专利名称：一种含活性营养蛋白的保健食品及制备方法
技术领域：
本发明属保健食品技术领域。具体涉及一种含活性营养蛋白的保健食品及制备方法。
抗氧酶SOD是1969MCcod发现的消除体内自由基的氧化酶，其催化速度为化学能的104倍，SOD在人的染色体21部位产生，有CUSOD,MN-SOD及FeSOD三种细胞中含CuZnSOD(二聚体)线耕体M-SOD(为四聚体)与过氧化氢酶CAT配合生产Orr1994年发表假说“氧自由基和过氧化氢统称活性氧(ROS)是降低寿命的主因，如体内抗氧剂不充足，部分ROS免受消除，累积后势必对寿命有关的细胞功能致不可挽救的损害，寿命减短。SOD蛋白有二个亚基，分子量为16000-19000”。SOD在任何口服或非肠道给药方法都不能通过血脑屏障。在神经引起肌肉萎缩侧索硬化症(ALC)药理研究时，不得已应用-20℃保藏的重组人型SOD(Rhsod)作脊椎滴注。(Cudkvwicz1997。我们发现，人工致大脑衰老的大白鼠在直接口服高效营养蛋白后，40天后，脑海马体、纹状体及下丘脑三区的衰老细胞全部恢复正常，口服蛋白C后，三脑区中SOD的浓度升高分别为致衷型159.35％,158.61％,157.29％。蛋白B则升高为179.37％,183.44％,173.16％。
本发明的目的在于从蛋白质中分离得到蛋白B和蛋白C制成营养食品，使人体服用后，首先促进血浆必需氨基酸平衡，特别促进SOD产生，加强体内自由基消除能力，达到促生长、抗衰老目的。
本发明提供了一种含活性营养蛋白的保健食品，该保健食品是由下列成分组成的精制蛋白质原料、维生素、矿物质及添加剂，其中(B)精乳清蛋白的包装和添加剂一、包装1．每100g乳清蛋白内含全氮为81.06％、热值为387.58卡；2．每份摄入量为14克，内含蛋白质 10克碳水化合物 0.73克脂肪 0.53克矿物质 0.39克每份热值为 47.38卡二、每100g中加入的维生素、矿物质和添加剂维生素 A 700-900iuBk 8.1-9.5kgN.A.A. 0.3-22mgB20.1-0.2mgB11.04mgE 33.21iuB61.04mgD314.5iuC 120mg谷氨酰胺 2g 糊精-麦芽糖 5g
香兰素0.2g 果糖1g卵磷脂2g柠檬酸钙 3.5g甲硫氨酸 2g阿斯巴甜1g(C)乳清蛋白(母奶成分)、大豆分离蛋白的包装和添加剂一、包装1．每100g(乳清蛋白40g，大豆分离蛋白50g、小麦谷氨酰胺肽10％)含全氮69.69％，热值336.55卡。
2．每份摄入量为15g，内含蛋白质 10克碳水化合物 0.72克脂肪0.94克矿物质 2.62克每份热值为 51.21卡二、每100g中加入的维生素、矿物质、添加剂维生素 A 700-900iuB128.1-9.5μgN.A.A 0.3-22mgB20.1-0.2mgE 33.21iuB11.04mgB61.04mgD314.5iu
C 120mg谷氨酰胺 2g 果糖1g香兰素 0.2g 柠檬酸钙 3.5g卵磷脂 2g 阿斯巴甜1g甲硫氨酸 2g 玉米油1.2g糊精-麦芽糖5g本发明的含活性营养蛋白的保健食品的临床研究结果如下乳香蛋白C1对××福利院营养不足儿童生长发育的研究(苏州医学院保健食品研究所)1材料与方法1.1研究对象××福利院33例儿童，其中女孩24例，男孩9例，年龄最小生后38天，最大6岁，作为口服C1蛋白的研究对象。
