用于诊断食管癌及食管癌转移的组合物及方法

专利名称：：用于诊断食管癌及食管癌转移的组合物及方法
技术领域：
：本发明涉及用于诊断(即检测、确定或预测)食管癌及食管癌转移的组合物、利用该组合物检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法、及使用了该组合物的食管癌及食管癌转移诊断用试剂盒。
背景技术：
：食管是连接咽和胃的管腔状器官，大部分存在于胸腔，一部分存在于颈部和腹腔。在胸腔上部，食管位于气管和脊推之间，在胸腔下部，食管被心脏、大动脉和肺包围。食管具有将从口摄入的食物输送到胃的作用。2001年日本人的癌死亡率为10万人中有238.8人。死亡原因中食管癌所占的比例逐年增加，2001年男性的食管癌死亡例占到所有癌症死亡例的5.0%、女性占到1.4%。食管癌的发病年龄的高峰在6070岁，男性发病较多。另外，吸烟、饮酒、嗜好热食品等环境因素与发病密切相关。并且，一般认为由于在食管壁内部或周围，血管和淋巴管丰富，所以发生的癌症多出现转移。食管癌的治疗根据进展程度(日本食管疾病研究会编临床病理食管癌治疗规范1999年)或转移、及全身状况而决定。食管癌的标准治疗方法记载于日本食管疾病研究会编"食管癌治疗方针"(2002年)。目前最普通的治疗方法是手术疗法，即切除含有癌细胞的食管和包括淋巴结的周围组织(淋巴结清扫(lymphnodedissection))，并利用胃等其他器官重建食管。但是，手术疗法、特别是大范围的淋巴结清扫给患者带来很大的负担，还必须考虑手术后的生活质量评分(QOL)降低的问题。对于粘膜内的早期癌症，有时可以在内窥镜下实施粘膜剥除术。另外，从#^'台疗法、对症疗法两方面考虑，有时可以进ffi丈射线照射。还可以与手术疗法或放射线疗法组合，进行化学疗法。目前，一般认为在化学疗法中，并用5-氟尿嘧啶和顺铂的治疗方法是最有效的。食管癌通常是在患者感觉吞咽时有不适感、吞咽困难、胸骨后部疼痛及胸部不适感等自觉症状进行就诊时被发现。但是，上述症状的出现是由癌在食管内生长导致的，患者因自我检测而就诊时发现的癌已经扩散或转移到食管壁外，通常预后不良。所以，手术时一般清扫食管周围的淋巴结，此时如果能预见癌是否发生转移，则可以在术前准确决定清扫范围或限定清扫范围，从而有助于术后患者的QOL。食管癌可以通过食管造影检查、内窺镜检查及活组织检查进行确定。在进行内窥镜检查时或手术时采集活组织检查标本，制作病理标本，并且通过病理组织学分类加以诊断。此时，需要开发一种快速简便的诊断方法，该方法能根据内窥镜检查得到的细胞的性质预测癌是否向食管外转移。至今为止，已有人提出使用食管癌组织中特异性含有的标记物的分子生物学诊断方法。该方法能快速地得到客观的结果，有助于快速诊断。目前，作为食管癌临床检查用标记物，除了使用作为血清中的蛋白质标记物的SCC、CYFRA21_1、CEA等之外，还报道了专利文献l、2中记载的蛋白质等。但是，上述标记物缺少灵敏度、特异性，即使是灵敏度最高的CYFRA21-1,其灵敏度也只是33.9%(非专利文献l)43.9%(非专利文献2)左右。所以，尚不能达到通过对上述血清中的标记物及其组合进行检测来确定食管癌细胞是否存在的阶段，使用上述标记物也不能诊断食管癌的转移。另一方面，作为使用了用于特异性判断从受试者采集的活检试样中是否含有食管癌细胞的基因的标记物，公开了染色体异常(例如参见专利文南大3，4)或基因的后生序歹ll(epigeneticsequences)(例^口专利文献5)，除此之外，还报道了多个利用DNA芯片全面解析基因表达的结果(例如，参见非专利文献38)。另外，作为以单独的基因表达作为指标的标记物，才艮道了专利文献6、非专利文献9、IO中记载的SPRR3基因(Smallproline—richprotein3)、非专利文献ll中i己载的fgf3基因、专利文献6、非专利文献12中记载的CSTB基因(cystatinB、liverthiolproteinaseinhibitor)、专利文献7中记载的UCP2基因(mitochondrialuncouplingprotein2)、专利文献6中记载的UPK1A基因(uroplakin1A)、非专利文献13中记载的HSPAIB基因(HeatShock70kDaProtein1)等。专利文献l专利文献2专利文献3专利文献4专利文献5专利文献6专利文献7特开2003-259872号7>寺艮特表2000—511536号乂>冲艮特开2001-17200号公报特开2002-272497号公报特表2004-505612号公报国际公开第2003/042661号说明书国际公开第2003/076594号说明书非专利文i献l:Nakamura,T.等,1998，DiseasesoftheEsophagus,第ll巻，p.35-39非专利文献2:Kawaguchi，H.等，2000,Cancer,第89巻，p.1413-1417非专利文献3:Luo，A.等，2004年，Oncogene,第23巻，p.1291-1299非专利文献4:Zhi，H.等,2003年，InternationalJournalofCancer,第106巻，p.327-333非专利文献5:Lu,J.等，2001年，InternationalJournalofCancer，第91巻，p.288-294非专利文献6:Kazemi-Noureini,S.等,2004年，WorldJournalofGastroenterology,第10巻，p.l716-1721非专利文献7:Xu,S.H.等，2003年，WorldJournalofGastroenterology,第9巻，p.417-422非专利文献8:Su,H.等，2003年，CancerResearch,第63巻，p.3872非专利文献9:Chen，B.S.等，2000年，Carcinogenesis,第21巻，p,2147-2150非专利文献10:Abraham,J.M.等，1996年，CellGrowth&Differentiation,第7巻，p.855-860非专利文献ll:Kitagawa，Y.等，199l年，CancerResearch,第51巻，p.1504-1508非专利文献12:Shiraishi,T.等，1998年，InternationalJournalofCancer,第79巻，p.175-178非专利文献13:Kawanishi，K.等,1999年，Cancer,第85巻，p.1649-1657
发明内容但是，由于上述现有的指标缺少特异性及/或灵敏性，或尚未确立从生物试样中有效地检出的方法，所以通常不应用于临床，另外，认为目前还不能使用诊断标记物检测作为决定患者预后的重要因素的食管癌是否转移。所以迫切希望开发出特异性及灵敏性高的食管癌转移的标i己物。本发明的目的在于提供在食管癌的诊断、食管癌转移的诊断、及食管癌的治疗中有用的疾病确定用组合物、试剂盒或DNA芯片。本发明的目的还在于提供使用上述组合物、试剂盒或DNA芯片检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法。作为寻找标记物的方法，可以举出以下方法通过某种方法对食管癌细胞和非癌细胞中的基因表达或蛋白质表达、或细胞代谢产物等的量进行比较的方法；或对食管癌患者和非癌患者的体液中含有的基因、蛋白质、代谢产物等的量进行测定的方法；通过某种方法对食管癌细胞中的、来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌细胞、和来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌细胞中的基因表达或蛋白质表达、或细胞代谢产物等的量进行比较的方法；对转移性食管癌患者和非转移性食管癌患者体液中含有的基因、蛋白质、代谢产物等的量进行测定的方法等。近年来，使用DNA阵列进行的基因表达量解析，被特别广泛地用作寻找上述标记物的方法。DNA阵列中固定有使用了对应于数百至数万种基因的碱基序列的探针。通过将受试试样添加到DNA阵列中，试样中的基因与探针结合，利用某种方法测定结合量，由此可以知道受试试样中的基因量。对应于固定在DNA阵列上的探针的基因可以自由选择，另外，使用来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌细胞和来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌细胞作为受试试样，通过比较试样中的基因表达量，能判定可以作为食管转移癌标记物的基因组。为了解决上述课题，本发明人等取得了以下发现利用DNA阵列解析食管癌组织及非癌组织的基因表达，发现了可用于食管癌的检测标记物的基因，并且发现食管癌组织与非癌组织相比，该基因表达量显著变化；在食管癌患者的血浆中存在被特异性地检测出的蛋白质标记物，而在健康人的血浆中不存在上述蛋白质标记物；以及利用DNA阵列解析来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌组织和来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌组织的基因表达，发现了可用作食管癌转移的检测标记物的基因，来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌细胞与来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌细胞相比，该基因的表达量显著变化。本发明人等基于上述发现完成了本发明。l.发明概要本发明具有以下特征。(1)一种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在或转移的组合物，其中含有选自下述I组、n组及/或III组中的l种或2种以上探针，I组'.由以下(a)(e)组成的多核苷酸，(a)由序列号146表示的碱基序列组成的多核普酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(b)含有序列号146表示的i咸基序列的多核苷酸，(c)由与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核普酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(d)含有与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列的多核普酸，及(e)在严格条件下与上述(a)~(d)中任一种多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，II组由以下(f)(j)组成的多核苷酸，(f)由序列号142155、157161表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(g)含有序列号142155、157161表示的碱基序列的多核苷酸，(h)由与序列号142155、157161表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(i)含有与序列号142155、157161表示的碱基序列互补的碱基序列的多核普酸，及(j)在严格条件下与上述(f)~(i)中的任一种多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，III群由以下(k)(m)组成的抗体、其片段或化学修饰衍生(k)与由序列号146表示的碱基序列编码的多肽、或具有序列号95一40表示的氨基酸序列的多肽、它们的变异体、或它们的片段中的至少l个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，(1)与由序列号142155、157161表示的碱基序列编码的多肽、或具有序列号182195、197201表示的氨基酸序列的多肽、它们的变异体、或它们的片段中的至少l个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，及(m)与具有序列号202232表示的氨基酸序列的多肽、其变异体、或其片段中的至少1个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物。(2)(l)所述的组合物，其中，利用所述I组及III组(k)的各探针能检测、确定或预测食管癌的存在或转移。(3)(l)所述的组合物，其中，利用所述II组及III组(l)、(m)的各探针能检测、确定或预测食管癌的存在。(4)(l)所述的组合物，其中，所述多核苷酸是DNA或RNA。(5)(l)所述的组合物，其中，所述I组及II组中的片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(6)(i)所述的组合物，其中，所述i组及n组中的片段是序列号146、142155、157161中任一个表示的碱基序列中，分别含有序列号4893、162175、177181中任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。(7)u)所述的组合物，其中，所述i组及n组中的片段是含有序列号4893、162175、177181中任一个表示的碱基序列、或与上述碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。(8)(l)所述的组合物，在该组合物中，除所述I组的探针以外，还含有由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、(9)(8)所述的组合物，其中，所述片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(10)(8)所述的组合物，其中，所述片段是序列号47表示的碱基序列中含有序列号94表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核普酸序列互补的碱基序列的多核苷酸。(11)(8)所述的组合物，其中，所述片段是含有序列号9斗表示的碱基序列、或与该碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。(12)权利要求i所述的组合物，在该组合物中，除所述n组的#果针以外，还含有由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段作为探针。(13)(12)所述的组合物，其中，所述片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(14)(12)所述的组合物，其中，所述片段是序列号156表示的碱基序列中，含有序列号176表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苦酸。(15)(12)所述的组合物，其中，所述片段是含有序列号176表示的碱基序列、或与其互补的碱基序列的多核苷酸。(16)(l)所述的组合物，在该组合物中，除所述III组(m)的探针以外，还含有与序列号233表示的多肽、其变异体或其片段中的至少1个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物。(17)(l)所述的组合物，其中，所述多肽或变异体的片段含有由至少7个氨基酸组成的表位。(18)(l)所述的组合物，其中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、合成抗体、重组抗体、多特异性抗体或单链抗体。(19)(l)所述的组合物，所述组合物单独或组合含有选自所述i组及/或n组、或m组中的2种以上探针。(20)—种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在或转移的试剂盒，其中含有选自权利要求i定义的i组、n组及/或in组中的1种或2种以上探针。(21)(20)所述的试剂盒，其中，还含有序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段作为探针。(22)(20)所述的试剂盒，其中，还含有由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段作为探针。(23)(20)所述的试剂盒，其中，所述多核苷酸是序列号146、47中任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段。(24)(20)所述的试剂盒，其中，所述多核苷酸是序列号142155、156、157161中任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段。(25)(20)所述的试剂盒，其中，所述I组及II组中的片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(26)(20)所述的试剂盒，其中，所述I组中的片段是在含有序列号146、47中任一个表示的碱基序列的60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号4893、94中任一个表示的i咸基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸序列互补的碱基序列的多核苷酸。(27)(20)所述的试剂盒，其中，所述n组中的片段是在含有序列号142155、156、157161中任一个表示的石咸基序列的60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号162175、176、H7181中任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸序列互补的碱基序列的多核苷酸。(28)(20)所述的试剂盒，其中，所述I组或II组中的片段是含有序列号4893、94、162175、176、177~181中任一个表示的碱基序列、或与上述碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。(29)(20)所述的试剂盒，其中，所述I组或II组中的片段是由序列号4893、94、162175、176、177181中任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸。(30)(20)所述的试剂盒，其中含有2种以上至全部的含有序列号4893、94表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。(31)(20)所述的试剂盒，其中含有2种以上至全部的含有序列号162175、176、177181表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。(32)(20)所述的试剂盒，其中，所述探针单独或组合包装在不同容器中。(33)—种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在或转移的DNA芯片，其中含有选自权利要求l定义的I组及/或II组中的1种或2种以上探针。(34)(33)所述的DNA芯片，其中还含有由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体及/或其片段。(35)(33)所述的DNA芯片，其中还含有由序列号l託表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体及/或其片段。(36)(33)所述的DNA芯片，其中含有2种以上全部的含有序列号4893、94表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。(37)(33)所述的DNA芯片，其中含有2种以上全部的含有序列号162175、176、177181表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。(38)—种体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法，该方法包括使用选自权利要求i定义的i组、n组及/或m组中的探针体外测定来自受试者的生物试样中的i种或多种食管癌相关靶核酸的存在或存在量或表达量。(39)(38)所述的方法，其中，使用DNA芯片进行所述测定。(40)(38)所述的方法，其中，以相对于对照试样的变化为指标检测、确定或预测所述食管癌的存在或转移。(41)(38)所述的方法，其中，通过免疫学方法进行所述测定。(42)(41)所述的方法，其中，所述通过免疫学方法进行的测定是使用所述III组的抗体、其片段或其化学修饰衍生物进行测定。(43)(42)所述的方法，其中，所述抗体、其片段、或其化学修饰书1"生物^皮标记。(44)(38)所述的方法，其中，所述生物试样是来自食管的组织或细胞、血液、血浆、血清、或尿。(45)—种体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法，该方法包括使用(1)(19)中任一项所述的组合物、(20)(32)中任一项所述的试剂盒、或(33)(37)中任一项所述的DNA芯片体外测定来自受试者的生物试样中的l种或多种食管癌相关靶核酸的存在或存在量或表达量。(46)—种检测、确定或预测食管癌的转移的方法，该方法包括以下步骤第1步骤，使用选自(1)定义的I组中的探针、或含有该探针的(1)(19)中任一项所述的组合物、(20)~(32)中任一项所述的试剂盒、或(33)(37)中任一项所述的DNA芯片，体外测定多个生物试样中的食管癌相关靶核酸的表达量，所述生物试样是已知含有伴随转移(即转移性)的食管癌或不伴随转移(即非转移性)的食管癌细胞的组织；第2步骤，以该第l步骤中得到的该靶核酸的表达量的测定值作为训练样本制作辨别式(支持向量机(SupportVectorMachine));第3步骤，与第1步骤相同地体外测定来自受试者食管的生物试样中的该靶核酸的表达量；第4步骤，将第3步骤中得到的该靶核酸的表达量的测定值代入该第2步骤中得到的辨别式，基于由该辨别式得到的结果，判断生物试样中不含有伴随转移的癌细胞及/或含有不伴随转移的癌细胞。(47)—种检测食管癌的方法，该方法包括以下步骤第l步骤，使用选自(1)中定义的n组的探针、或含有该探针的(1)(19)中任一项所述的组合物、(20)(32)中任一项所述的试剂盒、或(33)(37)中任一项所述的DNA芯片，体外测定多个生物试样中的靶核酸的表达量，所述生物试样是已知含有食管癌细胞的组织或正常组织；第2步骤，以该第l步骤得到的该靶核酸的表达量的测定值作为训练样本制作辨别式(支持向量机)；第3步骤，与第l步骤相同地体外测定来自受试者的食管的生物试样中的该靶核酸的表达量；第4步骤，将第3步骤中得到的该靶乙酸的表达量的测定值代入该第2步骤中得到的辨别式中，基于由该辨别式得到的结果，判断生物试样中含有癌细胞或不含有癌细胞。(48)选自(i)定义的i组、n组及/或m组中的探针、或含有该探针的(1)(19)中任一项所述的组合物、(20)(32)中任一项所述的试剂盒、或者(33)~(37)中任一项所述的DNA芯片用于体外检测、确定或预测来自受试者的生物试样中的食管癌的存在或转移的使用方法。2.定义本说明书中使用的术语具有以下定义。在本说明书中，"探针"是指能与作为食管癌相关标记物的特定基因类或编码该基因类的多肽类结合的核酸、抗体或二者的相当物，用于^H则、确定或预测食管癌的存在或转移。在本说明书中只要没有特别说明，核酸、多核苷酸、氨基酸、肽、多肽、蛋白质等术语的意思及其简写符号所表达的含义是本领域中的惯用意思及含义。在本说明书中，"多核苷酸"是指包括RNA及DNA在内的核酸。需要说明的是，上述DNA包括cDNA、基因组DNA及合成DNA。上述RNA包括总RNA、mRNA、rRNA、及合成RNA中的任一种。另夕卜，本说明书中多核苷酸可以与核酸互换使用。在本说明书中，"cDNA，，包括与基因表达生成的RNA互补的序列的全长DNA链、及由其部分序列组成的DNA片段。cDNA可以通过以RNA为模板，利用使用聚T引物的RT-PCR(逆转录酶-聚合酶链反应)进行合成。在本说明书中，"基因，，不仅包括双链DNA，还包括构成双链DNA的正链(或有意义链)或互补链(或反义链)等各单链DNA。另夕卜，对其长度无特别限定。所以，在本说明书中，在没有特别说明的情况下，"基因"是指包括人类基因组DNA在内的双链DNA、包括cDNA在内的单链DNA(正链)、具有与该正链互补的序列的单链DNA(互补链)、及上述DNA的片段中的任一种。另外，该"基因"不仅包括以特定的碱基序列(或序列号)表示的"基因"，还包括编码与由上述基因编码的蛋白质的生物学功能相同的蛋白质的"基因"，所述蛋白质例如可以举出同源物(即homolog)、剪接变体等变异体、及衍生物。作为编码同源物、变异体或衍生物的"基因"，具体可以举出具有在后述的严格条件下与上述序列号147、142161等表示的任一特定碱基序列的互补序列杂交的碱基序列的"基因"。例如，作为来自人的蛋白质的同源物(即homolog)或编码该同源物的基因，可以举出与该蛋白质或编码该蛋白质的人基因对应的其它生物种的蛋白质或基因，上述蛋白质或基因同源物可以通过homoloGene(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/homoloGene/)鉴定。具体而言，可以将特定的人类氨基酸或碱基序列代入BLAST程序(BLASTprogram)(Karlin，S.等,ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,1993年，第90巻，p.5873-5877，http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/),得到一致(得分最高、E值为0且同一性显示为100%)序列的登录号(accessionnumber)。作为BLAST程序，已知有BLASTN(基因)、BLASTX(蛋白质)等。例如，进行基因检索时，将从上述BLAST检索得到的登录号输入UniGene(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/),4寻5'JUniGeneClusterID(以Hs.表示的编号)，将得到的UniGeneClusterID输入homoloGene。从作为结果得到的表示其它生物种基因与人类基因的基因同源物的相关性的列表中选择其它生物种的基因作为与由特定碱基序列表示的人类基因对应的基因同源物。在该方法中，可以使用FASTA程序(http:〃www.ddbj.nig.ac.jp/search/fasta-e.html)代替BLAST程序。需要说明的是，对"基因，，的功能区域没有限定，例如可以包括表达控制区域、编码区域、外显子或内含子。在本说明书中，"转录产物"是指以基因的DNA序列为模板合成的信使RNA(mRNA)。RNA聚合酶与位于基因上游的被称为启动子的部位结合，使核糖核苷酸与3，末端结合，使其与DNA的碱基序列互补，合成信使RNA。该信使RNA中不仅含有基因自身，还含有包括表达控制区域、编码区域、外显子或内含子在内的从转录起点至聚A序列末端的全长序列。在本说明书中，"翻译产物"表示无论转录合成的信使RNA接受/不接受剪接等修饰，都基于其信息而合成的蛋白质。在信使RNA的翻译过程中，首先，核糖体与信使RNA结合，然后，根据信使RNA的碱基序列结合氨基酸，从而合成蛋白质。在本说明书中，"引物"包括能特异性识别、扩增基因表达产生的RNA或来自该RNA的多核苷酸的连续的多核普酸及/或与其互补的多核苷酸。此处，互补的多核苷酸(互补链、反链)是指基于A:T(U)、G:C的碱基配对，与由序列号定义的碱基序列组成的多核苷酸的全长序列、或其部分序列(此处，为了便于说明，将上述序列称为正链)具有碱基互补关系的多核苷酸。其中，所述互补链不只限于形成与作为对象的正链的碱基序列完全互补的序列，也可以是具有能与作为对象的正链在严格条件下杂交的程度的互补关系的序列。在本说明书中，"严格条件"是指相对于探针对其它序列的杂交，探针以可检测性更大的程度(例如，比背景至少大2倍)与其靶序列杂交的条件。严格条件具有序列依赖性，因进行杂交的环境的不同而不同。通过控制杂交及/或清洗条件为严格条件，可以鉴定与探针ioo%互补的靶序列。在本说明书中，"变异体"为核酸时，是指起因于多型性、突变、转录时的选择剪接等的天然变异体、或以遗传密码的简并为基础的变异体、或在序列号147、142161等表示的碱基序列或其部分序列中缺失、置换、添加或插入l个以上、优选l个或几个碱基的变异体、或与该碱基序列或其部分序列具有约80%以上、约85%以上、约90%以上、约95%以上、约97%以上、约98%以上、约99%以上的同源性百分序列的多核苦酸或寡核苷酸杂交的核酸，另一方面，变异体为蛋白质或肽时，是指在序列号95141、182201、202233等表示的氨基酸序列或其部分序列中缺失、置换、添加或插入l个以上、优选l个或几个氨基酸的变异体、或与该氨基酸序列或其部分序列具有约80%以上、约85%以上、约90%以上、约95%以上、约97%以上、约98%以上、约99%以上的同源性百分比的变异体。在本说明书中，"数个"是指约IO、9、8、7、6、5、4、3或2个的整数。在本说明书中，"同源性百分比"可以使用由上述BLAST或FASTA得到的蛋白质或基因检索系统，导入或不导入空位(gap)而进行确定(Karlin，S.等,1993年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.，第90巻，p.5873-5877;Altschul，S.F.等，1990年，JournalofMolecularBiology,第215巻，p.403-410;Pearson,W.R.等，1988年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第85巻,p.2444-244S)。在本说明书中，"衍生物"为核酸时，是指通过荧光团等进行标记的衍生物、含有修饰核苷酸(例如，含有卣素、曱基等烷基、曱氧基等烷氧基、硫代、羧甲基等基团的核苷酸，及进行了碱基的再构建、双键的饱和、脱氨基化、硫分子对氧分子的取代等的核苷酸等)的衍生物等，另一方面，"衍生物"为蛋白质时，是指通过酶、荧光团、放射性同位素等标记产生的标记化衍生物、或乙酰化、酰化、烷基化、磷酸化、硫酸化、糖基化衍生物等化学修饰衍生物。在本说明书中，"诊断用组合物"或"疾病确定用组合物"等术语，是指为了诊断、检测、确定或预测是否罹患食管癌或食管癌是否转移(或转移的可能性)、发病程度或是否改善或改善程度，或为了筛选对食管癌的预防、改善或治疗有用的候补物质，而直接或间接使用的组合物。其中，包括能特异性识别或结合下述基因的核酸、寡核苷酸及多核苷酸，所述基因与食管癌的罹患或转移相关、在生物体内特别是在食管组织内的表达发生变化或变动，还包括能检测作为该基因翻译产物的蛋白质的抗体等。