用于减轻肌肉炎症的乳清生长因子提取物的组合物的制作方法

专利名称：：用于减轻肌肉炎症的乳清生长因子提取物的组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生产用作营养补充剂的包含乳制品的组合物。更具体地，本发明涉及包含乳清生长因子提取物(wheygrowthfactorextract,WGFE)的组合物，及其在减轻进行抗阻运动训练的个体中肌肉炎症的方法中的用途。
背景技术：
：应当才艮据本领域的当前状况来理解本发明。然而，以下论述并不^1承认所引用的任何资料在本申请优先权日时已在澳大利亚公开、使用或者作为公知常识的一部分。对人甚至动物应用营养补充剂以改善总体健康或者提高例如运动成绩是公知的。营养补充剂并不意在提供完全饮食所必需的所有营养，而是通常旨在补充饮食摄入以使营养更加全面。已经认识到维生素、矿物质和在这种补充剂中存在的其它物质发挥着重要的生理作用，并且某些维生素、矿物质和/或其他补充剂成分的缺乏已经与某些疾病的发生、总体健康的下降或运动成绩的降低联系起来。相反，已知营养补充剂在多种条件下增强多种生理状态。营养补充剂有许多目标对象，例如生病的患者、康复中的患者、老年人以及执行高强度运动方案的希望提高成绩和/或从这种运动中得到恢复的人。参加健身的人和参加高强度体育运动的人的营养需求是非常特殊的，无论是为了降低身体脂肪和增加无脂肪肌肉(leanmuscle)量，还是为了改善从高强度运动中的恢复都是如此。恢复包括克服运动所诱发炎症的能力。炎症是对组织损伤或破坏的局部应答。其特征为急性型疼痛、热、发红、肿胀、和功能丧失。因此，降低肌肉炎症包括但不限于降低肌肉中的任何一种或多种前述症状。炎性应^#抗肌肉蛋白质的合成，并且造成人在高强度运动(包括抗P且运动训练)后1至2天所经历的大部分身体不适(MaclntyreDL等，SportsMed.1995;20(1):24-40;MaclntyreDL等，EurJApplPhysiol.2001;84(3):180-6)。如果炎症严重的话，可以开些抗炎药物如皮质类固醇。然而，应用这些药物可能造成有害的副作用，并且在许多情况下对于竟技运动员而言是禁用的。负重或抗阻运动训练在活化的肌肉中引发广泛的应答。存在由肌肉牵张和劳损(stretchandstrain)以及由本地合成或在血流中循环的生长因子所激活的合成代谢信号途径。在活化位于肌肉床(musclebed)内的干细胞(卫星细胞)(Anderson&Wozniak，CanJPhysiolPharmacol.2004;82(5):300-10)快速增殖所需的细胞事件顺序的调节中，调节多种基因的表达是必需的过程，所述细胞在增殖后成熟并最终与现有肌纤维融合或者连接在一起，产生新的肌纤维。卫星细胞活化的调节因子包括多配体蛋白聚糖-3(Syndecan-3)(卫星细胞增殖所必需的跨膜硫酸肝素蛋白聚糖)、Pax-7(卫星细胞活化必需的和肌肉组织修复必需的蛋白质)(Seale等，DevBiol.2004;275(2):287-300,Cornelisonetal.,DevBiol.2001;239(l):79-94)。参与运动诱导的肌肉修复和炎症过程的其它基因包括小分子量趋化因子(CCL2和CCL4)和早期应奪_基因jun-B和c-fos。如果可获得对运动恢复具有有益效果的天然食品(比如来源于乳的产品)，那么它将是易于获得并且安全的治疗性补充剂。在现有技术中已知由保持在特定超免疫状态的母牛生产乳制品，所述^fe疫状态是通过用剂量足够高的抗原实施周期性加强免疫所建立的，所述乳制品可用于治疗多种疾病，包括关节炎、皮炎和肿瘤性疾病(EPO064103Al，BeckLR)。然而，正常牛乳中不包含存在于前i^免疫动物所产生的乳中的特定'抗炎因子，，尽管相信它包^欣水平的其它抗炎因子。