专利名称：：通过工程化生物合成制备的大环内酰胺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及具有抗肿瘤性质的大环内酰胺和它们的制备方法及用途。
背景技术：
：本发明在美国政府支持下进行，资助号为5R44CA096262-03,由国立卫生研究院(NationalInstitutesofHealth)给予。美国政府对本发明具有一定的权利。格尔德霉素(geldanamycin)属于安沙霉素(ansamycin)天然产物家族，其成员的特征在于大环内酰胺环跨越了在苯醌、苯酚或氬醌母核上互为间位的两个位置。除了格尔德霉素，安沙霉素还包括麦克霉素(macbecin)、除莠霉素(herbimycin)、TAN-420s和reblastatin。o《0=<0《格尔德霉素NH7麦克霉素INH2麦克霉素IINH,8<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>在安沙霉素中，格尔德霉素及其衍生物受到最广泛的研究。尽管格尔德霉素最初是作为抗生素活性筛选的结果而被鉴定的，但目前对它的兴趣源自其作为抗癌药物的潜能。它是热休克蛋白-90("Hsp90")(参与多种"客户蛋白(clientprotein)"(包括参与信号转导、细胞周期控制和转录调节的关键蛋白)折叠和活化的伴侣蛋白)的抑制剂。抑制剂与Hsp90的结合中断了其与客户蛋白的相互作用，阻止了后者被正确折叠，并随之丧失了功能或具有了对蛋白酶体所介导破坏的敏感性。在Hsp90客户蛋白中有参与癌症的多种突变蛋白或过表达蛋白，例如突变体p53、Bcr-Abl激酶、Raf-1激酶、Akt激酶、Npm-Alk激酶、Cdk4、Cdk6、Weel、HER2/Neu(ErbB2)和HIF國la。多种致癌客户蛋白可被同时靶向的可能性已经在Hsp90抑制剂作为抗癌药物的开发中引起了相当大的兴趣。参见例如Xiao等人,Mini-ReviewsMed.Chem.2006,6(10),1137-1143。人们考虑对格尔德霉素进行开发以将其作为抗癌药物，但其肝脏毒性和差的生物利用度导致其不能作为临床候选药物。然而，人们仍然对开发具有Hsp90抑制活性并具有改进药物性质语的格尔德霉素衍生物持有兴趣。从化学角度来讲，格尔德霉素的C17已经是用于合成格尔德霉素衍生物的兴趣焦点，这是因为该位置的曱氧基可容易地被亲核试剂所取代，由此提供了得到n-取代的-i7-去曱氧基-格尔德霉素的便利合成途径。构效关系("SAR，，)研究已经显示可引入化学不同和立体不同的l7-取代基而不破坏抗肺瘤活性。参见例如Sasaki等人，US4,261，989(1981)(以下称作"Sasaki，，)、Schnur等人，US5,932,566(1999)、Schnur等人，J,Med.Chem.1995,38(19),3806-3812、Schnur等人，J.Med.Chem.1995,38(19),3813-3820和Santi等人，US6，872，715B2(2005),将这些文献披露的内容并入本申请作为参考。SAR推理通过Hsp90和格尔德霉素衍生物所形成络合物的X射线晶体共结构(X-mycrystalco-structure)得以支持，所述X射线晶体共结构显示17-取代基从结合口袋(bindingpocket)中支出并突出到溶剂中(Jez等人，Chemistry&Biology2003,10,361-368)。最为已知的17-取代的格尔德霉素衍生物为17-烯丙基氨基-17-去曱氧基格尔德霉素(也称作17-AAG或坦螺旋霉素(tanespimycin),如上所述的Sasaki)和17-(2-二曱基氨基乙基)氨基-17-去曱氧基格尔德霉素(也称作17-DMAG或阿螺旋霉素(alvespimycin)，Snader等人，US6,890,917B2(2005))，这两种化合物目前都在进行临床试验。期望开发基于格尔德霉素中除17-曱氧基取代之外的结构基元(motif)并且具有得到更引人注意性质谱的潜能的其它安沙霉素治疗剂。一个可能的基元通过具有非苯醌芳族母核的安沙霉素所代表。如上所述，一些这样的安沙霉素是天然存在的麦克霉素II、除莠霉素、TAN420B、TAN420D和reblastatin。也已经才艮道了一些具有该基元的半合成化合物Rinehart,Jr.等人，US3,987,035(1976)、Muroi等人，US4,421,688(1983)、Schnur,US5,387,584(1995)、Cullen等人，WO93/14215Al(1993)、Sasaki等人，JP57-163369A(1982)和Yamaguchi等人，WO2007/001049A1(20Q7),将这些文献公开的内容并入本申请作为参考。然而，由于各种原因，已经将非苯醌安沙霉素发展成药物候选物，其中一个可能的例外如下所讨论。
发明内容在本发明中，申请人披露了能用作Hsp90抑制剂的大环内酰胺。这些大环内酰胺在结构上与天然存在的安沙霉素相关，并如下以生物合成的方式得到对产生格尔德霉素的生物体(geldanamycin-producingorganism)即吸水链霉菌去势变种NRRL3602(Streptomyceshygroscopicusvar.geldanusNRRL3602)(在文献中也经常简单地称作吸水链霉菌NRRL3602)的突变抹(mutantstrain)进行培养。所述突变林不能制造3-氨基-5-羟基苯曱酸("AHBA，，)(在得到格尔德霉素的生物合成途径中的第一底物(或起子单元(starterunit))),但含有完整的格尔德霉素生物合成基因簇(genecluster)。当供给有非天然的替换起子单元(replacementstarterunit)(即除AHBA之外的芳族氨基酸)时，所述突变抹将它们引入到新颖的大环内酰胺中。具体地，申请人已经构建了在本申请中称作菌抹K554-161的突变抹，其中已经将负责AHBA生物合成的aMa-6基因簇删除(delete)，但没有破坏用于格尔德霉素生物合成的基因簇。因此，在一个实施方案中，本发明提供具有式I所示结构的大环内酰胺:3-氨基-5-羟基-苯曱酸。=<其中X为H、Cl、F或OMe(曱氧基)；R1、112和113独立地为H或OH;以及!^和RS各自为H,或尺4和115组合形成键；条件是(i)R'、R"和R"中的至少一个为H,和(ii)如下部分:在另一个优选的实施方案中，W和RS各自为H，对应于具有式I-a所示结构的大环内酰胺(I画a)在另一个优选的实施方案中，R"和RS组合形成键，对应于具有式I-b所示结构的大环内酰胺OMe'(I-b)在一个实施方案中，X在式I、I-a或I-b中为C1或F。在另一个实施方案中，X在式I、I-a或I-b中为H。在另一个实施方案中，X在式I、I-a或I-b中为OMe。另一个实施方案提供了制备具有式I-c所示结构的大环内酰胺的方法120=<所述方法包括如下步骤(a)向不能产生3-氨基-5-羟基苯曱酸但含有用于合成格尔德霉素的完整基因簇的吸水链霉菌去势变种NRRL3602菌抹(所述菌林优选为菌林K554-161)的培养物中加入(作为替换起子单元)具有式II或II-a所示结构的化合物ci(Il-a)和(b)在产生具有式I-c所示结构的化合物的条件下发酵所述培养物，其中X为H、Cl、F或OMe;R6、R和RS独立地为H或OH;以及R9和R^各自为H,或W和R"组合形成键；条件是R6、W和RS中的至少一个为H。