上述核酸、寡核苷酸及多核苷酸基于上述性质，可以有效地用作探针或引物，所述探针用于检测在生物体内、组织或细胞内等表达的上述基因，所述引物用于扩增在生物体内表达的上述基因。在本说明书中，成为检测诊断对象的"生物组织"是指伴随食管癌的发生，本发明的基因表达发生变化的组织。具体是指食管组织、其周围的淋巴结、及怀疑发生转移的其它器官等。在本说明书中，成为检测诊断对象的"生物试样"是指从生物体中采集的含有或怀疑含有伴随食管癌的发生而出现的靶多肽的试样。在本说明书中，"特异性结合"是指抗体或其片段只与本发明的靶多肽、其变异体或其片段形成抗原-抗体复合体，而与其它肽性或多肽性物质实质上不形成复合体。此处，"实质上"是指虽然程度小，但能引起非特异性复合体的形成。在本说明书中，"表位，，是指在本发明的靶多肽、其变异体或其片段中，具有抗原性或免疫原性的部分氨基酸区域(抗原决定基)。表位通常由至少5个氨基酸、优选至少7个氨基酸、更优选至少10个氨基酸组成。本说明书中使用的"AXL基因"或"AXL"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号l)表示的AXL受体酪氨酸激酶(AXLreceptorTyrosineKinase)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号l中记载的AXL基因(GenBank登录号NM—021913)或其它生物种同源物等。AXL基因可以根据O，Bryan，J.P.等，1991年，MolecularCellarBiology,第ll巻，p.5016-5031中记载的方法得到。本说明书中使用的"C6orf54基因"或"C6orf54"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号2)表示的染色体6开》丈阅读才匡54基因(Chromosome6openreadingframe54gene)(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号2中记载的C6orf54基因(GenBank登录号NM—014354)或其它生物种同源物等。C6orf54基因可以通过Minaguchi,T.等，1999年，DNAResearch.第6巻，p.131-136中记载的方法得到。序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号3)表示的含锌指结构和BTB域1l基因(zincfingerandBTBDomainContaining11gene)(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号3中记载的ZBTB11基因(GenBank登录号NM—014415)或其它生物种同源物等。ZBTBll基因在1996年被Tang,C.M.等克隆。本说明书中使用的"TNFRSF14基因"或"TNFRSF14"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号4)表示的月中瘤坏死因子受体超家族，成员14基因(tumornecrosisFactorreceptorsuperfamily，memberl4gene)(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号4中记载的TNFRSF14基因(GenBank登录号NM—003820)或其它生物种同源物等。TNFRSF14基因可以通过Montgomery,R丄等，1996年，Cell,第87巻，p.427-436中记载的方法得到。本说明书中使用的"NSUN5基因"或"NSUN5"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号5)表示的NOLl/NOP2/Sun相关区域家族，成员5基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号5中记载的NSUN5基因(GenBank登录号NM—018044)或其它生物种的同源物等。NSUN5基因可以通过Doll，A.等，2001年，CytogeneticsandCellgenetics,第95巻，p.20—27中记载的方法得到。本说明书中使用的"SPEN基因"或"SPEN"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号6)表示的spen同源物，转录调节基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号6中记载的SPEN基因(GenBank登录号NM—015001)或其它生物种同源物等。SPEN基因可以通过Newberry，E.P.等，1999年，Biochemistry,第38巻，p.10678-10690中记载的方法得到。本说明书中使用的"LTBP3基因"或"LTBP3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号7)表示的潜在转4匕生长因子|3结合蛋白(latenttransforminggrowthFactorBetabindingProtein)3基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号7中记载的LTBP3基因(GenBank登录号NM—021070)或其它生物种同源物等。SPEN基因可以通过Yin,W.等，1995年，JournalofBiologicalChemistry,第270巻，p.10147-10160中记载的方法得到。本说明书中使用的"SYNGR1基因"或"SYNGR1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号8)表示的突触循环蛋白(synaptogyrin)l基因(DNA)、其同源物、变异体及^"生物等的基因(DNA)。具体包括序列号8中记载的SYNGR1基因(GenBank登录号NM—004711)或其它生物种同源物等。SYNGR1基因可以通过Kedra，D.等，1998年,HumanGenetics,第103巻，p.131-141中记载的方法得到。本说明书中使用的"ARL3基因"或"ARL3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号9)表示的ADP核糖基化因子样3(ADP_ribosylationFactor-like3)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号9中记载的ARL3基因(GenBank登录号NM—004311)或其它生物种同源物等。SYNGRl基因可以通过Cavenagh,M.M.等，1994年，JournalofBiologicalChemistry,第269巻，p.18937-18942中记载的方法得到。本说明书中使用的"SLC13A1基因"或"SLC13A1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号10)表示的溶质载体蛋白家族(solutecarrierfamily)13(钠/石克酸盐同向转运体，sodium/sulfatesymporters),成员l基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号10中记载的SLC13A1基因(GenBank登录号NM—022444)或其它生物种同源物等。SLC13A1基因可以通过Lee，A.等，2000年，Genomics,第70巻，p.354_363中记载的方法得到。本说明书中使用的"RALGDS基因"或"RALGDS"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号ll)表示的ral鸟。票呤核苷酸解离刺激因子(mlguaninenucleotidedissociationstimulator)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号11中记载的RALGDS基因(GenBank登录号NM—006266或其它生物种同源物等。RALGDS基因可以通过Albright,C.F.等,1993年，EMBOJournal,第12巻，p.339-347中记载的方法得到。本说明书中使用的"ADD3基因"或"ADD3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号12)表示的内收蛋白3(Y)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号12中记载的ADD3基因(GenBank登录号NM—019903)或其它生物种同源物等。RADD3基因可以通过Katagiri，T.等，1996年,CytogeneticsandCellgenetics,第74巻，p.90—95中记载的方法得到。本说明书中使用的"MAP3K12基因"或"MAP3K12"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号13)表示的促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen—activatedProteinkinasekinasekinase)12基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号13中记载的MAP3K12基因(GenBank登录号NM一006301)或其它生物种同源物等。MAP3K12基因可以通过Reddy，U.R.等，1994年,BiochemicalBiophysicalResearchCommunications,第202巻，p.613—620中^己载的方法4寻到。本说明书中使用的"AVPI1基因"或"AVPI1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号14)表示的精氨酸力口压素i秀导的(argininevasopressin—induced)l基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号14中记载的AVPI1基因(GenBank登录号NM—021732)或其它生物种同源物等。AVPIl基因可以通过Nicod，M.等，2002年，EMBOJournal,第21巻，p.5109-5117中记载的方法得到。本说明书中使用的"GIMAP6基因"或"GIMAP6"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号15)表示的GTPase，IMAP家族成员6基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号15中记载的GIMAP6基因(GenBank登录号NM—024711)或其它生物种同源物等。GIMAP6基因可以通过Stamm，O.等，2002年，Gene,第282巻，p159-167中记载的方法得到。本说明书中使用的"FLJ11259基因"或"FLJl1259"的术语,在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号16)表示的FLJ11259基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号16中记载的FLJ11259基因(GenBank登录号NM—018370)或其它生物种同源物等。FLJ11259基因可以通过Ota,T.等，2002年，NatureGenetics,第36巻，p.40—45中记载的方法得到。本说明书中使用的"C3AR1基因"或"C3AR1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号17)表示的补体成分3R受体(complementComponent3Rreceptor)l基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号17中记载的C3AR1基因(GenBank登录号NM—004054)或其它生物种同源物等。C3AR1基因可以通过Ames，R.S.等，1996年，JournalofBiologicalChemistry,第271巻，p.20231-20234中记载的方法得到。本说明书中使用的"PCGF2基因"或"PCGF2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号18)表示的Polycomb组环指结构(polycombgroupringfmger)2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号18中记载的PCGF2基因(GenBank登录号NM—007144)或其它生物种同源物等。PCGF2基因可以通过Tagawa,M.等，1990年，JournalofBiologicalChemistry,第265巻，p.20021-20026中记载的方法得到。本说明书中使用的"PDE6D基因"或"PDE6D"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号19)表示的杆体cGMP特异性磷酸二酯酶6Ddelta基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号19中记载的PDE6D基因(GenBank登录号NMJ)02601)或其它生物种同源物等。PDE6D基因可以通过Florio，S.K.等，1996年，JournalofBiologicalChemistry,第271巻，p.24036-24047中记载的方法得到。本说明书中使用的"PLCG2基因"或"PLCG2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号20)表示的磷脂酶C-Y2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号20中记载的PLCG2基因(GenBank登录号NM—002661)或其它生物种同源物等。PLCG2基因可以通过Kang,J.S.等，1996年，FEBBSLetters,第399巻，p.14-20中记载的方法得到。本说明书中使用的"GPR148基因"或"GPR148"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号21)表示的g蛋白偶联受体(gProtein-coupledreceptor)148基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号21中记载的GPR148基因(GenBank登录号NM—207364)或其它生物种同源物等。GPR148基因可以通过Vassilatis，D.K.等，2003年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica"第100巻，p.4903-4908中记载的方法得到。本说明书中使用的"ARF6基因"或"ARF6，，的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号22)表示的ADP-核糖基化因子6基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号22中记载的ARF6基因(GenBank登录号NM—001663)或其它生物种同源物等。ARF6基因可以通过Cavenagh，M.M.等，1996年，JournalofBiologicalChemistry,第271巻，p.21767-21774中记载的方法得到。本说明书中使用的"NISCH基因"或"NISCH"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号23)表示的nischarin基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号23中记载的NISCH基因(GenBank登录号NM007184)或其它生物种同源物等。NISCH基因可以通过Ivanov，T.R.等，1998年,JournaloftheAutonomicNervousSystem,第72巻,p.98-110中记载的方法得到。本说明书中使用的"GLYAT基因"或"GLYAT"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号24)表示的甘氨酸-N-乙酰基转移酶基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号24中记载的GLYAT基因(GenBank登录号NM—005838)或其它生物种同源物等。GLYAT基因可以通过Schachter，D.等，1976年,JournalofBiologicalChemistry,第251巻，p.3352-3358中记载的方法得到。本说明书中使用的"IGHM基因"或"IGHM"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号25)表示的免疫球蛋白重4连恒定区(Immunoglobulinheavyconstant)mu基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号25中记载的IGHM基因(GenBank登录号NG—001019)或其它生物种同源物等。IGHM基因可以通过Ravetch,J.V.等，1981年，Cell,第27巻,P.583-591中记载的方法得到。本说明书中使用的"FBX038基因"或"FBX038"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号26)表示的F框蛋白(F-boxProtein)38基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号26中记载的FBX038基因(GenBank登录号NM—205836)或其它生物种同源物等。FBX038基因可以通过Smaldone，S.等，2004年，MolecularandcellularBiology,第24巻，p.1058-1069中记载的方法得到。本说明书中使用的"SLC12A1基因"或"SLC12A1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号27)表示的溶质载体蛋白家族12(钠/钟/氯化物转运体，sodium/potassium/chloridetransporters)，成员l基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号27中记载的SLC12A1基因(GenBank登录号NM—000338)或其它生物种同源物等。SLC12A1基因可以通过Simon，D.B.等，1996年，NatureGenetics,第13巻，p.l83-188中记载的方法得到。本说明书中使用的"PGDS基因"或"PGDS"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号28)表示的造血型前列A泉素D2合成酶(prostaglandinD2synthase,hematopoietic)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号28中记载的PGDS基因(GenBank登录号NM-014485)或其它生物种同源物等。PGDS基因可以通过Kanaoka，Y.等，1997年，Cell,第90巻,p.1085—1095中记载的方法得到。本说明书中使用的"CD48基因"或"CD48"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号29)表示的CD48抗原基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号29中记载的CD48基因(GenBank登录号NM-001778)或其它生物种同源物等。CD48基因可以通过Staunton,D.E.等，1987年，EMBOJournal,第6巻，p.3695-3701中记载的方法得到。本说明书中使用的"IMPA2基因"或"IMPA2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号30)表示的肌醇一1(或4)—石粦酉臾单酉旨酵(inositol(myo)—1(or4)—monophosphatase)2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号30中记载的IMPA2基因(GenBank登录号NM—014214)或其它生物种同源物等。IMPA2基因可以通过Yoshikawa，T.等，1997年，Molecularpsychiatry,第2巻，p.393-397中记载的方法得到。本说明书中使用的"HSPA6基因"或"HSPA6"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号31)表示的热休克蛋白70(heatshock70kDaProtein)6(HSP70B，)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号31中记载的HSPA6基因(GenBank登录号NM—002155)或其它生物种同源物等。HSPA6基因可以通过Voellmy，R.等,1985年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica"第82巻,p.4949-4953中记载的方法得到。本说明书中使用的"EIF3S9基因"或"EIF3S9"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号32)表示的真核翁H奪起始因子(EukaryoticTranslationinitiationFactor)3,亚基9eta,116kDa基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号32中记载的EIF3S9基因(GenBank登录号NM—003751)或其它生物种同源物等。EIF3S9基因可以通过Methot，N.等，1997年，JournalofBiologicalChemistry,第272巻，p.lll0-1116中记载的方法得到。本说明书中使用的"ZNF659基因"或"ZNF659"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号33)表示的锌指蛋白(zincfmgerProtein)659基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号33中记载的ZNF659基因(GenBank登录号NM—024697)或其它生物种同源物等。ZNF659基因在2000年被Sugano，S.等克隆。本说明书中使用的"RAB6C基因"或"RAB6C"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号34)表示的RAS癌基因家族RAB6C基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号34中记载的RAB6C基因(GenBank登录号NM—032144)或其它生物种同源物等。RAB6C基因可以通过Fitzgerald,M丄.等，1999年，BiochemicalJournal,第342巻，p.353-360中记载的方法得到。本说明书中使用的"NOLl基因"或"NOLl"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号35)表示的核仁蛋白l，120kDa基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号35中记载的NDL1基因(GenBank登录号NM—006170)或其它生物种同源物等。NOLl基因可以通过Freeman,J.W.等，1988年，CancerResearch,第48巻，p.1244-1251中记载的方法得到。本说明书中使用的"DAB2基因"或"DAB2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号36)表示的有丝分裂原反应石粦蛋白dab同源物2(disabledhomolog2，mitogen-responsivePhosphoprotein)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号36中记载的DAB2基因(GenBank登录号NM—001343)或其它生物种同源物等。DAB2基因可以通过Mok，S.C.等，1994年，Gynecologiconcology，第52巻，p.247-252中记载的方法得到。本说明书中使用的"EBI3基因"或"EBI3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号37)表示的EB病毒诱导基因(Epstein-BarrvirusinducedGene)3基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号37中记载的EBI3基因(GenBank登录号NM—005755)或其它生物种同源物等。EBI3基因可以通过Devergne,O.等，1996年，Journalofvirology,第70巻，p.1143-1153中记载的方法得到。本说明书中使用的"PRSS3基因"或"PRSS3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号38)表示的丝氨酸蛋白酶3(内消旋胰蛋白酶(mesotrypsin))基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号38中记载的PRSS3基因(GenBank登录号NM—002771)或其它生物种同源物等。PRSS3基因可以通过Robinson，M.A.等，1993年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,第90巻，p.2433-2437中记载的方法得到。本说明书中使用的"GLB1基因"或"GLB1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号39)表示的半乳糖苷酶，p1基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号39中记载的GLB1基因(GenBank登录号NM—000404或其它生物种同源物等。GLBl基因可以通过Shows,T.B.等，1979年,SomaticCellGenetics,第5巻，p.147-158中记载的方法得到。本说明书中使用的"SAMSN1基因"或"SAMSN1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号40)表示的SAM区，SH3区和核定位信号(SAMDomain,SH3Domainand薩learlocalisationsignals)l基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号40中记载的SAMSN1基因(GenBank登录号NM—022136)或其它生物种同源物等。SAMSN1基因可以通过Claudio，J.O.等，2001年，Oncogene,第20巻，p.5373-5377中记载的方法得到。本说明书中使用的"AQP3基因"或"AQP3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号41)表示的水通道蛋白3基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号41中记载的AQP3基因(GenBank登录号NM—004925)或其它生物种同源物等。AQP3基因可以通过Ishibashi，K.等，1994年，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,第91巻，p.6269-6273中记载的方法得到。本说明书中使用的"CAPZA2基因"或"CAPZA2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号42)表示的加帽蛋白(月几动蛋白纤丝)Z线(cappingProtein(actinfilament)muscleZ-line)a2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号42中记载的CAPZA2基因(GenBank登录号NM—006136)或其它生物种同源物等。CAPZA2基因可以通过Barron-Casdla,E.A.等，1995年，JournalofBiologicalChemistry,第270巻，p.21472-21479中记载的方法得到。本说明书中使用的"B4GALT2基因"或"B4GALT2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号43)表示的UDP-Gal:卩GlcNAc(31，4-半乳糖基转移酶，多肽2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号43中记载的B4GALT2基因(GenBank登录号NM—003780)或其它生物种同源物等。B4GALT2基因可以通过Almeida，R.等，1997年，JournalofBiologicalChemistry,第272巻，p.31979-31991中记载的方法得到。本说明书中使用的"ARHGEF3基因，，或"ARHGEF3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号44)表示的Rho鸟口票p令斗亥苷酉吏交#灸因子(RhoguaninenucleotideexchangeFactor)(GEF)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号44中记载的ARHGEF3基因(GenBank登录号NM一019555)或其它生物种同源物等。ARHGEF3基因可以通过丁hiesen，S.等，2000年，Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications,第273巻，p.364—369中i己载的方法4寻到。