专利名称：Fki－1366物质及其生产的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有增强吡咯抗真菌剂活性的新的FKI-1366物质及其生产。FKI-1366物质是FKI-1366A物质、FKI-1366B物质和FKI-1366C物质的统称。
先有技术关于用于治疗霉菌病的吡咯类，已知1-[(2-(2，4-二氯苄基氧基)-2-(2-，4-二氯苯基)乙基]咪唑(属名米康唑，Sigma Inc.，U.S.)、2，4-二氟-α，α-双(1H-1，2，4-三唑-1-基-甲基)苯甲醇(属名氟康唑，ICN Pharmaceuticals Inc.，U.S.)以及(±)-1-仲-丁基-4-[p-[4-[p-[[(2R，4S)-2-(2，4-二氯苯基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基-甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-哌嗪基]苯基]-Δ2-1，2，4-三唑(triazolin)-5-酮(属名伊曲康唑，Kyowa Hakko Kogyo K.K.，日本)。
这些化合物与用于治疗霉菌病的多烯抗菌素相比具有高度的安全性，例如(1R，3S，5R，6R，9R，11R，15S，16R，17R，18S，19E，21E，23E，25E，27E，29E，31E，33R，35S，36S，37S-33-(3-氨基-3，6-二脱氧-b-D-甘露吡喃糖基氧基)-1，3，5，6，9，11，17，37-八羟基-15，16，18-三甲基-13-氧-14，39-二氧杂双环[33.3.1]三十九烷基-19，21，23，25，27，29，31-庚烯-36-羧酸(属名两性霉素B，Sigma Inc.，U.S.)，并且是最常使用的药物(Anaissie E.J.等人，临床感染疾病，23964-972，1966).
然而，近来，由于长期或反复使用这些吡咯抗真菌剂而导致的抗性菌的出现成为问题。结果，非常急需研发具有高度安全性且抗性微生物出现率低的药物。
目前抗真菌剂药物研发的主要方向是研发具有直接作用于真菌的具有杀真菌或者能够抑制真菌作用的药物。药物的创造不再着眼于增强已知抗真菌剂的活性。
发明的公开在伴随免疫受损的疾病，例如HIV感染和血液疾病中诱发受损的宿主的疾病，并且产生真菌感染作为机会感染的频率增加了。带有这些免疫条件受损的疾病通常是严重的，并且需要长期的治疗。结果，在目前最常用的吡咯抗真菌剂可能被认为会导致抗药性的产生，因为在许多情况下，真菌感染需要进行长期的化学疗法。
针对吡咯抗真菌剂的抗性机制已知为如下情况。在白色假丝酵母(Candida albicans)中，作为氨基酸突变的结果，一种靶酶，P-450，即1-α-脱甲基酶的过量表达或与药物亲和性减少(VandenBossche，H.等人，抗菌剂和化学疗法，36，2602-2610，1992；Sanglard，D.等人，出处同前，42，241-253，1998)并且通过多药物排出传输子例如MSF(主要促进子超家族)和ABC(ATP结合盒)减少细胞内药物浓度(Fing，M.E.等人，Mol.Gen.Gent.，227，318-329，1991；Sanglard，D.等人，Microbiology，143，405-416，1997)，这是已知的。在啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，已有报道说MDR(多药抗性)基因，PDR16和PDR17，能够改变脂质体代谢以获得针对吡咯化合物的抗性(H.Bart van den Hazel，等人，J.Biol.Chem.，274，1934-1941，1999)。
因此，能提高吡咯抗真菌剂活性的药物被希望通过减少药物使用量以及缩短使用时间而减少出现抗性微生物的频率。而且，作为联合使用两种具有不同骨架结构药物的结果，希望其能够对于针对吡咯抗真菌剂的抗性有效。在这样的条件下，提供具有增强吡咯抗真菌剂活性的药物对于治疗各种真菌感染例如深层霉菌病和吡咯抗性霉菌病是有用的。
解决问题的方式本发明的一个方面是提供FKI-1366物质，其是FKI-1366物质A、FKI-1366物质B以及FKI-1366物质C的统称，具有增强目前实际上使用的抗真菌剂活性，并且具有增强抗真菌剂活性的功能，这些抗真菌剂能够以低浓度在短时间内作用于多种霉菌病，例如深层霉菌病，并且使其能降低抗性真菌菌株出现的频率，及其生产。
我们已经发现，作为研究各种微生物所产生的代谢物的结果，新近从土壤里分离出来的菌株FKI-1366的培养团块中所产生的物质具有活化吡咯抗真菌剂的特性。我们还发现，作为从培养团块中分离和纯化活性物质的结果，该物质具有如下通式[I]、[II]和[III]所代表的化学结构。由于具有通式[I]、[II]和[III]所代表的化学结构的物质迄今为止是未知的，被命名为FKI-1366物质A，FKI-1366物质B和FKI-1366物质C.