本领域的技术人员会理解，根据EP0064103Al生产抗炎乳制品是非常昂贵和耗时的。在现有技术中还已知生产抗炎的乳制品，所述乳制品中包含富含免疫球蛋白的初乳。初乳是在乳腺分泌物稳定成乳之前，M后马上产生的前期乳(pre-milk)。初期初乳在产犊后最初6小时内获得，其包含的蛋白质是48小时后得自同一母牛的乳中的4倍。初乳的免疫球蛋白级分中含有抗体、乳铁蛋白和免疫增强剂。乳铁蛋白被认为可增强初乳的抗炎效果，是美国专利6,475,511(GohlkeMB)的主题。认为免疫球蛋白在消化道中发挥局部免疫功能。蛋白质补充剂已被进行阻抗运动训练的人广泛使用，以促进肌肉蛋白质合成，从而修复肌肉组织和促进肌肉生长。营养补充剂可以以饮品或食品的形式提供，包括应用时与液体混合的蛋白质粉、营养唪和点心(snackfood)、片剂、胶嚢和其它制品。市售的合适蛋白质源包括水解的乳蛋白质、i^白酸盐、大豆蛋白分离物和M滤的脱脂乳制备的乳蛋白浓缩物。也可以利用基于其它蛋白质源(如乳清蛋白质)的营养补充剂，并且可以以果汁的形式提供，但是认为这是不够的，因为它们未同时提供脂质源(WO02/15720)。此外，还考虑到一些来源于乳的蛋白质不易被肠吸收，或者不能承受消化系统的严苛环境，从而不具有治疗作用。乳清生长因子提取物就是这样一种乳制品，认为其在摄入后，由于分子比如生长因子的断裂而易于至少部分丧失生物活性。此外，由于其分离方法，WGFE仅含有低水平的免疫球蛋白，如上所述，免疫球z蛋白被i人为是重要的抗炎因子。尽管如此，有报导说乳清蛋白质补充剂能够在参加抗阻运动训练的人中提供益处。已有报导说参加健身的人可利用乳清蛋白质分离物(wheyproteinisolate,WPI)和乳蛋白分离物(milkproteinisolate,MPI)(均与乳清生长因子提取物的组成不同)快速获得无脂肪肌肉量/尺寸并减少身体脂肪。WPI富含支链氨基酸，被认为是"快速"发挥作用的，而MPI主要是酪蛋白，代谢较慢并且有效促进肌肉生长。在大鼠模型中应用WPI或乳清蛋白浓缩物与#^酸谷氨酰胺、亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的组合以改善肌肉疲劳是WO2004/049830Al(TsuchitaH等)的主题。该作者测量来自比目鱼肌的酪氨酸释ii作为疲劳的指标。本发明人已发现，包含乳清生长因子提取物的组合物可改变与运动诱发的肌肉炎症相关的基因表达。在本发明人进行的另一研究中，施用了乳清生长因子提取物的受训运动员报告其运动后的酸痛降低。重要的是，根据本发明，可以从普通的散装乳制品(bulkmilkproduct)中分离乳清生长因子提取物，而无需使母牛保持在超免疫状态或者收集相对于其它乳制品而言供应有限的初乳。
发明内容本发明涉及WGFE组合物和应用所述组合物使进行抗阻运动训练的人降低其肌肉炎症水平的方法，所述肌肉炎症水平的降低超过现有技术中组合物所获得的降低。因此，本发明的一个目的是提供一种组合物及其使用方法，与现有技术中的组合物相比，本发明的组合物在降低肌肉炎症方面有所改善/更有效。根据本发明的一个方面，提供降低骨格肌炎症的组合物，其中包含乳清生长因子拔:取物，所述乳清生长因子^^取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。根据本发明的另一方面，提供肌肉抗炎组合物，其中包含乳清生长因子^取物，所述乳清生长因子提取物通过包括以下步骤的方法分离自乳制p口ra)将所述乳制品应用于SPSepharose阳离子交换柱，b)用低离子强度的緩冲液洗涤该柱，c)在pH6.5下用緩冲液洗脱WGFE级分，该緩冲液包含0.4-0.5M的NaCl或者相当的离子强度。