一种陕西卫矛种子的萌发方法
【专利摘要】本发明涉及农业技术领域，特别涉及一种陕西卫矛种子的萌发方法。该萌发方法包括：将陕西卫矛种子进行消毒处理，切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养；生根培养包括：将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后转接到炼苗培养基中进行培养；生根培养基包括KT和NAA。本发明具有的有益效果为：采用本发明方法进行陕西卫矛种子萌发诱导，实现了陕西卫矛种子萌发率从不足10％提高到了90％以上，炼苗成活率在85％左右，对于实现陕西卫矛的规模化种子繁殖具有非常重要的作用。
【专利说明】
一种陕西卫矛种子的萌发方法
技术领域
[0001] 本发明涉及农业技术领域，特别涉及一种陕西卫矛种子的萌发方法。
【背景技术】
[0002] 陕西卫矛(Euonymus schensianus Maxim)又名金丝吊蝴蝶，是卫矛科卫矛属翅果 系，果实具翅4~5,成熟后为红色，翅长可达2.5~3cm，宽1.5~2cm，吊在绿叶之间，犹如振 翅欲飞的蝴蝶，是一种园林观赏价值极高的树种。
[0003] 陕西卫矛的繁殖方法包括播种和嫁接。播种方法为:秋天果实成熟后采收，日晒待 果皮开裂后收集种子并晾干、收藏。翌年1月将种子用30°C温水浸种24小时，然后湿沙背阴 处贮藏。3月中旬移至背风向阳处并保持20~25°C温度催芽，待胚根出现后即可播种。采取 条播，行距35cm，株距3~5cm，覆土厚度2~3cm，播种量10kg/亩。嫁接方法为:可用丝棉木作 砧木，3月中下旬砧木萌动时即可嫁接。采用劈接和切接方法进行，有很高的观赏价值。
[0004] 陕西卫矛种子在自然条件下萌发率极低，常规播种试验证明其萌发率几乎为零， 而经过一定浓度的赤霉素、细胞分裂素等激素处理之后，萌发率依然很低，萌发率不足 10%。由于种子萌发条件的限制，现在陕西卫矛快繁技术多是以带芽茎段作为外植体，但是 组培苗生长较慢，炼苗不易成活。目前，园林上多采用丝棉木作为砧木进行嫁接繁殖，虽然 可以实现陕西卫矛的规模化繁殖，但嫁接属于无性繁殖，无法实现陕西卫矛的基因重组和 品种改良。因此，只有实现陕西卫矛的种子顺利成苗，才能实现亲本到子代的延续，杂交培 育新品种才具有可行性，突破陕西卫矛的种子萌发技术，对于实现该品种的种质保存和品 种改良具有非常重要的意义。因此，提供一种促进陕西卫矛种子萌发的方法具有重要的现 实意义。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明提供了一种陕西卫矛种子的萌发方法。采用本发明方法进行陕 西卫矛种子萌发诱导，实现了陕西卫矛种子萌发率从不足10%提高到了90%以上，炼苗成 活率在85%左右，对于实现陕西卫矛的规模化种子繁殖具有非常重要的作用。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0007] 本发明提供了一种陕西卫矛种子的萌发方法，包括:将陕西卫矛种子进行消毒处 理，切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养；
[0008] 生根培养包括:将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后 转接到炼苗培养基中进行培养;生根培养基包括激动素(KT)和萘乙酸(NAA)。
[0009] KT是一种非天然的细胞分裂素，化学名称为6-糖基氨基嘌呤(或N6-呋喃甲基腺嘌 呤），分子式c 1QH9N5o。不溶于水，溶于强酸、碱及冰醋酸中；除具有促进细胞分裂的作用外， 还具有延缓离体叶片和切花衰老，诱导芽分化和发育及增加气孔开度的作用。
[0010] NAA，中文名称1-萘乙酸（1-Naphthaleneacetic acid)，是一种有机化合物，化学 式:C1QH7CH2C02H，是一种易溶于有机溶剂的无色固体。它是一种植物激素生长素，常用于商 用的发根粉或发根剂中，在植物使用扦插法繁殖时使用。它也可用于植物组织培养。
[0011]本发明采用包含KT和NAA的培养基对陕西卫矛种子进行萌发培养，结果显示本发 明培养基可显著促进陕西卫矛种子的萌发，萌发率可达95%以上。
[0012] 作为优选，KT的浓度为0 · 8~1 · 0mg/L，NAA的浓度为0 · 08~0 · lmg/L。