本发明的完成是这些发现的结果。本发明的目的之一是提供如下化学结构[I]所代表的FKI-1366物质A。
本发明的另一目的是提供如下化学结构[II]所代表的FKI-1366物质B。
本发明的另一个目的是提供如下化学结构[III]所代表的FKI-1366物质C。
本发明的进一步目的是提供由如上化学结构[I]、[II]和[III]分别代表的包含FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C的粗FKI-1366物质。
本发明另一个目的是提供用于生产FKI-1366物质A的方法，其包括在培养基中培养具有产生FKI-1366物质A能力的属于白僵菌属(Beauveria sp.)的微生物，在培养液中积累FKI-1366物质A并且从所培养的团块中分离FKI-1366物质A。
本发明另一个目的是提供用于生产FKI-1366物质B的方法，其包括在培养基中培养具有产生FKI-1366物质B能力的属于白僵菌属的微生物，在培养液中积累FKI-1366物质B并且从所培养的团块中分离FKI-1366物质B。
本发明另一个目的是提供用于生产FKI-1366物质C的方法，其包括在培养基中培养具有产生FKI-1366物质C能力的属于白僵菌属的微生物，在培养液中积累FKI-1366物质C并且从所培养的团块中分离FKI-1366物质C。
本发明另一个目的是提供用于生产粗FKI-1366物质的方法，其包括在培养基中培养具有产生FKI-1366物质A和/或B和/或C能力的属于白僵菌属的微生物，在培养液中积累FKI-1366物质A和/或B和/或C并且从所培养的团块中分离FKI-1366物质A和/或B和/或C。
本发明的另一个目的是提供生产粗FKI-1366物质的方法，其中具有产生FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C能力的微生物是白僵菌属FKI-1366FERMBP-08459。
本发明的另一目的是提供属于白僵菌属并且具有产生FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C能力的微生物。
本发明的另一目的是提供白僵菌属FKI-1366FERMBP-08459微生物。
具有产生由以上通式[I]、[II]或[III]所代表的FKI-1366物质A或FKI-1366物质B或FKI-1366物质C能力的微生物(在下文中被称为“FKI-1366物质产生微生物”)属于白僵菌属，然而该微生物不限于上述并且可以是没有限制的具有产生本发明物质能力的任何菌株。用于产生本发明的FKI-1366物质的一个菌株优选实施例是例如白僵菌属FKI-1366，它是本发明的申请人新近从土壤样本中分离出来的。
菌株的分类特性如下所示。
(1)形态学上的特性观察到在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基、麦芽提取物琼脂培养基、玉米粉琼脂培养基和Miura’s琼脂培养基中生长良好。带分生孢子在各种琼脂培养基中都良好。
生长在Miura’s琼脂培养基上的菌落的显微镜观察显示具有间隔的无色菌丝，以及分生孢子发生器官，单独或成簇地，直接从气生菌丝或从短枝伸展出来(2.8-4.3×1.8-2.8μm)。分生孢子发生器官的基底凸出成具有3.3-5.6×2.0-3.3μm大小的半球形或球形。取决于形成的分生孢子，分生孢子发生器官的顶部延长变尖锐形成锯齿形式，具有5-12μm的长度。分生孢子具有球形至半球形无色形式，1.8-3.0×1.8-2.6μm，从分生孢子的分生孢子发生器官小突出区域萌芽而形成。观察到气生菌丝担子为杆状或为不规则的衣形芽孢。
(2)在各种琼脂培养基上的培养特性在25℃14天中对在各种琼脂培养基上的培养特性的显微镜观察结果见下表。
3.生理学特性
1)最佳生长条件菌株的最佳生长条件是pH 3.4-7.9，13.2-30.5℃。
2)生长范围菌株的生长范围是pH 2.4-9.8，7.4-32.4℃。
3)需氧或厌氧的区别需氧。