本说明书中使用的"POGK基因"或"POGK"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号45)表示的含有KRAB区i或的pogo4争座因子(pogotransposableelementwithKRABDomain)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号45中记载的POGK基因(GenBank登录号AB040946)或其它生物种同源物等。POGK基因可以通过Greenhalf，W.等，1999年，Yeast，第15巻，p.1307-1321中记载的方法得到。本说明书中使用的"PRAF1基因"或"PRAF1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号46)表示的聚合酶(RNA)I相关因子l基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号46中记载的PRAF1基因(GenBank登录号NM—022490)或其它生物种同源物等。POGK基因可以通过Hanada,K.等，1996年，EMBOJournal,第15巻，p.2217-2226中记载的方法得到。本说明书中使用的"HPGD基因"或"HPGD"的术语，在没有^皮序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号47)表示的羟基前歹寸A泉素脱氢酶(hydroxyprostaglandindehydrogenase)15—(NAD)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号47中记载的HPGD基因(GenBank登录号NM—000860)或其它生物种同源物等。HPGD基因可以通过Pichaud,F.等，1997年，HumanGenetics,第99巻，p.279-281中记载的方法得到。HPGD基因在食管癌抹化细胞的转移性亚抹中，表达增加，上述内容被记载在Kawamata,H.等，2003年，CancerScience,第94巻，p.699-706。本说明书中使用的"GALNS基因"或"GALNS"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号142)表示的6-硫酸N-乙酰半乳糖胺硫酸酯酶基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号142中记载的GALNS基因(GenBank登录号NM—000512)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"fgfi基因"或"fgf，的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号143)表示的成纤维细胞生长因子3基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号143中记载的fgf3基因(GenBank登录号NM—005247)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"CMK2B基因"或"CMK2B"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号144)表示的钙/钙调蛋白-依赖性蛋白激酶(CAMkinase)II(3基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号144中记载的CMK2B基因(GenBank登录号NM—001220)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"CAMKIINalpha基因"或"CAMKIINalpha"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号145)表示的4丐/4丐调蛋白-依赖性蛋白激酶II基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号145中记载的CAMKIIalpha基因(GenBank登录号NM—018584)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"PSARL基因"或"PSARL"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号146)表示的早衰素相关菱开j体样蛋白(Presenilin-associatedrhomboid-likeprotein)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号146中记载的PSARL基因(GenBank登录号NM-018622)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"XRCC3基因"或"XRCC3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号147)表示的中国仓鼠细胞3中的X射线修复互补缺陷修复(X-rayrepaircomplementingdefectiverepairinChinesehamstercell3)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号147中记载的XRCC3基因(GenBank登录号NM-005432)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"CAPG基因"或"CAPG"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号148)表示的(肌动蛋白纤丝))疑〉容月交蛋白冲羊加帽蛋白(cappingprotein(actinfilament)gelsolin-like)(CAPG)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号148中记载的CAPG基因(GenBank登录号NM—001747)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"GRHPR基因"或"GRHPR"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号149)表示的乙醛酸还原酶一^至基丙酉同酉臾还y(^酵(glyoxylatereductase/hydroxypyruvatereductase)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号149中记载的GRHPR基因(GenBank登录号NM—012203)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"TROAP基因"或"TROAP"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号150)表示的滋养蛋白相关蛋白质(trophininassociatedprotein(滋养蛋白辅助蛋白，tastin))基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号150中记载的TROAP基因(GenBank登录号NM一005480)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"RRM2基因"或"RRM2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号151)表示的核糖核苷酸还原酶M2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号151中记载的RRM2基因(GenBank登录号NM-001034)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"SATB2基因"或"SATB2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号152)表示的SATB家族成员2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号152中记载的SATB2基因(GenBank登录号NM—015265)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"C14orf162基因"或"C14orf162"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号153)表示的染色体14开》文阅读才匡162(chromoseme14openreadingframe162)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号153中记载的C14orf162基因(GenBank登录号NM—020181)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"SEPT6基因"或"SEPT6"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号154)表示的septin6基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号154中记载的SEPT6基因(GenBank登录号NM—145799)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"M6PR基因"或"M6PR"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号155)表示的甘露#唐6—石舞酉臾酉旨小受体(smallmannose6—phosphatereceptor)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号155中记载的M6PR基因(GenBank登录号NM—002355)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"SPRR3基因"或"SPRR3"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号156)表示的富月甫氨酸小蛋白(smallproline—richprotein)3基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号156中记载的SPRR3基因(GenBank登录号NM-005416)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"EML1基因"或"EML1"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号157)表示的棘皮动物樣吏管结合蛋白相关蛋白1(Echinodermmicrotubule—associatedprotein-like1)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号157中记载的EML1基因(GenBank登录号NM—004434)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"YPEL5基因"或"YPEL5"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号158)表示的开心蛋白5(yippee-like5)(果蝇)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号158中记载的YPEL5基因(GenBank登录号NM—016061)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"EIF4EBP2基因"或"EIF4EBP2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号159)表示的真核翁H,起始因子4E-结合蛋白2(Eukaryotictranslationinitiationfactor4E-bindingprotein2)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号159中记载的EIF4EBP2基因(GenBank登录号NM—004096)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"SLC2A14基因"或"SLC2A14"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号160)表示的溶质载体蛋白家族2(易化扩散的葡萄糖转运体)，成员14(Solutecarrierfamily2(facilitatedglucosetransporter)，memberl4)基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号160中记载的SLC2A14基因(GenBank登录号BC060766)或其它生物种同源物等。本说明书中使用的"SLIT2基因"或"SLIT2"的术语，在没有被序列号定义的情况下，包括编码特定碱基序列(序列号161)表示的果蝇同源物SLIT的2基因(DNA)、其同源物、变异体及衍生物等的基因(DNA)。具体包括序列号161中记载的SLIT2基因(GenBank登录号NM—004787)或其它生物种同源物等。本发明提供对诊断、检测、确定或预测食管癌或食管癌转移、及食管癌的治疗有用的疾病确定用组合物、以及使用了该组合物的诊断、检测、确定或预测食管癌及食管癌转移的方法，由此具有以下独特作用效果，即提供具有特异性且预测率高、迅速、简单的检测、确定或预测食管癌和食管癌转移的方法。另外，本发明的食管癌标记物还包括在食管癌患者的血液等生物试样中发现的物质，该物质在健康人中基本或完全没有被发现，所以，还具有下述效果，即，通过单独以上述标记物的存在或存在量作为指标，例如在血液中的存在或存在量，即可容易地4全测食管癌。[图l]表示组合使用与表2中记载的基因对应的序列号4894的多核苷酸时，存在发生转移(即转移性)的食管癌细胞的检测率。纵轴表示能够检测到检样中存在发生转移的食管癌组织的概率，横轴表示检测发生转移的食管癌所需要的基因总数，该基因数按照表中记载的序列号依次增加。[图2]表示非癌组织部表达基因的表达量-表达强度相关图(M-A图，白色菱形标记食管癌检测用基因，黑色圆形标记对照基因)。纵轴M、即Minus表示各基因在对照与检样中的测定值的对数值之差，横轴A、即Add表示各基因在对照与检样中的测定值的对数值之和。[图3]表示食管癌组织部表达基因的表达量-表达强度相关图(M-A图，白色菱形标记食管癌检测用基因，黑色圓形标记对照基因)。纵轴M、即Minus表示各基因在对照与检样中的测定值的对数值之差，横轴A、即Add表示各基因在对照与检样中的测定值的对数值之和。[图4]表示组合使用与表3中记载的基因对应的序列号162181的多核苷酸时，存在食管癌细胞的检测率。纵轴表示能检测到检样中存在食管癌组织的概率，横轴表示检测食管癌所需的基因总数，该基因数按照表3中记载的序列号依次增加。[图5]表示利用RT-PCR法测定的食管癌组织中CAMKIIalpha及YPEL5基因的表达量降低。GAPDH:稳定表达基因甘油醛-3-磷酸酯脱氢酵(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)、-RT:不添加Taq聚合酶进行的反应。具体实施方式以下进一步具体地说明本发明。l.食管癌相关标记物l.l食管癌相关靶核酸(1)作为在使用本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片检测、确定或预测食管癌的存在及转移时使用的食管癌转移相关标记物的靶核酸例如包括含有序列号147表示的碱基序列的人类基因(即AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FU11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IG腿、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、NOLl、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD)、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。此处，基因、同源物、转录产物、cDNA、变异体及衍生物的含义与上述定义相同。优选的靶核酸为含有序列号147表示的碱基序列的人类基因、其转录产物或cDNA,较优选该转录产物或cDNA。在本发明中，成为食管癌转移的靶的上述基因在来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中的表达水平，与其在来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中的表达水平相比，均发生显著变化(即增加或降低)。第1耙核酸是AXL基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变少可以作为食管癌的标志(marker)的报道。第2耙核酸是C6orf54基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于C6orf54基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第3靶核酸是ZBTB11基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第4耙核酸是TNFRSF14基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于TNFRSF14基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第5靶核酸是NSUN5基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的寺艮道。第6靶核酸是SPEN基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的报道。第7靶核酸是LTBP3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于LTBP3基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第8靶核酸是SYNGR1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的才艮道。第9靶核酸是ARL3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于ARL3基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第10耙核酸是SLC13A1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于RRM2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第11革巴核酸是RALGDS基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于RALGDS基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第12靶核酸是ADD3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于ADD3基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第13靶核酸是MAP3K12基因、其同源物、其转录产物或cDNA、产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第14耙核酸是AVPI1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的冲艮道。第15耙核酸是GIMAP6基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第16靶核酸是FLJ11259基因、其同源物、其转录产物或cDNA、物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第17耙核酸是C3AR1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于C3AR1基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第18耙核酸是PCGF2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第19耙核酸是PDE6D基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于PDE6D基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第20耙核酸是PLCG2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于PLCG2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第21耙核酸是GPR148基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第22靶核酸是ARF6基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的才艮道。第23耙核酸是NISCH基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第24靶核酸是GLYAT基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第25靶核酸是IGHM基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于IGHM基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第26耙核酸是FBOX38基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第27耙核酸是SLC12A1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第28靶核酸是PGDS基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的报道。第29耙核酸是CD48基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于CD48基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第30靶核酸是IMPA2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第31靶核酸是HSPA6基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第32輩巴核酸是EIF3S9基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第33靶核酸是ZNF659基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于ZNF659基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第34耙核酸是RAB6C基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第35靶核酸是N0L1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于N0L1基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的寺艮道。第36靶核酸是DAB2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于DAB2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第37靶核酸是EBI3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于EBI3基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第38靶核酸是PRSS3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的报道。第39耙核酸是GLB1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于GLB1基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第40靶核酸是SAMSN1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于SAMSN1基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第41把核酸是APQ3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其达减少可以作为食管癌的标志的4艮道。第42耙核酸是CAPZA2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第43靶核酸是B4GALT2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于B4GALT2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第44靶核酸是ARHGEF3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第45靶核酸是POGK基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于POGK2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第46靶核酸是PRAF1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。迄今为止还没有关于PRAF1基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第47耙核酸是HPGD基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。HPGD基因在食管癌抹化细胞的转移性亚抹中表达增加，上述内容被记载于Kawamata，H.等，2003年，CancerScience,第94巻，p.699-706。1.2食管癌相关靶核酸(2)作为在使用本发明组合物、试剂盒或DNA芯片检测、确定或预测食管癌或食管癌细胞的存在时使用的食管癌相关标记物的靶核酸的其他例子，例如包括含有序列号142161表示的碱基序列的人类基因(即分别为GALNS,fgf3，CAMK2B，CaMKIINalpha，PSARL,XRCC3,CAPG，GRHPR,TROAP，RRM2,SATB2，C14orfl62,SEPT6，M6PR，SPRR3,EML1，YPEL5，EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2)、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。此处，基因、同源物、转录产物、cDNA、变异体及衍生物的含义与上述定义相同。优选的靶核酸是含有序列号142161表示的碱基序列的人类基因、其转录产物或cDNA，较优选该转录产物或cDNA。本发明中，作为食管癌的靶的上述基因，在食管癌组织中的表达水平与其在非癌组织中的表达水平相比，均显著降低。第1靶核酸是GALNS基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。GALNS基因是6-疏酸N-乙酰半乳糖胺硫酸酯酶的基因(Tomatsu,s.等，1991年,BiochemicalBiophysicalResearchCommunication,第181巻，p.677-683)。已知该基因的翻译产物在溶酶体内参与葡糖胺聚糖、硫酸角质素、6-硫酸软骨素等的代谢，该基因的缺损、缺失、变异可引起遗传性粘多糖病、即莫尔基奥综合征(MorquioAsyndrome)(Fukuda,S.等，1992年,JournalofClinicalInvestigation,第90巻，p.1049-1053等)。莫尔基奥综合征的主要症状是角膜混浊、大动脉瓣关闭不全、硫酸角质素从尿中排泄或骨病变。但是，迄今为止还没有关于GALNS基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第2靶核酸是fgf3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。fgf3基因是属于成纤维细胞生长因子家族的基因(Brookes，S.等，1989年，Oncogene,第4巻，p.429-436)。除暗示该基因的翻i奪产物有助于耳的形成之外，还发现作为原癌基因，在包括人食管癌细胞在内的多种人及小鼠的癌组织中扩增(Kitagawa,Y.等，1991年，CancerResearch,第51巻，p.1504-1508)。但是，迄今为止还没有关于fgf3基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第3靶核酸是CAMK2B基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。