在前述方法的优选实施方案中，在步骤(a)中加入的化合物具有式II的结构。在另一个优选的实施方案中，所加入的化合物具有式II-a的结构。在一个优选的实施方案中，X在式I、Ia、Ib、Ic或II中为Cl或F。在另一个优选的实施方案中，X在式I、Ia、Ib、Ic或II中为H。另一个实施方案提供了在患有高增殖性疾病(hyperproliferativedisease)的患者中治疗所述疾病的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的本发明大环内酰胺。优选地，如此治疗的高增殖性疾病为乳腺癌、卵巢癌、白血病、结肠癌或月市癌。另一个实施方案提供了一种药物组合物，其包含本发明的大环内酰胺13和可药用赋型剂。另一个实施方案提供了抑制靶标细胞增殖的方法，所述方法包括使所述耙标细胞与有效量的本发明大环内酰胺接触。优选地，如此抑制的靶标细胞为乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、结肠癌细胞或肺癌细月包。一般而言，所述有效量可对应于浓度为约40至约10,000nM更优选约40至约900nM的所述大环内酰胺。图1概念性地说明了通过删除吸水链霉菌NRRL3602的aMa-6基因簇来产生菌林K554-161。图2是从没有加入任何AHBA的菌抹K554-161发酵物中分离的产物的LC-MS迹线图。图3a是当同样的菌抹在lmMAHBA的存在下发酵时分离的产物的LC-MS迹线图。图3b是在图3aLC-MS迹线图的9.96分钟时洗脱的物质的质谱。图4a和4b分别是从产生格尔德霉素的菌抹即吸水链霉菌去势变种NRRL3602的发酵物中分离的产物的比较性LC-MS迹线图和比较性质谱。图5显示了暴露于本发明的大环内酰胺对Hsp90客户蛋白的浓度的影响以及当抑制Hsp90时对所i秀导蛋白的浓度的影响。具体实施例方式格尔德霉素和其它安沙霉素是天然产物聚酮化合物(polyketide)超家族的成员。聚酮化合物在很大程度上不是通过它们的结构而相关(它们的结构酮化合物合成酶(polyketidesynthase,"PKS，，)的酶来介导)。格尔德霉素PKS是I型PKS(或模块(modular)PKS)，其特征在于被分成活性模块的大的多功肯fe酶(largemultifunctionalenzymedividedintomodulesofactivity)以装酉己纟戋(assembly-line)的方式排列(arrange)。每个模块具有负载、活化和缩合二碳(乙酰(ketide))单元以使聚酮化合物链增长的多种酶活性("结构域(domain)")，并可具有使刚加入的乙酰单元发生化学改变(还原、脱水等)的额外修饰结构域(modifyingdomain)。模块的数目和顺序以及包含在每个模块中的修饰结构域(如果有)的类型决定了所得聚酮化合物的基本结构。有关PKS的一般综述请参见Staunton等人，Nat.Prod.Rep.2001,18，380-416。聚酮化合物合成的引发发生于负载模块(包含酰基转移酶("AT")和酰基载体蛋白("ACP，，)结构域)，其中通过高能硫酯4建(high-energythioesterlinkage)来将聚酮化合物的第一单元(或起子单元)负载到PKS上。包含酮合成酶(ketoysnthase，"KS")结构域、AT结构域和ACP结构域的随后模块("延长模块(extendermodule)，，)(总称为最小PKS模块)同样通过硫酯链来负载基于丙二酸(malonate)的二碳延长单元(extenderunit)。(术语"二碳"指的是聚酮化合物主链，而延长单元也可具有指定于侧链的碳原子，如在曱基丙二酰基延长单元的情况下)。所负载的延长单元与增长中的聚酮化合物链缩合，所述增长中的聚酮化合物链与负载模块或在先紧邻的延长模块相连，在通过二碳来延长聚酮化合物链的克莱森反应(Claisenreaction)中的情况可以如此。然后，修饰结构域(如果存在)例如酮还原酶(ketodreductase)("KR，，)结构域、脱水酶(dehydratase)("DH")结构域、烯酰还原酶(enoylreductase)("ER")结构域和/或曱基转移酶结构域在刚加入的二碳单元上进行加工，并通过还原、脱水等来对其进行修饰。在最后的延长模块发挥作用后，释放结构域一典型地为硫酯酶结构域或酰胺酶结构域一从PKS中释放聚酮化合物，这通常在通过使末端酰基与上游羟基或氨基发生环化的过程中形成内酯或内酰胺。其它酶(称作"剪裁酶(tailoringenzyme)，，或"修饰酶")可进一步修饰所述聚酮化合物，这称作PKS后修饰(post-PKSmodification),剪裁酶可以是例如加氧酶、糖基和曱基转移酶、酰基转移酶、卣化酶(halogenase)、环化酶、氨基转移酶和羟化酶。Hutchinson等人，US2004/0077058Al(2004)(将其公开的内容并入本申请作为参考)描述了格尔德霉素PKS基因簇和其来自吸水链霉菌NRRL3602的克隆。格尔德霉素PKS包含接受AHBA作为起子单元的负载结构域和各自加入延长单元(丙二酰基、2-曱氧基丙二酰基或2-曱基丙二酰基，这取决于模块)的七个模块。格尔德霉素PKS的初始产物是原格尔德霉素(progeldanamycin)，通过如下几个剪裁酶所介导的步骤来将所述原格尔德霉素转化成格尔德霉素C7羟基的氨曱酰基化；C17的羟基化和如此引入的羟基的O-曱基化；C21的羟基化和氧化；以及C4-C5的脱氢15i^-*vOHC7氨甲酰基化C17羟基化C170-曱基化C21氧化C4-C5氧化原格尔德霉素已经对格尔德霉素生物合成途径进行生物工程化以产生新的格尔德霉素类似物。使用已知为"AT-swap，，的技术(其中天然的AT结构域被来自不同PKS的AT结构域替换，参见Tian等人，US2005/0026894Al(2005)(下文称作"Tian")和Patel等人，Chemistry&Biology2004,11，1625-1633(下文称作"Patel")来制备以如下为特征的格尔德霉素类似物，所述特征尤其为不存在2-甲基和抑制芳族环氧化成醌氧化态格尔德霉素类似物。Rascher等人,AppliedEnvironmentalMicrobiology2005,71(8),4862-4871(下文称作"Rascher")披露了对加氧酶基因gdmM的破坏导致了格尔德霉素类似物(KOS-1806)的产生，其中对芳族环的羟基化和氧化及对C4-C5的氧化都得以抑制。。=<Rascher也报道了在用于形成AHBA的基因簇(fl/^a-Z))被删除的另一种突变林(K3卯-76-l)中，格尔德霉素的产生也受到抑制，但可通过进料AHBA来恢复。在本申请所要求的优先权日期后，Kim等人，ChemBioChem2007，8,1491-1494披露了吸水链霉菌二重霉素亚种JCM4427(Streptomyceshygroscopicussubsp.duamyceticusJCM4427)(其也是格尔德霉素的生产者)中AHBA合成酶基因的失活。使所得菌林在各种氨基苯甲酸或羟基笨曱酸的存在下生长。通过LC-MS来对因引入这些苯曱酸而得到的多种代谢物进行表征。