根据本发明的另一方面，提供肌肉抗炎组合物，其中包含乳清生长因子拔^取物，所述乳清生长因子揭:取物通过包括以下步骤的方法分离自乳制品a)将所述乳制品应用于SPSepharose阳离子交换柱，b)用包含0.008M或更低浓度NaCl的緩冲液洗涤该柱，c)在pH6.5下用緩冲液洗脱WGFE级分，该緩冲液包含0.4M的NaCl或者相当的离子强度。在本发明的另一方面中，提供根据上述的组合物，其中所述乳清生长因子提取物从选自以下的乳制品中分离全乳、干酪乳清、凝乳酶酪蛋白乳清(rennetcaseinwhey)、酸性M白乳清或其浓缩物或者脱脂乳。在本发明的另一方面中，提供根据上述的组合物，其用作肌肉抗炎剂。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法，其包括对该受试者施用有效量的包含乳清生长因子拔_取物的纟且合物。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法，其包括对该受试者施用有效量的包含乳清生长因子提取物的组合物，所述乳清生长因子提取物通过包括以下步骤的方法分离自乳制a)将所述乳制品应用于SPSepharose阳离子交换柱，b)用低离子强度的緩冲液洗涤该柱，c)在pH6.5下用緩冲液洗脱WGFE级分，该緩冲液包含0.4-0.5M的NaCl或者相当的离子强度。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法，其包括向该受试者施用有效量的包含乳清生长因子提取物的组合物，所述乳清生长因子提取物通过包括以下步骤的方法分离自乳制p口a)将所述乳制品应用于SPSepharose阳离子交换柱，b)用包含0.008M或更低浓度NaCl的緩冲液洗涤该柱，c)在pH6.5下用緩冲液洗脱WGFE级分，该緩沖液包含0.4M的NaCl或者相当的离子强度。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法，其中每日剂量中所施用的乳清生长因子提取物为至少5mg/kg体重至12.5mg/kg体重。优选地，乳清生长因子提取物的日剂量为至少25mg/kg体重。在本发明的另一方面中，拔:供通过阳离子交换层析分离自乳制品的乳清生长因子提取物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗需要降低骨骼肌炎症的受试者。在本发明的另一方面中，提供通过上述方法分离自乳制品的乳清生长因子提取物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗需要降低骨骼肌炎症的受试者。根据本发明的另一方面，提供包含乳清生长因子提取物和其他蛋白质源的降低骨骼肌炎症的组合物，所述乳清生长因子4C取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。根据本发明的另一方面，所述其他蛋白质源是乳清蛋白质，优选乳清蛋白质分离物(WPI)，更优选包含以下的乳清蛋白质分离物水分5.0%脂肪0.5%pH(5%溶液)6.3灰分3.7%乳糖0.5%蛋白质(TNx6.38)卯.0%钠0.7%磷0.3%钓0.15%在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法，包括对所述受试者施用有效量的组合物，所述组合物包含乳清生长因子提取物和其他蛋白质源，例如乳清，优选WPI。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中肌肉炎症的方法，包括对所述受试者施用组合物，所述组合物含有效量的乳清生长因子提取物以及分开摄入的其他蛋白质源，所述提取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。