利用兰花根菌栽培公石松的方法
【专利摘要】本发明提供利用兰花根菌栽培公石松的方法，将兰花菌根用自来水清洗干净，用75%的酒精进行表面消毒，在超净工作台上切取瘤状组织，移入真菌平板培养基待菌丝长出，提取菌丝移入相同平板培养基进行提纯培养；在25?30℃培养7?8天菌丝长满平板培养基，切割平板上菌丝块接种到混合菌培养菌袋；在24?28℃条件下培养35?40天待菌丝长透菌袋；将菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合，作为公石松栽培基质；再将公石松组织培养苗接种到基质中进行培养。本发明以野生公石松经过组织培养的苗，采用种植过兰花基料加入人工培养的内生真菌混合基质栽培公石松，能明显的促进植株增高增重和提高产品质量，从而更好地开发利用公石松的药用价值。
【专利说明】
利用兰花根菌栽培公石松的方法
技术领域
[0001]本发明属于植物栽培领域，具体涉及一种利用兰花根菌栽培公石松的方法。
【背景技术】
[0002]公石松:兰科植物血叶兰Ludisia discolor ( Ker-Gawl.) A.Rich.，是闽南民间颇具地方特色的一味草药。具有清热凉血、生津降火、利水通络、止咳等功效，可用于治疗高烧不退、咽喉肿痛、无名肿痛、脾胃病和炎症等。《中华本草》记载其功效润肺、健脾、安神，主治肺结核咳血、神经衰弱、食欲不振”。公石松对生长环境要求较苛刻，常常生长在阴湿的岩石缝中，生长地多为较丰富的内生真菌。其生长过程需要与真菌形成共生关系。
[0003]人工栽培情况根据部分经销商对公石松鲜活植株进行人工试种栽培的调查情况，因公石松对生长环境要求较苛刻，没有较权威的成熟技术可以参考，很少有人进行栽培试种研究人工种植技术.市面销售的公石松一般是通过进货鲜活植株，以沙培、水培、土培三种形式进行短期栽培.沙培以其透气性好、矿质营养充分、积水少不会烂根等优点而为多数人使用，但普遍技术含量低，生物产量增长不明显.且沙培并不是用来规模化育苗，而主要是用来适当延长新鲜植株生命周期，根据销量安排鲜活植株的供货，以保证能长期不问断供货.在生产实践中，目前还没有对其运用扦插、组织培养等无性繁殖技术进行规模化育苗的先例。
[0004]由于公石松自然繁殖力差，我们采用组培技术快繁种苗，因组培苗处于无菌状态下生长，在移植栽培时不能很好地利用自身根部来吸收土壤中营养物质，生长缓慢，利用种植过兰花基料(其基料比较适合内生真菌繁殖)加入人工培养的内生真菌混合基质栽培公石松，真菌侵入公石松根部后可形成一个共生的菌根系统，为公石松的生长发育提供相关的营养物质，本发明以野生公石松经过组织培养的苗，采用种植过兰花基料加入人工培养的内生真菌混合基质栽培公石松，能明显的促进植株增高增重和提高产品质量，从而更好地开发利用公石松的药用价值。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种利用兰花根菌栽培公石松的方法，本发明以野生公石松经过组织培养的苗，采用种植过兰花基料加入人工培养的内生真菌混合基质栽培公石松，能明显的促进植株增高增重和提高产品质量，从而更好地开发利用公石松的药用价值。
[0006]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
利用兰花根菌栽培公石松的方法，包括如下步骤:
(I)共生菌分离培养;兰花菌根用自来水清洗干净，用体积分数为75%的酒精进行表面消毒，在超净工作台上切取瘤状组织，移入真菌平板培养基待菌丝长出，提取菌丝移入相同平板培养基进行提纯培养;在25-30 °C培养7-8天菌丝长满平板培养基，切割平板上菌丝块接种到混合菌培养菌袋;在24-28Γ条件下培养35-40天待菌丝长透菌袋;将菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合，作为公石松栽培基质； (2)公石松种植栽培；当公石松组织培养苗长自3-3.5cm从培养瓶取出，用自来水把根部培养基冲洗干净;在公石松栽培基质上面铺一层Icm黄土壤，把洗净的公石松组织培养苗种植在基质上，浇透水放在没有阳光直射的地方，保持85%湿度;经过50-60天栽培，根部明显看到根瘤状菌根。