如上所述，基于菌株FKI-1366与已知菌株形态学上的特性、培养特性和生理学上的特性的比较研究结果，这个菌株被鉴定为属于白僵菌属种类，并且被称为白僵菌属FKI-1366。这个菌株以白僵菌属FKI-1366的名称保藏在独立行政法人产业技术综合研究所(IPOD)，Higashi 1-1-3，Tsukuba市，Ibaragi-ken，日本，并且在2003年8月27日被给予永久保藏号No.FERMBP-08459。
被用在本发明中的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C生产菌株的例子是前述的白僵菌属FKI-1366，但是作为一种微生物普遍的特性，菌株容易突变并且不是不变地维持在其天然环境中，公知的是自然突变或人工通过使用紫外线照射，X-射线照射或采用诱变剂处理(例如N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍或2-氨基嘌呤)进行突变。属于白僵菌属的菌株包括人工突变物，细胞融合菌株和一般的遗传工程菌株，并且产生能被用于本发明中的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C。
在本发明的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C的生产中，FKI-1366物质A，FKI-1366物质B和FKI-1366物质C的产生菌株属于白僵菌属，其被培养在优选培养基中。用于生产FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C的优选营养源的例子是可吸收的碳源、可消化的氮源以及，如果必需的，无机盐、维生素等等。
上述可吸收的碳源是糖类，例如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖、糊精和淀粉以及植物油例如豆油，其联合或单独使用。
可消化的氮源例子是蛋白胨、酵母提取物、肉汁提取物、豆粉、棉籽油、玉米浸汁、麦芽糖提取物、酪蛋白、氨基酸、尿素、铵盐或硝酸盐，单独或联合使用。如果需要，盐例如磷酸盐、镁盐、钙盐、钠盐或钾盐，以及重金属盐例如铁盐、锰盐、铜盐、钴盐和锌盐，多种维生素以及优选用于FKI-1366物质A，FKI-1366物质B和FKI-1366物质C生产的物质被优选加入。
在培养中，如果需要，消泡剂(例如动物油、植物油和硅油)可以在起泡的情况下加入。上述培养可以是液体培养或固体培养，只要含有上述营养源。常规的，优选采用液体培养。在小规模培养中，培养优选采用烧瓶。在大规模工业生产中，如同其它发酵生产中的浸没需氧(深层发酵)培养是优选的。
在大罐中的大规模培养中，为了防止在生产过程中微生物生长延迟，首先，用于生产的菌株被接种入相对小规模的培养基中，随后将培养的团块移入大罐中并进行大规模生产。在这种情况下，前次培养的培养基组合物与用在生产规模的培养基组合物可以是彼此相同的，如果需要，可以改变。
在带搅拌的需氧培养的情况下，可用常规的已知方法，例如，通过螺旋桨和其他机械装置搅拌，旋转或摇动发酵罐，抽吸处理和吹泡通风。通风在使用前被消毒。
培养温度可以通过FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C的产生温度在FKI-1366物质A，FKI-1366物质B和FKI-1366物质C的产生范围之内变化，并且是20-30℃，优选大约27℃。培养pH值通常为pH 5-8，优选中性pH 7。培养时间根据培养条件而不同，通常为大约4-7天。
这样所获得的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C存在于所培养的菌丝和培养物过滤物中。为了从培养团块中分离FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C，整个培养团块采用水混型有机溶剂(例如丙酮)提取，然后真空中蒸馏出溶剂，随后残余物采用水不可混型有机溶剂例如(乙酸乙酯)进行提取。