优选地，每日剂量中所施用的其他蛋白质源为至少225mg/kg体重(干重)，优选至少435mg/kg体重(干重)。在本发明的另一方面中，本发明的组合物每两天或三天一次至多达每天至少一次地施用，优选在抗阻运动训练之前施用和/或之后立即施用、更优选在抗阻运动训练之后立即施用、最优选在运动之后20分钟至2小时施用。在本发明的另一方面中，提供通过阳离子交换层析分离自乳制品的乳清生长因子提取物和其他蛋白质源用于生产药物的用途，所述药物用于治疗需要降低骨骼肌炎症的受试者。在本发明的另一方面中，提供包含本发明组合物的食品或饮品，其用于降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法中。在本发明另一方面中，提供本发明组合物用于生产降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的食品或饮品的用途。图1:在试验开始时(训练前)和用20gWPI(A组)、1gWGFE+20gWPI(Bl纟且)、或2gWGFE+20gWPI(B2纟且)处理12周后(训练后)，在静息时和3小时抗阻运动训练后成年受试者股外侧肌中MyoD、肌细胞生成素(myogenin)和肌细胞抑制素(myostatin)基因(mRNA)表达的倍数变化。结果表示为平均值士SEM。图2:在试验开始时(训练前)和用20gWPI(A组)、1gWGFE+20gWPI(Bl组)、或2gWGFE+20gWPI(B2组)处理12周后(训练后)，在静息时和3小时抗阻运动训练后成年受试者股外侧肌中Pax7和多配体蛋白聚糖3基因(mRNA)表达的倍数变化。结果表示为平均值±SEM。图3:试验开始时(训练前)和用20gWPI(A组)、lgWGFE+20gWPI(Bl组)、或2gWGFE+20gWPI(B2组)处理12周后(训练后)，通过免疫组织化学染色分析所显示的来自3小时抗阻运动训练后成年受试者股外侧肌组织切片中Pax7阳性核的百分比。图4:试验开始时(训练前)和用20gWPI(A组)、lgWGFE+20gWPI(Bl组)、或2gWGFE+20gWPI(B2组)处理12周后(训练后)，在静息时和3小时抗阻运动训练后成年受试者股外侧肌中IGF-1结合蛋白4和5基因(mRNA)表达的倍数变化。结絲示为平均值士SEM。图5:试验开始时(训练前)和用20gWPI(A组)、1gWGFE+20gWPI(Bl组)、或2gWGFE+20gWPI(B2组)处理12周后(训练后)，在静息时和3小时抗阻运动训练后成年受试者股外侧肌中JunB和c-fos基因(mRNA)表达的倍数变化。结果表示为平均值士SEM。图6:试验开始时(训练前)和用20gWPI(A组)、1gWGFE+20gWPI(Bl组)、或2gWGFE+20gWPI(B2组)处理12周后(训练后)，在静息时和3小时抗阻运动训练后成年受试者股外侧肌中CCL2、4和7基因(mRNA)表达的倍数变化。结果表示为平均值士SEM。图7:接触脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)并在初乳(样品2BC)、100mg/mlWPI(样品4BC)、100mg/mlWGFE(样品6BC)、多种乳级分或者仅LPS(对照)存在下培养的RAW细胞的TNF-a产生(ng/ml)。还向培养物中同时加入WGFE和LPS(样品WGFE+LPS)。图示的值表示在3次独立试验中获得的平均应答的算术平均值士SEM。图8:接触脂多糖(LPS)并在100mg/mlWPI或100mg/mlWGFE存在下培养的RAW细胞的TNF-a产生(ng/ml)的比较。