[0013] 优选地，KT的浓度为1 · Omg/L，NAA的浓度为0 · lmg/L。
[0014] 作为优选，生根培养的条件为:光照时间为8~12h/d，光照强度为2500~35001x， 培养温度为24~26 °C，相对湿度为45 %~50 %。
[0015] 在本发明提供的实施例中，生根培养的条件为：光照时间为12h/d，光照强度为 2500~35001x，培养温度为24~26°C，相对湿度为45%~50%。
[0016] 作为优选，生根培养基为包括KT、NAA、蔗糖和琼脂的固体培养基，蔗糖的浓度为25 ~30g/L，琼脂的浓度为5~7g/L。
[0017] 在本发明提供的实施例中，生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为7g/ L〇
[0018] 作为优选，炼苗培养基为包括蔗糖和琼脂的固体培养基，蔗糖的浓度为15~20g/ L，琼脂的浓度为5~7g/L。
[0019] 在本发明提供的实施例中，炼苗培养基中蔗糖的浓度为20g/L，琼脂的浓度为7g/ L〇
[0020] 在本发明提供的实施例中，固体培养基为MS固体培养基。
[0021] 作为优选，陕西卫矛种子的采摘时间为9月11日~10月1日之间。和传统的等待果 实成熟炸开后采收种子不同，
【申请人】在9月中旬至10月上旬之间进行种子采收，此时果实由 青转红，胚已经发育成熟，具有很高的活力。本申请经试验发现，9月11之前，胚过于幼嫩而 无法成活，10月1日之后，种子接种后染菌率高达80 %以上。
[0022] 作为优选，消毒处理为：在次氯酸溶液中浸泡10~2 0 m i η，然后依次用酒精和氯化 汞各消毒5~lOmin，无菌水冲洗，将假种皮剥离，放入双氧水中。
[0023]在本发明提供的实施例中，消毒处理为:在0.1 %次氯酸溶液中浸泡lOmin，然后依 次用75 %酒精和0.1 %氯化汞各消毒5min，无菌水冲洗5~6遍，将假种皮剥离，放入1 %双氧 水中。
[0024] 在消毒处理之前，还包括种子的前处理。种子的前处理包含以下步骤：用加有洗涤 剂的清水浸泡清洗，去除果皮上残留的虫卵、污渍，再用流水冲洗2h，晾干水份。用刀片切去 果翅、上部的果蒂和下部的脐，不要伤到内部的种子。
[0025] 作为优选，切除远离种脐端的部分胚乳为切除远离种脐端的1/4~1/3体积的胚 乳。
[0026] 作为优选，生根培养后还包括炼苗。
[0027]炼苗包含以下步骤：
[0028] (1)选取生长健壮的瓶苗，先开瓶炼苗2~3d，使幼苗适应外界环境；
[0029] (2)将苗小心取出，不要伤到根系，流水冲净植株上附着培养基，洗不净则容易导 致根系发霉腐烂最终死亡；
[0030] (3)将苗栽到事先准备好已灭菌的培养土中，培养土采用蛭石：泥炭= 1:1的比例 进行配制；
[0031] (4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处；
[0032] (5)待新叶、新根长出后放置向阳处培养，注意保持湿度，可白天覆膜，夜晚揭膜， 温度保持在15~25°C，逐步加强通风；
[0033] (6)待幼苗长势健壮再进行露天栽植。
[0034]本发明提供了一种陕西卫矛种子的萌发方法。该萌发方法包括:将陕西卫矛种子 进行消毒处理，切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养;生根培养包括:将切除胚 乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后转接到炼苗培养基中进行培养;生 根培养基包括KT和NAA。本发明具有的有益效果为:采用本发明方法进行陕西卫矛种子萌发 诱导，实现了陕西卫矛种子萌发率从不足10%提高到了90%以上，炼苗成活率在85%左右， 对于实现陕西卫矛的规模化种子繁殖具有非常重要的作用。
【附图说明】
[0035]图1示接种后10天，种子开始萌动，子叶呈黄色，微微露出；
[0036]图2示接种后30天，子叶明显长出，变成绿色，胚轴开始伸长；
[0037]图3示接种后60天，子叶展开，真叶开始发育，根部开始长出；
[0038]图4示接种后90天，根系发达，有2~3条主根，长可达4~6cm，真叶展开4~6片，叶 片墨绿色，生长健壮。