CAMK2B基因是钓/4丐调蛋白依赖性蛋白激酶II(3的基因(Tombes,r.M,等，1997年，BiochimicaetBiophysicaActa,第1355巻，p.281—292)。暗示该基因的翻译产物可将各种基质的丝氨酸.苏氨酸残基磷酸化，有助于细胞周期的调节或中枢神经系统的形成。暗示在肺小细胞癌细胞中，CAMK2B的活化促进细胞周期(Williams,C丄.等，1996年，BiochemicalPhamacology,第51巻，p.707-715)，但是，迄今为止还没有关于cMAK2B基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的4艮道。第4耙核酸是CaMKIINalpha基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。CAMKIINalpha基因是钓/4丐调蛋白-依赖性蛋白激酶II的基因(Strausberg，R丄.等，2002年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻，p.16899-16903)。已知CAMKIINalpha基因与CaM-激酶II抑制剂a(大鼠LOC287005)具有高同源性，LOC287005是对脑特异性的4丐/钙调蛋白-依赖性蛋白激酶II的抑制蛋白质(Chang.B.H.等，2001年,Neuroscience，第102巻,p.767-777)。但是，迄今为止还没有关于CaMKIINalpha基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第5耙核酸是PSARL基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。PSARL基因是早衰素相关菱形体样蛋白的基因(Pellegrini,L.等2001年,JournalofAlzheimer'sDisease,第3巻，p.181—190)。已知作为酿酒酵母(S.cerevisiae)的PSARL同源物的Rbdl的翻译产物存在于线粒体内膜，该翻译产物的缺损引起呼吸不全(MacQuibban,G.等，2003年，Nature,第423巻，p.537-541)。但是，迄今为止还没有关于PSARL基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第6靶核酸是XRCC3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。XRCC3基因是中国仓鼠细胞3的X射线修复互补缺陷修复的基因(Tebbes,R.S.等,1995年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第92巻，p.6354-6358)。XRCC3基因的翻译产物参与基因障碍的修复，并有以下报道XRCC3基因的变异在乳癌(Kuschel,B.等，2002年,Humanmoleculargenetics,第ll巻，p.1399-1407)及黑色素瘤(Winsey，L.等,2000年，CancerResearch,第60巻，p.5612-5616)中显著升高。但是，迄今为止还没有关于XRCC3基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第7耙核酸是CAPG基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。CAPG基因是属于凝溶胶蛋白/胆汁三烯家族(gelsolin/bilinfamily)的肌动蛋白加帽蛋白质的基因(Dabiri,G.A.等，1992年，JournalofBiologicalChemistry,第267巻，p.16545-16552)。该基因的翻译产物与肌动蛋白纤维的箭头端结合，使肌动蛋白纤维切断能力丧失。最初，该翻译产物在巨噬细胞中被发现，暗示有可能与巨噬细胞的功能有关，但是，迄今为止还没有关于CAPG基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第8耙核酸是GRHPR基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。GRHPR基因是乙醛酸还原酶-羟基丙酮酸还原酶的基因(Rumsby,G.等，1999年，BiochimicaetBiophysicaActa，第1446巻,p.383-388)。该基因的翻译产物将乙醛酸代谢为羟乙酸盐，并将羟基丙酮酸可逆性分解为D-甘油酸盐。暗示该基因是原发性2型高草酸尿症的致病基因(Cramer,S.D.等，1999年，HumanMolecularGenetics,第8巻，p.2063-2069)。但是，迄今为止还没有关于GRHPR基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第9靶核酸是TROAP基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。TROAP基因是滋养蛋白相关蛋白质(TASTIN)的基因(Fukuda，M.N.等，1995年，GenesandDevelopment,第9巻，p.l199-1210)。暗示该基因的翻译产物与滋养蛋白一同作用，在胚胎植入子宫内膜细胞时，有助于细胞粘附(Fukuda,M.等，如上所述)。但是，迄今为止还没有关于TROAP基因或其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的纟艮道。第10耙核酸是RRM2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。RRM2基因是核糖核苷酸-二磷酸酯还原酶M2嗜连(ribonucleotide-diphosphatereductaseM2chain)的基因(Yang_Feng，T丄.等,1987年，Genomics,第l巻，p.77-86)。该基因的翻译产物是由核糖核苷酸生成脱氧核糖核苷酸的酶的亚单位，是DNA合成的限速酶。已公开该翻译产物在浸润性乳癌等中表达亢进(jensen,R.A.等，1994年，ProceedingsofthenationalAcademyofSciences，USA,第91巻,p.9527-9261等)，还已知该基因的翻译产物作为羟基脲的抗癌作用的靶分子(Yen,Y.等，1994年，CancerResearch,第54巻，p.3686-3691)。另外，已知随癌细胞株对抗癌剂吉西他滨(gemcitabine)产生耐性，该基因的翻译产物的表达量增加(Goan，Y.G.等，1999年，CancerResearch,第59巻，p.4204-4207等)。但是，迄今为止还没有关于RRM2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第11靶核酸是SATB2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。SATB2基因是DNA序列结合蛋白质的基因(Kikuno.R.等，1999年，DNAResearch,第6巻，p.197-205)。已知该基因的翻译产物与pre-B细月包的免疫^求蛋白基因的核基质结合区(nuclearmatrixattachmentregions)结合并调节其表达(Dobreva,G,2003年，Genes&Development,第17巻，p.3048-3061)，但是，迄今为止还没有关于SATB2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第12靶核酸是C14orfl62基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。C14orfl62基因是染色体14开放阅读框162的基因(Mao，Y.等，2000年GenbankDirectsubmission)。C14orfl62基因的功能是未知的,迄今为止还没有关于C14orfl62基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第13靶核酸是SEPT6基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。SEPT6基因是属于septin家族的基因(Ono，R.等，2002年，CancerResearch,第62巻，p.333-337)。该基因的翻译产物具有ATP-GTP结合部位和暗示核内移行的序列。另外，已知存在多种变异体。已知在急性骨髓性白血病患者中，Septin6基因通过染色体转移与MLL基因融合(Ono,R.等，如上所述)。但是，迄今为止还没有关于SEPTIN6基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第14靶核酸是M6PR基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。M6PR基因是甘露糖6-磷酸酉旨小受体(smallma廳se6-phosphatereceptor)的基因(Pohlmann,R.等，1987年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第84巻，p.5575_5579)。已知该基因的翻译产物作为IGF-II的受体发挥作用，通过抑制其在绒毛癌细胞中的表达能够抑制细胞增殖能力(O，Goman,D.B.等，1999年，CancerResearch,59巻，p.5692-5694)。但是，迄今为止还没有关于M6PR基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第15靶核酸是SPRR3基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。如上所述，已知SPRR3基因是食管癌的标记物(国际公开第2003/042661说明书、Chen,B.S.等，2000年，Carcinogenesis,第21巻，p.2147-2150;Abraham,J.M.等，1996年，CellGrowth&Differentiation,第16靶核酸是EML1基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。EML1基因是棘皮动物微管结合蛋白相关蛋白1的基因(Eudy，J.D.等，1997年，Genomics,第43巻，P.104-106)。EML1基因的序列中存在推测为钙结合特征结构和组氨酸磷酸酶活性区域的序列，但是，迄癌的标志的报道。第17耙核酸是YPEL5基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。YPEL5基因是开心蛋白5(果蝇)的基因(Roxstrom-Lindquist,K.等,2001年,Insectmolecularbiology,第10巻,p.77-86)。YPEL5的翻译产物属于锌-结合蛋白质家族，迄今为止还没有关于YPEL5基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第18耙核酸是EIF4EBP2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。EIF4EBP2基因是真核翻译起始因子4E-结合蛋白2的基因(Pause,A.等，1994年，Nature,第371巻，p.762-767)。EIF4EBP2的翻译产物是基因表达的起始控制蛋白质，在几种癌中发现基因变异(Tsukiyama-Kohara,K.等，1996年，Genomics,第38巻，p.353-363)，迄今为止的标志的报道。第19靶核酸是SLC2A14基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。SLC2A14基因是溶质载体蛋白家族2(易化扩散的葡萄糖转运体)，成员14的基因(Strausberg,R丄.等，2002年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻，p.16899-16903)。SLC2A14的翻译产物是在睾丸中特异表达的葡萄糖转运体(Wu,X.等，如上所述)，迄今为止还没有关于SLC2A14基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。第20靶核酸是SLIT2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。SLIT2基因是果蝇SLIT同源物2的基因(Itoh，A.等，1998年，MolecularBrainResearch,第62巻，p.175—186)。已知该基因的翻i奪产物是分泌蛋白质，抑制神经纤维的延长和白细胞游走(Wu，W.等，1999年，Nature,第400巻，p.331-336)。但是，迄今为止还没有关于SLIT2基因及其转录产物的表达减少可以作为食管癌的标志的报道。1.3食管癌相关靶多肽(1)作为在使用本发明的组合物或试剂盒检测、确定或预测食管癌的存在及转移时使用的食管癌转移相关标记物的靶多肽，例如包括含有序列号147表示的碱基序列的上述人类基因，即分别由AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IGHM、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、NOLl、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因编码的多肽，例如含有序列号95141表示的氨基酸序列的人多肽、其同源物、或其变异体或衍生物。此处，多肽、同源物、变异体及衍生物的含义与上述定义相同。优选的靶多肽是含有序列号95141表示的氨基酸序列的人多肽。本发明中的成为食管癌转移的靶的上述多肽与对应的基因及其转录产物的表达量相同地都具有以下特征在来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中的表达水平与其在来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中的表达水平相比，发生显著变化(即增加或下降)，或该多肽在手术时发生淋巴结转移的受试者的血液中的表达水平与其在手术时未发生淋巴结转移的受试者的血液中的表达水平相比，发生显著变化(即增加或下降)。1.4食管癌的靶多肽(2)作为在使用本发明的组合物或试剂盒检测、确定或预测食管癌或食管癌细胞的存在时使用的食管癌相关标记物的靶多肽包括由上述GALNS，fgf3,CAMK2B,CaMK丽alpha，PSARL,XRCC3，CAPG，GRHPR，TROAP，RRM2，SATB2，C14orfl62，SEPT6，M6PR，SPRR3，EML1，YPEL5，EIF4EBP2，SLC2A14及SLIT2基因编码的多肽，例如，含有序列号182201表示的氨基酸序列的人多肽、其同源物、或其变异体或衍生物。此处，多肽、同源物、变异体及衍生物的含义与上述定义相同。优选的靶肽是含有序列号182201表示的氨基酸序列的人多肽。在本发明中，成为食管癌的靶的上述多肽与对应的基因及其转录产物的表达量相同地都具有以下特征在食管癌组织中的表达量与其在非癌组织中的表达量相比，显著降低，或该多肽在罹患食管癌的受试者的血液中的表达水平与其在健康受试者的血液中的表达水平相比，显著降低。1.5食管癌相关靶多肽(3)使用本发明的组合物或试剂盒体外检测食管癌时使用的其他食管癌标记物是具有序列号202233表示的氨基酸序列的多肽、其变异体或其片段。本发明的序列号202233的多肽、其基因名及蛋白质编号(GenBank登录名及登录号)、及其特性一同示于下面的表l。上述多肽例如在食管癌患者的血浆中被特异性地检测到，而在健康者的血浆中不被检测到或未达到能检测的水平。<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在本发明中，用于检测食管癌的上述靶多肽均具有以下特征该多肽在食管癌患者的血液等生物试样中的水平与健康人相比，患有食管癌的受试者中的多肽水平显著或特别高。2.食管癌诊断用探针根据本发明，用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移的探针、或用于预测受试者术后预后的探针选自下述i组、n组及/或in组I组由以下(a)(e)组成的多核苦酸，(a)由序列号146表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(b)含有序列号146表示的碱基序列的多核苷酸，(c)由与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(d)含有与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列的多核普酸，及(e)在严格条件下与上述(a)(d)中任一个多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。II组由(f)(j)组成的多核苷酸，(f)由序列号142155、157161表示的-威基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(g)含有序列号142155、157161表示的碱基序列的多核苷酸，(h)由与序列号142155、157161表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核普酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(i)含有与序列号142155、157161表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸、及(j)在严格条件下与上述(f)(i)中任一个多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，m组由(k)(m)组成的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，(k)与由序列号146表示的碱基序列编码的多肽、或具有序列号95140表示的氨基酸序列的多肽、其变异体、或其片段中的至少l个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，(1)与由序列号142155、157161表示的碱基序列编码的多肽、或具有序列号182195、197201表示的氨基酸序列的多肽、其变异体、或其片段中的至少1个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物、及(m)与序列号202232表示的多肽，其变异体、或其片段中的至少1个特异性结合的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物。上述探针均能与上述1.1至1.5中记载的食管癌相关标记物中的任一种结合，能够用于检测、确定或预测食管癌的存在或转移。例如，利用上述I组及III组(k)的各探针能够检测、确定或预测食管癌的存在或转移。另外，利用上述II组及III組(1)、(m)的各探针能够才全测、确定或预测食管癌的存在。在本发明中，核酸探针含有DNA或RNA,抗体探针含有多克隆抗体、单克隆抗体、其抗体片段、合成抗体、重组抗体、多特异性抗体、单链抗体等。本发明人等首次发现上述I组至III组所示的探针能用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移。3.食管癌诊断用组合物3.1核酸组合物(1)本发明中，用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移的核酸组合物含有上述2中的I组中记载的1种或2种以上探针，能够定性及/或定量地测定作为食管癌转移相关的靶核酸的以下物质的存在、表达量或存在量，所述物质为来自人的AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IGHM、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、N0L1、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物。上述靶核酸在来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中的表达水平与来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中的表达水平相比，发生显著变化(即增加或降低)。因此，本发明的组合物能够有效地用于测定来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌组织和来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌组织中耙核酸的表达水平，并对其进行比较。本发明中能使用的组合物包括选自下述多核苷酸组的l种或多种多核苷酸的组合，所述多核苷酸组为患有食管癌的患者的生物组织中含有序列号147表示的碱基序列的多核苷酸组及其互补多核苷酸组；由在严格条件下与DNA分别杂交的多核苷酸组及其互补多核苷酸组，所述DNA由与上述碱基序列互补的碱基序列组成；及上述多核苷酸组的碱基序列中含有15个以上连续碱基的多核苷酸组。具体而言，本发明的组合物可以含有以下1种或多种多核苷酸或其片段。(1)由序列号146、47表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(2)含有序列号146、47表示的碱基序列的多核苷酸组。(3)由序列号146表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(4)含有序列号146表示的碱基序列的多核苷酸组。(5)由与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(6)含有与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列的多核普酸组。(7)在严格条件下，与DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段，上述DNA由与序列号146表示的各碱基序列互才卜的石咸l4歹Q纟且A。(8)在严格条件下与由序列号146表示的各碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段。(9)由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(10)含有序列号47表示的碱基序列的多核苷酸。(11)由与序列号47表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或含有15个以上连续碱基的片段。(12)含有与序列号47表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸组。U3)在严格条件下，与DNA杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，上述DNA由与序列号47表示的碱基序列互补的碱基序列组成。(14)在严格条件下，与由序列号47表示的碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。上述(1)(14)的多核香酸的片段可以含有各多核苷酸的碱基序列中的例如下述范围的连续碱基数，但并不限定于此，所述范围包括15序列的全部碱基数、155000个碱基、154500个碱基、15~4000个碱基、153500个碱基、153000个碱基、152500个碱基、152000个碱基、151500个碱基、151000个碱基、15900个碱基、15800个碱基、15700个碱基、15600个碱基、15500个碱基、15400个碱基、15300个碱基、15250个碱基、15~200个碱基、15150个碱基、15~140个碱基、15130个碱基、15120个碱基、15110个碱基、15100个碱基、1590个碱基、1580个碱基、1570个碱基、1560个碱基、1550个碱基、1540个碱基、1530个碱基或1525个碱基；25序列的全部碱基数、251OOO个碱基、25900个碱基、25~800个碱基、25700个碱基、25600个碱基、25500个碱基、25400个碱基、25300个碱基、25250个碱基、25200个碱基、25150个碱基、25140个碱基、25130个碱基、25120个碱基、25110个碱基、25100个碱基、2590个碱基、2580个碱基、2570个碱基、2560个碱基、2550个碱基或2540个碱基；50序列的全部碱基数、501000个碱基、50900个碱基、50~800个碱基、50700个碱基、50600个碱基、50500个碱基、50400个碱基、50300个碱基、50250个碱基、50200个碱基、50150个碱基、50140个碱基、50130个碱基、50120个碱基、50110个碱基、50100个碱基、5090个石咸基、5080个碱基、5070个碱基或5060个碱基；60序列的全部碱基数、601000个碱基、60900个碱基、60800个碱基、60700个碱基、60600个碱基、60500个碱基、60400个碱基、60300个碱基、60250个碱基、60200个碱基、60150个碱基、60140个碱基、60130个碱基、60120个碱基、60110个碱基、60100个碱基、6090个碱基、6080个碱基或6070个碱基等。根据本发明的实施方案，含有序列号147表示的碱基序列的多核苦酸的片段，优选分别含有序列号4894表示的碱基序列或其互补序列、或其连续15个碱基以上的部分序列。本发明的组合物中例如含有以下多核苷酸。(1)序列号146表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有15个以上连续碱基的多核苷酸。(2)序列号146表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(3)序列号47表示的碱基序列或其互补序列中，含有15个以上连续碱基的多核苷酸。(4)序列号47表示的碱基序列或其互补序列中，含有60个以上连续i咸基的多核苷酸。(5)序列号146表示的碱基序列中，分别含有序列号4893表示的碱基序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(6)与序列号146表示的碱基序列互补的序列中，分别含有与序列号4893表示的碱基序列互补的序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(7)序列号47表示的碱基序列中，含有序列号94表示的碱基序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(8)与序列号47表示的碱基序列互补的序列中，含有与序列号94表示的碱基序列互补的序列、且含有60个以上连续石咸基的多核苷酸。本发明中使用的上述多核苷酸类或其片段类均可以为DNA或RNA。作为本发明的组合物的多核苷酸可以4吏用DNA重组技术、PCR法、使用DNA/RNA自动合成仪的方法等常^L技术进行制作。DNA重组技术及PCR法可以使用例如Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWilley&Sons,US(1993);Sambrook等，MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,US(1989)等中记载的技术。来自人的AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IG画、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、NOLl、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因是公知的，如上所述，其获得方法也是已知的。所以，可以通过克隆上述基因制作作为本发明的组合物的多核苦酸。构成本发明的组合物的多核苷酸可以使用DNA自动合成装置化学合成得到。通常可以使用亚磷酰胺法进行合成，利用该方法可以自动合成至约100个碱基的单链DNA。DNA自动合成装置可以从例如Polygen公司、ABI^^司、AppliedBioSystems7^司等购买。本发明的多核苷酸也可以通过cDNA克隆法制作。可以从表达作为本发明中的靶的上述基因的食管组织等生物组织中提取总RNA，将该总RNA用寡聚dT纤维素柱处理得到聚A(+)RNA,通过RT-PCR法由该聚A(+)RNA制作cDNA库，通过杂交筛选、表达筛选、抗体筛选等进行筛选，从该cDNA库得到目标cDNA克隆。可以根据需要，利用PCR法扩增cDNA克隆。可以基于序列号147表示的碱基序列，从15100个连续碱基序列中选择并合成探针或引物。例如在Sambrook，J.&Russel，D,著，MolecularCloning,ALABORATORYMANUAL、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2001年1月15日出片反，第1巻7.427.45,第2巻8.98.17中记载了cDNA克隆技术，可以用于多核苷酸的制作。3.2核酸组合物(2)本发明中用于检测、确定或预测食管癌或食管癌细胞的存在的核针，可以定性及/或定量地测定作为食管癌相关靶核酸的来自人的GALNS,fgf3，CAMK2B,CaMKIINalpha,PSARL,XRCC3,CAPG,GRHPR，TROAP，RRM2,SATB2,C14orfl62，SEPT6,M6PR,SPRR3,EML1,YPEL5,EIF4EBP2，SLC2A14及SLIT2基因、其同源物、其转录产物或cDNA、或其变异体或衍生物的存在、表达量或存在量。上述靶核酸在食管癌组织中的表达水平与非癌组织相比，显著降低。因此，本发明的组合物可以有效地用于测定非癌组织和食管癌组织中耙核酸的表达水平，并对其进行比寿交。本发明中可以使用的组合物是选自下述多核苷酸组的一种或几种多核香酸的组合，所述多核苷酸组为含有患有食管癌的患者的生物组织中的序列号142161表示的碱基序列的多核苷酸组及其互补多核普酸组；在严格条件下与DNA分别杂交的多核苷酸组及其互补多核苷酸组，上述DNA由与该碱基序列互补的碱基序列组成；以及上述多核苦酸组的碱基序列中含有15个以上连续碱基的多核苷酸组。