专利名称：一种病毒繁殖促进剂及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种病毒繁殖的促进剂及其应用，属于生物学 领域，特别是兽用生物制品领域。
背景技术：
在当前的传统禽类疫苗生产中，一^:程序是将所用病毒加 稀释液稀释后注入到鸡胚中进行繁殖，然后收获尿嚢液进行病毒滴度的测 定来判定病毒的增殖量是多少，病毒增殖量增多则疫苗的产量则可大幅增 加。因此如何提高病毒滴度节约成本增加产量是当下的研究热点,但仍未有 有效且简单的提高病毒滴度方法，医学病毒学中提高病毒滴度的方法有用 "兵乓效应，，和32。C培养提高重组逆转录病毒滴度，在工业化培养罐中可以 提高细胞病毒滴度等方法(KotaniH, Newton PB， Zhang SY, Chiang YL， Otto E, Weaver L， Blaese RM， Anderson WF, McGarrity GJ.Improved meth-ods of retroviral vector transduction and production for gene therapy .Hum Gene Ther, 1994;5 ( 1 ) :19-28.)。在现有的专利中也有一些加 倍病毒增殖的方法，如申请号为02814421.X的丹麦发明专利，公开的是使 一种脊推动物痘病毒增殖增加的方法，该方法用低温的培养方式增加病毒 的繁殖量。如申请号为02139104.1的中国发明专利，公开的是一种提高昆 虫病毒增殖效率的方法，该方法利用昆虫病毒增效蛋白与昆虫病毒包涵体 经爆破获得的病毒粒子混合感染大龄昆虫幼虫，使其体内高效高水平增殖 病毒。但对于如何提高禽类病毒增殖的方法，至今未见报道
发明内容
本发明的目的是设计一种具有促进禽类病毒(如新城疫病 毒、禽流感病毒等)增殖的病毒稀释液，将其用于禽类病毒疫苗的生产过 程中能有效的提高疫苗制备过程中病毒抗原的产量。
技术方案
本发明所述的病毒繁殖促进剂是由氢化可的松、白蛋白及几种氨基酸 和磷酸緩冲盐水配制而成。
本发明所述的病毒繁殖促进剂用于禽类病毒疫苗(如新城疫疫苗、禽流感疫苗等)生产中作为病毒稀释液将疫苗生产种子病毒稀释后接种鸡胚 体内，促进新城疫病毒和禽流感疫病毒的繁殖。
氢化可的松作为激素药物具有提高细胞活性，促进鸡胚细胞分裂增殖， 抑制鸡胚自身对注入的外源物质(病毒)产生免疫，可使病毒繁殖加快， 提高鸡胚中病毒的含量，因而可提高病毒滴度。氢化可的松应用在了禽类 疫苗的生产中来增加病毒滴度，使用本发明能够使病毒繁殖量提高两个滴 度。不影响疫苗的免疫效果，十分易于应用于疫苗的生产中，对胚体和病 毒不产生副作用，安全性高且成本低廉。
1.病毒繁殖促进剂的配制(W/V):
氬化可的松 10 ~ 20 ml (规格为2OmL:100mg,天津药业焦作有限公 司等公司生产)
白蛋白 0.69~1.67g (规格为冻干粉，北京天坛生物制品股份有
限公司等生产)
蛋氨酸 0.17 0.75g(白色薄片状结晶或结晶性粉末，北京信诺科
美科技有限公司等提供)
赖氨酸 0.51 ~ 1.21g (白色或浅褐色粉末，安徽丰原生物化学股
份有限公司等提供)
精氨酸 0.08 0.3g(白色斜方晶系晶体或白色结晶性粉末，北京
信诺科美科技有限^^司等提供)
先后溶于pH 7.2的PBS中，并补足到1000ml。完全溶解后用滤器过 滤除菌备用。
3.病毒繁殖促进剂的使用和作用
在禽类病毒疫苗研制及生产中，有一些疫苗病毒是利用鸡胚进行繁殖 的，也就是将经过稀释的种子病毒通过适合的途径接种到合适日龄的鸡胚 体内，而本发明所制备的病毒繁殖促进剂在本发明中是作为病毒稀释液， 将种子病毒稀释后接种鸡胚内促进病毒繁殖以生产禽类疫苗。
使用本发明的病毒繁殖促进剂，其中的PBS起到緩沖pH的作用，保 持一定的离子浓度，以维持病毒的活性，因为在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，病毒当然不例外；白蛋白是一种重要的营养物质，
可分解产生的氨基酸，供鸡胚生长所需，提高鸡胚生长率，有利于其中病
毒的繁殖；氢化可的松作为激素药物可提高细胞活性，促进鸡胚细胞分裂 增殖，抑制鸡胚自身对注入的外源物质(病毒)产生免疫，从而可使病毒 繁殖加快，提高鸡胚的病毒含量，因而可提高病毒1 2个滴度。