[0007]所述的混合菌培养菌袋成分为:木肩87-88%、玉米粉2-3%、石灰粉0.5-1%、麦皮麸7_8%、蔗糖0.5-1%。步骤(I)中菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合的重量比例为1:30。
[0008]所述的真菌平板培养基成分为:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、琼脂20.0g/L。
[0009]本发明的优点在于:
本发明以野生公石松经过组织培养的苗，采用种植过兰花基料(目前大规模种植文心兰主要采用小石头和树皮混合基质(图5)，种植过程需要定期更换基料)加入人工培养的内生真菌混合基质栽培公石松。这样本发明能够充分利用废物种植公石松，大大降低种植成本。有效地快繁和规模栽培公石松，从而更好地开发利用公石松的药用价值。
[0010]该发明实现了无菌条件下的种苗快繁和高效栽培，成活率达到90%以上，种植120天单株重比普通基质提高30%左右。克服普通基质容易烂根现象，从而解决了公石松自然繁殖力差所导致的自然界野生资源匮乏的问题。让这具有悠久应用历史、药效确切的中草药更好地开发利用，填补了无性繁殖技术和高效栽培的技术研究。为公石松人工栽培开辟一条全新模式。
【附图说明】
[0011]图1内生真菌菌丝。
[0012]图2公石松菌根切片可见内生真菌。
[0013]图3公石松菌根。
[0014]图4混合基料栽培的公石松。
[0015]图5小石头和树皮混合基质种植的文心兰。
[0016]图6上面铺一层黄土壤下层混合基质。
【具体实施方式】
[0017]实施例1
利用兰花根菌栽培公石松的方法，包括如下步骤:
(1)共生菌分离培养;兰花菌根用自来水清洗干净，用体积分数为75%的酒精进行表面消毒，在超净工作台上切取瘤状组织，移入真菌平板培养基待菌丝长出，提取菌丝移入相同平板培养基进行提纯培养;在25 °C培养7天菌丝长满平板培养基，切割平板上菌丝块接种到混合菌培养菌袋;在24°C条件下培养35天待菌丝长透菌袋;将菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合(1:30),作为公石松栽培基质；
(2)公石松种植栽培；当公石松组织培养苗长自3cm从培养瓶取出，用自来水把根部培养基冲洗干净;在公石松栽培基质上面铺一层Icm黄土壤，把洗净的公石松组织培养苗种植在基质上，浇透水放在没有阳光直射的地方，保持85%湿度;经过50天栽培，根部明显看到根瘤状菌根。
[0018]所述的混合菌培养菌袋成分为:木肩87%、玉米粉3%、石灰粉1%、麦皮麸8%、蔗糖1%。步骤(I)中菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合的重量比例为1:30。
[0019]所述的真菌平板培养基成分为:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、琼脂20.0g/L。
[0020]该发明实现了无菌条件下的种苗快繁和高效栽培，成活率达到96%，种植120天单株重比普通基质提高35%。
[0021]实施例2
利用兰花根菌栽培公石松的方法，包括如下步骤:
(1)共生菌分离培养;兰花菌根用自来水清洗干净，用体积分数为75%的酒精进行表面消毒，在超净工作台上切取瘤状组织，移入真菌平板培养基待菌丝长出，提取菌丝移入相同平板培养基进行提纯培养;在30 °C培养8天菌丝长满平板培养基，切割平板上菌丝块接种到混合菌培养菌袋;在28°C条件下培养40天待菌丝长透菌袋;将菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合(1:30),作为公石松栽培基质；
(2)公石松种植栽培；当公石松组织培养苗长自3.5cm从培养瓶取出，用自来水把根部培养基冲洗干净;在公石松栽培基质上面铺一层Icm黄土壤，把洗净的公石松组织培养苗种植在基质上，浇透水放在没有阳光直射的地方，保持85%湿度;经过60天栽培，根部明显看到根瘤状菌根。
[0022]所述的混合菌培养菌袋成分为:木肩88%、玉米粉2%、石灰粉0.5%、麦皮麸7%、蔗糖
