一种榨菜与萝卜远缘复合杂交创制种质的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物遗传领域，具体涉及一种榨菜与萝卜远缘复合杂交创制种质的方法。
【背景技术】
[0002]榨菜作为我国特产，长期以来受到国内外消费者普遍欢迎。尤其是以“涪陵榨菜”为代表的重庆榨菜，更因其“鲜、香、嫩、脆”独特品质以及营养丰富、方便可口和耐储存耐烹调等优点，在国内外享有盛誉，与欧洲酸黄瓜、日本酱菜并誉为世界三大名腌菜。重庆是榨菜生产的发祥地，也是目前我国生产加工规模最大、种植最为集中的榨菜主产区。榨菜产业已成为重庆市区域化农业和农村经济发展中最具特色及优势的产业之一。因此，重庆榨菜产业的持续健康及稳定发展，在我市特别是在三峡库区的农业和农村经济发展中占有十分重要地位，也对现阶段我市区域农业增效、农民增收和农村经济发展，发挥了极其重要的作用。
[0003]榨菜又称茎瘤芥，茎瘤芥的起源和分化年代较晚，分布地方较少，很多地方栽培的茎瘤芥品种都是最先从涪陵地区引种的，据研究，茎瘤芥种质遗传基础相对较狭窄。随着茎瘤芥育种的发展，现有品种很难满足产业向多元化方向发展的需要。特别是近年来茎瘤芥病毒病、根肿病和霜霉病发展迅速，严重威胁莖瘤芥的生产。莖瘤芥病毒病榨菜原料植物的一种历史性流行病害，由于它的发病频率高，发生面积大，发生后损失严重，发病后防治困难。是茎瘤芥经济产量不稳定、年度性减产的重要原因之一。茎瘤芥根肿病是由芸薹根肿病菌侵染所致的一种严重病害。榨菜主产区涪陵地区自1994年发生根肿病以来，病害逐年加重，已成为当前危害榨菜生产的主要病害。因此，急需拓展茎瘤芥的种质资源，提高榨菜的抗病能力，以便进一步提高茎瘤芥的育种水平，满足生产和市场的需要。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题提供一种可得到稳定遗传资源的简单、快速、高效的榨菜与萝卜远缘复合杂交创制榨菜新种质的方法。
[0005]为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案:一种榨菜与萝卜远缘复合杂交创制种质的方法，其操作步骤如下:
(1)杂交:选择三个早、中、晚熟特点的榨菜品种作为母本，萝卜作为父本，进行人工杂交，得Fl代；
(2)自交:将Fl代进行自交、分离留种得四种表现性状的F2代；
(3)复交:取Fl代作为母本，选取榨菜品种作为父本进行复交，得三交种；
(4)回交:选择三交种作为母本，选择步骤(3)中作为父本的榨菜品种作为回交父本，进行连续回交，获得稳定遗传的远缘杂交后代。
[0006]采用本发明技术方案的榨菜与萝卜远缘复合杂交方法，步骤(3)复交步骤中，作为父本的榨菜品种，可以与步骤(I)中杂交母本的榨菜品种相同，也可与其不同，选择其他品种的榨菜品种。由于萝卜发病少，且发病较迟，抗逆性强，可以作为一种抗病源，通过远缘杂交将抗病基因转入到榨菜中，提高抗性，通过榨菜与萝卜进行远缘复合杂交，突破了Fl代不分离的限制，获得了大量的变异群体，创新榨菜新种质，目前未有相关报道。首先利用配合力强的榨菜与萝卜杂交获得远缘杂交后代，作为一个中间桥梁，再与其他榨菜杂交，相比于每一种榨菜与萝卜杂交，难获得杂交后代材料，大大提高了杂交的效率和操作的便捷性，既可以节省时间，又节约劳动力，同时杂交优势明显，易获得大量有价值的远缘杂交后代材料，可以解决榨菜抗逆性差、发病多、种质资源狭窄等问题，较大范围内拓宽榨菜种质资源，不仅局限于本研究使用的几个榨菜品种，同时该方法也可应用于远缘杂交难度比较大的榨菜与其他属间杂交。选用的远缘杂交亲本根据需求不同可以有目的性的选用性状表现优良的材料，为加快榨菜资源创新，促进榨菜品种更新换代奠定基础;本发明操作方法简单快捷高效，且能较大范围的增加榨菜遗传多样性。
[0007]进一步，所述的步骤(I)中，母本榨菜的品种分别为:早熟品种蔺市草腰子、中晚熟品种泡叶和晚熟品种余波。
[0008]早熟品种蔺市草腰子，品种特性:该品种出苗至现蕾140-145天，叶倒卵形，叶面微皱，叶缘细锯齿状，刺毛稀疏;瘤茎呈纺锤形，皮色浅绿，肉瘤钝圆，间沟较浅。瘤茎含水量低，皮薄筋少，脱水速度快，加工成菜率高，品种优良。但抗病毒病能力弱，开花期早盛花期时间较长，早播容易先期抽薹。