具体而言，本发明的组合物可以含有以下1种或多种多核苷酸或其片段。(1)由序列号142161表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(2)含有序列号142161表示的碱基序列的多核苷酸组。(3)序列号142155表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(4)含有序列号142~155表示的碱基序列的多核苷酸组。(5)由与序列号142155表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(6)含有与序列号142155表示的碱基序列互补的碱基序列的多核普酸组。(7)在严格条件下与DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段，上述DNA由与序列号142155表示的各碱基序列互补的-威基序列组成。(8)在严格条件下与由序列号142155表示的各碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段。(9)由序列号157161表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(10)含有序列号157161表示的碱基序列的多核苷酸组。(11)由与序列号157161表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(12)含有与序列号157161表示的碱基序列互补的碱基序列的多核香酸组。(13)在严格条件下与DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段，上述DNA由与序列号157161表示的各碱基序列互补的;咸基序列组成。(14)在严格条件下与由序列号157161表示的各石咸基序列组成的DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段。(15)由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(16)含有序列号156表示的碱基序列的多核苷酸。(17)由与序列号156表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(18)含有与序列号156表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苦酸。(19)在严格条件下与DNA杂交的多核苦酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，上述DNA由与序列号156表示的碱基序列互补的碱基序列组成。(20)在严格条件下与由序列号156表示的碱基序列组成的DNA杂交的多核苦酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。上述(1)(14)的多核苷酸片段可以含有各多核苷酸的碱基序列中的例如下述范围的连续碱基数，但并不限定于此，所述范围为15序列的全部碱基数、155000个碱基、154500个碱基、154000个碱基、153500个碱基、153000个碱基、152500个碱基、152000个碱基、151500个碱基、151000个碱基、15900个碱基、15800个碱基、15700个碱基、15600个碱基、15500个碱基、15400个碱基、15300个碱基、15250个碱基、15200个碱基、15150个碱基、15140个碱基、15130个碱基、15120个碱基、15110个碱基、15100个碱基、1590个碱基、1580个碱基、1570个碱基、1560个碱基、1550个碱基、1540个碱基、1530个碱基或1525个碱基；25序列的全部碱基数、251000个碱基、25900个碱基、25800个碱基、25700个碱基、25600个碱基、25500个碱基、25400个碱基、25300个碱基、25250个碱基、25200个碱基、25150个碱基、25140个碱基、25130个^咸基、25120个-威基、25110个石威基、25100个;咸基、2590个石威基、2580个碱基、25~70个碱基、2560个碱基、2550个碱基或25~40个碱基；50序列的全部碱基数、501000个碱基、50900个碱基、50800个碱基、50700个碱基、50600个碱基、50500个碱基、50~400个碱基、50300个碱基、50250个碱基、50200个碱基、50150个碱基、50140个碱基、50130个碱基、50120个碱基、50110个碱基、50100个;咸基、5090个碱基、5080个石咸基、5070个;咸基或50~60个碱基；60序列的全部碱基数、601000个碱基、60900个碱基、60,个碱基、60700个碱基、60600个碱基、60500个碱基、60400个碱基、60300个碱基、60250个碱基、60200个碱基、60~150个碱基、60140个碱基、60130个碱基、60120个碱基、60110个碱基、60100个碱基、6090个碱基、6080个碱基或6070个碱基等。根据本发明的实施方案，优选含有序列号142161表示的碱基序列的多核苷酸的片段分别含有序列号162181表示的碱基序列或其互补序列、或其连续15个;威基以上的部分序列。本发明的组合物例如包括以下多核苷酸。(1)序列号142155表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有15个以上连续碱基的多核*酸。(2)序列号142155表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(3)序列号157161表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有15个以上连续碱基的多核苷酸。(4)序列号157161表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(5)序列号142155表示的碱基序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号162175表示的碱基序列的多核苷酸。(6)与序列号142155表示的碱基序列互补的序列中，含有60个以上连续碱基的多核苦酸中分别含有与序列号162~175表示的碱基序列互补的序列的多核苷酸。(7)序列号157161表示的碱基序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号177181表示的碱基序列的多核苷酸。(8)与序列号157161表示的碱基序列互补的序列中，含有60个以上连续碱基的多核普酸中分别与序列号177181表示的碱基序列互补的序列的多核苷酸。(9)序列号156表示的碱基序列或其互补序列中，含有15个以上连续碱基的多核苷酸。(10)序列号156表示的碱基序列或其互补序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(11)序列号156表示的碱基序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中含有序列号176表示的碱基序列的多核苷酸。(12)与序列号156表示的碱基序列互补的序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中含有与序列号176表示的碱基序列互补的序列的多核香酸。本发明中使用的上述多核苷酸类或其片段类均可以为DNA,也可以为RNA。作为本发明的组合物的多核苷酸可以使用DNA重组技术、PCR法、利用DNA/RNA自动合成仪的方法等常规技术进行制作。DNA重组技术及PCR法，例如可以使用Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWilley&Sons，US(1993);Sambrook等,MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,US(1989)等中记载的技术。GALNS,fgf3，CAMK2B，CaMKIINalpha，PSARL，XRCC3，CAPG，GRHPR,TROAP，RRM2，SATB2，C14orfl62，SEPT6，M6PR,SPRR3，EML1，YPEL5,EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2基因是公知的，其获得方法也是已知的。因此，可以通过克隆上述基因制作作为本发明的组合物的多核苷酸。GALNS基因，例如可以通过Tomatsu，S.等，1991年，BiochemicalBiophysicalResearchCommunication,第181巻,p.677-683中记载的方法得到。fgf3基因，例如可以通过Brookes,S.等，1989年，Oncogene,第4巻,p.429—436中记载的方法得到。CMK2B基因，例如可以通过Tombes，R.M.等，1997年，BiochimicaetBiophysicaActa,第1355巻，p.281—292中i己载的方法4寻到。CAMKIINalpha基因，例如可以通过Strausberg,R丄.等，2002年,ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻,p.16899-16903中记载的方法得到。PSARL基因，例如可以通过Pellegrini，L.等，2001年，JournalofAlzheimer'sDisease,第3巻，p.181-190中记载的方法得到。XRCC3基因，例如可以通过Tebbes，R.S.等，1995年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第92巻，p.6354-6358中记载的方法得到。CAPG基因，例如可以通过Dabiri,G.A.等，1992年，JournalofBiologicalChemistry,第267巻，p.16545-16552中记载的方法得到。GRHPR基因，例如可以通过Rumsby,G.等，1999年，BiochimicaetBiophysicaActa,第1446巻，p.383—388中记载的方法得到。TROAP基因，例如可以通过Fukuda,M.N.等，1995年，GenesandDevelopment,第9巻，p.1199-1210中记载的方法得到。RRM2基因，例如可以通过Yang-Feng,T丄.等，1987年，Genomics,第l巻，p.77-86中记载的方法得到。SATB2基因，例如可以通过Kikuno.R.等，1999年，DNAResearch,第6巻，p.197—205中记载的方法得到。C14orfl62,例如Mao，Y.等在2000年报道了C14orfl62的克隆。SEPT6基因，例如可以通过Ono，R.等，2002年，CancerResearch,第62巻，p.333-337中记载的方法得到。M6PR基因，例如可以通过Pohlmann，R.等，1987年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第84巻，p.5575-5579中记载的方法得到。SPRR3基因，例如可以通过Gibbs，S.等，1993年，Genomics,第16巻，p.630-637中记载的方法得到。EML1基因，例如可以通过Eudy,J.D.等，1997年，Genomics,第43巻，P.104-106中记载的方法得到。YPEL5基因，例如可以通过Roxstrom-Lindquist,K.等，2001年,Insectmolecularbiology,第10巻，p.77—86中记载的方法得到。EIF4EBP2基因,例如可以通过Pause,A.等,1994年，Nature,第371巻，p.762-767中记载的方法得到。SLC2A14基因例如可以通过Strausberg，R丄.等，2002年，ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.,第99巻,p.16899-16903中记载的方法得到。SLIT2基因例如可以通过Itoh,A.等，1998年，MolecularBrainResearch,第62巻，p.175-186中记载的方法得到。构成本发明的组合物的多核苷酸可以使用DNA自动合成装置化学合成得到。通常使用亚磷酰胺法进行合成，利用该方法能自动合成至约100个碱基的单链DNA。DNA自动合成装置例如可以从Polygen公司、ABI公司、AppliedBioSystems公司等购买。本发明的多核苷酸也可以通过cDNA克隆法制作。可以,人表达作为本发明中的靶的上述基因的食管组织等生物组织中提取总RNA,将该总RNA用寡聚dT纤维素柱处理得到聚A(+)RNA,通过RT-PCR法由该聚A(+)RNA制作cDNA库，通过杂交筛选、表达筛选、抗体筛选等进行筛选，从该cDNA库得到目标cDNA克隆。可以根据需要，利用PCR法扩增cDNA克隆。可以基于序列号142161表示的碱基序列，从15100个连续碱基序列中选择并合成探针或引物。例如在Sambrook，J.&Russel，D.著，MolecularCloning,ALABORATORYMANUAL、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2001年1月15日出片反，第1巻7.427.45,第2巻8.98.17中记载了cDNA克隆技术，可以用于多核苷酸的制作。3.3抗体组合物本发明的组合物作为食管癌诊断用探针，可以含有上述2中的m组中记载的抗体、其片段或化学修饰衍生物。该组合物对于体外检测、确定或预测患有食管癌的受试者中的食管癌的存在及/或转移是有用的。此处，转移的预测可以推导出受试者术后的预后良好、不良的预测结果。(A)本发明的抗体组合物的第l例是含有对下述多肽、其变异体或其片段的l种或多种抗体、该抗体的片段、或其化学修饰衍生物的组合物，所述多肽具有上述m组(k)中记载的序列号95140表示的氨基酸序列。本发明的组合物中可以进一步含有对下述多肽、其变异体或其片段的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，所述多肽具有序列号141表示的氨基酸序列。通过并用上述抗体，可以提高预后预测的准确度。即，根据本发明，可以提供用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移的组合物，为了检测作为食管癌转移标记物的由上述AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPIl、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PLCG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IGHM、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、N0L1、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因编码的多肽、其同源物、或其变异体或衍生物，该组合物含有l种或几种对上述多肽、其变异体或其片段的抗体。(B)本发明的抗体组合物的第2例是含有对下述多肽、其变异体或其片段的l种或几种抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，所述多肽具有上述III组(1)中记载的序列号182195、197201表示的氨基酸序列。本发明的组合物可以进一步含有对下述多肽、其变异体或其片段的抗体、该抗体的片段或化学修饰衍生物，所述多肽具有序列号196表示的氨基酸序列。即，根据本发明，可以提供用于检测、确定或预测食管癌的存在的组合物，为了检测作为食管癌标记物的由上述GALNS，fgf3，CAMK2B，CaMKIINalpha,PSARL，XRCC3，CAPG,GRHPR，TROAP,RRM2，SATB2，C14orfl62，SEPT6，M6PR,SPRR3,EMU,YPEL5,EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2基因编码的多肽、其同源物、或其变异体或衍生物，该组合物中含有l种或几种对上述多肽、其变异体或其片段的抗体。(C)本发明的抗体组合物的第3例是用于体外检测、确定或预测患有食管癌的受试者中的食管癌的存在的组合物，其中含有对下述多肽、其变异体或其片段的l个或几个抗体、该抗体的片段、或其化学修饰衍生物，所述多肽具有上述m组(m)中记载的序列号202232表示的氨基酸序列。本发明的组合物中可以进一步含有与具有序列号233表示的氨基酸序列的多肽、其变异体或其片段中的至少1个特异性结合的抗体、该抗体的片段或其化学修饰衍生物。上述多肽由上述表l中记载的基因编码。上述多肽可以利用DNA重组技术得到。例如，将如上所述得到的cDNA克隆整合到表达载体中，通过培养由该载体转化或转染的原核或真核宿主细胞，可以从该细胞或培养上清得到上述多肽。载体及表达系统可以从Novagen公司、宝酒造、第一化学药品、Qiagen公司、Stratagene公司、Promega公司、RocheDiagnositics公司、Invitrogen公司、GeneticsInstitute公司、AmershamBioscience公司等购买。作为宿主细胞，可以使用细菌等原核细胞(例如大肠杆菌、枯草菌)、酵母(例如酿酒酵母)、昆虫细胞(例如Sf细胞)、哺乳动物细胞(例如COS、CHO、BHK)等。载体中除含有编码该多肽的DNA以外，还可以含有调节成分，例如启动子、增强子、多聚腺苷酸化信号、核糖体结合部位、复制起始点、终止子、选择标记等。为了容易进行多肽的精制，可以将多肽制成在多肽的C末端或N末端结合了标记肽的融合多肽。作为代表性的标记肽，可以举出610个残基的组氨酸重复序列、FLAG、myc肽、GFP多肽等，但标记肽并不限定于此。DNA重组技术记载于Sambrook，J.&Russel,D.(参见上述记载)。在不结合标记肽的状态下制备本发明的多肽时，作为其精制方法，例如可以举出利用离子交换色谱法的方法。除此之外，还可以使用组合凝胶过滤或疏水性色镨、等电点色谗等的方法。另一方面，在该蛋白上结合组氨酸重复序列、FLAG、myc、GFP等标记肽时，可以举出适合通常使用的各种标记肽的亲和色谱法。可以构建能容易分离.精制的表达载体。特别是构建能以多肽和标记肽的融合多肽的状态进行表达的表达载体，利用基因工程技术制备该多肽时，也可容易地进行分离精制。本发明的上述多肽的变异体如上述所定义，是在序列号95141、182201、202233表示的氨基酸序列或其部分序列中,缺失、置换、添加或插入l个以上、优选l或几个氨基酸的变异体、或与该氨基酸序列或其部分序列具有约80%以上、约85%以上、优选约90%以上、较优选约95%以上、约97%以上、约98%以上、约99%以上的同源性百分比的变异体。上述变异体例如包括不同于人的哺乳动物种的同源物、以人的多型性变异或剪接变异为基础的变异体等天然变异体。本发明的上述多肽或变异体的片段由该多肽的氨基酸序列的至少5个、至少7个、至少10个、至少15个、优选至少20个、至少25个、较优选至少30个、至少40个、至少50个连续氨基酸残基构成，并具有l个或几个表位。上述片段可以免疫特异性地与本发明的抗体或其片段结合。推测上述多肽可能在存在于生物体内的蛋白酶或肽酶等酶的作用下被切断而形成片段，以片段形式存在。识别如上所述得到的多肽的抗体可以通过抗体的抗原结合部位特异性结合该多肽。具体而言可以将具有序列号95141、182201、202233的氨基酸序列的多肽或其片段、其变异体多肽或融合多肽等，分别用作用于产生免疫反应性抗体的免疫原。更具体而言，多肽、片段、变异体、融合多肽等含有促使抗体形成的抗原决定基或表位，上述抗原决定基或表位可以是直链，也可以是较高级结构(断开)。需要说明的是，该抗原决定基或表位可以通过本领域已知的所有表位解析法、例如噬菌体表面展示技术(Phagedisplay)法、逆免疫(reverseimmunogenetics)法等进行确定。利用本发明的多肽能诱导所有种类的抗体。如果分离该多肽的全部或一部分或表位，那么使用常规技术即可制备多克隆抗体及单克隆抗体中的任一种。方法例如包括Kennet等(主编)，MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,PienumPress,NewYork,1980中列举的方法。多克隆抗体可以通过用本发明的多肽免疫禽类(例如鸡等)、哺乳动物(例如家兔、山羊、马、绵羊、小鼠等)等动物进行制作。可以适当组合硫酸铵分馏、离子交换色傳、亲和色语等方法，从被免疫的动物的血液中精制目标抗体。单克隆抗体可以通过包括利用常规技术在小鼠中生产杂交瘤细胞抹的方法得到，所述杂交瘤细胞抹能产生对各多肽特异的单克隆抗体。用于生产上述杂交瘤细胞抹的l种方法如下所述用本发明的酶多肽免疫动物，从被免疫的动物中采集脾脏细胞，使该脾脏细胞与骨髓瘤细胞株融合，由此制备杂交瘤细胞，然后鉴定能够生产与该酶结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体可以通过常规技术回收。作为本发明的抗体，只要是能与本发明的靶多肽或其片段特异性结合的抗体即可，没有特别限定，可以使用单克隆抗体，也可以使用多克隆抗体，优选使用单克隆抗体。其他抗体包括重组抗体、合成酶、多特异性抗体(例如，二重特异性抗体)、单链抗体、抗体片段等。上述抗体的例子为Fab、F(ab，)2、scFv、Fv、dsFv等。本发明抗体的球蛋白类型及分类只要具有上述特征的抗体即可，没有特别限定，可以是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD、IgG"IgG2、IgG3、IgG4、IgA!、IgA2等中的任一种。<单克隆抗体的制作〉(1)免疫及抗体产生细胞的采集对哺乳动物例如大鼠、小鼠(例如近交系小鼠Balb/c)、家兔等给与由靶多肽组成的免疫原。免疫原的1次给药量可以根据免疫动物种类、给药途径等适当确定，每1只动物给药约50200吗。主要通过在皮下、腹腔内注入免疫原进行免疫。另外，免疫的间隔没有特别限定，初次免疫后，间隔数日至数周，优选间隔14周，进行210次、优选34次追加免疫。初次免疫后，利用ELISA(酶联免疫吸附测定(Enzyme—LinkedImmunoSorbentAssay))法等反复测定免疫动冲勿血清中的抗体值，抗体值达到平台时，向静脉内或腹腔内注射免疫原，进行最终免疫。从最终免疫日起25日后，优选3日后，采集抗体产生细胞。作为抗体产生细胞，可以举出脾脏细胞、淋巴结细胞、末梢血细胞等，优选脾脏细胞或局部淋巴结细胞。(2)纟田月包融合制作能够生产对各靶多肽特异的单克隆抗体的杂交瘤细胞抹。该杂交瘤可以通过常规技术进行生产并鉴定。用于生产该杂交瘤细胞抹的方法之一是用本发明的蛋白质免疫动物，从被免疫的动物中采集脾脏细胞，使该脾脏细胞与骨髓瘤细胞抹融合，由此生成杂交瘤细胞，鉴定能够生产与该酶结合的单克隆抗体的杂交瘤细胞抹。作为能与抗体产生细胞融合的骨髓瘤细胞株，可以使用小鼠等动物的通常能购买到的细胞林。作为使用的细胞抹，优选具有下述性质的细胞抹，即具有药剂选择性，并具有在未融合状态下在HAT选择培养基(含有次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)中不能存活，只有在与抗体产生细胞融合的状态下能存活的性质。细胞林优选来自与免疫动物同种系的动物的细胞。作为骨髓瘤细胞抹的具体例，可以举出来自BALB/c小鼠的次黄噤呤'鸟。票呤.磷酸核糖基'转换酶(HGPRT)缺损细胞抹P3X63-Ag.8抹(ATCCTIB9)等。接下来使上述骨髓瘤细胞抹与抗体产生细胞进行细胞融合。细胞融合如下进行在不含有血清的DMEM、RPMI-1640培养基等动物细胞培养用培养基中，以约1:1~20:1的比例混合抗体产生细胞和骨髓瘤细胞抹，在细胞融合促进剂的存在下进行融合反应。作为细胞融合促进剂，可以使用浓度约为1080%、平均分子量为15004000道尔顿的聚乙二醇等。另外，因情况的不同，为了提高融合效率，可以并用二曱基亚砜等辅助剂。还可以使用利用电刺激(例如电穿孔)的市售的细胞融合装置使抗体产生细胞和骨髓瘤细胞抹融合。(3)杂交瘤的筛选及克隆从细胞融合处理后的细胞中筛选目标杂交瘤。作为筛选方法，使用例如含有胎牛血清的RPMI-1640培养基等适当稀释细胞悬浊液后，以约200万个细胞/孔接种到微孔板上，向各孔中加入选择培养基，并在以后适当更换选择培养基，进行培养。培养温度为2040。C、优选为约37。C。骨髓瘤细胞是HGPRT缺损抹或胸香激酶缺损抹时，通过使用含有次黄噤呤氨基蝶呤胸腺嘧啶核苷的选择培养基(HAT培养基)，能够仅选择性培养、增殖具有抗体产生能力的细胞与骨髓瘤细胞抹的杂交瘤。结果在用选择性培养基培养开始后，生长约14天左右的细胞可以作为杂交瘤被得到。接下来，在进行了增殖的杂交瘤的培养上清液中对是否存在目标抗体进行筛选。杂交瘤的筛选可以按照常规方法进行，没有特别限定。例如，采集作为杂交瘤培养的包含在孔中的培养上清的一部分，通过酶免疫测定法(EIA:EnzymeImmunoAssay、及ELISA)、放射免疫测定法(RIA:RadioImmunoAssay)等进行筛选。融合细胞的克隆通过极限稀释法等进行，从而最终确立产生单克隆抗体的细胞即杂交瘤。本发明的杂交瘤如后所述，在RPMI-1640、DMEM等基本培养基中的培养稳定，并能生产、分泌与靶多肽特异性反应的单克隆抗体。(4)抗体的回收单克隆抗体可以利用常规技术进行回收。即，作为从确立的杂交瘤中采集单克隆抗体的方法，可以采用通常的细胞培养法或腹水形成法等。采用细胞培养法时，在通常的培养条件(例如，37°C、5%C02浓度)下，在含有10。/。胎牛血清的RPMI-1640培养基、MEM培养基或无血清培养基等动物细胞培养基中培养杂交瘤210日，从该培养上清中获得抗体。采用腹水形成法的情况下，向与提供骨髓瘤细胞的哺乳动物同种系的动物的腹腔内给与约IOOO万个杂交瘤，使杂交瘤大量增殖。并在12周后采集腹水或血清。对于上述抗体的采集方法，在需要精制抗体的情况下，可以通过适当选择硫酸铵盐析法、离子交换色谱法、亲和色镨法、凝胶色谱法等公知的方法，或组合使用上述方法，得到精制的单克隆抗体。<多克隆抗体的制作>制作多克隆抗体时，与上述相同，免疫家兔等动物，从最终免疫日起660天后，利用酶免疫测定法(EIA及ELISA)、放射免疫测定法(RIA)等测定抗体值，在显示最大抗体值的当天采血，得到抗血清。然后，利用ELISA法等测定抗血清中的多克隆抗体的反应性。〈化学修饰衍生物〉举出利用酶、荧光团、放射性同位素等标记得到的标记化衍生物，或乙酰化、酰化、烷基化、磷酸化、硫酸化、糖基化衍生物等化学修饰书T生物。作为标记物质，在酶免疫测定法中，可以4吏用过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶、(3-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖氧化酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶或生物素-抗生物素蛋白复合体等酶，荧光免疫测定法中，可以使用异硫氰酸荧光素、四曱基罗丹明异硫氰酸盐、取代异硫氰酸罗丹明、二氯三嗪异硫氰酸盐、Alexa或AlexaFluoro等荧光性物质或荧光团，放射免疫测定法中，可以使用氖、硤(1311,1251，1231，1211)、磷(32P)、硫(35S)、金属类(例如68Ga，67Ga,68Ge，MMn，"Mo，"Tc，^Xe等)等放射性同位素。发光免疫测定法可以使用NADH-、FMNH2-、焚光素酶类、鲁米诺-过氧化氢-POD类、吖啶酯类或二氧杂环丁烷化合物类等发光性分子、发光物质、生物发光物质。另外，根据需要，还可以利用抗生物素蛋白-生物素类或链霉抗生物素蛋白-生物素类，此种情况下，可以在本发明的抗体或其片段上结合例如生物素。对于标记物质和抗体的结合法，在酶免疫测定法中，可以使用戊二醛法、马来酰亚胺法、吡啶基二硫化物或高碘酸法等公知的方法，放射免疫测定法中，可以使用氯胺T法、Bolton-Hunter法等公知的方法。4.食管癌诊断用试剂盒4,1核酸试剂盒本发明还提供用于体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的试剂盒，其中含有上述2中的i组及n组中记载的多核苷酸、上述3.1及3.2中记载的多核苷酸、其变异体及/或其片段中的l种或几种。本发明的试剂盒中可以含有以下记载的I组及II组的核酸探针。上述各探针可以单独或组合收纳在适当的容器中。<I组的核酸:^笨针〉根据本发明，本发明的试剂盒中含有的I组的核酸探针可以用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移。本发明的试剂盒可以含有下述多核苷酸中的至少一种，所述多核苷酸为含有序列号146表示的碱基序列的多核苷酸、含有其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核普酸的片段。本发明的试剂盒可以进一步含有下述多核苷酸中的至少一种，所述多核苷酸为含有序列号47表示的碱基序列的多核普酸、含有其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的片段。本发明的试剂盒中可以含有的多核苷酸片段例如是选自下述(1)(5)中的1种以上DNA:(1)序列号146、47表示的碱基序列或其互补序列中，含有15个以上连续碱基的DNA。(2)序歹'j号l46、47表示的碱基序列或其互补序列中，含有60个以上连续碱基的DNA。(3)序列号146、47表示的碱基序列或其互补序列中，分别含有序列号4893、94表示的i烕基序列或其互补序列、且含有60个以上连续碱基的DNA。(4)由序列号4893、94表示的碱基序列组成的DNA。(5)含有与序列号4893、94表示的碱基序列互补的碱基序列的DNA。在优选的实施方案中，上述多核苷酸是含有由序列号146中任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。在其他优选的实施方案中，本发明的试剂盒除含有上述多核苷酸以外，还可以进一步含有由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。在优选的实施方案中，上述片段可以是含有15个以上、优选60个以上连续石咸基的多核苷酸。在其他优选的实施方案中，上述片段是序列号146、47中任一个表示的碱基序列中，分别含有序列号4893、94中任一个表示的碱基序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。在其他优选的实施方案中，上述片段是含有序列号4893、94中任一个表示的石成基序列的多核苷酸。