【具体实施方式】
[0039] 本发明公开了一种陕西卫矛种子的萌发方法，本领域技术人员可以借鉴本文内 容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员 来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施 例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和 应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0040] 本发明采用的固体MS培养基的具体配方为:NH4N03 1.65g/L、KN031.9g/L、CaCl2 · 2H20 0.44g/L、MgS〇4.7H20 0.37g/L、KH2P〇4 0.17g/L、KI 0.83mg/L、H3B03 6.2mg/L、 MnS〇4 · 4H20 22.3mg/L、ZnS〇4 · 7H20 8.6mg/L、Na2Mo〇4 · 2H20 0.25mg/L、CuS〇4 · 5H20 0.025mg/L、CoCl2 · 6H2O 0.025mg/L、FeS〇4 · 7H20 27.8mg/L、Na2-EDTA · 2H20 37.3mg/L、肌 醇100mg/L、IVB烟酸0.5mg/L、盐酸吡咳醇（维生素B6)0.5mg/L、盐酸硫胺素（维生素Bi) 0.1mg/L、甘氨酸2mg/L。琼脂质量浓度7g/L，蔗糖质量浓度30g/L，pH值为6.0,所配培养基经 过高压高温蒸汽灭菌，126摄氏度下5分钟。
[0041 ] 组培室培养条件:光照时间12h/d，光照强度2500~35001X，培养温度为24~26°C， 相对湿度45%~50%，每3d用紫外灯灭菌25~30min。
[0042] 本发明提供的陕西卫矛种子的萌发方法中所用培养基、激素等均可由市场购得。
[0043] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0044] 实施例1
[0045] 本发明实施例陕西卫矛种子萌发方法如下：
[0046] 1、种子的处理
[0047] (1)在9月11日至10月1日之间，选取果实饱满、果皮青白色、外观完整、无病虫害的 陕西卫矛果实进行采集。
[0048] (2)采收后先用加有洗涤剂的清水浸泡清洗，去除果皮上残留的虫卵、污渍等，再 用流水冲洗2h，晾干水份。用刀片切去果翅、上部的果蒂和下部的脐，此过程不要伤到内部 的种子。
[0049] (3)种子切好后放入0.1%HC10中浸泡lOmin。
[0050] (4)在超净工作台内依次用75 %酒精和0 · 1 %HgCl各消毒5min。注：消毒液的使用 次数不超过10次，达到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完毕后要求密封保存，避免挥发降 低消毒效果;氯化汞要求避光保存，以免失效。
[0051] (5)消毒完成后，用无菌水冲洗5~6遍，每次浸泡时间要求长于3min。
[0052] (6)清洗完成后，在超净工作台内用手术刀和镊子把果实剥开，取出种子，并将种 子外面的红色假种皮剥离干净，放入1 %H2〇2中待用。
[0053] 2、接种
[0054] (1)在超净工作台内，切除种子远离种脐段的胚乳1/4到1/3体积，接种到灭菌后的 加有KT 1.0mg/L、NAA O.lmg/L的MS培养基中。接种10天后，种子开始萌动，子叶呈黄色，微 微露出（图1)。接种后30天后，子叶明显长出，变成绿色，胚轴开始伸长(图2)。
[0055] (2)培养45~60天后种子第一片真叶展开，根已经伸长，并长出须根。接种后60天， 子叶展开，真叶开始发育，根部开始长出（图3)。
[0056] (3)在超净工作台内，将长出须根的幼苗转接到不含激素的MS固体培养基中。
[0057] (4)培养45~60天后，幼苗根系发达茎干粗壮，叶片发育正常，可以进入炼苗阶段。 接种后90天，根系发达，有2-3条主根，长可达4-6cm，真叶展开4-6片，叶片墨绿色，生长健壮 (图 4)。
[0058]同时统计种子萌发率。经统计，萌发率为96%。
[0059] 3、炼苗
[0060] (1)选取生长健壮的瓶苗，先开瓶炼苗2d，使幼苗适应外界环境。