同样在本申请所要求的优先权日期后，Martin等人，WO2007/122829A2(2007)披露了通过向产生麦克霉素的生物体中进料非天然的起子单元来制备18,21-二去氧麦克霉素类似物。所披露的非天然起子单元包括3-氨基苯曱酸、5-氨基-2-氟苯甲酸、5-氨基-3-氟-苯曱酸、5-氨基-2，3-二氟苯曱酸和5-氨基-2,3，6-三氟苯曱酸。申请人已经创造了吸水链霉菌NRRL3602的新突变株，申请人将其命名为菌林K554-161。其中已经将a/z6a-6基因簇删除，但当进料某些芳族氨基酸作为替换起子单元时，所述菌林K554-161接受这些替换起子单元并产生新颖的大环内酰胺。(当进料AHBA时，菌抹K554-161产生格尔德霉素，这证实其格尔德霉素PKS是完整的。)可进料给菌抹K554-161以制备大环内酰胺的优选式II或II-a替换起子单元中有<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>2-氯_5-氨基苯曱酸不是特别期望的底物，它的进料导致芳族环的脱氯。3-氨基-2-羟基苯曱酸也不是特别期望的底物，其似乎不容易被生产生物体(producingorganism)所接受以严生聚酮化合物。本领域技术人员应该理解的是，这些替换起子单元作为氨基酸可以按相应的共轭酸盐的形式来使用、处理(handle)或加到发酵混合物中，所述共辄酸盐为例如盐酸盐、三氟乙酸盐等。或者,它们可以按其羧酸盐的形式来使用、处理或加入，所述羧酸盐为例如钠盐或钾盐。当然，两性离子形式也可以如此来使用、处理或加入。通过本发明的方法制备的式I-a大环内酰胺包括如下那些化合物，其中式I-a中的如下部分:、o、/o人,、/、和它们分别对应于如下化合物，这些化合物完整画出的结构为III-a至III-q:18(ni-a)、(ni誦b)、(ni-c)(m-d)、(ni-e)、(in-f)(m-g)、(ni陽h)、(ni-o(m-m)、(III-n)、(III-o)(in-p)和(ni-q)。在上述化合物中，优选的是化合物m-a和m-d。通过菌株K554-161产生的大环内酰胺倾向于没有在格尔德霉素中发现的C4-C5双键，如化合物III-a至III-o所示例的那样。由于将AHBA进料给菌抹K554-161导致格尔德霉素的产生，所以申请人推测C4-C5剪裁酶是有活性的，但通过PKS使用替换起子单元而初始产生的化合物对于C4-C5剪裁酶来说是劣等底物(inferiorsubstrate)。另外，替换起子单元的芳族母核20MeO'MeOMeO没有被氧化成醌氧化态，尽管在一些情况下发生部分氧化(表现为C17和/或C21的羟基化)。作为表明C4-C5剪裁酶是完整的另一个证据，申请人已经观察到在小量分离出来的数个产物中C4-C5被氧化。实例包括通过分别进料3-氨基苯曱酸、3-氨基-5-氯苯曱酸、3-氨基-5-氟苯曱酸和3-氨基-4-羟基苯曱酸而得到的式IV-a、IV-b、IV-c和IV-d化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>(IV画a)(IV-b)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>(IV-c)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>(IV-d)各项研究已经得出以下结论格尔德霉素衍生物17-AAG和17-DMAG中的醌基团经酶NAD(P)H:醌氣化还原酶l(也称作NQOl或DT心肌黄酶(diaphorase))还原成相应的氢醌形式(分别是17-AAGH2和17-DMAGH。对于它们作为Hsp90抑制剂的活性来说是重要的。参见Kelland等人,J.Nat，lCancerInst.1999,91(22)，1940-1949、Guo等人，CancerRes.2005，65(21)，10006-10015、Guo等人，Mol.Pharmacol.2006，70(4),1194-1203、Maroney等人，Biochemistry2006，45,5678-5685和Gooljarsingh等人，Proc.Nat，lAcad.Sci.(USA),2006,103(20),7625-7630。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>这些研究表明，还原形式的17-AAGH2和17-DMAGH2是比母体醌更强效的Hsp90抑制剂。在一项研究中，使两种乳腺癌细胞系(同基因的(isogenic),不同的是一种被转染成表达高水平的NQOl)暴露于17-AAG。17-AAG对抗NQOl表达细月包系的效力比对抗非NQOl表达细胞系的效力强约12倍。在另一项研究中，发现所述氢醌形式比相应的醌结合得更紧密(约40倍)，并具有较慢的解离速率。计算机建模计算也预测了氢醌形式的结合是能量上较有利的。然而，格尔德霉素化合物的氢醌形式是不稳定的，在溶液中容易被氧化回到醌，特别是在金属离子的存在下。需要特别的防范措施以阻止氧化，例如在金属螯合剂存在下的贮存溶液(storingsolution)、低pH緩冲液和/或抗氧化剂。参见例如Adams等人,US7,282,493B2(2007)和Ross等人，US2006/0205705Al(2006)。因此，使用氢醌作为治疗剂面临相当大的制剂挑战。然而，17-AAGH2的盐形式正在进行临床试验。与17-AAG和17-DMAG不同的是，本发明的大环内酰胺不依赖于通过NQOl进行还原来提高它们的Hsp90抑制活性。因为没有氢醌基团，它们不需要特别的处理和贮存防范措施来防止氧化成醌形式。但不限于高增殖性疾病，包括头部和颈部癌症，包括头部肿瘤、颈部肿瘤、鼻腔肿瘤、鼻旁窦肿瘤、鼻咽肿瘤、口腔肿瘤、口咽肿瘤、喉部肿瘤、下咽部肿瘤、唾液腺肿瘤和副神经节肿瘤；肝脏和胆道系统(biliarytree)癌症，特别是肝细胞癌；肠癌(intestinalcancer),特别是结肠直肠癌；卵巢癌；小细胞肺癌和非小细胞肺癌；乳腺癌；肉瘤，例如纤维肉瘤(fibrosarcoma)、恶性纤维组织细胞瘤(malignantfibroushistiocytoma)、胚胎性才黄紋肌肉瘤(embryonalrhabdomysocarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomysosarcoma)、神经纤维肉瘤(neurofibrosarcoma)、骨肉瘤(osteosarcomatousma)、滑膜肉瘤(synovialsarcoma)、月旨肉瘤(liposarcoma)和软组织&泉泡状肉瘤(alveolarsoftpartsarcoma);中枢神经系统肿瘤，特别是脑癌(braincancer);淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤(Hodgkin，slymphoma)、淋巴浆细胞样淋巴瘤(lymphoplasmacytoidlymphoma)、滤泡性淋巴瘤(follicularlymphoma)、粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤(mucosa-associatedlymphoidtissuelymphoma)、夕卜套细月包'淋巴瘤(mantlecelllymphoma)、Bi普系大细胞淋巴瘤(B-lineagelargecelllymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt，slymphoma)和T细胞间变性大细月包'淋巴瘤(T-cellanaplasticlargecelllymphoma),更具体地，可治疗的靶标癌症包括乳腺癌、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma)、黑素瘤、结肠癌、肺癌(特别是非小细胞肺癌(NSCLC))、前列腺癌(prostatecancer)、曱状腺癌(thyroidcancer)、卵巢癌、淋巴瘤、胰腺癌(pancreaticcancer)和白血病(特别是慢性髓细胞性白血病(chronicmyelogenousleukemia,CML)和慢性淋巴细胞性白血病(chroniclymphocyticleukemia,CLL))。