1.2分析指标分析指标包括体重、身高、血红蛋白定量、血浆蛋白(总蛋白、清蛋白、球蛋白等)定量，血浆八种必需氨基酸(赖氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，苏氨酸，蛋氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸等)的定量。
1.3分析方法1.3.1 C1蛋白服用量按儿童体重，平均每公斤体重，每天温水冲服0.52克/kg C1蛋白，固定时间服用，连续服二个月。
1.3.2分析方法使用一般测量儿童服用二个月前及服用二个月后的体重与身高，分别以公斤及厘米表示；使用Hb仪器分析法，分析儿童服用二个月前、服用二个月后血液Hb含量，以Hb克/L表示；使用Lowery’s改良法，测定儿童服用二个月前、服后血浆蛋白包括血浆总蛋白，清蛋白以及球蛋白，以100毫升血浆蛋白克表示；使用萤光试剂，丹酰氯，标记血浆游离AA，然后进行聚酰氨薄膜层析，分析儿童服用二个月前、服用二个月后血浆八种必需氨基酸水平，以100毫升血浆含有μmol表示。
2结果与讨论2.1结果2.1.1儿童口服乳香蛋白C1二个月后体重增长的情况，于表1。
表1 口服C1蛋白二个月前后体重(kg)的改变
表1，说明儿童口服C1蛋白二个月，体重虽增加1.26公斤，但无显著性。
2.1.2儿童口服C1蛋白二个月，身高增长的情况于表2。
表2 口服C1蛋白二个月身高(cm)的改变
表2，说明口服C1蛋白二个月后，身高平均增长3.72厘米，但无显著性。
2.1.3儿童口服C1蛋白二个月前后全血，血红蛋白改变的情况于表3。
表3儿童口服C1蛋白前后血红蛋白水平(克/L)的改变
表3，说明儿童口服C1蛋白二个月后，血红蛋白平均增加6克，且有显著性(P＜0.05)升高。
2.1.4儿童口服C1蛋白二个月后，血浆总蛋白、清蛋白、球蛋白含量的改变，于表4。
表4儿童口服C1蛋白前后，血浆三种蛋白含量(克/100ml)的改变
表4，说明儿童口服乳香蛋白C1二个月后，血浆总蛋白及清蛋白的含量均有明显升高，但球蛋白的升高甚微，无明显性。
2.1.5儿童口服C1蛋白二个月后，血浆中八种必需氨基酸浓度的改变，于表5。
表5 儿童口服C1蛋白前后，血浆中八种必需AA浓度(μmol/100ml)改变
表5，说明儿童口服C1蛋白二个月，Trp口服前未被测出，但口服后被测得4.50μmol/100ml。因此除Met在口服前后未被测出外，其余七种必需氨基酸浓度均成倍增加，所以血浆必需AA都明显增加(P＜0.001)。
2.2讨论2.2.1儿童服用C1蛋白二个月后，全血血红蛋白明显增加(＜0.05)，证明C1蛋白具有促进造血功能，这不仅适合儿童服用也很适合不同原因引起的贫血病人服用。
2.2.2儿童服用C1蛋白二个月后，使血浆中总蛋白及清蛋白均增高，这不仅适合儿童服用，更适合肾脏疾病、肝脏疾病所致的清蛋白降低的病人服用。
2.2.3儿童服用C1蛋白二个月后，使血浆中七种必需AA均成倍增加，这对儿童的智力、体质增强，均有重要的促进作用。
1．材料与方法1.1研究对象××托儿所29例营养好儿童，其中女孩13例，男孩16例，年龄5岁15人，6岁14人，作为口服乳香蛋白B的研究对照对象。
1.2分析指标分析指标包括体重、身高、血红蛋白定量，血浆蛋白(T,A,G)定量，血浆八种必需氨基酸(赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸等)的定量。