发明详述本发明涉及包含WGFE的组合物及其使进行抗阻运动的受试者能够降低其肌肉炎症水平的用途，所述炎症水平的降低超过现有技术中的组合物所能达到的降低。根据本发明的一个方面，提供包含乳清生长因子提取物的降低骨骼肌炎症的组合物，所述乳清生长因子提取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。用于本发明的乳清生长因子提取物可以通过例如澳大利亚专利号645589(PCT/AU91/00303)(其通过参考并入本文)中所述方法分离自乳、脱脂乳、乳衍生物、乳清、初乳和初乳衍生物。这种方法基本上依赖于强阳离子交换层析iMM刀始材料中选择性提^5成性蛋白质，从而组成乳清生长因子提取物。产生WGFE级分的方法生产用于本发明的WGFE的一种优选方法是使用装有SP(磺丙基)Sepharose的柱。对该柱应用乳制品(优选脱脂乳)流，直至所应用的乳体积达到"柱中的树脂体积的高达1000倍。用低离子强度(<0.008MNaCl或相当)的緩冲液去除柱中残留的乳10分钟。用緩冲液从所述柱中洗脱WGFE级分，该緩冲液包含相当于0.4-0.5MNaCl(然而其它阳离子也是适合的)、最优选0.4MNaCl的钠离子。流动相可具有4艮宽的pH范围，比如4.5-9.0，优选5.5-7.5，最优选约6.5。在上限和下限时，蛋白质的稳定性和蛋白质结合阳离子交换树脂的能力都受到影响。5.5-7.5范围内的pH提供最高WGFE产率。适于吸附WGFE组分的阳离子交换树脂类型可以包括如Sepharose阳离子交换树脂珠之类的树脂。例如，分别包含磺丙基官能团和羧甲基基团的SPSepharoseBigBeads和CMSepharose珠(GEHealthcare的产品)是适合的。阳离子交换树脂珠的大小优选为45-300nm。对于本发明的WGFE纯化而言，45-165和100-300范围内的两种SPS印harose辆是适合的。可对WGFE级分进行的进一步处理之一是通过如透析或超滤进行脱盐。因此，在本发明的另一方面中，提供根据上述的组合物，其中所述乳清生长因子提取物分离自乳清或脱脂乳。用作初始材料的乳清可以是干酪乳清、凝乳酶酪蛋白乳清、酸性酪蛋白乳清或其浓缩物。用于本发明的乳清生长因子提取物和蛋白质源的量应足以降低肌肉炎症或者具有疗效。在本发明的另一方面中，提供给药方案，其中每日剂量中施用的乳清生长因子提取物为至少5mg/kg体重至12.5mg/kg体重。优选地，乳清生长因子提取物的日剂量为至少25mg/kg体重。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗P且运动训练受试者中骨骼肌炎症的方法，包括对所述受试者施用有效量的包含乳清生长因子提取物的组合物。与仅施用蛋白质源的受试者相比，当所述组合物包含其他蛋白质源(可以是任何适于消费的蛋白质源，比如WPI)时，运动后肌肉炎症降低。所述蛋白质源可得自全乳，优选得自乳清蛋白质，更优选得自乳清蛋白质分离物(WPI)。可从MurrayGoulburnCoOpCompanyLtd.购得商品名为NatraProTM的这样一种乳清蛋白质分离物。NatraProTMWPI的典型组成包括水分5.0%脂肪0.5%pH(5%溶液)6.3灰分3.7%乳糖0.5%蛋白质(TNx6.38)卯.0%钠0.7%磷0.3%钙0.15%优选地，本发明的组合物还包含蛋白质源，并且在给药方案中，每日剂量中所施用的其他蛋白质源为至少225mg/kg体重(干重)，优选至少435mg/kg体重(干重)。所述其他蛋白质源可以与WGFE组合物配制在一起，或者配制成与WGFE组合物分开施用。在本发明的另一方面中，提供乳清生长因子提取物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗需要降低骨骼肌炎症的受试者。