专利名称：卵磷脂酶试验培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种卵磷脂酶试验培养基，其主要成分是蛋白胨、氯化钠、 磷酸氢二钠、硫酸镁葡萄糖、琼脂、50%卵黄生理盐水乳化液、蒸馏水按比例混合经加温、溶 解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种卵磷脂酶试验培养基。主要用于检查细菌卵 磷脂酶的活性。生物实验的核心问题是掌握生物的特性生态作用。评价实验方法的准确性 和特异性，检查细菌卵磷脂酶的活性，必须严格掌握作用时间，获得微生物准确的特性，才 能快速检测诊断，这就要求方法简单，使用方便，结果可靠。卵磷脂酶试验培养基可用于快 速检测诊断荧光假单胞菌。已有培养基剂品种很多，不具有切实可靠的方法；培养基本身或 与细菌反应的产物对实验微生物有杀灭或抑制其生长的作用；对培养成分有破坏作用，亦 影响其物理性状。随着消毒研究的进展，国内外对培养基的研究也在不断的发展中。生物 实验工作者一直希望能有一种能克服上述培养基不足的卵磷脂酶试验培养基。本反应可受 pH值、蛋白胨种类等影响，钙盐对反应可有抑制作用，在培养基中加入l^葡萄糖可获良好 结果。可用牛心肌浸液加入等量10%卵黄盐水悬液制成液体培养基，接种待试菌培养1 5天，呈现显著混浊为阳性。
技术背景本发明的目的在于提供一种能一种能克服上述培养基不足的卵磷脂 酶试验培养基。本反应可受pH值、蛋白胨种类等影响，钙盐对反应可有抑制作用，在培养基 中加入1%葡萄糖可获良好结果。可用牛心肌浸液加入等量10%卵黄盐水悬液制成液体培 养基，接种待试菌培养1 5天，呈现显著混浊为阳性。与其它类中和剂相比具备下列特点 卵磷脂酶试验培养基可用于快速检测诊断荧光假单胞菌。;本反应可受pH值、蛋白胨种类等 影响，钙盐对反应可有抑制作用，在培养基中加入1%葡萄糖可获良好结果。可用牛心肌浸 液加入等量10 %卵黄盐水悬液制成液体培养基，接种待试菌培养1 5天，呈现显著混浊为 阳性。 发明内容本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、 混合、冷却、高温灭菌、分装、等工艺而成一种卵磷脂酶试验培养基。 本发明选择的配方如下(组分及其重量百分比％)蛋白胨18-20 ;氯化钠 0. 8-1. 0 ;磷酸氢二钠2. 0-2. 5 ;硫酸镁0. 05-0. 07 ;葡萄糖0. 8_1. 0 ;琼脂10-12 ;50%卵黄 生理水乳化液加至100 ;(蒸馏水稀释至1000mL)。 卵磷脂酶属磷脂水解酶类，产气荚膜梭菌产生的卵磷脂酶，A型菌主要的致死毒 素，在钙、镁离子存在的条件下，迅速水解卵磷脂，生成甘油二酸酯和磷酸胆碱，主要用于检 查细菌卵磷脂酶活性。在培养物周围产生混浊环是甘油酯，卵黄被分解产生的游离脂肪和 卵黄磷蛋白反应而产生沉淀。将待试菌18 24h培养物接种于平板或斜面培养基上，36°C 培养18 24h观察结果。在菌落周围产生乳白色浑浊环为阳性反应。质控阳性菌株荧光 假单胞菌。阴性菌株铜绿假单胞菌。本反应可受PH值、蛋白胨种类等影响，钙盐对反应可 有抑制作用，在培养基中加入1%葡萄糖可获良好结果。可用牛心肌浸液加入等量10%卵 黄盐水悬液制成液体培养基，接种待试菌培养1 5天，呈现显著混浊为阳性。
本发明产品的制备方法是 (1)、除卵黄液外，其他成分混合加热溶解，调pH7. 4， 115°C 15min高压灭菌。冷至约50°C， (2)、加入无菌的卵黄液，混合均匀，倾注无菌平皿或分装每管10mL制成斜面。