0.5%。步骤(I)中菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合的重量比例为I:30。
[0023]所述的真菌平板培养基成分为:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、琼脂20.0g/L。
[0024]该发明实现了无菌条件下的种苗快繁和高效栽培，成活率达到96%，种植120天单株重比普通基质提高35%。
[0025]实施例3
利用兰花根菌栽培公石松的方法，包括如下步骤:
(1)共生菌分离培养;兰花菌根用自来水清洗干净，用体积分数为75%的酒精进行表面消毒，在超净工作台上切取瘤状组织，移入真菌平板培养基待菌丝长出，提取菌丝移入相同平板培养基进行提纯培养;在28 °C培养8天菌丝长满平板培养基，切割平板上菌丝块接种到混合菌培养菌袋;在25°C条件下培养38天待菌丝长透菌袋;将菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合(1:30),作为公石松栽培基质；
(2)公石松种植栽培；当公石松组织培养苗长自3.5cm从培养瓶取出，用自来水把根部培养基冲洗干净;在公石松栽培基质上面铺一层Icm黄土壤，把洗净的公石松组织培养苗种植在基质上，浇透水放在没有阳光直射的地方，保持85%湿度;经过55天栽培，根部明显看到根瘤状菌根。
[0026]所述的混合菌培养菌袋成分为:木肩87%、玉米粉3%、石灰粉1%、麦皮麸8%、蔗糖1%。步骤(I)中菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合的重量比例为1:30。
[0027]所述的真菌平板培养基成分为:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、琼脂20.0g/L。
[0028]该发明实现了无菌条件下的种苗快繁和高效栽培，成活率达到96%，种植120天单株重比普通基质提高35%。
[0029]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1.利用兰花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:所述方法包括如下步骤: (1)共生菌分离培养;兰花菌根用自来水清洗干净，用体积分数为75%的酒精进行表面消毒，在超净工作台上切取瘤状组织，移入真菌平板培养基待菌丝长出，提取菌丝移入相同平板培养基进行提纯培养;在25-30 °C培养7-8天菌丝长满平板培养基，切割平板上菌丝块接种到混合菌培养菌袋;在24-28Γ条件下培养35-40天待菌丝长透菌袋;将菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合，作为公石松栽培基质； (2)公石松种植栽培；当公石松组织培养苗长自3-3.5cm从培养瓶取出，用自来水把根部培养基冲洗干净;在公石松栽培基质上面铺一层Icm黄土壤，把洗净的公石松组织培养苗种植在基质上，浇透水放在没有阳光直射的地方，保持85%湿度;经过50-60天栽培，根部明显看到根瘤状菌根。2.根据权利要求1所述的利用兰花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:所述的混合菌培养菌袋成分为:木肩87-88%、玉米粉2-3%、石灰粉0.5-1%、麦皮麸7-8%、蔗糖0.5-1%。3.根据权利要求1所述的利用兰花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:步骤(I)中菌丝长透菌袋与种植过兰花的基料混合的重量比例为1:30。4.根据权利要求1所述的利用兰花根菌栽培公石松的方法，其特征在于:所述的真菌平板培养基成分为:蛋白胨5.0g/L、牛肉膏3.0g/L、琼脂20.0g/L。
【文档编号】A01G1/00GK105961010SQ201610400150
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年6月8日
【发明人】林成辉, 吴祖建, 潘贤, 廖琳琳
【申请人】福建农林大学