在上述提取方法之外，已知用于分离亲脂性物质的方法，例如，吸附色谱、凝胶过滤色谱、薄层色谱、离心逆流色谱和高效液相色谱，优选联合或分别使用，以分离每种成分并纯化。
本发明的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C的物理化学特性如下。
FKI-1366物质A(1)特性白色粉末(2)分子重量769(快速原子轰击质量分光光度测定)(3)分子式C44H55O9N3(4)旋光度[a]D26＝+9.0(C＝0.1，甲醇)(5)UV吸收光谱在甲醇中检测的紫外吸收光谱如
图1所示，并且在大约213nm具有特异的最大吸收(ε＝26000)。
(6)IR吸收光谱在KBr片中检测的红外吸收光谱如图2所示，并且在2966，2875，1743，1662，1456，1261，1203和1105Cm-1具有特异吸收波段。
(7)1H-NMR光谱如图3所示(采用NRM分光光度计检测，Varian日本，CDCl3中)。
(8)13C-NMR光谱如图4所示(采用NRM分光光度计检测，Varian日本，CDCl3中)。
(9)溶剂中的溶解性可溶于DMSO，甲醇，氯仿和乙酸乙酯。
微溶于水和正己烷。
(10)颜色反应在磷钼酸中为阳性(11)酸性，中性和碱性特性的区分中性物质。
作为仔细检测上述各种物理化学特性和FKI-1366物质A的光谱数据的结果，目前FKI-1366物质A被确定具有如下化学结构[I]
FKI-1366物质B(1)特性白色粉末。
(2)分子重量735(快速原子轰击质量分光光度测定)(3)分子式C41H57O9N3(4)旋光度[a]D26＝+18.4(C＝0.1，甲醇)(5)UV吸收光谱在甲醇中检测的吸收光谱如图5所示，并且在大约208nm具有特异的最大吸收(ε＝30500)。
(6)IR吸收光谱在KBr片中检测的红外吸收光谱如图6所示，并且在2964，2873，1743，1664，1456，1261，1201和1101Cm-1具有特异吸收波段。
(7)1H-NMR光谱如图7所示(采用NRM分光光度计检测，Varian日本，CDCl3中)。
(8)13C-NMR光谱如图8所示(采用NRM分光光度计检测，Varian日本，CDCl3中)。
(9)溶剂中的溶解性可溶于DMSO，甲醇，氯仿和乙酸乙酯。
微溶于水和正己烷。
(10)颜色反应在磷钼酸中为阳性(11)酸性，中性和碱性特性的区分中性物质。
作为仔细检测上述各种物理化学特性和FKI-1366物质B的光谱数据的结果，目前FKI-1366物质B被确定具有如下化学结构[II] FKI-1366物质C(1)特性白色粉末。
(2)分子重量797(快速原子轰击质量分光光度测定)(3)分子式C46H59O9N3(4)旋光度[a]D26＝+31.4(C＝0.1，甲醇)(5)UV吸收光谱在甲醇中检测的吸收光谱如图9所示，并且在大约208nm具有特异的最大吸收(ε＝11200)。
(6)IR吸收光谱在KBr片中检测的红外吸收光谱如图10所示，并且在2962，2873，1743，1662，1484，1261，1203和1101Cm-1具有特异吸收波段。
(7)(7)1H-NMR光谱如图11所示(采用NRM分光光度计检测，Varian日本，CDCl3中)。
(8)13C-NMR光谱如图12所示(采用NRM分光光度计检测，Varian日本，CDCl3中)。
(9)溶剂中的溶解性可溶于DMSO，甲醇，氯仿和乙酸乙酯。
微溶于水和正己烷。
(10)颜色反应在磷钼酸中为阳性(11)酸性，中性和碱性特性的区分中性物质。
作为仔细检测上述各种物理化学特性和FKI-1366物质C的光谱数据的结果，目前FKI-1366物质C被确定具有如下化学结构[III] 如上所述，FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C的物理化学特性被详细描述。具有这些特性的化合物在以前从未有过报道。因此，本发明的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C被确定为新的物质。
以下描述FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C在吡咯抗真菌剂上的增强活性。