1.3分析方法1.3.1.B及C蛋白服用量按儿童体重，平均每公斤体重，每天口服0.64克/kgB蛋白，0.52克/kgC蛋白固定时间，用温水冲服，连续服二个月。
1.3.2．分析方法1．使用一般方法测量儿童服用二个月前后的体重与身高，分别以公斤及厘米表示。
2．使用血红蛋白分析仪，直接测定儿童服用二个月前后的血红蛋白含量，以克/L表示。
3．使用Lowery’s改发法，测定儿童服用二个月前后血浆蛋白质的含量以克/100毫升表示。
4．使用荧光试剂——丹酰氯标记血浆游离氨基酸，然后进行聚酰胺薄膜层析，分析儿童服用二个月前后血浆八种氨基酸的含量，以100毫升血浆含有微克分子(μmol/100毫升)表示。
2结果与与讨论2.1结果2.1.1口服B蛋白二个月后儿童体重的增长情况，于表1。
表6口服B蛋白前后体重(kg)改变
表6说明儿童口服B蛋白二个月后，平均体重虽增加1.28公斤，但无显著差异。
2.1.2儿童口服B蛋白二个月后，身高增长的情况于表2。
表7口服B蛋白前后身高(cm)改变
表7说明儿童口服B蛋白二个月后，身高平均增长2.87厘米，比口服前有显著性差异(＜0.01)。
2.1.3儿童口服B蛋白二个月后，全血血红蛋白水平改变情况，于表3。
表8口服B蛋白前后Hb(g/L)
表8说明儿重口服B蛋白二个月后，血红蛋白平均负增加2.89克，其原因尚待进一步研究。
2.1.4儿童口服B蛋白二个月后，血浆总蛋白，清蛋白，球蛋白等含量的改变，于表4。
表9口服B蛋白前后血浆蛋白(g/100ml)含量改变
表9说明儿童口服乳B蛋白二个月后，血浆总蛋白增加0.03克100ml，而清蛋白反而下降0.31克/ml，但球蛋白平均增加0.44克/100ml，并与口服前，有明显的差别(P＜0.01)。
2.1.5儿童口服B蛋白二个月后，血浆中八种必需氨基酸水平的改变，于表5。
表10口服B蛋白前后血浆八种必需AA
表10除Met未被测出外，说明儿童营养好口服B蛋白二个月后，Leu,Ile,val,Lys等4种必需氨基酸水平，没有明显升高(P＜0.01)。是负对照。
2.2讨论2.2.1儿童服用B蛋白二个月，体重增长不明显，但身高明显增长，这很合适偏胖孩子服用。
2.2.2儿童服用B蛋白二个月后，血浆中总蛋白稍增加，清蛋白明显降低(＜0.01)，而球蛋白明显升高(P＜0.01)。
2.2.3儿童服用乳香蛋白B二个月后，血浆中Leu,Ile,val以及Lys等水平明显增加(P＜0.01)，其中前三种氨基酸含量的增加有利智力增长发育，后一种氨基酸含量的增加有利促进骨骼生长。
××托儿所，口服、0.8克/kg/日60天表11口服蛋白前后体重(kg)改变
表12口服蛋白B前后身高(cm)改变
表13口服B蛋白(8/R)改变
表14口服B蛋白前后血浆蛋白(g/100ml)改变
表15口服B蛋白前后血浆必需氨基酸(μmol/100ml)浓度改变
××福利院，口服c1、0.8克/kg/日40天表16口服蛋白前后体重(kg)改变
表17口服B蛋白前后身高(cm)改变
表18口服蛋白前后血红蛋白(克/L)水平改变
表19口服B蛋白前后血浆蛋白(g/100ml)改变
表20口服B蛋白前后血浆必需氨基酸改变
本发明的含活性营养蛋白的保健食品的动物实验结果如下1．实验方法1.1．动物分组实验选用江苏省动物中心提供的体重在140-160克范围内的纯种wistar’s健康雄性大鼠，随机分成四组(1)正常对照组；(2)致衰老组；(3)B蛋白组；(4)C蛋白组。