本发明具有以下优点卵磷脂酶试验培养基可用于快速检测诊断荧光假单胞菌。； 本反应可受pH值、蛋白胨种类等影响，钙盐对反应可有抑制作用，在培养基中加入l^葡萄 糖可获良好结果。可用牛心肌浸液加入等量10%卵黄盐水悬液制成液体培养基，接种待试 菌培养1 5天，呈现显著混浊为阳性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明
按照下表所列数据(重量百分比％ )及其所述步骤进行配置
配方一
蛋白胨18-20;氯化钠0. 8-1. 0;磷酸氢二钠2. 0-2. 5;硫酸镁0. 05-0. 07;葡萄糖0. 8-1. 0; 琼脂10-12; 50%卵黄生理水乳化液加至100;(蒸馏水稀释至1000 mL)。
配方一
蛋A胨19-20;氯化钠0. 9-1.0;磷酸氢二钠2. 2-2. 5;硫酸镁0. 06-0. 07;葡萄糖0. 9-1. 0;
琼脂11-12; 5(F。卵黄生理水乳化液加至100;(蒸馏水稀释至1000 mL)。
配方三
蛋白胨18-19;氯化钠0. 8-0. 9;磷酸氢二钠2. 0-2. 4;硫酸镁0. 05-0. 06;葡萄糖0. 8-0. 9;
琼脂10-11; 50%卵黄生理水乳化液加至100;(蒸馏水稀释至1000 mL)。
蛋白胨18.5-19.5;氯化钠0.8-0.9;磷酸氢二钠2.1-2.4;硫酸镁0.06-0.07;葡萄糖 0.9-1.0;琼脂11-12; 50%卵黄生理水乳化液加至100;(蒸馏水稀释至誦ItlL)。
权利要求
本发明涉及一种卵磷脂酶试验培养基，其主要成分是蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、硫酸镁葡萄糖、琼脂、50％卵黄生理盐水乳化液、蒸馏水按比例混合经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种卵磷脂酶试验培养基；其特征在于具有如下配方(组分及其重量百分比％)蛋白胨18-20；氯化钠0.8-1.0；磷酸氢二钠2.0-2.5；硫酸镁0.05-0.07；葡萄糖0.8-1.0；琼脂10-12；50％卵黄生理水乳化液加至100；(蒸馏水稀释至1000mL)。
2. —种权利要求1所述卵磷脂酶试验培养基的制备方法，其特征在于具有如下的步骤(1) 、除卵黄液外，其他成分混合加热溶解，调pH7. 4， 115°C 15min高压灭菌。冷至50°C;(2) 、加入无菌的卵黄液，混合均匀，倾注无菌平皿或分装每管10mL制成斜面。
全文摘要
本发明涉及一种卵磷脂酶试验培养基，其主要成分是蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、硫酸镁葡萄糖、琼脂、50％卵黄生理盐水乳化液、蒸馏水按比例混合经加温、溶解、混合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种卵磷脂酶试验培养基。主要用于检查细菌卵磷脂酶的活性。生物实验的核心问题是掌握生物的特性生态作用。评价实验方法的准确性和特异性，检查细菌卵磷脂酶的活性，必须严格掌握作用时间，获得微生物准确的特性，才能快速检测诊断，这就要求方法简单，使用方便，结果可靠。卵磷脂酶试验培养基可用于快速检测诊断荧光假单胞菌。本反应可受pH值、蛋白胨种类等影响，钙盐对反应可有抑制作用，在培养基中加入1％葡萄糖可获良好结果。可用牛心肌浸液加入等量10％卵黄盐水悬液制成液体培养基，接种待试菌培养1~5天，呈现显著混浊为阳性。
文档编号C12Q1/04GK101698881SQ20071011573
公开日2010年4月28日 申请日期2007年12月18日 优先权日2007年12月18日
发明者曲奕 申请人:曲奕