例如，运动员可能需要抗阻运动训练以加强其肌肉力量，从而提高成绩，或者克服引^肉萎缩的虚弱性损伤。肌肉炎症可由例如腿部淤血('corked'thigh)或者肌肉撕裂引起。包含本发明组合物的药物还可以帮助所述受试者迅速恢复，从而恢复训练和/或参加竟赛。在有挫伤倾向的受试者比如老年人中也可能发生肌肉炎症。在本发明的另一方面中，提供降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法，包括对该受试者施用有效量的包含乳清生长因子提取物和其他蛋白质源的组合物。对于本领域技术人员显而易见的是，可以在训练当天或者训练当天和/或其它时间施用本发明的组合物，只要施用方案导致骨骼肌炎症降低即可。优选在运动当天施用，更优选'f^fcf在运动之前施用和/或运动之后立即施用。更优选在运动后20分钟至2小时进行施用。因此，在本发明的一个优选方面中，提供如上所述的方法，其中在运动之后立即施用。与仅施用WPI的受试者相比，在抗P且运动训练之后立即施用1gWGFE加20gWPI或者2gWGFE加20gWPI的受试者显示出炎症相关基因表达调节的提高(见实施例和结果)。此外，与施用WPI的受试者相比，施用WGFE的受试者报告运动后酸痛减轻，这支持WGFE在减轻运动后肌肉炎症方面的作用。此外，本发明的组合物可用于在期望降低肌肉炎症的非人类哺乳动物如马、灵缇犬(greyhound)等中降低肌肉炎症。在本发明的另一方面中，提供包含本发明组合物的食品或饮品，其用于降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的方法。在本发明另一方面中，提供本发明组合物用于生产降低进行抗阻运动训练的受试者中骨骼肌炎症的食品或饮品的用途。WPI通常包含约卯％(重量/体积)蛋白质；因此，20gWPI包含约18g蛋白质作为营养源。乳清生长因子提取物通常包含约85%(重量/体积)蛋白质；因此，2g乳清生长因子提取物包含约1.7g蛋白质作为营养源。应当理解，在本文中描述的发明并不仅限于所公开的具体特征实施例。实施例实蘑伊M.游床微实施了一项临床试验，其中20名年轻男性参加了三个月的随机双盲抗阻训练计划。根据澳大利亚专利号645589(PCT/AU91/00303)概括描述的方法(更详细描述见上文)制备乳清生长因子提取物。每种乳清蛋白质制剂均包^^人工^^未剂(NutrasweetTM，NutrasweetCompany,USA)。在每次运动(exercisesession)后立即服用乳清蛋白质制剂，每个受试者在监督下每周完成三次运动。将受试者随机分配至三个补充剂组之一A组20gNatraPro(WPI)/剂量；n-7Bl组20gNatraPro(WPI)加1gWGFE/剂量；n=6B2组20gNatraPro(WPI)加2gWGFE/剂量；n=7NatraProTMWPI的典型组成包括水分5.0%脂肪0.5%pH(5。/。溶液)6.3灰分3.7%乳糖0.5%蛋白质(TNx6.38)卯.0%钠0.7%磷0.3%钾0.15%肌肉分析应用透皮针活检技术从右腿股外侧肌收集肌肉样品。对切下的肌肉组织进行目测检查，仔细地解剖去除任何脂肪或结締组织，通过吸附去除多余的血，并立即冷冻在液氮中用于后续分析。将一部分肌肉组织包埋在水性包埋^h质中，并在用液氮冷却的异戊烷中冷冻，用于后续的免疫组织化学分析。免戯织化学M个样品的连续切片(10nm)包埋在显微镜载片上，用于M^蛋白重链纤维类型的分析。基于Behan的方案，应用基于M^蛋白快和慢亚型的免疫组织化学技术*查纤维类型分布以及肌肉横截面积。使用标准免細鄉《基絲这分析根据生产商的说明书使用TOTALLYRNA试剂盒和试剂(AmbionInc.)从骨骼Rtt品中提取RNA。