1.2．致动物脑衰老的方法(2)致衰老组每天按大鼠100克体重，皮下一次注射D一半乳糖水溶液5mg，(3)B蛋白组及其(4)C蛋白组除每天皮下注射D一半乳糖同时按每100克鼠重分别每日一次灌胃0.64克/kgB蛋白及其水C蛋白0.52克/kg。然后(1),(2),(3),(4)等四组动物统一饲养，统一饲料，连续40天，最后活杀取样，观察分析各项指标。
1.3．指标的分析使用电子秤称取体重；使用黄嘌呤氧化酶方法，测定三脑区组织中SOD活力，使用双缩脲方法测定三脑区组织中蛋白质含量。
1.4．三脑区组织病理活检断头处死动物，打开脑壳，在冰上按投影分别取出海马，纹状体，下丘脑等三个脑区，然后分别用福尔马林固定，石蜡切片，伊红染色，观察不同脑区组织细胞的病理改变。
2．实验结果2.1．大鼠体重增长的情况表21，四组大鼠体重(克)增长的比较
表21结果说明(1)正常对照组动物体重平均增长了79.7克，(2)致衷老组体重增长了61克，(3)致衷老+B蛋白组，体重增长了100克，(4)致衰老+C蛋白水解物组体重增长了98克。
2.2．大鼠三脑区蛋白质量的改变表22，四组大鼠三脑区组织中蛋白质含量(mg/100mg湿组织)的比较
表22结果四组大鼠三个脑组织中蛋白质含量均有一定的变化，(2)致脑衰老组三脑区蛋白质含量均降低，而(3)与(4)组三脑区蛋白质含量均较高，甚至超过(1)正常对照组。
2.3．大鼠三脑区超氧化物歧化酶(SOD)活力的改变表23，四组大鼠三个脑区组织中SOD活力(NU/ml)的比较
表23结果(2)致衰老组三脑区组织SOD活力最低；(3)致衰老+B蛋白0.64克/kg组三脑区SOD活力最高，(4)致衰老+C蛋白0.52克/kg组三脑区SOD活力也较高SOD增加口服总蛋白质量成正比增加；(3)与(4)组三脑区SOD活力超过(1)致衰组及正常对照组。2.4．大鼠三脑区组织结构的病理改变2.4.1海马(kippocampus)正常对照组大鼠海马区组织细胞圆形，椭圆型，边缘清晰，细胞浆分布均匀，组织结构未见病理改变。致衰老组大鼠海马区组织细胞呈梭型，边缘不清，核固缩。服用B蛋白及其水C蛋白，海马区组织细胞基本恢复正常，细胞呈圆形，椭圆型，只有个别细胞见有核固缩。
2.4.2．纹状体(striatum)正常对照组纹状体区组织细胞均含有清晰的胞浆界线，核大周围充满胞浆，分布均匀，未见病理改变。致衰老组纹状体区组织细胞减少，核固缩呈不定型，胞浆减少。B蛋白及其C组的纹状体区组织细胞形态基本恢复正常，核大，分布均匀，充满胞浆，只有少数细胞仍见核固缩。
2.4.3．下丘脑(hypothalamus)正常对照组下丘脑区组织细胞充满胞浆，核大，分布均匀，未见病理改变。致衰老组细胞变形，核固缩。乳清蛋白及其水解物织下丘脑区组织细胞形态基本恢复正常，个别细胞尚留有核固缩。
表24蛋白质B和C对动物生长发育影响
*p＜0.05**p＜0.01***p＜0.001与正常组比较表25蛋白质B及C抗动物脑衰老的研究
*p＜0.05**p＜0.01***p＜0.001与正常组比较Δp＜0.05 ΔΔp＜0.01 ΔΔΔp＜0.001与衰老组比较本发明的含活性营养蛋白的保健作品的临床研究结果表明营养蛋白B、C，超沪后2、3肽已检出C2的乙肽有18个。分子量中含有支健氨基酸(BCAA)，B为51.76％，C为52.47％。口服剂量B为0.64克/kg体重，C为0.52克/kg。而联合国1995年规定儿童为0.92克/kg(1995)。