当本发明的化合物用于抑制靶标细胞的增殖时，如此抑制的靶标细胞优选为乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、结肠癌细胞或肺癌细胞。一^:而言，有效抑制量可对应于浓度为约40至约10，000nM更优选约40至约900nM的所述大环内酰胺。以细胞高增殖为特征的非癌症疾病也可用本发明化合物进行制备。这些疾病的示例性实例包括但不限于萎缩性胃炎(atrophicgastritis)、炎症性溶血性贫血(inflammatoryhemolyticanemia)、移才直物才非斥反应(graftrejection),炎症性中性粒细胞减少(inflammatoryneutropenia)、大疱性类天疱瘠(bullouspemphigoid),腹部疾病(coeliacdisease)、脱骨逸鞘性神经病(demyelinatingneuropathy)、皮肌炎(dermatomyositis)、炎症性肠病(inflammatoryboweldisease)(溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis)和克罗恩病(Crohn，sdisease))、多发性石更化(multiplesclerosis)、心肌炎(myocarditis)、月几炎(myositis)、鼻息肉(nasalpolyps)、慢性鼻窦炎(chronicsinusitis)、寻常性天疱掩(pemphigusvulgaris)、原发性肾小球肾炎(primaryglomerulonephritis)、牛皮癣(psoriasis)、外科手术性粘连(surgicaladhesion)、狭窄(stenosis)或再狭窄(restenosis),巩膜炎(scleritis)、石更皮病(scleroderma)、湿渗(eczema)(包4舌特应性皮炎(atopicdermatitis)、刺;敫'I"生皮炎(irritantdermatitis)、过壽文'l"生皮炎(allergicdermatitis))、23牙周疾病(periodontaldisease)(即牙周炎(periodontitis))、多嚢性肾病(polycystickidneydisease)和I型糖尿病。其它实例包括血管炎(vasculitis)(例如巨细胞动月永炎(Giantcellarteritis)(颞动务K炎(temporalarteritis)、高安动乐K炎(Takayasu，sarteritis))、结节性多关节炎(polyarteritisnodosa)、变应性脉管炎(allergicangiitis)和肉芽月中病(gmnulomatosis)(丘-施二氏病(Churg-Straussdisease))、多脉管炎重叠综合征(polyangitisoverlapsyndrome)、超敏性脉管炎(hypersensitivityvasculitis)(亨-舍二氏紫疯(Henoch-Schonleinpurpura))、血清病(serumsickness)、药物诱导的脉管炎(drug-inducedvasculitis)、感染性脉管炎(infectiousvasculitis),肿瘤性脉管炎(neoplasticvasculitis)、与结締组织卩章石寻有关的月永管炎(vasculitisassociatedwithconnectivetissuedisorder)、与^卜体系统先天4生缺陷有关的#"管炎(vasculitisassociatedwithcongenitaldeficienciesofthecomplementsystem)、韦格纳肉芽月中病(Wegener'sgranulomatosis)、川崎病(Kawasaki'sdisease)、中枢神经系统的脉管炎(vasculitisofthecentralnervoussystem)、伯格病(Buerger，sdisease)和全身性硬化症(systemicsclerosis));胃肠道疾病(例如胰腺炎(pancreatitis)、克罗恩病(Crohn'sdisease)、溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis)、溃疡性直肠炎(ulcerativeproctitis)、原发性硬化性胆管炎(primarysclerosingcholangitis)、任何原因(包括意念性(ideopathic))的良性狭窄(benignstricture)(例如胆管狭窄、食道狭窄、十二指肠狭窄、小肠狭窄或结肠狭窄)；呼吸道疾病(例如哮喘(asthma)、超牵文'l"生月申炎(hypersensitivitypneumonitis)、石才帛月申(asbestosis)、砂肺(silicosis)和其它形式的尘月市(pneumoconiosis)、'I"曼'I"生支气管炎(chronicbronchitis)和'l"曼'f生阻塞'l"生气道疾病(chronicobstructiveairwaydisease));鼻泪管疾病(nasolacrimalductdisease)(例如各种原因(包括意念性)的狭窄(stricture));和咽骨管疾病(eustacheantubedisease)(例如各种原因(包括意念性)的狭窄)。本发明化合物可与另一种活性药物成分(API)联合给药，所述另一种活性药物成分为例如其它抗癌药或细胞毒剂，包括烷化剂、血管生成抑制剂、抗代谢剂、DNA裂解剂(DNAcleaver)、DNA交联剂(DNAcrosslinker)、DNA嵌入剂(DNAintercalator)、DNA小沟结合剂(DNAminorgroovebinder)、烯二炔(enediyne)、热休克蛋白90抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂(histonedeacetylaseinhibitor)、樣l管牙急定齐'j(microtubulestabilizer)、核香(nucleoside)(噪呤或嘧啶)类似物、核输出抑制剂(nuclearexportinhibitor)、蛋白酶体抑制剂(proteasomeinhibitor)、拓朴异构酶(topoisomerase)(I或H)抑制剂或酪氨酸、激酶抑制剂。