本发明的优点在于该病毒繁殖促进剂是由氢化可的松、白蛋白、氨 基酸和磷酸缓沖盐水配制而成。在用鸡胚繁殖禽类病毒使用本发明所涉及 的病毒繁殖促进剂能够使病毒滴度提高1 ~ 2个对数级，对胚体和病毒不产 生副作用，且不影响疫苗的免疫效果，应用在工业化疫苗的生产中，有效 增加病毒产量。
通过以下实施例对发明做进一 步详细描述。 实施例1——病毒繁殖促进剂的配制 氢化可的*>15 ml (规格为20mL: 100mg) 1. 0g 0. 50g 0. 90g 0.20g
以上成分先后溶于pH 7,2的PBS中，并补足到1000ml。完全溶解后 用滤器过滤除菌备用。
实施例2——病毒繁殖促进剂的配制 氢化可的+〉 20 ml (规j各为20mL: 100mg) 白蛋白 0. 69g
蛋氨酸 Q. 75g
赖氨酸 1. 21g
精氨酸 0.10g
将以上各成分先后溶于pH 7.2的PBS中，并补足到1000ml。完全溶 解后用滤器过滤除菌备用。
白蛋白 蛋氨酸 赖氨酸 精氨酸实施例3—
氬化可的衫 白蛋白
病毒繁殖促进剂的配制
10ml (规格为2OmL:100mg) 1.67g
蛋氨酸 0.17 赖氨酸 0.51g 精氨酸 0.3g
将以上各成分先后溶于pH 7.2的PBS中，并补足到1000ml。完全溶解 后用滤器过滤除菌备用。
实施例4——病毒繁殖促进剂对新城疫病毒的作用
1. 取已配置好并用滤器过滤除菌的病毒繁殖促进剂作为接毒时的病毒稀 释液。
2. 新城疫病毒液的稀释在超净台中将用来接种的新城疫病毒原液用以 上配好的病毒繁殖促进剂进行1:1000 (V/V)稀释作为试验组。对照组只用生 理盐水将新城疫病毒原液也进行1:1000 (V/V)稀释。
3. 鸡胚的准备繁殖病毒所用的鸡胚均由购买的无特异性病原(SPF) 种蛋自行孵化，在孵化器中孵育9~10天后，用作接毒。
4. 接毒挑选健康鸡胚尿嚢腔内接种稀释好的病毒液0.2ml/枚，实验组 和对照组各接毒220枚胚。继续放孵化器内进行孵化。
5. 收毒并测定HA效价在接毒3天后，收获实验组和对照组的尿嚢液 进行HA效价的测定，测定结果为实验组HA效价平均为287,对照组的HA 效价平均为264。
通过对以上试验结果得出结论本项研究成果提高病毒繁殖量的增效剂 能明显提高新城疫病毒的效价，该增效剂作为病毒的稀释液比常规的生理盐 水稀释液提高病毒约2.0 ~ 2.3个滴度，效果显著。
实施例5_病毒繁殖促进剂对禽流感病毒的作用
1. 1.取已配置好并用滤器过滤除菌的病毒繁殖促进剂作为接毒时的病毒 稀释液。
2. 禽流感病毒液的稀释在超净台中将用来接种的禽流感病毒原液用。
权利要求
1. 一种病毒繁殖促进剂，其特征在于是由氢化可的松、白蛋白及氨基酸和磷酸缓冲盐水配制而成。
2. 如权利要求1所述的一种病毒繁殖促进剂，其特征在于其中的氨基 酸是蛋氨酸、赖氨酸和精氨酸。
3. 如权利要求1所述的一种病毒繁殖促进剂，其特征在于其配方是 20ml:100mg的氢化可的+〉 10~20ml、白蛋白0.69~1.67g、蛋氨酸 0.17~0.75g、赖氨酸 0.51~1.21g、精氨酸 0.08 ~ 0.3g和pH 7.2磷酸緩 沖盐水补足到1000ml 。
4. 一种病毒繁殖促进剂的应用，其特征在于本发明所述的禽类病毒繁 殖促进剂用于禽类病毒疫苗生产中作为病毒稀释液将种子病毒稀释后接种 鸡胚体内。
5. 如权利要求4所述的一种病毒繁殖促进剂的应用，其特征在于是该 促进剂用于新城疫疫苗生产中，促进新城疫病毒的繁殖。
6. 如权利要求4所述的一种病毒繁殖促进剂的应用，其特征在于是该 促进剂用于禽流感疫苗生产中，促进禽流感疫病毒的繁殖。
全文摘要
本发明涉及一种病毒繁殖促进剂及其应用。该病毒繁殖促进剂是由氢化可的松、白蛋白、氨基酸和磷酸缓冲盐水配制而成。在用鸡胚繁殖禽类病毒使用本发明所涉及的病毒繁殖促进剂能够使病毒滴度提高1～2个对数级，对胚体和病毒不产生副作用，且不影响疫苗的免疫效果，应用在工业化疫苗的生产中，以增加病毒产量。
文档编号C12N7/00GK101463345SQ200810187558
公开日2009年6月24日 申请日期2008年12月26日 优先权日2008年12月26日
发明者李明义, 潇 胡 申请人:青岛易邦生物工程有限公司