使用Agilent2100生物分析仪(AgilentTechnologies,Inc.)测定总RNA浓度和质量。随后，使用AMV逆转录酶试剂盒方案和试剂(Promega)将RNA逆转录成cDNA。应用经PrimerExpress2.0软件设计的基因特异性引物在AppliedBiosystems7500实时PCR系统上实施基因表达分析。節度教分析应用标准western印迹技术和针对4M^蛋白重链蛋白亚型共同节段的抗体(Zymed)来检查总Ji/L^蛋白重链蛋白质含量。结果结果表示为平均值士SEM，使用Bonforoni事后检验通过双因素ANOVA计算显著性。在训练之前和之后均未观察到年龄、体重、身高或BMI值方面的显著差异。表l-受试者特征<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>基因表达分析没有观察到训练或治疗对MyoD和肌细胞生成素表达的一致影响，然而训练显著提高了肌肉LIM蛋白(MLP)的表达(图1)。Pax7和多配体蛋白聚糖3(卫星细胞募集和增殖的两种标志物)的表达在训练12周后分别提高为2倍和7倍，并且蛋白质表达数据对此也提供支持(图2和3)。Bl组中IGFBP4和IGFBP5表达(图4)在12周时应答于剧烈运动而显著提高。与肌肉炎症相关的早期应答基因jun-B和c-fos的运动后正常上调在Bl和B2补充剂组中均有所减弱，提示在这些组中应^Jl应减少(图5)(ChenYW等，JApp.Physiol.2003;95(6):2485-94)。在12周时，与对照A组相比，在B1组和B2组中，CCL4和CCL7的静息和运动后表达水平在单次抗阻运动之后均(显著)提高(图6)。实施例2:WGFE对RAW细胞中LPS诱导的TNF-a表达的影响实施体外研究以测试各种乳制品级分对RAW细胞中LPS诱导的促炎a-TNF表达的影响。在LPS存在下培养RAW细胞，1^添加初乳(样品2BC)、100mg/mlWPI(样品4BC)、100mg/mlWGFE(样品6BC)、多种乳级分。在一个样品中，在LPS刺激之后不添加乳制品(阳性对照)。还将WGFE和LPS同时添加到培养物中(样品WGFE+LPS)。图示数值表示在3次独立试验中获得的平均^JI的算术平均值士SEM(图7)。比较WGFE和WPI抑制LPS诱发的TNF-a表达的效果(图8)。按照实施例1制备乳清生长因子提取物。数据支持WGFE降低抗l!Bit动训练之后的肌肉炎症反应。体外数据提示，WGFE通过抑制TNF-a表达来降低炎症。数据还支持，WGFE与其他蛋白质源如WPI组合时降低运动后炎性应答的程度高于仅施用WPI(—种已知由进行抗阻运动训练的受试者使用的蛋白质源)时所观察到的降低。权利要求1.一种肌肉抗炎组合物，其中包含乳清生长因子提取物，所述乳清生长因子提取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。2.—种肌肉抗炎组合物，其中包含乳清生长因子提取物，所述乳清生长因子提取物通过包括以下步骤的方法分离自乳制品a)将所述乳制品应用于SPSepharose阳离子交换柱，b)用低离子强度的緩冲液洗涤该柱，c)在pH6.5下用緩冲液洗脱WGFE级分，该緩冲液包含0.4-0.5M的NaCl或者相当的离子强度。3.—种肌肉抗炎组合物，其中包含乳清生长因子提取物，所述乳清生长因子^l取物通过包括以下步骤的方法分离自脱脂乳a)将所述脱脂乳应用于SPSepharose阳离子交换柱，b)用低于0.008MNaCl的緩冲液洗涤该柱，c)在pH6.5下用包含0.4MNaCl的緩沖液洗脱WGFE级分。4.权利要求1至3中任一项的肌肉抗炎组合物，所述组合物还包含其他蛋白质源。5.权利要求4的组合物，其中所述蛋白质源是乳清蛋白质。