[0061] (2)将苗小心取出，不要伤到根系，流水冲净植株上附着培养基，洗不净则容易导 致根系发霉腐烂最终死亡。
[0062] (3)将苗栽到事先准备好已灭菌的培养土中，培养土采用蛭石：泥炭= 1:1的比例 进行配制。
[0063] (4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处。
[0064] (5)1个月左右，待新叶、新根长出后放置向阳处培养，注意保持湿度，可白天覆膜， 夜晚揭膜，温度保持在15~25°C，逐步加强通风。
[0065] (6)待幼苗长势健壮再进行露天栽植。栽植前统计炼苗成活率。经统计，炼苗成活 率达85 %。
[0066] 实施例2
[0067]本发明实施例陕西卫矛种子萌发方法如下：
[0068] 2、种子的处理
[0069] (1)在9月11日至10月1日之间，选取果实饱满、果皮青白色、外观完整、无病虫害的 陕西卫矛果实进行采集。
[0070] (2)采收后先用加有洗涤剂的清水浸泡清洗，去除果皮上残留的虫卵、污渍等，再 用流水冲洗2h，晾干水份。用刀片切去果翅、上部的果蒂和下部的脐，此过程不要伤到内部 的种子。
[0071] (3)种子切好后放入0.1%HC10中浸泡lOmin。
[0072] (4)在超净工作台内依次用75 %酒精和0.1 %HgCl各消毒5min。注：消毒液的使用 次数不超过10次，达到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完毕后要求密封保存，避免挥发降 低消毒效果;氯化汞要求避光保存，以免失效。
[0073] (5)消毒完成后，用无菌水冲洗5~6遍，每次浸泡时间要求长于3min。
[0074] (6)清洗完成后，在超净工作台内用手术刀和镊子把果实剥开，取出种子，并将种 子外面的红色假种皮剥离干净，放入1 %H202中待用。
[0075] 2、接种
[0076] (1)在超净工作台内，切除种子远离种脐段的胚乳1/4到1/3体积，接种到灭菌后的 加有KT 0.9mg/L、NAA 0.09mg/L的MS培养基中。
[0077] (2)培养45~60天后种子第一片真叶展开，根已经伸长，并长出须根。
[0078] (3)在超净工作台内，将长出须根的幼苗转接到不含激素的MS固体培养基中。
[0079] (4)培养45~60天后，幼苗根系发达茎干粗壮，叶片发育正常，可以进入炼苗阶段。 同时统计种子萌发率。经统计，萌发率为96 %。
[0080] 3、炼苗
[0081 ] (1)选取生长健壮的瓶苗，先开瓶炼苗2d，使幼苗适应外界环境。
[0082] (2)将苗小心取出，不要伤到根系，流水冲净植株上附着培养基，洗不净则容易导 致根系发霉腐烂最终死亡。
[0083] (3)将苗栽到事先准备好已灭菌的培养土中，培养土采用蛭石：泥炭= 1:1的比例 进行配制。
[0084] (4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处。
[0085] (5)1个月左右，待新叶、新根长出后放置向阳处培养，注意保持湿度，可白天覆膜， 夜晚揭膜，温度保持在15~25°C，逐步加强通风。
[0086] (6)待幼苗长势健壮再进行露天栽植。栽植前统计炼苗成活率。经统计，炼苗成活 率达85 %。
[0087] 实施例3
[0088]本发明实施例陕西卫矛种子萌发方法如下：
[0089] 3、种子的处理
[0090] (1)在9月11日至10月1日之间，选取果实饱满、果皮青白色、外观完整、无病虫害的 陕西卫矛果实进行采集。
[0091] (2)采收后先用加有洗涤剂的清水浸泡清洗，去除果皮上残留的虫卵、污渍等，再 用流水冲洗2h，晾干水份。用刀片切去果翅、上部的果蒂和下部的脐，此过程不要伤到内部 的种子。
[0092] (3)种子切好后放入0.1%HC10中浸泡lOmin。
[0093] (4)在超净工作台内依次用75 %酒精和0.1 %HgCl各消毒5min。注：消毒液的使用 次数不超过10次，达到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完毕后要求密封保存，避免挥发降 低消毒效果;氯化汞要求避光保存，以免失效。
[0094] (5)消毒完成后，用无菌水冲洗5~6遍，每次浸泡时间要求长于3min。