具体的抗癌药或细胞毒剂包括(3-拉帕醌(P-Iapachone)、安丝菌素P3(ansamitocinP3)、auristatin、比卡鲁胺(bicalutamide)、博来霉素(bleomycin)、石朋替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、callistatinA、喜才对石咸(camptothecin)、卡培他滨(capecitabine)、CC-1065、顺铂(cisplatin)、cryptophycin、柔红霉素(daunorubicin)、disorazole、多西他塞(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、duocarmycin、达内霉素A(dynemycinA)、epothilone、依才乇泊苦(etoposide)、氟脲嘧啶脱氧核苦(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟脲嘧啶(fluoruracil)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲(hydroxyurea)、^尹马替尼(imatinib)、干4无素(interferon)、白介素(interleukin)、伊立替康(irinotecan)、美登素(maytansine)、曱氨蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素C(mitomycinC)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、辛二酰苯胺异轻肝酸(suberoylanilidehydroxamicacid，SAHA)、塞替派(thiotepa)、托泊替康(topotecan)、曲古抑菌素A(trichostatinA)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)和长春地辛(vindesine)。优选的组合物是与以下药物的组合吉非替尼(Iressa⑧)、硼替佐米(Velcade⑧)、紫杉醇(Taxo1⑧)、多西他塞、沙利度胺(thalidomide)(Thalomid⑧))、来那度胺(lenalidomide)(Revlimid⑧)和Herceptin。在与另一种API—起进行的联合治疗中，另一种API可按其自身制剂的形式来分开给药，或当经得起检验(amenable)时，可按加到本发明化合物制剂中的额外组分的形式来给药。本发明化合物的制剂可含有赋型剂，例如载体、表面活性剂、增稠剂或乳化剂、固体粘合剂(solidbinder)、分散助剂或悬浮助剂、增溶剂、着色剂、调味剂、包衣剂(coatings)、冷冻保护剂(cryoprotectant)、冻干保护剂(lyoprotectant)、崩解剂、润滑剂、甜味剂、防腐剂、等渗剂(isotonicagent)和它们的纟且合。在Gennaro,ed.，Remington:TheScienceandPracticeof的选择和使用，将此文献公开的内容并入本发明作为参考。^'本发明化合物的受试者典型地为人，尽管本发明可为兽医目的而实施，其中就所涉及的具体哺乳动物(包括猫、牛、狗、马等)而言，对单位剂量进行合适的调整。本发明化合物的治疗有效量为所述化合物的如下量，所述量在细胞培25人员、兽医、临床医生或内科医生所正在寻求的生物应答或医学应答，这些应答包括改善所治疗的疾病、病症或障碍的症状。剂量范围可以是约4mg/n^至约4000mg/m2，这取决于给药频率。为使用安沙霉素而开发的可用于本发明大环内酰胺的制剂技术包括基于各种链长度的甘油三酯的制剂(Ulm等人，US2006/0014730Al(2006)、Ulm等人，US2006/0148776Al(2006)和Isaacs等人，WO2006/094029A2(2006));DMSO/卵磷脂组合(Tabibi等人，US6,682,758Bl(2004));聚乙氧基化蓖麻油(Zhong等人，US2005/0256097Al(2005));各种增溶剂或分散剂(Mansfield等人，US2006/0067953Al(2006));二曱基脱水山梨糖醇(dimethylsorbide)(Desai等人，WO2006/034147A2(2006));和纳米颗粒悬浮液(Tao等人，Am.Assoc.CancerRes.，96thAnnualMeeting(Apr.16-20,2005)，abstractno.1435和Licari等人，US2007/0203110Al(2007));将这些文献公开的内容并入本发明作为参考。通过参考下述实施例可进一步理解本发明的实施，这些实施例以示例性方式而非限制性方式来提供。一些替换起子单元是商购的，因此没有提供它们的合成方法。对于其它替换起子单元，提供了合成方法。实施例1:菌株K554-161的制备一般方法.吸水链霉菌NRRL3602的aM)a-6基因簇与格尔德霉素(gc/w)PKS基因相隔多于30kb,并含有六个对用于合成AHBA的酶进行编码的ORF(可读框)(Rascher,如上所述)。对在所述簇边缘的两个约lkb的DNA片段进行PCR扩增，并用作同源臂(homologyarm)以处于衍生自pFDneoS的卡那霉素抗性盒(kanamycinresistancecassette)的侧翼。将所述构建体插入到接合质粒pKC1139中，所述接合质粒pKC1139含有安普霉素抗性才示i己(apramycinresistancemarker)和热敏性复制子(thermosensitivereplicon)。通过在限制性温度孵育培养物来对其中断裂盒(disruptioncassett)被插入到染色体中的突变体克隆进行选择。接下来，除了双交换(doublecrossover)之夕卜，还就卡那霉素抗性/安普霉素敏感性表型而对200个菌落进行了筛选。通过PCR对所选择菌落进行的遗传分析用于鉴定克隆(菌林K554-161),其中所述a/26a-6基因簇的六个ORF已经被所述卡那霉素抗性盒替代。26已经4要照布达佩斯条约的条款在2006年11月15日将菌林K554-161的样品保藏在美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)(RO.Box1549,Manassas,Virginia20108,USA),其中保藏号为PTA-謂2。菌抹、培养基和生长条件.吸水链霉菌去势变种NKRL3602得自杆菌XLl-蓝(EscherichiacoliXLl-blue)(Strategene)用于DNA操作。大肠杆菌ET12657/pUZ8002(Kieser等人，PracticalStreptomycesGenetics(TheJohnInnesFoundation,Norwich,U.K.,2000))(下文中称作"Kieser，，)在大肠杆菌-吸水链霉菌接合(conjugation)中用作供体。为了繁殖和孢子形成，使吸水链霉菌在番茄酱琼脂上在28。C生长14天(Patel，如上所述)。使大肠杆菌菌抹在LB培养基上生长。将吸水链霉菌菌林以孢子在20%甘油中的悬浮液的形式保持在-80。C。引物和PCR条件.