6.权利要求5的组合物，其中所述乳清蛋白质是乳清蛋白质分离物(WPI)。7.权利要求6的组合物，其中所述乳清蛋白质分离物包含水分5.0%脂肪0.5%pH(5。/o溶液)6.3灰分3.7%乳糖0.5%蛋白质(TNx6.38)90.0%钠0.7%磷0.3%钾0.15%。8.权利要求1至7中任一项的组合物，其中所述乳清生长因子提取物分离自干酪乳清、凝乳酶酪蛋白乳清、酸性酪蛋白乳清或脱脂乳。9.权利要求8的组合物，其中所述乳清生长因子提取物分离自脱脂乳。10.权利要求1至9中任一项的组合物，其用作肌肉抗炎剂。11.降低进行抗阻运动训练的受试者中肌肉炎症的方法，其包括对所述受试者施用权利要求1至3中任一项的组合物，所述组合物中包含有效量的乳清生长因子提取物。12.权利要求11的方法，其中所述组合物以至少5mg/kg体重至12.5mg/kg体重的乳清生长因子提取物、优选至少25mg/kg体重的乳清生长因子提取物的日剂量施用。13.权利要求11或12的方法，其中所述组合物包含其他蛋白质源。14.降低进行抗PJii:动训练的受试者中肌肉炎症的方法，包括对所述受试者施用组合物，所述组合物中包含有效量的乳清生长因子提取物以及分开摄入的其他蛋白质源，所述乳清生长因子提取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。15.权利要求13或14的方法，其中所述组合物以至少5mg/kg体重至12.5mg/kg体重的乳清生长因子提取物、优选至少25mg/kg体重的乳清生长因子提取物，以及至少225mg/kg体重的其他蛋白质源的日剂量施用。16.权利要求15的方法，其中所述其他蛋白质源为权利要求5至7中任一项所述的蛋白质源。17.权利要求11至16中任一项的方法，其中所述对受试者的施用每2天或3天一次至多达每天至少一次地it行。18.权利要求11至16中任一项的方法，其中所述对受试者的施用在抗阻运动训练之前进行和/或之后立即进行。19.权利要求11至16中任一项的方法，其中所述施用在抗阻运动训练之后立即进行。20.权利要求18的方法，其中所述施用在运动之后20分钟至2小时进行。21.乳清生长因子提取物用于生产治疗抗阻运动所诱发肌肉炎症的药物的用途，所述提取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。22.乳清生长因子提取物用于生产治疗抗阻运动所诱发肌肉炎症的药物的用途，所述提取物根据权利要求2或3的方法分离自乳制品。23.权利要求1至10中任一项的组合物用于生产治疗抗阻运动所诱发肌肉炎症的药物的用途。24.用于权利要求11至20中任一项方法的包含权利要求1至10中任一项所述组合物的食品、饮品、片剂或胶嚢剂。25.权利要求24的食品，所述食品为营##或点心的形式。26.权利要求1至10中任一项的组合物用于生产降低进行抗阻运动训练的受试者中肌肉炎症的食品、饮品、片剂或胶囊剂的用途。27.肌肉抗炎组合物，其基本如说明书实施例所述。28.乳清生长因子提取物的用途，其基本如说明书实施例所述。29.降低进行抗PiLi^动训练的受试者中肌肉炎症的方法，其基本如说明书实施例所述。全文摘要本发明涉及生产用作营养补充剂的包含乳制品的组合物。更具体地，本发明涉及包含乳清生长因子提取物的组合物，及其在减轻进行抗阻运动训练的个体中肌肉炎症的方法中的用途。根据本发明的一个方面，提供包含乳清生长因子提取物的组合物用于减轻运动诱发的肌肉炎症的用途，所述提取物通过阳离子交换层析分离自乳制品。文档编号A23J1/20GK101282736SQ200680037586公开日2008年10月8日申请日期2006年9月8日优先权日2005年9月9日发明者大卫·卡梅伦-史密斯,米歇尔·罗尼申请人:墨累古尔本合作有限公司