白色假丝酵母ATCC 64548，氟康唑抗性白色假丝酵母ATCC64550和黑曲霉ATCC 6275用作检测生物。米康唑和氟康唑用作吡咯抗真菌剂。
通过酵母敏感性检测方法，即临床标准国立委员会(NCCLS)标准方法M27-A来确定吡咯抗真菌剂在白色假丝酵母ATCC 64548和ATCC 64550上的增强活性。每种接种菌株的悬浮液涂布在YM琼脂培养基(0.5％酵母提取物，0.5％麦芽提取物，0.5％蛋白胨，1％葡萄糖和1.5％琼脂)，培养在35℃36小时。收集5个具有直径为1mm或更大的生长菌落并将菌落悬浮于5ml生理盐水中。悬浮液用生理盐水进一步稀释以制备检测微生物悬浮液，其具有McFarland转移液0.5。RPMI 1640培养基70μl被加入到96孔塑料板(Corning Inc.，U.S.)。20μl米康唑或氟康唑溶液(其被制备以维持最终浓度为0.06μg/ml-400μg/ml)也被加入。此外，加入FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C，10μl(每种被制备以维持最终浓度为0.5，1.0和2.0μg/ml)。最后，加入检测微生物悬浮液100μl，并且在35℃孵育24小时。24小时后采用微板阅读仪在630nm检测吸收值(Elx808，Bio-TEK Instruments Inc.，U.S.)，计算吡咯抗真菌剂的50％抑制浓度(IC50)(即在多种培养条件下抑制每种检测微生物50％的生长)。当把没有加入FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C时的IC50值设置为1.0，加入了FKI-1366物质A，FKI-1366物质B或FKI-1366物质C的IC50比率被确定为增强的活性。
在黑曲霉ATCC 6275上吡咯抗真菌剂的增强活性通过由NCCLS(M38-P)提出的用于分生孢子发生真菌的药物敏感性检测方法而确定。黑曲霉ATCC 6275菌株的孢子被悬浮于生理盐水中以维持OD 530nm的值为0.09-0.11。悬浮液采用PRMI1640培养基进一步稀释100倍以制备接种微生物溶液。RPMI 1640培养基70μl被加入到96孔塑料板中(Corning Inc.，U.S.)。20μl米康唑或氟康唑溶液。(其被制备以维持最终浓度为1.0μg/ml-400μg/ml)也被加入。然后，FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C，10μl，(每种被制备以维持最终浓度为2.5，5.0和10μg/ml)被加入。最后，加入检测微生物悬浮液80μl。Alamar蓝溶液(Asahi GlassCo.，日本)20μl(一种显色试剂)被加入，并在35℃孵育24小时。在激发波长为530nm的荧光强度和荧光波长在24小时后采用Cyto荧光计(Nippon Perceptive Ltd.，日本)进行检测，并计算吡咯抗真菌剂的50％抑制浓度(IC50)(其抑制在多种培养条件下每种检测微生物50％的生长)。当把没有加入FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C时的IC50值设置为1.0，加入了FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C的IC50比率被确定为增强的活性。
采用米康唑作为吡咯抗真菌剂的结果如表1所示。在表1中，符号*指示在采用黑曲霉ATCC 6275时FKI-1366物质A、FKI-1366物质B或FKI-1366物质C的浓度。
表1
采用氟康唑作为吡咯抗真菌剂的结果如表2所示。在表2中，符号*指示在采用黑曲霉ATCC 6275时FKI-1366物质A，FKI-1366物质B或FKI-1366物质C的浓度。
表2
如上所述，由于本发明的物质具有增强在白色假丝酵母ATCC64548，米康唑抗性白色假丝酵母菌株ATCC64550和黑曲霉ATCC6275上吡咯抗真菌剂活性的行为，物质显示出能够在低浓度和短时间内治疗深层霉菌病和其他真菌感染，并且能用于减少抗性微生物出现的频率。进而，有希望能克服抗性。