60天临床效果，福利院24位儿童全部恢复健康，血浆EAA比口服前增加179％，BCAA增加199.77％。显著表示B、C蛋白的高效利用。国外1999报告美国ASF运动员用高级蛋白的EAA增加为144％。
城市托儿所儿童口服B、C蛋白效果不显著，体内EAA不大增加，说明该儿童营养好，没必要口服营养蛋白，对照结果。
动物试验，Wistar’s大白鼠100克，口服蛋白40天后，血浆中EAA增加138.37％，BCAA增加139.48％，与儿童的体N正平衡相仿。
半乳糖致衰的大白鼠，经40天口服B或C后，血相及游泳能力全部恢复，体重由原来157克升为255克，说明蛋白B和C的显著抗衰老作用。
本发明的另一目的是提供了上述含活性营养蛋白的保健食品的制备方法，该方法包括下列步骤(一)纯乳清蛋白A．乳清分离蛋白provon蛋白质95％以上，投料40Kg无盐水40升、磨细加热，加精制中性蛋白酶0.5克/kg原料，温度50℃，PH7-7.5，揽拌反应2小时，85℃5分钟酶失活。
B．氨肽酶，米面霉酶或风味酶(Novo公司)2.5％，温度55，调PH7.0，反应4小时，85℃5分钟使酶失活。 (二)大豆分离蛋白酶解A．大豆分离蛋白，蛋白质95％以上(美国)，投料40kg，无盐水240升，磨细加结晶木瓜酶10克/公斤(L-半胱氨酸0.005M,EDTA 0.002M。温度65℃，PH7.5反应2小时，85℃酶失活。
B．PH调7.5加风味酶2.5％，反应4小时，85℃5分钟失活。 (三)乳原酸钠(M-160)40kg+无盐水240升，后再加100升，大豆浓缩蛋白50kg,PH7.5，温度60℃，风味酶6kg，反应8小时，85℃失活。超离心(固体回收)，喷雾干燥70kg，收率77.8％。
工艺因设备变化，也可A、B分开，混合A液，于B步合并第二次酶解。固体的无机盐等按光明牛乳公司化验室每批必测试，全部合格。
以上均系酶解原料，制剂时加维生素、无机盐、香料、炭水化合物、小麦谷氨酰胺多肽等等，配方按营养学原规配制。B产品是纯乳清蛋白，含母乳蛋白成份，C产品是乳清40％，大豆分离，浓缩蛋白50％，小麦谷氨酰胺肽10％。
分析1．肽常规经高压液相与新西兰乳清肽比较相似。
2．产品C超滤微量试验经Amicon Centriprep 10(分子量截留10,000)得53.93％,30号(截留量3000)得45％。见
图1。
3．分肽检测，按特殊质谱得以裂解离子峰后，用Protein EletrosprayLC/MC Chiron Corporation裂解规率检测。
C2蛋白Mass见图2。
乳酸菌氨肽酶较米面酶多，切品和底物肽链顺序不同，产物也不同。乳酸菌酶只得5个2肽。本产品C2所用的酶可得18个二肽。指示吸收快速。国内外未见报导。
图3为蛋白C凝胶电路图，其中#1植物蛋白肽、#8强化蛋白C、5#纯化乳清蛋白、#4强化酪蛋白。
分析结果(以下数据为样品分析时用量中的各氨基酸含量)
分析结果(以下数据为样品分析时用量中的各氨基酸含量)
分析结果(以下数据为样品分析时用量中的各氨基酸含量)
本发明的含活性营养蛋白的保健食品具有以下特点(一)蛋白C2有18个二肽，活性强，强快速通过小肠粘膜，维持血浆中达EAA的正平衡福利院营养不良儿童临床，口服低日允许量(RDA)0.92克/kg的规定下，B剂量0.64克/kg和C剂量0.52克/kg，60天后，血浆中总ECA增加169.9％，BCAA增加199.77％，B和C口服结果相似。60天后身长升3.72厘米，体重增1.26kg，完全恢复健康，脱离贫血。指营养蛋白的活性强，EAA特别BCAA吸收量大，足以直接参与体内组织蛋白质的合成，是有效蛋白质的循环，达到克服贫血，脱离生长发育蛋白不足要求，恢复儿童正常生长和发育。