引物Olil和01i2(表l)用于对含有基因的片段的右同源臂进行PCR扩增。引物01i3和01i4用于对含有基因aMa-76的片段的左同源臂进行扩增(参见图1)。使用作为模板的吸水链霉菌基因组DNA(如在Kieser(如上所述)中所描述的那样来制备)和PCR故障保险试剂盒(fail-safekit)(Epicentre)(按照制造商的指示)来进行PCR扩增，表1-用于制备菌林K554-161的寡核苷酸(工程化用于克隆的限制位点以下划线标识)引物序列说明OlilAAGGATCCAGACCTCGACCACCGGTG用于同源臂A的扩增01i2AACTCGAGCACGATTTCCAGCGCATG用于同源臂A的扩增OIi3AAACTAGTCTCACCCGCTCGCCTTC用于同源臂B的扩增01i4AAATGCATTGAGCCACCACGGCGTG用于同源臂B的扩增01i5GCAGAAGGAACCGCGCAC用于盒插入分析01i6CGATTGTCTGTTGTGCCCAGTC用于盒插入分析01i7GGCTGACCGCTTCCTCGTG用于盒插入分析01i8CGCACCCTGGAGTCGGAC用于盒插入分析断裂盒装配.通过制备如下DNA片段的四段连接体(fourpieceligation)来将断裂盒一步装配到pKC1139接合质粒中(Bierman等人，Gene1992，116(1):用BamHI-XhoI消化的上游臂PCR产物、用Xhol-Nsil消化的来自pFDneoS(Denis等人，Gene1992，111(1)，115-8)的卡那霉素抗性盒、用Nsil-Spel消化的下游臂PCR产物和用BamHI-Spel消化的pKC1139载体。将所得到的质粒命名为pKOS554-106，并且其结构通过测序得以确认。如图l所示，质粒pKOS554-106含有处于卡那霉素抗性盒(Km"側翼的基因a/z^-3的片段和基因aMa-/的片段、安普霉素抗性标记(ApraR)和复制子的psG5热敏性起点(ori)。大肠杆菌-吸水链霉菌接合.如在Kieser(如上所述)中所描述的那样，使用大肠杆菌ET12657/pUZ8002作为供体通过接合将质粒pKOS554-106引入到吸水链霉菌去势变种NRRL3602中。使初级接合后体(exconjugant)在5mL含有卡那霉素(50mg/L)的R5液体培养基(Kieser,如上所述)中在30。C生长2天。为了选择突变体，将0.2mL所述细胞用于接种5mL具有卡那霉素的R5，并在37。C生长2天。将该步骤重复一次，然后稀释细胞，并铺在番茄琼脂板上，以及在28。C孵育14天。具有双交换的各个菌落如下鉴定复制铺板在补充有安普霉素(100mg/L)的R5板上，由此确定是否没有安普霉素抗性。通过遗传分析来确认插入性断裂.使菌落(卡那霉素抗性和安普霉素敏感性)在液体R5上生长，并如在Kieser中所描述的那样得到基因组DNA。使用PCR故障安全试剂盒来进行使用引物对01i5/01i6和01i7/01i8的PCR分析(表1和图1),从而确认插入性断裂(insertionaldisruption),菌抹K554-161和格尔德霉素产生.图2显示了从只有菌株K554-161(没有加入任何AHBA)的发酵物中分离的产物的LC-MS迹线图。如果产生了格尔德霉素，其应当在所使用的HPLC条件下在刚好小于10分钟的时间内洗脱。如图所示，没有产生任何格尔德霉素。图3a显示了当在lmMAHBA的存在下对菌林K554-161进行发酵时分离的产物的LC-MS迹线图。在9.96分钟有大的洗脱峰，在此处认为格尔德霉素洗脱出来。图3b是所述9.96分钟物质的质谱，鉴定其为格尔德霉素(格尔德霉素的m/z计算值为559.3[M-H]-)。图4a和4b分别为从对照实验(其中对天然格尔德霉素生产生物体(naturalgeldanamycin-producingorganism)即吸水链霉菌NRRL3602进行发酵)中分离的产物的LC-MS迹线图和质语(针对在9.97分钟洗脱的物质)。图4a和4b清楚地表明了格尔德霉素的产生。实施例2:3-氨基-5-氯苯曱酸如下所示制备替换起子单元3-氨基-5-氯苯曱酸的盐酸盐283-氯-5-硝基苯曱腈.将浓H2SO4(440mL)緩慢加到碎水(1200g)中，并将2-氨基-3-氯-5-硝基苯曱腈(43.8g)悬浮在所得H2S04溶液中。加入丙-2-醇(1600mL)后，在剧烈搅拌下将混合物加热到内部温度为40°C。滴加NaNO2(66.0g)于水(100mL)中的溶液。加入完成后，将混合物在40。C再保持3小时，然后冷却至环境温度，并用CH2Cl2萃取。有机萃取物先后用水、O.lNNaOH、水和盐水洗涤，然后用MgS04干燥，过滤通过硅胶垫，然后蒸发，得到粗制产物，其为黄色固体。进行硅胶色谱(20。/。EtOAc(乙酸乙酯)/己烷)，然后/人丙-2-醇中结晶，得到产物，其为黄色晶体。'H-NMR(CDCb):58.47(1H，t,JN2.0Hz)，8.43(1H，dd，J=l,4,2.0Hz)，7.98(1H,dd，J=1.4，2.0Hz)。I3C-NMR(CDC13):5148.8，137.4，137.0,128.1,125.3,115.4，115.3。3-氯-5-硝基苯曱酸.将3-氯-5-硝基苯曱腈(30.0g)溶解在水(85mL)和H2SO4(250mL)的混合物中，并在N2气氛下在150。C加热2小时。将混合物冷却至环境温度，并倒在水(1L)上。真空过滤收集所得固体，并且滤液用乙酸乙酯萃取。合并萃取物和固体，用水和盐水洗涤，然后用MgS04干燥，过滤并蒸发。在加热下将残余物溶解在l:l水/MeOH(200mL)中，用脱色炭处理并过滤。加入水(100mL),然后使混合物冷却并结晶。得到产物，其为浅黄色晶体。'H-丽R(d6画固SO):51楊(1H,brs)，8.51(2H,m),8.29(1H，m)。13C-NMR(d6-DMSO):5164.9,149.2，135,2，135.0，134.5，127.7，122.9。3-氨基-5-氯苯曱酸盐酸盐.将3-氯-5-硝基苯曱酸(10.0g)和10。/。Pd/C(0.3g)于MeOH(100mL)和6NHCl(30mL)中的混合物在帕尔装置(Parrappamtus)中在30psiH2下振摇30分钟，然后过滤通过硅藻土并蒸发。残余物从6NHC1中结晶，得到产物。通过从水中再次结晶而得到更高度纯化的物质。'H-NMR(d4-CD30D):57,24(1H，dd，J=1.4，2.0Hz),7.20(1H，dd，J=1.6,2.0Hz),6.87(1H,t,J=2.0Hz)。13C-NMR(d4-CD3OD):5167.6，149.5，134.329132.7,117,8,117.4，113.9。实施例3:3-氨基-S-氟苯甲酸如下制备替换起子单元3-氨基-5-氟苯甲酸的盐酸盐:H2,Pd/C1"1020^^^02HaH02C将3-氟-5画硝基苯曱酸(5.0g)和10。/oPd/C(0.3g)于MeOH(100mL)和6NHCl(20mL)中的混合物在30psiH2下振摇30分钟。过滤除去催化剂，然后将溶液蒸发至干。残余物从6NHC1中结晶，得到产物。13C-NMR(D20):S167.6，162.5(d,JCF=246Hz)，133.8(d，JCF=8Hz)，132.6(d,JCF=10Hz),119.7(d，JCF=3Hz),116.7(d，Jc产23Hz)，115.2(d,JCF=24Hz)。