在其他优选的实施方案中，上述片段是含有与序列号4893、94中任一个表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。在其他优选的实施方案中，上述片段是由序列号4893、94中任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸。上述组合的具体例包括含有序列号1及2的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号13的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号14的碱基序列或其互补序列的多核香酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号15的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号16的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号17的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号18的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核普酸、及/或其片段，含有序列号19的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核普酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号110的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或其片段，序列号111的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苦酸杂交的多核苦酸、及/或其片段，含有序列号112的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号113的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苦酸、及/或其片段，含有序列号114的碱基序列或其互补序列的多核苦酸、在严格条件下与上述多核苦酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号115的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号116的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核普酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号117的碱基序列或其互补序列的多核苷酸及/或其片段，含有序列号118的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号119的碱基序列或其互补序列的多核苦酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号120的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核普酸杂交的多核普酸、及/或其片段，含有序列号121的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号122的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核普酸、及/或其片段，含有序列号123的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号124的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号125的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号126的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号127的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号128的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号129的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号130的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核普酸、及/或其片段，含有序列号131的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号132的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号133的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号134的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号135的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号136的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号137的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号138的碱基序列或其互补序列的多核苦酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号139的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核普酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号140的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号141的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号143的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号144的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号145的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号146的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号147的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段。根据其他较优选的实施方案，本发明的试剂盒可以含有下述多核苷酸中的2种以上全部，所述多核苷酸为含有序列号4893、94表示的石咸基序列或其互补序列的多核苷酸。<II组的核酸探针〉根据本发明，本发明的试剂盒中含有的II组的核酸探针可以用于检测、确定或预测食管癌的存在。本发明的试剂盒可以含有下述多核苷酸中的至少一种，所述多核苦酸为含有序列号142155、157161表示的碱基序列的多核苷酸、含有其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核香酸的片段。本发明的试剂盒可以进一步含有下述多核苷酸中的至少一种，所述多核苷酸为含有序列号156表示的碱基序列的多核苷酸、含有其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的片段。本发明的试剂盒中可以含有的多核苷酸片段例如是选自下述(1)(5)中的1种以上DNA:(1)序列号142161表示的石咸基序列或其互补序列中，含有15个以上连续碱基的DNA。(2)序列号142161表示的碱基序列或其互补序列中，含有60个以上连续碱基的DNA。(3)序列号142161表示的碱基序列或其互补序列中，含有60个以上连续碱基的多核普酸中分别含有序列号162181表示的碱基序列或其互补序列的DNA。(4)由序列号162181表示的碱基序列组成的DNA。(5)含有与序列号162181表示的碱基序列互补的碱基序列的DNA。在优选的实施方案中，上述多核苷酸是由序列号142155、157161中任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核普酸的含有15个以上连续碱基的片段。在其他优选的实施方案中，本发明的试剂盒除含有上述多核苦酸以外，还可以进一步含有由序列号156表示的石威基序列组成的多核苦酸、由其互补序列组成的多核苦酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段。在优选的实施方案中，上述片段可以是含有15个以上、优选60个以上连续碱基的多核苷酸。在其他的优选实施方案中，上述片段是在序列号142161中任一个表示的碱基序列中，于含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号162181中任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。在其他的优选实施方案中，上述片段是含有序列号162181中任一个表示的碱基序列的多核苷酸。在其他的优选实施方案中，上述片段是含有与序列号162181中任一个表示的碱基序列互补的碱基序列的多核普酸。在其他的优选实施方案中，上述片段是由序列号162181中任一个表示的碱基序列组成的多核普酸。根据优选的实施方案，本发明的试剂盒含有选自下述多核苷酸中的l种或几种多核苷酸，即含有序列号142155表示的碱基序列的多核苷酸、含有其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段。上述多核香酸没有限定，例如可以是在序列号142155中任一个表示的碱基序列中，于含有60个以上连续碱基的多核香酸中分别含有序列号162175中任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。根据优选的其他实施方案，本发明的试剂盒含有选自下述多核苷酸中的l种或几种多核苷酸，即含有序列号157161表示的碱基序列的多核苷酸、含有其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或上述多核苷酸的含有15个以上连续i咸基的片段。上述多核苷酸没有限定，例如是在序列号157161中任一个表示的碱基序列中，于含有60个以上连续碱基的多核普酸中分别含有序列号177181中任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核香酸的序列互补的碱基序列的多核普酸。本发明的试剂盒可以含有上述多核普酸中的2种以上多核普酸的任意组合。上述组合的具体例为，含有序列号142及143的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苦酸、及/或其片段，含有序列号142~144的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142145的碱基序列或其互补序列的多核苦酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142146的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142147的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142148的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142149的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142150的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苦酸杂交的多核香酸、及/或其片段，含有序列号142151的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、或其片段、序列号142152的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142153的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142154的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142155的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142156的碱基序列或其互补序列的多核普酸及/或其片段，含有序列号142157的碱基序列或其互补序列的多核芬酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142158的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142159的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142160的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸、及/或其片段，含有序列号142161的碱基序列或其互补序列的多核苷酸、在严格条件下与上述多核苷酸杂交的多核香酸、及/或其片段。酸。其他组合的具体例是含有序列号162165、167、171、173、174及176的碱基序列或其互补序列的(或、由其组成的)多核苷酸及/或其片段。其他组合的具体例是含有序列号162166、168172及175的石威基序列或其互补序列的(或、由其组成的)多核苷酸及/或其片段。在本发明中，上述i组、n组的多核苷酸片段的大小是各多核苷酸碱基序列中下述范围的连续碱基数，例如15序列的全部碱基数、155000个碱基、154500个碱基、154000个i威基、153500个碱基、153000个碱基、152500个碱基、152000个石威基、151500个碱基、151000个碱基、15900个碱基、15800个碱基、15700个碱基、15600个碱基、15500个碱基、15400个碱基、15300个碱基、15250个碱基、15200个碱基、15150个碱基、15140个碱基、15130个碱基、15120个碱基、15110个碱基、15100个碱基、1590个碱基、1580个碱基、1570个碱基、1560个碱基、1550个碱基、1540个碱基、1530个碱基或1525个碱基；25序列的全部碱基数、251000个碱基、25900个碱基、25800个碱基、25700个碱基、25600个碱基、25500个碱基、25400个碱基、25300个碱基、25250个碱基、25~200个碱基、25150个碱基、25140个碱基、25130个碱基、25120个碱基、25110个碱基、25~100个碱基、25~90个碱基、2580个碱基、2570个碱基、2560个碱基、2550个碱基或2540个碱基；50序列的全部碱基数、501000个碱基、50900个碱基、50~800个碱基、50700个碱基、50600个碱基、50500个碱基、5(K400个碱基、50~300个碱基、50250个碱基、50200个碱基、50150个碱基、50140个碱基、50130个碱基、50120个碱基、50110个碱基、50100个碱基、5090个碱基、5080个碱基、5070个碱基或5060个碱基；60序列的全部碱基数、601000个碱基、60900个碱基、60800个碱基、60700个碱基、60600个碱基、60500个碱基、60400个碱基、60300个碱基、60250个碱基、60200个石威基、60150个石威基、60140个石咸基、60130个石威基、60120个碱基、60110个碱基、60100个碱基、6090个碱基、6080个碱基或6070个碱基等。构成本发明的试剂盒的上述组合只是列举，其他各种可能的组合都包括在本发明中。本发明的试剂盒除了上述说明的本发明的多核苷酸、其变异体或其片段之外，还可以含有已知能够检测食管癌的或将来发现的多核苷酸。4.2抗体试剂盒本发明还提供用于体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的试剂盒，其中含有上述2中m组中记载的抗体、其片段或其化学修饰衍生物、上述3.3中记载的抗体、其片段或其化学修饰衍生物中的l种或几种。本发明的试剂盒中可以含有如下所述的来自m组(k)、(1)及(m)中的抗体、其片段或其化学修饰衍生物探针。上述各探针可以单独或组合收纳在适当的容器中。探针的组合例如下所示。第l例探针为了检测作为食管癌转移标记物的上述AXL、C6orf54、ZBTBll、TNFRSF14、NSUN5、SPEN、LTBP3、SYNGR1、ARL3、SLC13A1、RALGDS、ADD3、MAP3K12、AVPI1、GIMAP6、FLJ11259、C3AR1、PCGF2、PDE6D、PIXG2、GPR148、ARF6、NISCH、GLYAT、IG固、FBX038、SLC12A1、PGDS、CD48、IMPA2、HSPA6、EIF3S9、ZNF659、RAB6C、N0L1、DAB2、EBI3、PRSS3、GLB1、SAMSN1、AQP3、CAPZA2、B4GALT2、ARHGEF3、POGK、PRAF1及HPGD基因编码的多肽、其同源物、或其变异体或衍生物而含有l种或几种对上述多肽、其变异体或其片段的抗体。该探针能用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移。特别是转移的预测可以推导出食管癌患者的术后预后的预测结果。具体而言，试剂盒中含有的探针是与具有序列号95140表示的氨基酸序列的多肽、其变异体、或其片段中的至少l个特异性结合的l种或几种抗体、该抗体的片段、或其化学修饰衍生物。该试剂盒中可以进一步含有对具有序列号141表示的氨基酸序列的多肽的抗体、该抗体的片段或其化学修饰衍生物。通过并用，能提高转移的预测或术后预后的预测准确度。第2例探针为了检测作为食管癌标记物的上述GALNS,fgf3,CAMK2B,CaMKIINalpha,PSARL,XRCC3,CAPG,GRHPR，TROAP,RRM2,SATB2，C14orfl62,SEPT6,M6PR,SPRR3,EMU,YPEL5,EIF4EBP2,SLC2A14及SLIT2基因编码的多肽、其同源物、或其变异该探针可以用于检测、确定或预测食管癌的存在。具体而言，试剂盒中含有的探针是与具有序列号182195、197201表示的氨基酸序列的多肽、其变异体、或其片段中的至少l个特异性结合的l种或几种抗体、该抗体的片段或其化学修饰衍生物。在该试剂盒中可以进一步含有对具有序列号196表示的氨基酸序列的多肽的抗体、该抗体的片段或其化学修饰衍生物。第3例探针是与具有序列号202232表示的氨基酸序列的多肽、其变异体、或其片段中的至少一个特异性结合的l种或几种抗体、其片段或其化学修饰衍生物。该试剂盒中可以进一步含有对具有序列号233表示的氨基酸序列的多肽的抗体、其片段或它们的化学修饰衍生物。本发明的试剂盒中含有的抗体可以单独存在，也可以以混合物的状态存在，或与固相载体结合存在，也可以以游离状态存在。另外，本发明的试剂盒可以含有标记二抗、载体、清洗緩沖液、试样稀释液、酶基质、反应停止液、精制的作为标准物质的标记物(靶)多肽、使用说明书等。5.DNA芯片本发明还提供用于体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的DNA芯片，所述DNA芯片单独或组合、优选组合使用与上述3及/或4中记载的本发明的组合物及/或试剂盒中含有的物质相同的多核苷酸、变异体或片段。作为DNA芯片的基板，只要是能够将DNA固相化的基板即可，没有特别限定，可以举出载玻片、硅制芯片、聚合物制芯片及尼龙膜等。另外，可以对上述基板进行聚L赖氨酸涂布或导入氨基、羧基等官能团等的表面处理。另外，固相化法只要是通常使用的方法即可，没有特别限定，可以举出以下方法使用被称为点样器(spotter)或阵列点样仪(arrayer)的高密度分液器点样DNA的方法、或使用通过压电元件等从喷嘴喷射微量的液滴的装置(喷墨)将DNA喷射到基板上的方法、或在基板上依次进行核普酸合成的方法。使用高密度分液器时，例如如下进行固相化在具有多个孔的平板的各孔中装入不同的基因溶液，用针取出该溶液，然后依次点到基板上。使用喷墨法时，如下进行固相化从喷嘴喷射基因，将基因高速地排列在基板上。在基板上合成DNA时，如下进行固相化用能在光的作用下离去的官能团保护与基板结合的碱基，通过使用掩模只对特定部位的碱基曝光，使官能团离去。然后，反复进行向反应液中加入碱基、使其与基板上的碱基偶联的步骤。被固相化的多核苷酸是上述说明的本发明的多核苷酸。例如，上述多核苦酸可以含有以下l种或几种多核苷酸或其片段。(1)由序列号146、47表示的石威基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(2)含有序列号146、47表示的石咸基序列的多核苷酸组。(3)由序列号146表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(4)含有序列号146表示的碱基序列的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(5)由与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(6)含有与序列号146表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸组。(7)在严格条件下与DNA杂交的多核苦酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段，所述DNA由与序列号146表示的各碱基序列互补的i咸基序列组成。(8)在严格条件下与由序列号146表示的各碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段。(9)由序列号47表示的碱基序列组成的多核普酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(10)含有序列号47表示的碱基序列的多核苷酸、其变异体、或其含有15以上连续碱基的片段。(11)由与序列号47表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(12)含有与序列号47表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸组。(13)在严格条件下与DNA杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，上述DNA由与序列号47表示的碱基序列互补的碱基序列组成。(14)在严格条件下与由序列号47表示的碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。(15)序列号146表示的碱基序列或其互补序列的各序列中含有15个以上连续碱基的多核普酸。(16)序列号146表示的碱基序列或其互补序列的各序列中含有60个以上连续碱基的多核苦酸。(17)序列号47表示的碱基序列或其互补序列中，含有15个以上连续石咸基的多核苷酸。(18)序列号47表示的碱基序列或其互补序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(19)序列号146表示的碱基序列中，分别含有序列号4893表示的碱基序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(20)与序列号146表示的碱基序列互补的序列中，分别含有与序列号4893表示的碱基序列互补的序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(21)序列号47表示的碱基序列中，分别含有序列号94表示的碱基序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(22)与序列号47表示的碱基序列互补的序列中，分别含有与序列号94表示的碱基序列互补的序列、且含有60个以上连续碱基的多核苷酸。根据优选的实施方案，本发明的DNA芯片可以含有2种以上全部的含有序列号4894表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。在其他例子中，能够与DNA芯片结合的多核普酸可以含有以下的l种或几种多核苷酸或其片段。(1)由序列号142161表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(2)含有序列号142161表示的石咸基序列的多核苷酸组。(3)由序列号142155表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(4)含有序列号142155表示的碱基序列的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(5)由与序列号142155表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(6)含有与序列号142155表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸组。(7)在严格条件下与DNA杂交的多核香酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段，所述DNA由与序列号142155表示的各碱基序列互补的;威基序列组成。(8)在严格条件下与由序列号142155表示的各碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段。(9)由序列号157161表示的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(10)含有序列号157161表示的碱基序列的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(11)由与序列号157161表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸组、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(12)含有与序列号157161表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸组。(13)在严格条件下与DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段，所述DNA由与序列号157161表示的各碱基序列互补的碱基序列组成。(14)在严格条件下与由序列号157161表示的各碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸组、或其含有15个以上连续碱基的片段。(15)序列号142155表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有15个以上连续碱基的多核苦酸。(16)序列号142155表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(17)序列号157161表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有15个以上连续碱基的多核苷酸。(18)序列号157161表示的碱基序列或其互补序列的各序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸。(19)序列号142155表示的碱基序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号162175表示的碱基序列的多核苷酸。(20)与序列号142155表示的碱基序列互补的序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有与序列号162175表示的碱基序列互补的序列的多核苷酸。(21)序列号157161表示的碱基序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号177181表示的i咸基序列的多核苷酸,(22)与序列号157161表示的碱基序列互补的序列中，含有60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有与序列号177181表示的碱基序列互补的序列的多核苷酸。(23)由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(24)含有序列号156表示的碱基序列的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。(25)由与序列号156表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段。普酸。(27)在严格条件下与DNA杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段，所述DNA由与序列号156表示的碱基序列互补的碱基序列组成。(28)在严格条件下与由序列号156表示的碱基序列组成的DNA杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。(29)序列号156表示的碱基序列或其互补序列中含有15个以上连续碱基的多核苷酸。连续碱基的多核苷酸。(31)序列号156表示的碱基序列中，于含有60个以上连续碱基的多核苷酸中含有序列号176表示的碱基序列的多核苷酸。(32)与序列号156表示的碱基序列互补的序列中，于含有60个以上连续碱基的多核苷酸中含有与序列号176表示的碱基序列互补的序列的多核普酸。根据优选的实施方案，本发明的DNA芯片可以含有2种以上全部的含有序列号162181表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。本发明中，被固相化的多核苷酸可以是基因组DNA、cDNA、RNA(例如mRNA、cRNA、aRNA)、合成DNA、合成RNA中的任一种，可以为单链或双链。作为能够检测、测定靶基因、RNA或cDNA的表达水平的DNA芯片的例子，可以举出Affymetrix7>司的GeneChipHumanGenomeUl33Plus2.0Array、Agilent/^"司的Wholehumangenomeoligomicroarray、TakaraBi(K^司的IntelliGene(R)HSHumanExpressionCHIP、具有凹凸结构的聚甲基丙烯酸曱酯制DNA芯片基板(日本特开2004-264289)等。DNA微阵列的制作例如可以使用在固相表面固定预先制备的探针的方法。在固相表面固定预先制备的多核苷酸探针的方法如下合成导入了官能团的多核苷酸，在经过表面处理的固相载体表面上点样寡核苷酸或多核苷酸，使其共价键合(例如、丄B丄amture等、Nucleic.Acids.Research、1994年，第22巻，p.2121—2125、Z.Guo等、Nucleic.Acids.Research、1994年，第22巻，p.5456-5465)。多核普酸通常通过间隔臂(spacer)或交3f关剂(crosslinker)与经过表面处理的固相载体共价键合。还已知使聚丙烯酰胺凝胶的微d、片排列在玻璃表面上，使合成多核苷酸与其共价键合的方法(G.Yershov等、ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.、1996年，第94巻，p.4913)。还已知下述方法在二氧化硅微阵列上制作微小电极的阵列，在电极上设置含有链霉抗生物素蛋白的琼脂糖的渗透层，形成反应部位，通过使该部位带正电，固定生物素化多核苷酸，通过控制部位的电荷，能高速且严格地进行杂交(R.G.Sosnowski等、ProceedingsoftheNationalAcademicSciencesU.S.A.、1997年,第94巻，p.l119-1123)。6.4全测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法