(二)蛋白质B、C有效地促进衰老大白鼠脑中抗氧酶SOD的产生，加强消除自由基并可限制其他活性氧(ROS)的活性能力，40天口服后完全恢复生长，游泳能力，体重增加，主要是脑区中SOD活力显著增加为表SOD(μMOL/ml)增加
40天后血浆中EAA增138％，BCAA增138-139％，可通过血脑屏障达脑部，直接参与Sod合成，是活性蛋白质的循环，因为Sod是大分子，不能通过脑屏障。国际上未见报导，体外Sod能增加体内自由基的消除能力。
有效营养蛋白能达到组织蛋白的合成和加强体内自由基及Ros的消除，其原理是1、营养蛋白的必需氨基酸是满足体氨正平衡需要，动态供应新蛋白质合成原料。2、SOD在大脑海马体、纹状体中是与过氧化氢酶(CAT)，谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione Peroxidase GSH-PX)是同步协调产生的，所以认为蛋白B、C是细胞内普遍抗氧化酶的合成前体(pro-Enzymatic Antioxidant Precursor)。
权利要求
1．一种含活性营养蛋白的保健食品，其特征在于该保健食品是由精制蛋白质原料、维生素、矿物质及添加剂组成的。
2．根据权利要求1所述的一种含活性营养蛋白的保健食品，其特征在于其中所述的精制蛋白质原料为乳清蛋白、大豆分离蛋白或小麦谷氨酰胺肽；维生素为A 700-900iv、B128.1-9.5μg、N.A.A 0.3-22mg、B20.1-0.2mg、E 33.21iv、B11.04mg、B61.04mg、D314.5iv、C 120mg；矿物质和添加剂为谷氨酰胺2g、香兰素0.2g、卵磷脂2g、甲硫氨酸2g、糊精-麦芽糖5g、果糖1g、柠檬酸钙3.5g、阿斯巴甜1g及玉米油1.2g。
3．根据权利要求1所述的一种含活性营养蛋白的保健食品的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)制备纯乳清蛋白乳清分离顶部加一倍量无盐水，磨细加热，加精制中性蛋白酶，在50℃中性pH条件下反应2小时，再85℃五分钟使酶失活，或加氨肽酶、米面霉酶或风味酶在50℃、中性pH条件下反应4小时，再85℃五分钟使酶失活，然后超离心，取清液、均质、喷雾干燥；(2)大豆分离蛋白酶解大豆分离蛋白加6倍量无盐水、磨细、加结晶木瓜酶，在65℃、中性pH条件下反应2小时，85℃酶失活，或架风味酶反应4小时，85℃5分钟酶失活，超离心、喷雾干燥；(3)乳原酸钠，加6倍量无盐水，加大豆浓缩蛋白，在60℃pH7.5条件下，加风味酶，反应8小时，85℃失活，超离心，喷雾干燥；(4)制备营养保健食品将步骤(1)、(2)、(3)制得原料，按处方量再加入维生素、矿物质及添加剂即制得本发明的营养保健食品。
全文摘要
本发明属保健食品技术领域。本发明公开了一种含活性营养蛋白的保健食品。该保健食品由精制蛋白质原料、维生素、矿物质及添加剂组成的。本发明的保健食品,使人体服用后促进血浆必需氨基酸平衡,特别促进SOD产生,加强体内自由基消除能力、得到促生长抗衰老目的。
文档编号A23L1/29GK1324580SQ01112930
公开日2001年12月5日 申请日期2001年5月18日 优先权日2001年5月18日
发明者蔡润生, 蔡科林 申请人:蔡润生, 蔡科林