实施例4:3-氨基-6-氟苯甲酸如下制备替换起子单元3-氨基-6-氟苯曱酸的盐酸盐H2,Pd/CH02C^^^^N02HaH02C将2-氟-5-硝基苯曱酸(5.0g)于MeOH(100mL)和6NHCl(15mL)中的溶液与0.15g10%Pd/C—起在30psiH2下振摇30分钟。过滤除去催化剂，然后蒸发滤液。残余物从6NHC1中结晶，得到产物。'H-NMR(D20):57.82(1H,dd，J=2.8,6.0Hz),7'55(1H,ddd，J=2.8,4.0，8,9Hz),7.27(1H,dd,J=8.9，14.0Hz)。13C-NMR(D20):5166.5(d,Jc产2Hz)，16L3(d，Jc产260Hz)，129.7(d，JCF=10Hz),126.6，126.0(d,Jc产3Hz),120.0(d，JCF=llHz),118.9(d,JCF=25Hz)。实施例5:3-氨基-4-氟苯甲酸如下制备替换起子单元3-氨基-4-氟苯曱酸的盐酸盐H2,Pd/CH02CTv、No2HC'H02C将4-氟-5-硝基苯曱酸(5.0g)于MeOH(100mL)和6NHCl(15mL)中的溶液与0.15g10%Pd/C—起在30psiH2下振摇30分钟。过滤除去催化剂，然后蒸发滤液。残余物从6NHC1中结晶，得到产物。'H-NMR(D20):57.89(2H,m),7.25(1H,t,J=10Hz)。30实施例6:3-氨基-2-氟苯甲酸如下制备替换起子单元3-氨基-2-氟苯曱酸的三氟乙酸盐2-氟间苯二曱酸.1,3-二曱基-2_氟苯(4g)于水(75mL)中的混合物用KMnO4(11.0g)处理，并将深紫色混合物》爰'l"曼加热至回流。回流12小时后，将混合物冷却并真空过滤通过硅藻土垫。将无色滤液酸化至pH为1,此时产物结晶。真空过滤，得到产物。'H-NMR(CD3OD/CDCl3):S8.10(2H,dd，J=6.4,7.6Hz),7.31(1H，t，J=7.6Hz)。13C-NMR(CD3OD/CDCl3):5165.5,161.1(d:Jc产271Hz),136.1,123.4(d,JCF=5Hz)，120.6(d,JCT=llHz)。2-氟间笨二曱酸单曱酯.将2-氟间苯二曱酸溶解在MeOH(100mL)中，冷却至-10。C，并用SOCl2(5mL)逐滴处理。加入完成后，将混合物温热至环境温度并搅拌过夜，然后蒸干。将残余物溶解在EtOAc中，用饱和NaHC03水溶液洗涤，用MgS04干燥，过滤并蒸发，得到二曱酯。将二曱酯溶解在MeOH(曱醇)(50mL)中并用l.O摩尔当量的5NNaOH在环境温度处理过夜。浓缩混合物，并将残余物在水和CH2Cl2之间分配。水相用6NHC1酸化，然后过滤收集所得沉淀物并风干，得到产物。'H-NMR(CD3OD):58.10(2H,m),7.34(1H,t,J=8.0Hz),3.93(3H，s)。3-(叔丁氧基羰基氨基V2-氟苯曱酸曱酯.2-氟间苯二曱酸单甲酯(0.4g)于叔丁醇(10mL)中的溶液用Et3N(三乙胺)(0.56mL)和二苯基膦酰叠氮(diphenylphosphorylazide)(0.75mL)处理。1小时后，将混合物在回流温度加热24小时，然后冷却并浓缩。残余物用EtOAc稀释，用饱和NaHC03水溶液洗涤，用MgS04干燥，过滤并蒸发。进行硅胶色谱(丙酮/己烷梯度)，得到产物。'H-NMR(CDCl3):58.31(1H，brt，J=7.2Hz)，7.55(1H，ddd，J=1.6，6.8，318.0Hz)，7.16(1H,ddd,J=1.2,8.0,8.0Hz)，6.80(1H,brs),3.93(3H,s)，1.54(9H，s)。3-氨基-2-氟苯甲酸三氟乙酸盐.将3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-氟苯曱酸曱酯于1NNaOH中的混合物在环境温度搅拌2小时，然后酸化并用乙酸乙酯萃取。萃取物用MgS04干燥，过滤并蒸发。将残余物溶解在5mL三氟乙酸中，保持10分钟，然后蒸干，得到产物。'H-NMR(D2O):57.80(lH,ddd，J=1.6,8.0,8.0Hz),7,54(1H,ddd,J=1.2，4,0,4.0Hz)，7.28(1H,t，J=8.0Hz)。13C-NMR(D20):5167.2,154.1(d,JCF=257Hz)，130.2,127.9，124.9,122.5,120.1。实施例7:3-氨基-5-甲氧基苯曱酸如下制备替换起子单元3-氨基-5-曱氧基苯曱酸的盐酸盐3-曱氧基-5-硝基苯曱酸.将3,5-二硝基苯曱酸(866mg)溶解在浓度为1M的LiOMe(曱醇锂)于MeOH(1.3mL)中的溶液中，然后蒸干。将所得固体溶解在30mL六曱基膦酰胺(hexamethylphosphoramide)中并在80。C加热16小时。然后将混合物冷却，并倒在碎冰(250g)和6NH2SO4(42mL)的混合物上。混合物用乙醚萃取，并且萃取物用水和盐水洗涤，然后用MgS04干燥，过滤并蒸发，得到橙色固体。过滤通过硅胶(使用9:1CH2Cl2/MeOH)，然后蒸发，得到624mg产物。!H-NMR(d6醫丙酮)58.36(lH,dd，J-1.6，2.0Hz),7.97(1H,t,J=2.0Hz),7.91(1H,dd，J-1.6,2.0Hz)，4.03(3H,s)。3-氨基-5-曱氧基苯曱酸盐酸盐.将上述操作的产物溶解在MeOH(20mL)中，并在H2气氛下用6NHCl(2mL)和10。/oPd/C(50mg)处理30分钟。过滤除去催化剂，并将混合物蒸干。从6NHC1中结晶，由此得到产物。'H-丽R(D20):57.43(1H,dd，J=1.3,2.5Hz)，7.40(1H,dd,J=1.3,2.0Hz),7.02(1H，t，J=2.2Hz),3.72(3H,s)。13C-NMR(D20):5168.6,160.1，133.0,131.6,<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>116.0,115.1，113.6，55.8。实施例8:3-氨基-5-氯-4-羟基苯甲酸如下制备替换起子单元3-氨基-5-氯-4-羟基苯曱酸的盐酸盐:将3-氯-4-羟基苯曱酸(5.0g)分小份加到搅拌的在冰上冷却的发烟HNO3(90%,15mL)中。加入完成后，将橙色混合物温热至20°C,并继续搅拌2小时。加入冰水(50mL)，然后真空过滤收集所沉淀的产物，得到5.4g3-氯_4-羟基-5-硝基苯曱酸，其为亮黄色固体。使用帕尔振摇器，将3-氯-4-羟基-5-硝基苯甲酸(5g)和10。/。钇/炭(0.1g)于曱醇(100mL)和6NHCl(20mL)中的混合物在30psi氢气下振摇30分钟。过滤除去催化剂，并将溶液蒸发至干。产物从6NHC1中结晶。^-NMR(400MHz,D20):S7.78(1H,d,J=3Hz)，7.71(1H,d,J=3Hz)。13C-NMR(100MHz,D20):5167.7，150.6，131.4,123.8，122.4,121.5,120.3。实施例9:制备用于产生大环内酰胺的接种物(inocuhim)如下制备种子培养物(seedculture):将菌抹K554-161的lmL孢子悬浮液(108个孢子)接种到50mLYPD肉汤(broth)(Sigma)中，并在250mL锥形瓶(Erlenmeyerflask)中在搅动下在28匸孵育24小时。