附图简述图1显示本发明FKI-1366物质A的UV吸收光谱(在甲醇中)。
图2显示本发明FKI-1366物质A的IR吸收光谱(KBr片)。
图3本发明显示本发明FKI-1366物质A的质子1H-NMR光谱(在CDCl3中)。
图4本发明显示本发明FKI-1366物质A的13C-NMR光谱(在CDCl3中)。
图5显示本发明FKI-1366物质B的UV吸收光谱(在甲醇中)。
图6显示本发明FKI-1366物质B的IR吸收光谱(KBr片)。
图7显示本发明FKI-1366物质B的质子1H-NMR光谱(在CDCl3中)。
图8显示本发明FKI-1366物质B的13C-NMR光谱(在CDCl3中)。
图9显示本发明FKI-1366物质C的UV吸收光谱(在甲醇中)。
图10显示本发明FKI-1366物质C的IR吸收光谱(KBr片)。
图11显示本发明FKI-1366物C的质子1H-NMR光谱(在CDCl3中)。
图12本发明显示本发明FKI-1366物质C的13C-NMR光谱(在CDCl3中)。
实现本发明的最佳方式本发明将通过实施例予以介绍，但本发明并不局限于实施例。
实施例100ml GP培养基(葡萄糖2.0％，酵母提取物0.2％，7水硫酸镁0.05％，多聚蛋白胨0.5％，磷酸二氢钾0.1％和琼脂0.1％，调节至pH 6.0)被加入到500ml瓶。三角烧瓶用棉塞密封并且用蒸汽消毒。一接种环生长在琼脂培养基上的白僵菌属FKI-1366FERMBP-08459被无菌接种并且在27℃振摇72小时以制备种子培养基。
将包含甘油3.0％，燕麦粉2.0％，干酵母1.0％，磷酸二氢钾1.0％，磷酸二氢钠1.0％和六水氯化镁0.05％(未调pH)的培养基倒入两个7.5升容量的发酵罐中(MarubishiBioeng.Co.，日本)并且用蒸汽消毒。将种子培养基(40ml)无菌接种并且在27℃以200rpm且通风2.5升/min培养6天。将丙酮5升加入到所获得的整个培养液中，充分搅拌，加入硅藻土进行过滤并且在真空中浓缩。其被乙酸乙酯再次提取并且在真空中浓缩以获得粗物质9.6g。
粗物质4.5g被溶解在小量甲醇中。将甲醇溶液进行ODS树脂柱交换(ODS-7515-12A，Senshu ScientificCo.，Ltd.)，该柱采用40％含水乙腈平衡。洗脱采用40％含水乙腈1升，随后同样量的60％含水乙腈，80％含水乙腈和100％含水乙腈，分别进行，并且各洗脱部分都被收集(50ml)。收集来自No.5至No.20的部分，其被80％含水乙腈洗脱，包含了FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C。在乙腈蒸馏后，含水层采用乙酸乙酯提取并且在真空中干燥得到粗物质1.1g。
粗物质556mg通过采用高效液相色谱被分离和纯化。所用仪器为带有PEGASIK ODS柱的(20×250mm，Senshu ScientificCo.Ltd.，Japan)PU-980Galiver系统(NihonBunko Inc.，Japan)。所用流动相为85％含水乙腈检测在UV 210nm且洗脱速率为6ml/min下进行。在这样的条件下，分别获得FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C其保留时间分别是28min、29min和42min.的物质。每种洗出液在真空中被浓缩而残余的含水层采用乙酸乙酯提取以获得FKI-1366物质A 15.9mg，FKI-1366物质B 28.9mg和FKI-1366物质C 6.9mg。然后，这样所获得的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C是分部收集，并且通过采用如上相同条件再次提取以最终获得FKI-1366物质A 8.6mg，FKI-1366物质B 11.5mg和FKI-1366物质C 3.2mg。
