一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及农业生物技术领域，尤其涉及一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法。
【背景技术】
[0002] 圆叶鸟巢蕨是一种拉丁名为Neottopteris nidus cv. 〃Avis〃的中型附生蕨，是南 洋巢蕨(Asplenium australasicum)驯化出的一个圆叶盆栽品种，株形呈漏斗状或鸟巢状。 根状茎短而直立，柄粗壮而密生大团海绵状须根，能吸收大量水分。叶簇生，辐射状排列于 根状茎顶部，中空如巢形结构，能收集落叶及鸟粪;革质叶阔披针形，两面滑润，叶脉两面稍 隆起，孢子囊群长条形。
[0003] 圆叶鸟巢蕨具有四季常青、株形丰满、淡雅秀丽、叶色葱绿等特点，主要用作室内 布景盆栽，其叶片是优良的花材;卷曲的嫩叶可以煮食、也可做泡菜;鸟巢蕨的性味微苦，清 热解毒，可用于药材。
[0004] 鸟巢蕨类植物传统的繁殖方法为营养繁殖、孢子繁殖和组织培养，营养繁殖通常 需要切割母株，繁殖率低且易伤害母株，不适用于批量植苗。孢子繁殖对培育环境要求条件 高且培育周期长，不适用商业化植苗。相对来说，组织培养生产成本低，条件可控，周期短， 因此可大规模植苗。
[0005] 目前，还未有一种适用圆叶鸟巢蕨组织培养并快速繁殖的方法，直接从叶子组织 培养。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明提供一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法，包括以下步骤：
[0007] (1)愈伤组织诱导:将外植体材料清洗后，在氯化汞溶液中表面灭菌7-10min，用水 冲洗，切成块状接种于诱导培养基，45天后诱导产生愈伤组织;外植体材料为未展开的圆叶 鸟巢蕨嫩叶，诱导培养基成分为13改良培养基、1、〇-2.〇1^/16-84和0.5-1.〇11^/1嫩八；
[0008] (2)增殖培养:将愈伤组织接种于增殖培养基进行增殖，增殖培养基成分为MS基本 培养基、〇.5-1.〇11^/16-84和0.1-〇.511^/1熟八。
[0009] (3)孢子体诱导：将增殖培养后的愈伤组织接种于分化培养基，处理30天后获得发 芽的孢子体，分化培养基成分为MS基本培养基，0.4-0.5mg/L 6-BA和0.1-0.2mg/L NAA;
[0010] (4)生根培养:待孢子体的叶片长到2-3cm后，接种于生根培养基培养成苗，30d后 苗的基部长出棕色的根，生根培养基成分为15改良培养基、0.1-0.211^/1祖4、10-2(^/1蔗 糖和0.5-0.8g/L活性炭；
[0011] (5)炼苗移栽:待苗长有2~3条根，高度在4cm以上时，进行炼苗移栽，置于太阳光 下炼苗5-7d后，取出瓶苗，洗净根部附着的生根培养基，晾干并种植于灭菌后的培养基质 中，培养基质为椰糠、泥炭土和火山岩的混合物。
[0012] 本发明的一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法，通过培养基的改进，通过培养基配方 改进，愈伤组织诱导率为65.29 %，增殖率为8.71 %，分化率为达到88.35 %，生根率达到 91 · 21 %，成活率达到95 · 3 %。
[0013] 本发明工艺流程简单，以原叶体形式进行增殖，可获得大量的原叶体，通过增殖、 孢子体诱导、生根、移栽等过程，获得大量可用于生产栽培的种苗，且获得的种苗生理年龄 一致，生长整齐，适合工厂化育苗和规模化栽培。
【附图说明】
[0014] 图1为一种圆叶鸟巢蕨增殖培养效果图；
[0015] 图2为一种圆叶鸟巢蕨孢子体诱导培养效果图；
[0016] 图3为一种圆叶鸟巢蕨生根培养效果图；
[0017] 图4为一种圆叶鸟巢蕨炼苗移栽效果图。
【具体实施方式】
[0018] 下面通过【具体实施方式】结合附图对本发明作进一步详细说明。
[0019] 本发明的MS基本培养基是实验室常用的培养基，MS改良培养基在基本培养基的基 础上改良，MS基本培养基包含1650mg/L NH4N03和1900mg/L KN03，1/2MS改良培养基包含 825mg/L NH4NO3和950mg/L KN〇3,2/3MS改良培养基包含 1100mg/L NH4NO3和 1266mg/L KN〇3， 1 /3MS改良培养基包含550mg/L NH4N03和633mg/L KN〇3，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，NAA为a-萘 乙酸。
[0020] 实施例一：
[0021] 1、愈伤组织诱导培养：以未展开的圆叶鸟巢蕨嫩叶为外植体材料，用适量的洗洁 精清洗后，在流水中冲洗〇. 5h，在0.1 %氯化汞溶液中表面灭菌7min，在无菌水中冲洗3次， 切成1 X lcm大小接种于初始诱导培养基上，诱导培养基成分为：1/2MS改良培养基+2.0mg/L 6-BA+l. Omg/L NAA，处理接种30个外植体，并重复3次。45d诱导产生愈伤组织，统计愈伤组 织诱导率。
[0022]愈伤组织诱导率=诱导出愈伤组织的外植体数/未污染外植体数X 100%。
[0023] 2、增殖培养:愈伤组织接种于增殖培养基上，成分为:1^基本培养基+1.〇11^/16-BA+0.10mg/L NAA。处理接种50个外植体，并重复3次，30d后观察，统计其增殖率。
[0024] 增殖率=愈伤组织鲜重/接种鲜重。
[0025] 3、孢子体诱导培养:愈伤组织接种于分化培养基中，分化培养基成分为:MS基本培 养基+0.50mg/L 6-BA+0.20mg/L NAA。处理接种50个外植体，并重复3次，30d后观察，愈伤组 织分化出叶片，形成丛生芽。统计分化率，分化率=已分化植株总数/外植体总数X 100%。
[0026] 4、生根培养:待孢子体的叶片长到2-3cm后接种于生根培养基上培养，生根培养基 成分为：1/2MS改良培养基+0.2mg/L NAA+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L，处理接种30个外植体， 并重复3次。30d后在苗的基部形成棕色的根，根上有根毛和叉根，统计其生根率，平均根数 为 3.74±0.03。
[0027] 生根率=生根苗数/接种数X 100% ;
[0028]平均根数=生根条数/生根苗数。
[0029] 5、炼苗移栽:待无菌苗长有2~3条根，高度在4cm以上时，进行炼苗移栽，揭开培养 瓶的瓶盖，于室内自然光下炼苗5d后，小心取出瓶苗，洗净根部附着的培养基，稍晾干，种植 于灭好菌的1:1:1的椰糠，泥炭土，火山岩的基质中。温度控制在24-26°C，湿度保持在90% 左右，统计其成活率。施肥：15~20d后幼苗生新根，晴天上午采用0.2 %~0.3 %尿素溶液喷 雾后，并用清水淋洗，每7d施肥1次。病虫害防治：利用500倍多菌灵(50%)、600倍甲霜灵复 合防病，利用菊酯类杀虫剂除虫。
[0030] 实施例二：
[0031] 1、愈伤组织诱导培养：以未展开的圆叶鸟巢蕨嫩叶为外植体材料，用适量的洗洁 精清洗后，在流水中冲洗〇. 5h，在0.1 %氯化汞溶液中表面灭菌lOmin，在无菌水中冲洗3-5 次，切成1