技术领域：
：本发明提供体外检观'J、确定或预测食管癌的存在及/或转移的方法，该方法包括使用选自上述定义的i组、n组及/或in组中的i种或几种探针、或本发明的组合物、试剂盒、DNA芯片或其组合，测定来自受试者的生物试样中的l种或几种食管癌相关靶核酸的存在或存在量或表达量。上述I组的多核苷酸、以及III组(k)的抗体、其片段或其化学修饰衍生物可以用于检测、确定或预测食管癌的存在及/或转移。上述n组的多核苷酸、及in组(i)、(m)的抗体、其片段或其化学修饰衍生物可以用于检测、确定或预测食管癌的存在。在本发明的方法中，食管癌的存在或转移的检测、确定或预测可以以相对对照试才羊的变化为指标进4亍确定。例如，体外判断来自受试者的生物试样中是否含有食管癌细胞或转移性食管癌细胞时，如果相对于正常或非癌食管组织或来自术后未发生转移的患者的食管癌组织，生物试样中的细胞的靶核酸的表达量发生变化(即，增加或降低)，则可以判断生物试样中存在食管癌细胞或转移性食管癌细胞。本发明还提供选自上述定义的i组、n组及/或m组中的i种或几种探针、或本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片在体外检测、确定或预测来自受试者的生物试样中的食管癌的存在或转移中的使用方法。在本发明的食管癌的存在或转移的检测、确定、预测或(基因)诊断中，本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片中含有的由多核苷酸、其变异体或其片段组成的食管癌诊断用探针可以作为引物或检测探针(探测头)使用。用作引物时，可以举出碱基长度通常为1550个碱基、优选为1530个碱基、较优选为1825个碱基的探针。用作检测探针时，例如可以举出碱基长度为15个碱基全部序列的碱基数、优选为251000个碱基、较优选为25100个碱基的探针，但并不限定于此。本发明的组合物或试剂盒中含有的多核苷酸、其变异体或其片段在RNA印迹法(NorthernBlot)、DNA印迹法(Southernblot)、RT-PCR法、原位杂交法、DNA杂交法等特异性地检测特定基因的公知方法中，可以根据标准方法用作引物或探针。作为测定对象试样，根据所用的检测方法的种类，可以通过活组织检测等采集受试者的食管组织或被怀疑存在食管癌细胞的生物组织的一部分或全部，或者从手术取出的生物组织中回收。还可以使用按照常规方法由其制备的总RNA,还可以使用基于该RNA制备的含有cDNA、聚A(+)RNA的各种多核苷酸。或者，可以使用DNA芯片(包括DNA宏阵列(macroarray))检测或定量生物组织中的本发明的基因、RNA、cDNA等核酸的表达量。此种情况下，本发明的组合物或试剂盒可以用作DNA阵列的探针(例如，在Affymetrix乂/^司的HumanGenomeU133Plus2.0Array中，使用长度为25个碱基的多核苷酸探针)。使上述DNA阵列与以从生物组织采集的RNA为基础制备的标记DNA或RNA杂交，以该标记DNA或RNA的标记为指标，检测通过该杂交形成的上述探针和标记DNA或RNA的复合体，由此能评价生物组织中的食管癌相关基因或食管癌转移相关基因是否表达或表达水平(表达量)。本发明方法中优选使用DNA芯片，该DNA芯片能对一个生物试样同时评价多个基因是否表达或表达水平。本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片对于食管癌的存在或转移的诊断、即检测、确定或预测(例如，是否患病或患病程度的诊断)是有用的。使用该组合物、试剂盒或DNA芯片诊断食管癌的存在或转移，具体可以如下进行将受试者的存在食管癌细胞的生物组织与来自手术时未发生淋巴结转移的患者的食管癌组织及/或来自手术时发生淋巴结转移的患者的食管癌组织进行比较，或与来自手术时未发生淋巴结转移的患者及/或手术时发生淋巴结转移的患者的生物组织进行比较，判断用该诊断用组合物检测的基因的表达水平的不同(或、差异)。此时，基因表达水平的不同不仅仅表示有无表达，还包括以下情形存在食管癌细胞的生物组织和正常组织两者、或存在转移性食管癌细胞的生物组织和存在非转移性食管癌细胞的生物组织两者都表达时，比较两者间的表达量，其差值有统计学意义(p值〈0.05)。例如，由于SPRR3基因的表达在食管癌中诱导/减少，所以，在受试者的食管癌组织中表达/减少，将该表达量与正常组织的表达量相比较进行;险测时，如果差异显著，则怀疑受试者患有食管癌。另外，例如，由于HPGD基因的表达在转移性食管癌患者中诱导/减少，所以，当HPGD基因在受试者的食管癌组织中表达/减少，将该表达量与存在非转移性食管癌细胞的生物组织的表达量相比较进行检测时，如果差异显著，则怀疑受试者的食管癌发生转移。利用本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片检测食管癌(纟田月包)或转移性食管癌(细胞)的方法如下通过活组织检测等采集或从手术取出的生物组织中回收受试者的生物组织的一部分或全部，使用选自本发明的多核苷酸探针组中的1种或几种多核苷酸、其变异体或其片段检测上述生物组织中含有的基因，测定该基因的表达量，由此诊断是否患有食管癌或患病程度、或食管癌是否转移或转移程度。本发明的食管癌或食管癌转移的检测方法还可以在例如对食管癌患者给与用于改善该疾病的治疗药时，一全测、确定或预测该疾病是否改善或改善程度。本发明方法例如可以包括以下(a)、(b)及(c)步骤(a)使来自受试者的生物试样与本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片的多核香酸接触的步骤，(b)使用上述多核苷酸作为探针测定生物试样中的靶核酸的表达水平的步骤、(c)基于(b)的结果，判断该生物试样中是否存在食管癌(细胞)或转移性食管癌(纟田月包)的步骤。作为本发明方法中使用的生物试样，可以举出由受试者的生物组织例如食管组织及其周围组织、怀疑发生食管癌转移的组织等制备的试样。具体而言，含有由该组织制备的RNA的试样、或含有由该组织制备的多核苷酸的试样可以如下制备，即，通过活组织检测等采集或从通过手术取出的生物组织中回收受试者的生物组织的一部分或全部，然后按照常规方法进行制备。此处的受试者是指哺乳动物，例如人、猴子、小鼠、大鼠等，并无限定，优选为人。本发明的方法，可以根据用作测定对象的生物试样的种类变更步骤。例如，使用RNA作为测定对象物时，食管癌(细胞)或转移性食管癌(纟田月包)的检测可以包括例如下述步骤(a)、(b)及(c):(a)使由受试者的生物试样制备的RNA或由该RNA转录的互补多核苷酸(cDNA)与本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片的多核苷酸结合的步骤，(b)使用上述多核苷酸作为探针，测定与该多核苷酸结合的来自生物试样的RNA或由该RNA转录的互补多核苷酸的步骤，(c)基于上述(b)的测定结果，判断是否存在食管癌(纟田胞)或转移性食管癌(纟田胞)的步骤。为了利用本发明检测、确定或诊断食管癌(细胞)或转移性食管癌(细胞)，例如可以使用各种杂交法。所述杂交法，例如可以使用RNA印迹法、DNA印迹法、RT-PCR法、DNA芯片解析法、原位杂交法、DNA杂交法等。使用RNA印迹法时，通过使用本发明的组合物作为探针，可以才全测、测定RNA中的各基因是否表达或其表达水平。具体可以举出以下方法用放射性同位素(32P、33P、"S等)或荧光物质等标记本发明的诊断用组合物(互补链)，使其与利用常规方法转移到尼龙膜等上的来自受试者的生物组织的RNA杂交，然后用放射线;险测器(可以举出BAS-1800IIFujiPhotoFilm抹式会社等)或焚光检测器(例如STORM860,AmershamBioscience公司等)检测、测定形成的诊断用组合物(DNA)和RNA的双链中的来自诊断用组合物的标记物(放射性同位素或荧光物质)的信号。使用定量RT-PCR法时，通过使用本发明的上述诊断用组合物作为引物，可以检测、测定RNA中的基因是否表达或其表达水平。具体可以举出以下方法按照常规方法由来自受试者的生物组织的RNA制备cDNA,为了能以该cDNA为模板扩增各靶基因区域，使由本发明的组合物制备的l对引物(由与上述cDNA结合的正链和反链组成)与cDNA杂交，按照常规方法进行PCR法，检测得到的双链DNA。作为双链DNA的检测方法，可以采用以下方法使用预先用放射性同位素或荧光物质标记的引物进行上述PCR的方法；用琼脂糖凝胶电泳PCR产物，用溴乙锭等染色双链DNA进行检测的方法；将产生的双链DNA按照常规方法转移到尼龙膜等上，作为探针与标记的诊断用组合物杂交，进行检测的方法。使用DNA阵列解析时，使用将本发明的上述诊断用组合物作为DNA探针(单链或双链)贴合到基板上制成的DNA芯片。将基因组在基板上固相化得到的物质通常称为DNA芯片及DNA阵列，DNA阵列包括DNA宏阵列和DNA微阵列，本说明书中称为DNA芯片时，即为含有该DNA阵列的物质。杂交条件没有限定，例如，包括在30。C50。C下，在34xSSC、0.10.5。/。SDS中杂交124小时，较优选在40。C45。C下，在3.4xSSC、0.3。/。SDS中杂交124小时，然后进行清洗。作为清洗条件，例如可以举出利用含有2xSSC和0.1y。SDS的溶液、及lxSSC溶液、0.2xSSC溶液在室温下连续清洗等的条件。此处，lxSSC是含有150mM氯化钠及15mM柠檬酸钠的水溶液(pH7.2)。互补链优选为即使在上述条件下进行清洗仍能保持与作为对象的正链杂交的状态的链。作为上述互补链，具体可以举出由与作为对象的正链的碱基序列具有完全互补关系的碱基序列组成的链、以及由与该链具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%同源性的碱基序列组成的链。作为以来自本发明的组合物或试剂盒的多核苷酸片段为引物进行PCR时的严格的杂交条件的例子，例如可以举出使用组成为1OmMTris-HCL(pH8.3)、50mMKCL、12mMMgCl2等的PCR緩冲液，在由该引物序列计算的Tm+510。C下处理15秒l分钟左右等。作为上述Tm的计算方法，可以举出Tm-2x(腺。票呤残基数+胸腺嘧。定残基数)+4x(鸟。票呤残基数+胞嘧啶残基数)等。上述杂交的"严格条件"的其它例子，记载于例如Sambrook,J.&Russel,D.著，MolecularCloning,ALABORATORYMANUAL、ColdSpringHarborLaboratoryPress、2001年1月15日出版，第1巻7.427.45，第2巻8.98.17等中，可以在本发明中使用。本发明还提供判断生物试样不含及/或含有食管癌细胞或转移性食管癌细胞的方法，该方法使用上述i组、n组及/或m组中的i种或几种探针、或本发明的组合物、试剂盒、DNA芯片或他们的组合，测定来自受试者的生物试样中的靶核酸或基因的表达量，以支持向量机(SVM,supportvectormachine)作为辨另'J式进行判断，所述支持向量机(SVM)以食管癌组织和正常组织、或转移性食管癌组织和非转移性食管癌组织的基因表达量作为训练样本。即，本发明还提供检测、确定或预测食管癌的转移的方法，该方法包括以下步骤第l步骤，使用选自上述定义的I组中的探针、或含有该探针的本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片，体外测定多个生物试样中的食管癌相关靶核酸的表达量，所述生物试样是已知含有伴有转移的食管癌细胞或不伴有转移的食管癌细胞的组织；第2步骤，以该第1步骤得到的该靶核酸的表达量的测定值为训练样本，制作辨别式(支持向量机)；第3步骤，与第l步骤相同地体外测定来自受试者的食管的生物试样中的该靶核酸的表达量；第4步骤，将第3步骤中得到的该靶核酸的表达量的测定值代入该第2步骤中得到的辨别式，基于由该辨别式得到的结果，判断生物试样中不含有伴有转移的癌细胞及/或含有不伴有转移的癌细胞。本发明还提供检测食管癌的方法，该方法包括以下步骤第l步骤，使用选自上述定义的n组中的探针、或含有该探针的本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片，体外测定多个生物试样中的靶核酸的表达量，所述生物试样是已知含有食管癌细胞的组织或正常组织；第2步骤，以该第1步骤得到的该耙核酸的表达量的测定值作为训练样本，制作辨别式(支持向量机)；第3步骤，与第l步骤相同地体外测定来自受试者的食管的生物试样中的该靶核酸的表达量；第4步骤，将第3步骤中得到的该靶乙酸的表达量的测定值代入该第2步骤中得到的辨别式，基于由该辨别式得到的结果，判断生物试样中含有癌细胞或不含有癌细胞。或者，本发明的方法可以包含例如下述步骤(a)、(b)及(c):(a)步骤使用本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片测定已知是含有食管癌细胞的组织或正常组织的生物试样、或已知是来自伴有转移的患者的含有食管癌细胞的组织或来自无转移的患者的食管癌细胞组织的生物试样中的輩巴基因的表达量；(b)步骤将(a)中测定的表达量的测定值代入下述等式1等式5的式中，制作称为SVM的辨别式；(c)步骤使用本发明的组合物、试剂盒或DNA芯片测定来自受试者的生物试样中的该靶基因的表达量，并将其代入(b)中制作的辨别式，基于得到的结果，判断该生物试样中是否含有食管癌细胞或转移性食管癌细胞。SVM是为了解决二级分类问题而制作的，是1995年由AT&T的V.Vapnik(TheNatureofStatisticalLeaningTheory、Springer、1995年出版)基于统计学习理论的框架提出的学习机。SVM是一种线性辨识器，但通过组合后述的核函数(Kernel),能够解决非线性问题。针对不同级别的训练样本，在辨识上述训练样本的多个超平面中，将该超平面与训练样本的最小距离变得最大的超平面作为辨识面，由此能最准确地辨识新给与的试样属于哪一个级别。SVM只能解决线性问题，但作为用于解决本质上为非线性问题的方法，已知将特征向量非线性地转换成高维，在该高维空间内进行线性辨识的方法。使用该方法，与在原空间使用非线性模型等效。但进行向高维转换的绘图需要庞大的计算量，归纳能力也降低。SVM中，辨识函数仅依赖输入图案的内积，如果能计算内积，则能构建最优辨识函数。非线性地绘制的空间中的二个要素的内积仅由各自原来的空间的输入表示的式子称为核函数，一边在高维空间中绘制，一边避免在实际绘制的空间中的特征的计算，仅由核函数的计算构建最优辨识函数，即辨别式(例如，麻生英树等著、统计科学的前沿6"图案识别与学习的统计学新概念和方法"、岩波书店、东京、日本(2004年))。本发明的方法中可以使用的辨别式的计算例如下所示。为了确定SVM,可以以生物试样中的靶基因的表达量作为训练样本，按照以下步骤确定辨识函数的常数，所述生物试样是已知含有食管癌细胞的组织或正常组织。训练样本Xj属于被分类为(+1、-1)的含有食管癌细胞的组织组或正常组织组中的任一组。可以用超平面线性分离上述训练样本时，辨识函^:例如为下式。[等式l](此《'，w表示加权系数、b表示非线性常数(biasconstant)、x表示样本变数。)但是，该函数存在限制条件[等式2]_>',(vi.'7+6)》1-《,《20,/=1，...，"(此处，T表示内积、y表示样本的类别、；表示松弛变量。)所以，通过〗吏用拍4各朗日(Lagurange)未定乘子法，可以回归到使用了拉格朗日乘子a的下述最优化问题。[等式3][等式4](此处，C表示通过实验确定的限制条件参数。)此处，如果解决了该问题，则能够最终得到下式，[等式5]从而能毫无疑义地得到辨识函数。通过将新的生物试样(不知道是否含有食管癌细胞的组织的表达基因量)的x代入该函数，能够分类f(X)(即+l或-l)，从而判断生物试样属于哪一类(即含有食管癌细胞的组织组或正常组织、或来自发生转移的患者的含有食管癌细胞的组织组或来自没有发生转移的患者的食管癌组织)。如上所示，为了制作用于进行未知试样分类的SVM判定式，必需有二组训练样本。在本发明的情况下，该训练样本例如是以下二组，即，与"从发生转移的食管癌患者的食管癌组织获得的表达基因(基因&，X2，...Xn)"的各患者对应的组、以及与"从没有发生转移的食管癌患者的食管癌组织获得的表达基因(基因XpX2,..Xi,...Xn)，，的各患者对应的组。对上述各组分别测定的表达基因数(n)因实验设计的不同而各种各样，但对于各基因，无论在哪一个实验中，在二组间都可以观察到存在明显差别的情况和差别比较小或无差别的情况。为了提高SVM辨别式的精度，要求作为训练样本的二组样本之间存在显著差异，所以，必须从基因组中仅提取在二组间表达量存在差别的基因加以利用。作为提取表达量在二组间存在差别的基因的方法，可以利用作为检测平均值的差的参数解析的t-检验、作为非参数解析的Mann-Whitney的U检验等。在本发明的方法中，例如，使用上述记载的基于序列号146、47的l种或几种上述多核苷酸、及/或上述记载的基于146、47的1种或几种多核苷酸的任意组合，且上述47种靶基因的表达量在来自发生转移的患者的食管癌组织和来自没有发生转移的患者的食管癌组织之间都显著不同，以在来自发生转移的患者的食管癌组织中表达增加/减少为指标，通过测定上述47种基因的表达量，能以70%以上、80%以上、优选84%以上、较优选85%以上、进一步优选86%以上的概率区分食管癌的转移(图l)。另夕卜，例如，使用上述记载的基于序列号142156及162176的一种或几种上述多核苷酸、及/或上述记载的基于序列号157161及177181的一种或几种多核苷酸的任意组合，且上述20种靶基因的表达量在食管癌组织和非癌组织之间都存在显著差异，以在食管癌组织中表达减少为指标，测定上述20种基因的表达量，由此能够以89%以上、90%以上、优选92%以上、|交优选93%以上、进一步优选94%以上的概率区分食管癌组织(图4)。本发明还提供检测、确定或预测食管癌的转移的方法，该方法使用对下述多肽的一种或几种抗体或该抗体的片段，体外测定该多肽在来自发生转移的患者的食管癌组织和来自没有发生转移的患者的食管癌组织中的表达量、或该多肽在血液中的水平(或存在量)，所述多肽是由上述47种基因(例如相当于序列号147)或其片段(例如，相当于序列号4894)编码的多肽、例如由序列号95141表示的氨基酸序列组成的多肽。本发明还提供检测、确定或预测食管癌的方法，该方法使用对下述多肽的一种或几种抗体或该抗体的片^史，体外测定该多肽在食管癌组织和非癌组织中的表达量、或该多肽在血液中的水平(或存在量)，所述多肽是由上述20种基因(例如，相当于序列号142161)或其片段(例如，相当于序列号162181)编码的多肽、例如由序列号182201表示的氨基酸序列组成的多肽。具体而言，上述测定可以通过免疫学方法进4亍。作为免疫学测定方法，例如可以举出酶免疫测定法(ELISA、EIA)、荧光免疫测定法、》文射免疫测定法(RIA)、发光免疫测定法、免疫比浊法、乳胶凝集反应、乳胶比浊法、红细胞凝集反应、粒子凝集反应或蛋白质印迹法。上述方法通过使用了标记的免疫测定法进行时，可以在将本发明的抗体、或试样中的成分固相化后，进行其免疫学反应。作为固相载体，可以使用由聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚乙烯基甲苯、聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、尼龙、聚曱基丙烯酸酯、乳胶、明胶、琼脂糖、纤维素、琼脂糖凝胶、玻璃、金属、陶瓷或磁性体等材料组成的微珠、微量培养板、试管、棒(stick)或试验片等形状的不溶性载体。可以通过物理吸附法、化学结合法或并用两种方法等公知的方法，使固相载体和本发明的抗体或试样成分结合，进行固相化。本发明中，为了容易地检测本发明的抗体与试样中的靶多肽的反应，通过标记本发明的抗体直4如险测该反应，或通过4吏用标记二抗间接检测该反应。本发明的检测方法，从灵敏度方面考虑，优选使用后者的间接检测(例如，夹心法等)。作为标记物质，使用酶免疫测定法时，可以^使用过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶、P-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖氧化酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶或生物素-抗生物素蛋白复合体等酶；使用荧光免疫测定法时，可以使用异硫氰酸荧光素、四曱基罗丹明异硫氰酸盐、取代异硫氰酸罗丹明、二氯三嗪异硫氰酸盐、Alexa或AlexaFluoro等荧光性物质或焚光团；使用放射免疫测定法时，可以使用氚、碘(1311,1251,1231，1211)、磷(32P)、硫(35S)、金属类(例如"Ga，67Ga，68Ge，54Mn,99Mo,"Tc,'"Xe等)等放射性同位素。另外，使用发光免疫测定法时，可以使用NADH-、FMNH2-、荧光素酶类、鲁米诺-过氧化氢-POD类、吖啶酯类或二氧杂环丁烷化合物类等发光性分子、发光物质、生物发光物质。另外，根据需要，也可以使用抗生物素蛋白-生物素类或链霉抗生物素蛋白-生物素类，此种情况下，例如生物素也可与本发明的抗体或其片段结合。作为标记物质和抗体的结合方法，在使用酶免疫测定法时，可以使用戊二醛法、马来酰亚胺法、吡啶基二硫化物法或高碘酸法等公知方法；在4吏用力文射免疫测定法时，可以^吏用氯胺T法、Bolton-Hunter法等/>知方法。测定4喿作方法可以通过^>知的方法(CurrentprotocolsinProteinSciences、1995年,JohnWiley&SonsInc.、CurrentprotocolsinImmunology、2001年，JohnWiley&SonsInc.)进4亍。侈寸^口，直才妾才示i己本发明的抗体时，将试样中的成分固相化，使其与标记的本发明的抗体接触，形成标记多肽和本发明的抗体的复合体。然后将未结合的标记抗体洗涤分离，可以由结合标记抗体量或未结合标记抗体量测定试样中的靶多肽的量。另外，使用例如标记二抗时，使本发明的抗体与试样反应(一次反应)，再与标i己二抗反应(二次反应)。一次反应和二次反应可以以相反的顺序进行，也可以同时进行，还可以错开时间进行。通过一次反应及二次反应，形成固相化的靶多肽-本发明的抗体-标记二抗的复合体、或固相化的本发明的抗体-靶多肽-标记二抗的复合体。然后洗涤分离未结合的标记二抗，可以通过结合标记二抗量或未结合标记二抗量测定试样中的靶多肽的量。具体而言，使用酶免疫测定法时，在标记酶的最适条件下使其与基质反应，通过光学方法等测定反应生成物的量。使用焚光免疫测定法时，测定由荧光物质标记产生的荧光强度，使用放射免疫测定法时，测定由放射性物质标记产生的放射能量。使用发光免疫测定法时，测定由发光反应体系产生的发光量。本发明的方法中，通过采用光学方法测定或者肉眼观测其透射光或散射光的测定方法来测定免疫比浊法、乳胶凝聚反应、乳胶比浊法、红细胞凝集反应或粒子凝集反应等中免疫复合体凝集物的生成，此时，作为溶剂可以使用磷酸緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液或Good，s緩沖液等，还可以在反应体系中含有聚乙二醇等反应促进剂或非特异性反应抑制剂。上述抗体或片段例如包括多克隆抗体、单克隆抗体、合成抗体、重组抗体、多特异性抗体(包括二重特异性抗体)、单链抗体、Fab片段、F(ab，)2片段等。多克隆抗体可以通过与结合有精制多肽的亲和'性柱结合的所谓吸附法，作为特异性抗体进行制备。测定方法可以包括以下步骤使被惯用的酶或荧光团标记的抗体或片段与组织切片或均质化的组织接触的步骤、定性或定量测定抗原-抗体复合体的步骤。可以通过以下方法进行检测例如，利用免疫电子显微镜测定靶多肽的存在和水平的方法、利用ELISA或荧光抗体法等惯用方法测定靶多肽的水平的方法等，与来自没有发生转移的患者的食管癌组织相比，来自发生转移的患者的食管癌组织中的靶多肽的表达量增加或降低(或减少)时，或发生转移的食管癌患者与没有发生转移的食管癌患者相比，该多肽在血液中的水平显著增加或降低时，判断食管癌发生转移。换言之，与来自没有发生转移的患者的值相比，上述多肽的表达量或水平显著增加或降低时，可以判断食管癌发生转移。或者，根据上述方法，与非癌组织相比，食管癌组织中的靶多肽的表达量减少时，或患有食管癌的受试者与健康的受试者相比，该多肽在血液中的水平显著降低时，可以判断发生食管癌。换言之，上述多肽的表达量或水平与正常值比较，显著降低时，可以确定发生食管癌。此处，显著是指有统计学意义。利用以下实施例进一步详细说明本发明。但本发明的范围并不限定于列举的实施例。实施例<实施例l〉1.实验者的临床病理学观察从取得知情同意的进行食管癌摘除手术或食管活检的119名食管癌患者获得食管的摘除组织。对摘除的组织片进行肉眼及/或病理组织学观察，判断食管癌组织，区分食管癌病变部和正常组织部后，立即冻结，保存在液氮中。另外，采集周围所含的淋巴结，病理学诊断食管癌细胞是否转移。2.总RNA的提取和cDNA的制备作为试样，使用食管癌患者的食管组织中的食管癌病变部组织。使用Trizol试剂(Invitrogen公司)，按照该公司推荐的操作手册，由各组织制备总RNA。并用寡聚(dT)引物及随机九聚物，使用CyScribeFirst-StrandcDNALabelingKit(GEHealthcare公司)，按照制造商推荐的操作手册，对由上述方法得到的总RNAl[ig进行逆转录反应。在来自食管癌组织的总RNA中添加Cy3-dUTP(GEHealthcare公司)，在参考总RNA(Stratagene公司)中添力口Cy5—dUTP(GEHealthcare公司)，按照制造商推荐的操作手册，在逆转录反应时进行cDNA的标记。被标记的cDNA用QIAquickPCRpurificationKit(QIAGEN公司)精制后用于杂交。3.寡DNA微阵列的制作作为寡DNA微阵列，使用根据Affymetrix公司GeneChip(HumanGenomeU133A)及本说明书中记载的方法制作的DNA芯片。DNA芯片的制作方法如下所示。为了确定最初载带的寡DNA的种类，使用Affymetrix公司GeneChip，进行基因的插入。GeneChip的操作基于CompleteGeneChipInstrumentSystem等该公司规定的顺序进行。使用CompleteGeneChipTM的解析结果是提取得到有可能因食管癌导致表达变动的基因及可以作为实验对照的基因，共计8961种。对于提取的8961种基因，为了不引起序列的重复，分别选择序列特异性高的部位的序列60-70个残基进行合成。在MATSUNAMIDNA微阵列用涂层玻璃的耐DMSO的TypeI氨基修饰寡DNA固定涂层(松浪硝子工业抹式会社)上，使用点样仪(spotter)(GMS417arrayer,Affymetrix公司)，在50-60。/q湿度环境中点样合成寡DNA,所述合成寡DNA溶解在稀释至4倍的溶液I(TakaraBio公司)中，浓度为30!iM，含有序列号21-40的寡DNA、并由8961种的60或70mer组成。4.杂交在反意寡聚混合物(cocktail)(QIAGEN)中溶解l吗标记的cDNA,将得到的溶液排列到载有被覆Gap的玻璃(松浪硝子工业)的DNA芯片上，在42。C下杂交16小时。杂交结束后，依次用2xSSC/0.1%SDS、lxSSC、0.2xSSC清洗DNA芯片。5.基因表达量的测定使用Agilent微阵列扫描仪(Agilent公司)扫描利用上述方法进行杂交的DNA芯片，获得图像，将荧光强度转变为数值。参考SpeedT.著"Statisticalanalysisofgeneexpressionmicroarraydata，，Chapman&Hall/CRC、及CaustonH.C.等著"Abeginner'sguideMicroarraygeneexpressiondataanalysis"Blackwellpublishing进4亍统计学处理。即,将从杂交后的图像解析得到的数据分别取对数值，进行整体最佳化(globalnomalization)，并根据LOWESS(局部加权回归散点修勻法(locallyweightedscatterplotsmoother))进行平滑化,通过MAD缩放处理，进行归一化校正(normalizationcorrection)。结果能够找到在发生转移的食管癌病变部的表达量比没有发生转移的食管癌病变部多/少的基因。可以考虑将该基因用作食管癌转移检测用基因。6.预测得分系统以从50例患者得到的检样作为训练样本，制作使用载带在基因组框架图(GenomicProfiler)(三井信息开发)上的SVM的辨别式。利用该辨别式，对进行了归一化的所有119例的数据进行数据预测。需要说明的是，核函数使用线性核函数(linearkernel)。基于在二组间(发生转移的食管癌病变部和没有发生转移的食管癌病变部)的t检验的p值选择基因。以所有检样为对象进行解析，通过比较发生转移的食管癌病变部和没有发生转移的食管癌病变部，得到按照p值由小到大的顺序排列的一览表(发生转移的食管癌病变部和没有发生转移的食管癌病变部中的基因转录产物的表达量比较和统计值)，对于该一览表中的47种基因，从上面开始选择(表2)。