[0095] (6)清洗完成后，在超净工作台内用手术刀和镊子把果实剥开，取出种子，并将种 子外面的红色假种皮剥离干净，放入1 %H202中待用。
[0096] 2、接种
[0097] (1)在超净工作台内，切除种子远离种脐段的胚乳1/4到1/3体积，接种到灭菌后的 加有KT 0.8mg/L、NAA 0.08mg/L的MS培养基中。
[0098] (2)培养45~60天后种子第一片真叶展开，根已经伸长，并长出须根。
[0099] (3)在超净工作台内，将长出须根的幼苗转接到不含激素的MS固体培养基中。
[0100] (4)培养45~60天后，幼苗根系发达茎干粗壮，叶片发育正常，可以进入炼苗阶段。 同时统计种子萌发率。经统计，萌发率为96 %。
[0101] 3、炼苗
[0102] (1)选取生长健壮的瓶苗，先开瓶炼苗2d，使幼苗适应外界环境。
[0103] (2)将苗小心取出，不要伤到根系，流水冲净植株上附着培养基，洗不净则容易导 致根系发霉腐烂最终死亡。
[0104] (3)将苗栽到事先准备好已灭菌的培养土中，培养土采用蛭石：泥炭= 1:1的比例 进行配制。
[0105] (4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处。
[0106] (5)1个月左右，待新叶、新根长出后放置向阳处培养，注意保持湿度，可白天覆膜， 夜晚揭膜，温度保持在15~25°C，逐步加强通风。
[0107] (6)待幼苗长势健壮再进行露天栽植。栽植前统计炼苗成活率。经统计，炼苗成活 率达85 %。
[0108] 实施例4
[0109] 本发明研究了激素配比对种子生长情况的影响，试验方法同实施例1，对比结果如 下：
[0110] 表1激素配比对种子生长情况的影响
[0111]
[0112]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种陕西卫矛种子的萌发方法，其特征在于，包括:将陕西卫矛种子进行消毒处理， 切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养； 所述生根培养包括:将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后 转接到炼苗培养基中进行培养;所述生根培养基包括KT和NAA。2. 根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述KT的浓度为0.8~l.Omg/L，所述 NAA的浓度为0 · 08~0 · lmg/L。3. 根据权利要求1或2所述的萌发方法，其特征在于，所述生根培养的条件为:光照时间 为8~12h/d，光照强度为2500~35001x，培养温度为24~26°C，相对湿度为45%~50%。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的萌发方法，其特征在于，所述生根培养基为包括 KT、NAA、蔗糖和琼脂的固体培养基，所述蔗糖的浓度为25~30g/L，所述琼脂的浓度为5~ 7g/L〇5. 根据权利要求1至4中任一项所述的萌发方法，其特征在于，所述炼苗培养基为包括 蔗糖和琼脂的固体培养基，所述蔗糖的浓度为15~20g/L，所述琼脂的浓度为5~7g/L。6. 根据权利要求4或5所述的萌发方法，其特征在于，所述固体培养基为MS固体培养基。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的萌发方法，其特征在于，所述陕西卫矛种子的采 摘时间为9月11日~10月1日之间。8. 根据权利要求1至7中任一项所述的萌发方法，其特征在于，所述消毒处理为:在次氯 酸溶液中浸泡10~20min，然后依次用酒精和氯化汞各消毒5~lOmin，无菌水冲洗，将假种 皮剥离，放入双氧水中。9. 根据权利要求1至8中任一项所述的萌发方法，其特征在于，所述切除远离种脐端的 部分胚乳为切除远离种脐端的1/4~1/3体积的胚乳。10. 根据权利要求1至9中任一项所述的萌发方法，其特征在于，所述生根培养后还包括 炼苗。
【文档编号】A01H4/00GK106035078SQ201610361768
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】张丹, 张茂, 张家勋, 王东超
【申请人】河南红枫种苗股份有限公司