[0009]中晚熟品种泡叶，品种特性:该品种出苗至现蕾155-160天，叶卵圆形，叶面皱缩，叶缘细锯齿状，刺毛较多;瘤茎呈近圆球形，肉瘤羊角形，间沟较深。不适合加工，易鲜食，皮筋厚。抗病毒病能力较强，开花期适中盛花期时间长。
[0010]晚熟品种余波，品种特性:该品种出苗至现蕾160-165天，叶长椭圆形，叶面光滑，叶缘锯齿状，有刺毛;瘤茎呈近纺锤形，皮色浅绿，肉瘤羊角形，间沟较深。瘤茎含水量低，皮筋厚，适宜加工和鲜食，品种优良。抗病毒病能力较强，开花期晚且盛花期时间短。
[0011 ]经长期田间观察和检测，此三种榨菜品种配合力强且杂种优势明显，作为遗传改良的母本材料。为保证花期相遇，每个榨菜母本分3次播种，每次间隔10天，在西南重庆地区，分别在9月中旬，9月下旬和10月上旬播种。
[0012]进一步，所述的步骤(I)中，人工杂交后，通过混合授粉、重复授粉和喷洒激素的方式提高杂交效率。播种远缘杂交后的Fl代种子，通过田间观察远缘杂交后代Fl代的真伪，可计算真杂种获得率。
[0013]进一步，所述的混合授粉是在人工杂交过程中，母本榨菜每个花序保留2?3个雄蕊不摘除，然后再用父本萝卜花粉授粉，授粉时间在每天11:00-12:00之间;所述的重复授粉指母本榨菜与父本萝卜第一次授粉后每天重复授粉一次，直至花蕾柱头变黑为止;喷洒激素指授粉后在柱头重复喷洒100ppm 2，4_二氯苯氧乙酸，直至授粉子房膨大发育完毕为止。
[0014]进一步，所述的步骤(2)中分离留种的同时，反复喷洒激素，提高结实率。
[0015]进一步，所述的反复喷洒激素是每隔I天重复喷洒100ppm2，4_二氯苯氧乙酸，直至花期结束。
[0016]进一步，所述的步骤(2)中表现性状的F2代指性状分别为:根茎无膨大;根膨大、茎无膨大;根无膨大、茎膨大;根茎都膨大。
【附图说明】
[0017]图1为本发明实施例中四种表现性状的F2代中的根茎无膨大的根部示意图；
图2为四种表现性状的F2代中的根膨大、茎无膨大的根部示意图；
图3为四种表现性状的F2代中的根无膨大、茎膨大的根部示意图；
图4为四种表现性状的F2代中的根茎都膨大的根部示意图；
图5为本发明实施例中四种表现性状的F2代中的根茎无膨大的整株示意图；
图6为四种表现性状的F2代中的根膨大、茎无膨大的整株示意图；
图7为四种表现性状的F2代中的根无膨大、茎膨大的整株示意图；
图8为四种表现性状的F2代中的根茎都膨大的整株示意图；
图9为本发明获得的稳定遗传的远缘杂交后代示意图。
【具体实施方式】
[0018]实施例1:
一种榨菜与萝卜远缘复合杂交创制种质的方法，其操作步骤如下:
(I)杂交:
A、亲本的选择:选择发育良好、健壮、无病虫害的榨菜早熟品种蔺市草腰子、中晚熟品种泡叶和晚熟品种余波，开花盛期的植株，作为母本，选择发育良好、健壮、无病虫害且抗逆性好的萝卜作为父本；
a)、对母本进行处理:①整理花序:摘除已经开花的花蕾、即将开花的发黄的花蕾、以及去掉顶部太小的花蕾，只保留中部20-25个花蕾，然后用镊子摘除中间发育不良的花蕾;②去雄:将整好的花序夹在左手大拇指和中指之间，食指略偏上，拇指压住一个花蕾，右手用镊子轻轻拨开花蕾，去除四个雄蕊及其中部偏上的花蕾外壳，裸露出柱头，方便授粉，同时不能碰伤柱头。如果一旦夹破花药，及时摘除这个花蕾，将镊子用酒精棉球消毒，杀死粘到上面的花粉。夹时要数清四个雄蕊是否已全部取净。去雄要有一定的顺序，依次进行，以免遗漏。去雄时如发现花药变黄，则需要注意花药是否已经破裂，一般情况下，应把它去掉。夹过变黄的花药或做完一个品种另换一个品种时，用过的镊子要用酒精消毒，以防把花粉带到其他花朵或品种上。母本花序去雄完毕后，必须立即用透明塑料薄膜袋套住隔离，即能保证光照充足，又能防止其他花粉传入。套上的塑料袋用回形针别住，以免被风吹掉。
b)、对父本的处理:花粉的采集和授粉，去雄的花蕾的柱头直立且选择的花序呈羽状分叉时，表示柱头已经成熟，应及时进行授粉。一般在去雄后第2?3天的上午11时前和下午3时以后进行授粉较好，此时花粉活力最好。一般采用盛花期当天开的父本花朵进行授粉