<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>针对选择的47种基因制作用于辨识食管癌组织的SVM辨别机，通过研究使用序列号4894的多核苷酸作为探针测定的基因表达，制作发生转移(即转移性)的食管癌病变部和没有发生转移(即非转移性)的食管癌病变部的辨别式，概率依赖于使用的基因数而发生变动，能以86%以上的概率判断发生转移的食管癌病变部和没有发生转移的食管癌病变部(图l)。<实施例2〉实验者的临床病理学观察从取得知情同意的进行食管癌摘除手术或食管活检的119名食管癌患者获得食管的摘除组织。对摘除的组织片进行肉眼及/或病理组织学观察，判断食管癌组织，区分食管癌病变部和正常组织部后，立即冻结，保存在液氮中。总RNA的提取和cDNA的制备作为试样，使用食管癌患者的食管组织中的食管癌病变部组织以及同一食管组织中的非癌组织(正常组织)。使用Trizol试剂(Invitrogen公司)，按照该公司推荐的操作手册，由各组织制备总RNA。并用寡聚(dT)引物及随机九聚物，使用CyScribeFirst-StrandcDNALabelingKit(GEHealthcare公司)，按照制造商推荐的操作手册，对由上述方法得到的总RNAl微克(吗)进行逆转录反应。在来自正常组织或食管癌组织的总RNA中添加Cy3-dUTP(GEHealthcare公司)，在参考总RNA(Stratagene公司)中添加Cy5-dUTP(GEHealthcare公司)，按照制造商推荐的操作手册，在逆转录反应时进行cDNA的标记。—皮标记的cDNA用QIAquickPCRpurificationKit(QIAGEN公司)精制后用于杂交。3.寡DNA微阵列的制作作为寡DNA微阵列，使用根据Affymetrix公司GeneChip(HumanGenomeU133A)及本说明书中记载的方法制作的DNA芯片。DNA芯片的制作方法如下所示。为了确定最初载带的寡DNA的种类，使用Affymetrix公司GeneChipTM,进行基因的插入。GeneChip的操作基于CompleteGeneChipInstrumentSystem等该公司^L定的顺序进行。使用CompleteGeneChipTM的解析结果是提取得到有可能因食管癌导致表达变动的基因及可以作为实验对照的基因，共计8961种。对于提取的8961种基因，为了不引起序列的重复，分别选择序列特异性高的部位的序列60-70个残基进行合成。在MATSUNAMIDNA微阵列用涂层玻璃的耐DMSO的Typel氨基修饰寡DNA固定涂层(一公浪硝子工业4朱式会社)上，使用点样仪(spotter)(GMS417arrayer,Affymetrix公司)，在50-60%湿度环境中点样合成寡DNA，所述合成寡DNA溶解于稀释至4倍的溶液I(TakaraBio公司)中，浓度为30jiM,含有序列号162-181的寡DNA、并由8961种的60或70mer组成。.杂交在反意寡聚混合物(QIAGEN)中溶解l吗标记的cDNA,将得到的溶液排列到载有被覆Gap的玻璃(松浪硝子工业)的DNA芯片上，在42。C下杂交16小时。杂交结束后，依次用2xSSC/0.1%SDS、lxSSC、0.2xSSC清洗DNA芯片。5.基因表达量的测定使用Agilent微阵列扫描仪(Agilent公司)扫描利用上述方法进行杂交的DNA芯片，获得图像，将荧光强度转变为数值。参考SpeedT.著"Statisticalanalysisofgeneexpressionmicroarraydata，，Chapman&Hall/CRC、及CaustonH.C.等著"Abeginner'sguideMicroarraygeneexpressiondataanalysis"Blackwellpublishing进行统计学处理。即,将从杂交后的图像解析得到的数据分别取对数值，进行整体最佳化，并根据LOWESS(局部加权回归散点修匀法)进行平滑化，通过MAD缩放处理，进行归一化校正。结果能够得到非癌组织部(图2)、食管癌病变部(图3)中所示的M-A图。进而能找到在食管癌病变部的表达量比非癌组织部少的基因。可以考虑将该基因用作食管癌检测用基因。6.预测得分系统以从50例患者得到的检样作为训练样本，制作使用载带在基因组框架图(三井信息开发)上的SVM辨别式。利用该辨别式对进行了归一化的所有119例的数据进行数据预测。需要说明的是，核函数使用线性核函数(linearkernel)。基于在二组间(食管癌病变部和正常组织部)的t检验的p值选择基因。以所有检样为对象进行解析，通过比较食管癌病变部和非癌组织部，得到按照p值由小到大的顺序排列的一览表(食管癌病变部和非癌组织部的基因转录产物的表达量比较和统计值)，对于该一览表中的20种基因，从上面开始选择(表3)。表3序列RefS叫号基因名食管癌组织部表达平均值非癌组织部表达平均值表达比p值142NM—000512GALNS0.09731.43140.06801.202E-28143NM一005247fg。0.59851.62050.36935.559E-26144NM—001220CAMK2B0.44581.50410.29643.325E-25〗45NM018584CaMKllNalpha0.50471.42500.35423.057E-23146NM—018622PSARL0.44631.32630.33653.410E-23147NM—005432XRCC30.2565].52770.16792.539E-22148NM—001747CAPG-0.05510.5347-0.10309.067E-22149NM—012203GRHPR0.20300.66960.30322.052E-21150NM005480TROAP0.11920.86310.13812.679E-20151NMJ301034RRM20.20141.36560.14755.005E-20152函—145799SATB2-0.02860.7859-0.03643.150E-20153固—020181C14orfl620.02080.66630.03128.849E-20154NM—015129SEPT60.95921.96450.48837.463E-17155NM一002355M6PR0.08271.21630.06805.031E-17156函005416SP图0.99483.39830.29272.245E-21157函004434EML10.38420.98920.38843.975E-20158NM—016061YPEL50.58021.38570.41871.490E-19]59NM—004096EIF4EBP20.07220.68940.10472.750E-19160BC060766SLC2A140.22011.14130.19294.134E-19161NM—004787SLIT20.46121.03260.44662.331E-19针对选择的20种基因(图2及图3中以白色菱形标记表示)制作用于辨识食管癌组织的SVM辨别机，通过研究使用序列号162181的多核苷酸作为探针测定的基因表达，制作食管癌组织和非癌组织的辨另'J式，概率依赖于使用的基因数而发生变动，能以89%以上的概率判断食管癌病变部和非癌组织部(图4)。使用从手术切片及活检试样得到的食管癌病变部、仅从手术切片得到的非癌组织部作为成为训练样本的检样，进行解析，针对食管癌病变部和非癌组织部的表达量差，按照p值由小到大的顺序选择基因，制作用于辨识非癌组织的SVM辨别^/L,此时，4吏用序列号162165、167、171、173、174及176的多核苷酸作为最佳组合的探针测定基因表达，通过研究该基因表达能以93%的概率识别非癌组织。使用仅从手术切片得到的食管癌病变部、从手术切片及活检试样得到的非癌组织部作为成为训练样本的检样，进行解析，针对食管癌病变部和非癌组织部的表达量差，按照p值由小到大的顺序选择基因，制作用于辨识食管癌组织的SVM辨别机，此时，通过研究使用序列号162166、168172、175的多核苷酸作为最佳组合的探针测定的基因表达，能以96%的概率识别食管癌组织。可以同时针对1个受试组织的基因表达量套用上述2个识别非癌组织部的SVM和识别食管癌病变部的SVM,进行解析。结果，针对某一受试组织，当2个辨别式同时得到是非癌组织部的结果时，或2个辨别式同时得到是食管癌病变部的结果时，各诊断的准确度显著高于根据现有的通过l个辨别式进行诊断的方法。<实施例3>1.利用RT-PCR进行的检测使用食管癌患者的食管组织中的食管癌病变部的组织、及同一食管组织中的非癌组织(正常组织)作为试样，使用Trizol试剂(Invitrogen公司)，根据该公司推荐的操作手册，由各组织制备总RNA。使用SuperscriptIIIFIRST-STRANDSUPERMIX,由总RNA合成cDNA,使用TaKaRaTaqTM(TakaraBio公司、京都、日本)对相当于20ng总RNA的cDNA进行扩增反应。为了检测属于上述II组的CaMKIINalpha及YPEL5基因，在扩增反应中使用由对应于各基因序列(序列号145及158)的20个碱基组成的引物(TakaraBio抹式会社)。反应溶液的组成按照提供的操作手册进行制备。反应条件如下首先，在95。C处理1分钟后，进行23(GAPDH)26(CaMKIINalpha及YPEL5)轮95。C15秒、55。C30秒、72。C30秒的组合条件处理，最后，在72。C下处理7分钟。用2%琼脂糖凝胶电泳反应后的反应液，确认了各基因的表达(图5)。由图5可知，CaMKIINalpha及YPEL5在食管癌病变部组织中的表达比正常组织少。2.利用定量的RT-PCR法进行的才全测使用与1.利用RT-PCR进行的检测相同地制作的cDNA作为试样。定量的RT-PCR法基于由TakaraBio公司(京都、日本)的web页"l是供的信息(http:〃www.takara—bio.co.jp/prt/guide.htm)进行。焚光检测中使用SYBRpremixExTaq(TakaraBio公司)及ABIPRISM7000,反应液的组成基于SYBRpremixExTaq的操作手册、反应条件基于ABIPRISM7000的l喿作手册进行45轮的扩增反应。为了4佥测CaMKIINalpha(序列号145)及GAPDH基因，在扩增反应中使用由对应于各基因序列的20个碱基组成的引物(TakaraBio公司)。制作用于定量PCR的标准曲线时，对于CaMKIINalpha，使用由食管组织制备的PCR片段，对于作为稳定表达基因的一种的GAPDH(此处，所谓稳定表达基因，是指在几乎所有人细胞.组织中表达量基本一定的基因，也被称为管家基因。)使用由人参考RNA(humanreferenceRNA)(Stratagene公司)合成的cDNA,分别稀释至任意浓度后加以使用。在各组织中，对相当于1Ong总RNA的cDNA中的CaMKIINalpha和GAPDH进行定量PCR法，计算CaMKIINalpha表达量相对于GAPDH表达量的比值。结果在食管癌患者的食管组织中的食管癌病变部组织的CaMKIINalpha/GAPDH表达比为0.41，正常组织的表达比为3.16，可见在食管癌病变部中，CaMKIINalpha表达量降低。3.结果利用RT-PCR确认食管癌组织中的CaMKIINalpha及YPEL5的mRNA的表达量时，与正常食管组织相比，有减少的倾向。利用定量的RT-PCR进行检测时，与正常食管组织相比，CaMKIINalpha的mRNA在食管癌组织中减少约1/7.7。4.半定量RT-PCR使用LightCycler(Roche■Diagnostics)进行半定量RT-PCR。使用食管癌患者的食管组织中的食管癌病变部的组织、及同一食管组织中的非癌组织(正常组织)作为试样，使用firststrandsynthesiskit(GEHealthcare公司)由从各组织提取的总RNA合成cDNA。作为与属于上述II组的XRCC3及RRM2、作为内部参比的GAPDH对应的引物，使用primer3(httpc〃frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3—www.cgi),确定序歹'J(只寸于XRCC3，4吏用5'—ACTGTGCCCCACAAAACTTC—3'(序列号234)、5，一GACCCTCCTTCCTCTCAACC—3，(序列号235)、对于RRM2，使用5，-GGCTGGCTGTGACTTACCAT-3，(序列号236)、5，—AATCTGCGTTGAAGCAGTGA—3，(序列号237),7寸于GAPDH,使用5，一TGGTATCGTGGAAGGACTCATGC-3，(序列号238)、5,一ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC—3，(序列号239))。将得到的2pLcDNA模板与引物各50pmo1、3mMMgCl22.4jiL、LightCyclerDNAMASTERSYBRGreenl，10xcone(Roche.Diagnostics抹式会社)2pL混合，使用LightCycler，进行PCR反应。作为反应条件，首先，在95。C下处理反应溶液后，进行45轮94。C1秒、退火温度(XRCC358°C、RRM253.1°C)5秒、72°C18秒的组合条件处理，最后以0.2。C/秒的比例加热至95。C后，得到溶解曲线。在所有的实验中，通过稀释试样，制成GAPDH的表达量的定量曲线，对食管癌病变部组织和正常组织中的RRM2及XRCC3的表达量进行半定量。结果对于RRM2的表达量，正常组织食管癌病变部的比为1:0.06,对于XRCC3，比值减少至l:0.11。<实施例4〉1.健康人及食管癌患者血浆的蛋白质鉴定从11名5070岁的食管癌患者、及8名对应年龄的健康人分别得到添加EDTA的血浆成分。从健康人中随机选4名，制作混合血浆，用于解析。对食管癌患者的血浆分别进行解析。用孔径0.22fam的过滤器过滤血浆，除去杂质物质，进行调制，使蛋白质浓度为50mg/mL。进一步将该血浆注入到25mM碳酸氢铵溶液(pH8.0)中进行稀释，使浓度为12.5mg/mL，用中空丝过滤器(东丽)进行分子量截留。用ProteomeLab(注册商标)PF2DSystem(BeckmanCoulter公司)反相色谱将截留后的血浆样品(总量1.8mL、含有最多250(ig的蛋白质)分离成7个馏分，冷冻干燥后，再溶解于100nL25mM碳酸氢铵溶液(pH8.0)。将该样品用蛋白质的五十分之一的量的胰蛋白酶在37。C下消化23小时，进行肽化。再利用离子交换柱(KYATechnologies)将各馏分的肽分成4个馏分。将上述各馏分进一步用反相柱(KYATechnologies)分馏，将洗脱的肽用在线连接的质谱Q-TOFUltima(Micromass公司)，通过surveyscanmode进行测定。通过用蛋白质鉴定软件MASCOT(MatrixScience)解析上述测定数据，进行彻底的蛋白质鉴定。结果从健康人、食管癌患者获得的所有血浆成分中均鉴定到MASCOT分数为40以上(筌定肽数为2个以上)的约3500种蛋白质。2.比较健康人与食管癌患者血浆的蛋白质表达针对上述l中鉴定的血浆蛋白质，在健康人和食管癌患者之间进行比较。找到了在健康人中未检测出表达、在食管癌患者中检测出表达的蛋白质。上述蛋白质是上述表1中所示的序列号202233表示的多肽，作为所谓的食管癌标记物，在食管癌的检测中是有用的。在各患者中的表达频率如表4所示。健康人以4人为1组，2组均未检测到表达(用-表示)，在ll名食管癌患者中10名以上检测到表达(用+表示)。<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table>所以，通过使用上述多肽的至少l种、例如其特异性抗体，测定该多肽的存在或存在量，能检测食管癌。产业上的可利用性根据本发明，能够提供一种特异性、灵敏度优良的食管癌诊断用组合物，该组合物能够检测、确定或预测至少I阶段的食管癌、至少向淋巴结的食管癌转移，所以本发明特别是在制药及医药产业是有用的。序列表的自由文本序列号234人工序列的说明引物序列号235人工序列的说明引物序列号236人工序列的说明引物序列号237人工序列的说明引物序列号238人工序列的说明引物序列号239人工序列的说明引物权利要求1.一种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在或转移的组合物，所述组合物含有选自下述I组、II组及/或III组中的1种或2种以上探针，I组由下述(a)～(e)组成的多核苷酸，(a)由序列号1～46表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(b)含有序列号1～46表示的碱基序列的多核苷酸，(c)由与序列号1～46表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(d)含有与序列号1～46表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，及(e)在严格条件下，与所述(a)～(d)中的任一种多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段；II组由下述(f)～(j)组成的多核苷酸，(f)由序列号142～155、157～161表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(g)含有序列号142～155、157～161表示的碱基序列的多核苷酸，(h)由与序列号142～155、157～161表示的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体、或其含有15个以上连续碱基的片段，(i)含有与序列号142～155、157～161表示的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，及(j)在严格条件下与所述(f)～(i)中的任一种多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段；III组由下述(k)～(m)组成的抗体、其片段或其化学修饰衍生物，(k)与由序列号1～46表示的碱基序列编码的多肽、或具有序列号95～140表示的氨基酸序列的多肽、它们的变异体、或它们的片段中的至少1个特异性结合的抗体、其片段或其化学修饰衍生物，(l)与由序列号142～155、157～161表示的碱基序列编码的多肽、或具有序列号182～195、197～201表示的氨基酸序列的多肽、它们的变异体、或它们的片段中的至少1个特异性结合的抗体、其片段或其化学修饰衍生物，及(m)与具有序列号202～232表示的氨基酸序列的多肽、它们的变异体、或它们的片段中的至少1个特异性结合的抗体、其片段或其化学修饰衍生物。2、如权利要求l所述的组合物，其中，利用所述I组及III组(k)的各探针可以检测、确定或预测食管癌的存在或转移。3、如权利要求i所述的组合物，其中，利用所述n组及ni组(1)、(m)的各探针可以检测、确定或预测食管癌的存在。4、如权利要求l所述的组合物，其中，所述多核苷酸是DNA或RNA。5、如权利要求l所述的组合物，其中，所述I组及II组中的片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。6、如权利要求l所述的组合物，其中，所述I组及II组中的片段是序列号146、142155、157161中的任一个表示的石成基序列中分别含有序列号4893、162175、177181中的任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸序列互补的碱基序列的多核苷酸。7、如权利要求l所述的组合物，所述I组及II组中的片段是含有序列号4893、162175、177181中的任一个表示的碱基序列、或与该碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。8、如权利要求l所述的组合物，所述组合物除含有所述I组的探针以外，还含有由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与所述多核苷酸杂交的多核苷9、如权利要求8所述的组合物，其中，所述片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。10、如权利要求8所迷的组合物，其中，所述片段是序列号47表示的碱基序列中含有序列号94表示的碱基序列的多核普酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。11、如权利要求8所述的组合物，其中，所述片段是含有序列号94表示的碱基序列、或与该碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。12、如权利要求l所述的组合物，所述组合物除含有所述II组的探针以外，还含有由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与所述多核苷酸杂交的多核普酸、或所述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段作为探针。13、如权利要求12所述的组合物，其中，所述片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。14、如权利要求12所述的组合物，其中，所述片段是序列号156表示的碱基序列中含有序列号176表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核普酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。15、如权利要求12所述的组合物，其中，所述片段是含有序列号176表示的碱基序列、或与该碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。16、如权利要求l所述的组合物，所述组合物除含有所述m组(m)的探针以外，还含有与序列号233表示的多肽，其变异体或其片段中的至少1个特异性结合的抗体、其片段或其化学修饰衍生物。17、如权利要求l所述的组合物，其中，所述多肽或变异体的片段含有由至少7个氨基酸组成的表位。18、如权利要求l所述的组合物，其中，所述抗体是多克隆抗体、单克隆抗体、合成抗体、重组抗体、多特异性抗体或单链抗体。19、如权利要求l所述的组合物，其中单独或组合含有选自所述i组及/或ii组、或m组中的2种以上探针。20、一种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在或转移的试剂盒，其中含有选自权利要求i定义的i组、n组及/或in组中的i种或2种以上探针。21、如权利要求20所述的试剂盒，其中还含有由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苷酸、在严格条件下与所述多核苷酸杂交的多核苷酸、或所述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段作为探针。22、如权利要求20所述的试剂盒，其中还含有由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核苦酸、在严格条件下与所述多核普酸杂交的多核苷酸、或所述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段作为探针。23、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述多核苷酸是由序列号146、47中的任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸、由其互补序列组成的多核脊酸、在严格条件下与所述多核苷酸杂交的多核苷酸、或其含有15个以上连续碱基的片段。24、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述多核苷酸是由序列号142155、156、157161中的任一个表示的碱基序列组成的多核普酸、由其互补序列组成的多核普酸、在严格条件下与所述多核苷酸杂交的多核苷酸、或所述多核苷酸的含有15个以上连续碱基的片段。25、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述I组及II组中的片段是含有60个以上连续碱基的多核苷酸。26、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述I组中的片段是在含有序列号146、47中任一个表示的碱基序列的60个以上连续碱基的多核苷酸中分别含有序列号4893、94中的任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的碱基序列的多核苷酸。27、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述II组中的片段是在含有序列号142155、156、157161中任一个表示的碱基序列的60个以上连续石咸基的多核苷酸中分别含有序列号162175、176、177181中的任一个表示的碱基序列的多核苷酸、或含有与该多核苷酸的序列互补的石威基序列的多核苷酸。28、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述I组或II组中的片段是含有序列号4893、94、162175、176、177181中的任一个表示的碱基序列、或与该碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸。29、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述I组或II组中的片段是由序列号4893、94、162175、176、177181中的任一个表示的碱基序列组成的多核苷酸。30、如权利要求20所述的试剂盒，其中含有2种以上全部的含有序列号4893、94表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。31、如权利要求20所述的试剂盒，其中含有2种以上全部的含有序列号162175、176、177181表示的碱基序列或其互补序列的多核普酸。32、如权利要求20所述的试剂盒，其中，所述探针被单独或组合包装在不同容器中。33、一种用于体外检测、确定或预测受试者食管癌的存在或转移的DNA芯片，其中含有选自权利要求l定义的I组及/或II组中的l种或2种以上探针。34、如权利要求33所述的DNA芯片，其中还含有由序列号47表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体及/或其片段。35、如权利要求33所述的DNA芯片，其中还含有由序列号156表示的碱基序列组成的多核苷酸、其变异体及/或其片段。36、如权利要求33所述的DNA芯片，其中含有2种以上全部的含有序列号4893、94表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。37、如权利要求33所述的DNA芯片，其中含有2种以上全部的含有序列号162175、176、177181表示的碱基序列或其互补序列的多核苷酸。38、一种体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法，该方法包括使用选自权利要求i定义的i组、n组及/或m组中的探针，体外测定来自受试者的生物试样中的一种或几种食管癌相关靶核酸的存在或存在量或表达量。39、如权利要求38所述的方法，其中，使用DNA芯片进行所述测定。40、如权利要求38所述的方法，其中，以相对于对照试样的变化为指标，进行所述食管癌的存在或转移的检测、确定或预测。41、如权利要求38所述的方法，其中，利用免疫学方法进行所述测定。42、如权利要求41所述的方法，其中，利用所述免疫学方法的测定使用所述ni组的抗体、其片段、或其化学修饰衍生物进行。43、如权利要求42所述的方法，其中，所述抗体、其片段、或其化学修饰衍生物是被标记的。44、如权利要求38所述的方法，其中，所述生物试样是来自食管的组织或细胞、血液、血浆、血清、或尿。45、一种体外检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法，该方法包括使用权利要求1所述的组合物、权利要求20所述的试剂盒、或权利要求33所述的DNA芯片，体外测定来自受试者的生物试样中的l种或多种与食管癌相关的靶核酸的存在或存在量或表达量。46、一种检测、确定或预测食管癌的转移的方法，所述方法包括以下步骤即，第l步骤使用选自权利要求l定义的I组中的探针、或含有所述探针的权利要求l所述的组合物、权利要求20所述的试剂盒、或权利要求33所述的DNA芯片，体外测定多个生物试样中的食管癌相关靶核酸的表达量，所述生物试样是已知含有伴随转移的食管癌或不伴有转移的食管癌细胞的组织；第2步骤以所述第1步骤得到的所述靶核酸的表达量的测定值作为训练样本，制作辨别式(支持向量机)；第3步骤与第l步骤相同地体外测定来自受试者食管的生物试样中的所述耙核酸的表达量；第4步骤将第3步骤中得到的所述靶核酸的表达量的测定值代入所述第2步骤中得到的辨别式中，基于由所述辨别式得到的结果，判断生物试样中不含有伴有转移的癌细胞及/或含有不伴有转移的癌细胞。47、一种检测食管癌的方法，所述方法包括以下步骤即，第i步骤使用选自权利要求i定义的n组中的探针、或含有所述探针的权利要求l所述的组合物、权利要求20所述的试剂盒、或权利要求33所述的DNA芯片，体外测定多个生物试样中的靶核酸的表达量，所述生物试样是已知含有食管癌细胞的组织或正常组织；第2步骤以所述第1步骤得到的所述靶核酸的表达量的测定值作为训练样本，制作辨别式(支持向量机)；第3步骤与第1步骤相同地体外测定来自受试者食管的生物试样中的所述輩巴核酸的表达量；第4步骤将第3步骤中得到的所述耙乙酸的表达量的测定值代入所述第2步骤中得到的辨别式中，基于由所述辨别式得到的结果，判断生物试样中含有癌细胞或不含有癌细胞。48、选自权利要求l定义的I组、n组及/或in组中的探针、或含有所述探针的权利要求1所述的组合物、权利要求20所述的试剂盒、或权利要求33所述的DNA芯片在体外检测、确定或预测来自受试者的生物试样中的食管癌的存在或转移中的用途。全文摘要本发明涉及含有多核苷酸及抗体作为探针的组合物、试剂盒及DNA芯片及使用上述物质检测、确定或预测食管癌的存在或转移的方法，所述探针用于检测、确定或预测食管癌的存在或转移。文档编号C12N15/09GK101213296SQ200680023550公开日2008年7月2日申请日期2006年5月2日优先权日2005年5月2日发明者信正均,友田史绪里,妙本阳,小园聪子,岛田裕,田中祥德,秋山英雄,辻本豪三,野村修申请人:东丽株式会社;国立大学法人京都大学