所述的种植方法，其特征在于，步骤1)中，步骤1)中，所述的育苗可 采用以下方式进行:在拌种前30-40天，用种子体积8-10倍的细沙与种子混拌均匀，湿度以 于握成团松开后即散为宜；然后把拌好的种子装在木箱内，埋在室外地势较高和较干燥的 阴凉处，深度为35-45厘米。4. 如权利要求1或2所述的种植方法，其特征在于，步骤1)中，所述的育苗也可采用以下 方式进行:在种植前3天，用浓度为100mg/kg的赤霉素水溶液浸种2小时，捞出装入布袋中用 清水冲洗到无黄色为止，然后把种子袋浮水控净;再用3%硝酸钾液于室温条件下浸种3小 时后用清水洗净，达到水无色为止，把种子袋的水控净后，按细沙或细土与种子20:1的体积 比搅拌均匀后立刻拌种到大田。5. 如权利要求1或2所述的种植方法，其特征在于，步骤2)中，所述的选地是选择山坡、 河滩地或阳坡地，土壤耕作层厚25-40cm的壤土或砂质壤土，pH值为5~7、有机质2.5%以 上，遮荫条件好或用搭棚遮荫，使照度不超过2000 lux。6. 如权利要求1或2所述的种植方法，其特征在于，步骤2)中，整地分为2次进行;第一次 于育苗期间，割去地面杂草及株高低于藏茵陈成株的小灌木，保留乔木和其他灌木，在整地 时，翻耕20~30cm，除去留于地中的杂草根及小灌木树根;第二次于种植前，再次将杂草割 除，翻耕20~30cm，整细土壤，将腐殖质土施于地表，每亩撒施1000-2000kg腐熟的农家肥或 有机肥作底肥。7. 如权利要求1所述的种植方法，其特征在于，步骤3)中，所述施肥分为提芽肥、促芽肥 和补充施肥： 提芽肥于萌芽期前期和萌芽期追一次或两次； 促芽肥于花芽、腋芽抽生期施一次； 提芽肥或促芽肥:每亩农家肥l〇〇〇kg/亩，或有机复合肥10~20kg/亩； 采收后的补施，每亩农家肥1000~2000kg或每亩有机复合肥20~30kg/亩。8. 如权利要求2所述的种植方法，其特征在于，步骤5)中，采收成熟种子后，还包括采用 40目和60目的分样筛进行筛分，收集40~60目的种子。9. 如权利要求2或8所述的种植方法，其特征在于，步骤5)中，收集的种子进行消毒：用 50 %多菌灵可湿性粉剂或70 %代森锰锌可湿性粉剂按种子重量的0.2-0.3 %的比例进行拌 种，还可以采用50 %多菌灵可湿性粉剂600-800倍数液或70 %代森锰锌可湿性粉剂500-800 倍液，或75 %百菌清可湿性粉剂800-1000倍液，在温度17-25°C下浸种消毒2-3小时，捞出后 用清水冲洗药液，晾至种皮无水;然后在〇_5°C下低温处保存种子。10. -种藏茵陈育苗方法，其特征在于，所述的育苗可采用以下方式进行:在拌种前30- 40天，用种子体积8-10倍的细沙与种子混拌均匀，湿度以于握成团松开后即散为宜;然后把 拌好的种子装在木箱内，埋在室外地势较高和较干燥的阴凉处，深度为35-45厘米； 或者采用以下方式进行:在种植前3天，用浓度为100mg/kg的赤霉素水溶液浸种2小时， 捞出装入布袋中用清水冲洗到无黄色为止，然后把种子袋浮水控净;再用3%硝酸钾液于室 温条件下浸种3小时后用清水洗净，达到水无色为止，把种子袋的水控净后，按细沙或细土 与种子20:1的体积比搅拌均匀后立刻拌种到大田。
【专利摘要】本发明提供了藏茵陈的种植方法。本发明在深入研究藏茵陈生长发育特性与适宜生长条件的前提下，在进行系统的繁育和种植实验研究的基础上，所制定的藏茵陈种植方法科学合理，通过对藏茵陈野生资源的保护抚育实现了藏茵陈质量的稳定可控，以及资源的充分、合理、可持续利用，采用本发明所提供的藏茵陈规范化种植方法，幼苗发育整齐，育苗效率高，使得植株生长茂盛，产量高；其主要成分含量与野生药材相同，但单位面积苗产量却远远高于野生药材，经济价值成倍提高。
【IPC分类】A01C1/00, A01G1/00
【公开号】CN105493863
【申请号】CN201510995469
【发明人】祝清灿, 周宁, 杨相波, 陈钟, 刘凯, 白志文
【申请人】国药集团同济堂（贵州）制药有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月28日