工业实用性如上所解释，本发明的FKI-1366物质A、FKI-1366物质B和FKI-1366物质C具有对作用于白色假丝酵母ATCC6454，氟康唑抗性白色假丝酵母ATCC64550和黑曲霉ATCC 6275菌株的吡咯抗真菌剂活性的增强作用。这些物质能以低浓度在短时间内治疗深层霉菌病和其他真菌感染，并且能用于减少抗性微生物出现的频率微生物，并有希望制成药物。
权利要求
1.如以下通式[I]所代表的FKI-1366物质A
2.如以下通式[II]所代表的FKI-1366物质B
3.如以下通式[III]所代表的FKI-1366物质C
4.一种特别包含有以下通式[I]所代表的FKI-1366物质A 特别包含有以下通式[II]所代表的FKI-1366物质B 和特别包含有以下通式[III]所代表的FKI-1366物质C 的粗FKI-1366物质。
5.一种FKI-1366物质A的生产方法，包括在培养基中培养属于白僵菌属(Beauveria sp.)的且具有FKI-1366物质A生产能力的微生物，在液体培养基中积累FKI-1366物质A，并且从所述培养物中分离FKI-1366物质A。
6.一种FKI-1366物质B的生产方法，包括在培养基中培养属于白僵菌属的且具有FKI-1366物质B生产能力的微生物，在液体培养基中积累FKI-1366物质B，并且从所述培养物中分离FKI-1366物质B。
7.一种FKI-1366物质C的生产方法，包括在培养基中培养属于白僵菌属并且具有FKI-1366物质C生产能力的微生物，在液体培养基中积累FKI-1366物质C，并且从所述培养物中分离FKI-1366物质C。
8.一种粗FKI-1366物质的生产方法，包括在培养基中培养属于白僵菌属并且具有FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C生产能力的微生物，在液体培养基中积累FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C，并且从所述培养物中分离FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C。
9.根据权利要求8的粗FKI-1366物质的生产方法，其中属于白僵菌属并且具有产生FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C的能力的微生物是白僵菌属FKI-1366FERMBP-08459。
10.白僵菌属FKI-1366FERM BP-08459。
11.属于白僵菌属并且具有产生如权利要求1所述的FKI-1366物质A的能力的微生物。
12.属于白僵菌属并且具有产生如权利要求2所述的FKI-1366物质B的能力的微生物.
13.属于白僵菌属并且具有产生如权利要求3所述的FKI-1366物质C的能力的微生物。
14.具有产生如权利要求4所述的粗FKI-1366物质的能力的微生物，其中微生物是属于白僵菌属并且具有产生FKI-1366物质A和/或FKI-1366物质B和/或FKI-1366物质C的能力的白僵菌属FKI-1366FERM BP-08459。
全文摘要
属于白僵菌属并且具有FKI－1366物质A和/或FKI－1366物质B和/或FKI－1366物质C生产能力的微生物(白僵菌属FKI－1366FERMBP－08459)被培养在培养基中，在培养基液体中积累FKI－1366物质A和/或FKI－1366物质B和/或FKI－1366物质C，并且从所述培养物中分离FKI－1366物质A和/或FKI－1366物质B和/或FKI－1366物质C。由此获得具有增强吡咯抗真菌剂活性的FKI－1366物质A和/或FKI－1366物质B和/或FKI－1366物质C或其组合物，该物质可以在短时间内以低浓度作用于各种真菌感染，例如深层霉菌病和其他真菌感染。因此，该物质可用于降低抗性微生物出现的频率并克服抗性，并有希望作为药物。
文档编号C12N1/14GK1764653SQ0382628
公开日2006年4月26日 申请日期2003年8月29日 优先权日2003年8月29日
发明者大村智, 供田洋, 增间碌郎, 荒井雅吉 申请人:社团法人北里研究所