将5mL该培养物用于在250mL带有挡板的锥形瓶中接种40mL改性DeBoer甜菜糖蜜培养基(ModifiedDeBoerBeetMolassesMedium)(葡萄糖(Sigma)，36.4g/L;小麦蛋白胨(wheatpeptone)El(Organotechnie),5g/L;SL型大豆蛋白胨(Marcor),5g/L;细菌培养用酵母提取物(bactoyeastextract)(BD)，2.5g/L;燕麦(oatmeal)(Gerber)，5g/L;甜菜糖蜜(beetmolasses)(Minn-Dak)，10g/L(用NaOH平衡至pH为7))。加入溶解在DMSO中的替换起子单元(lOOmM)，得到ImM浓度。在搅动下将培养物在28t:孵育，直到安沙霉素的产生达到稳定(levd)。制备了补充有AHBA的培养物、没有补充任何前体的培养物和野生型菌抹的培养物作为所有实验的对照。在250mL带有挡板的锥形瓶中将菌抹K554-161于20。/。(v/v)甘油中的1毫升冷冻的孢子接种到50mL过滤器除菌的YSD培养基(由10g/L细菌培养用酵母提取物(BD)、20g/LSL型大豆蛋白胨(Marcor)和20g/L葡萄糖构成)中。在冲程(stroke)为2英寸的旋转振荡器上将细胞在28。C以190rpm孵育22-24小时。将22.5mL初级种子培养物转移到2.8L带有挡板的含有450mLYSD培养基的冯巴赫瓶(Fembachflask)中，由此得到次级种子培养物。使这些培养物在28。C以190rpm生长16-18小时。实施例10:在不使用XAD-16HP树脂的情况下对大环内酰胺进行制备和分离如下是使用3-氨基-5-氯苯曱酸或3-氨基-5-氟苯曱酸作为替换起子单元的代表性方法。用其它替换起子单元进行的制备可类似地进行。本申请稍后将描述可选择的在树脂(例如XAD-16HP)的存在下进行的制备。发酵.将含有4.5L改性DeBoer甜菜糖蜜培养基的五升生物反应器(B.Braun)在121。C加压处理60分钟。然后它们用225mL次级种子培养物接种。在28。C进行发酵，其中通气速率(aerationrate)为0.4v/v/m，以及初始搅动速率为400rpm。通过400-1000rpm的搅动级联(agitationcascade)将溶解的氧气控制在空气饱和度(airsaturation)的30%。通过自动加入2.5N石克酸或2.5N氢氧化钠，将培养物的pH保持在7.0。通过自动加入100%UCONLB-625来控制发泡。将替换起子单元制备成浓度为1M的在DMS0中的浓缩溶液。接种后1天，将它们加到生产培养物(productionculture)中至最终浓度为0.5mM。《吏发酵物生长4天。化合物III-a的分离.使用3-氨基-5-氯苯曱酸作为替换起子单元的十升发酵物肉汤用等体积的曱醇提取2小时，然后过滤。滤液在1.2LHP-20SS吸附剂(Supelco)上用不连续梯度(2.5倍柱体积(CV)的40:60(v/v)曱醇:水、2.5倍CV的50:50(v/v)曱醇:7JC、2.5倍CV的60:40(v/v)曱醇:水和2.5倍CV的100%曱醇)进行色谱分离。将含有目标化合物的馏分(通过LC-MS(m/z-551[M-H]-)来确定)合并，然后在1.0LC18吸附剂(Bakerbond,40nm)上用不连续梯度(4倍CV的50:50(v/v)曱醇:水、4倍CV的55:45(v/v)曱醇:水、4倍CV的60:40(v/v)曱醇:水和4倍CV的65:35(v/v)曱醇:水)进行色语分离。将含有目标化合物in-a的馏分(通过LC-MS来确定)合并，然后34通过(318色谱以30:70(v/v)乙腈:水在相同的dg处理柱上进一步纯化。通过制备性HPLC(Inertsil0DS-3，8pm,250mmx300mm)以30:70(v/v)乙腈:水对富集产物池中残留的少量杂质进行分离。分离出总共52mg化合物III-a，其为浅黄色固体。化合物III-d的分离.通过离心对使用3-氨基-5-氟苯甲酸作为替换起子单元的九升发酵物肉汤进行沉降。上清液在1.0LHP-20SS吸附剂上用不连续梯度(3倍CV的卯乂0(v/v)曱醇:水、3倍CV的50:50(v/v)曱醇:水、3倍CV的60:40(v/v)曱醇:水、3倍CV的70:30(v/v)甲醇:水和3倍CV的80:20(v/v)曱醇:水)进行色谱分离。将含有目标化合物的馏分(通过LC-MS(m/z二535[M-HT)来确定)合并，然后在l.OLC,s吸附剂上以50:50(v/v)曱醇:水进一步纯化。将含有目标化合物m-d的馏分(通过LC-MS来确定)合并，然后通过制备性HPLC以30:70(v/v)乙腈:水对富集产物池中的少量杂质进行分离。分离出总共241mg化合物III-d,其为浅黄色固体。化合物IV-c的分离.从上述产生III-d(即在不存在XAD-16HP的情况下)的发酵物中分离化合物IV-c。对来自在纯化化合物III-d中的C18色谱和制备性HPLC步骤的含有目标化合物IV-c的馏分(通过LC-MS(m/z-533[M-H]-)来确定)进行合并。通过制备性HPLC以27:73(v/v)乙腈:水对产物池进行纯化，得到1.8mg化合物IV-c，其为黄色固体。实施例11:在使用XAD-16HP树脂的情况下制备大环内酰胺申请人已经发现，在发酵过程中加入吸附树脂(adsorbentresin)提高了所述大环内酰胺的收率。在不受理论束绰的情况下，认为所述树脂吸附了所述大环内酰胺，并保护它们使之不会分解或不会降解。所述吸附树脂优选包含非离子性(非官能化的)疏水性聚合物，例如聚苯乙烯或苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。这样的树脂是高度多孔的，并能可逆性地从含水培养基中吸附有机分子。示例性的合适树脂包括AmberliteXAD树月旨(特别是XAD16级、XAD-16HP级、XAD7级、XAD8级、XAD1180级和XAD5级)、AmberchromTM树脂(特别是CG161级)、DIAIONtm樹脂(特别是HP20级)和SEPABEADSTM树脂。AmberliteTM和AmberchromTM树脂可从Rohm&Haas得到，而DIAIONtm和SEPABEADStm樹脂可从MitsubishiChemical得到。所述树脂优选为XAD-16HP。本领域技术人员应该理解的是，通过经验来确定所期望的树脂类型和树脂量可能是需要的。发酵.使用一长段'/2，，有机硅管(siliconetubing)(在灭菌前夹住)将含有90gXAD-16HP(Rohm&Haas)和200rnL去离子水的1L烧并瓦与每个5L生物反应器相连。生物反应器含有4.5L改性DeBoer甜菜糖蜜培养基，并在121°C加压处理60分钟。灭菌后，松开有机硅管，并将树脂加到生产培养基中。然后生物反应器用225mL次级种子培养物接种。这些发酵在与就不使用吸附树脂的发酵所描述相同的条件下进行。化合物III-a的分离.通过离心对使用3-氨基-5-氯苯曱酸作为替换起子单元的三十八升发酵物肉汤进行沉降。滗出上清液，然后XAD-16HP树脂和细胞沉淀(cellpellet)用10L100。/。曱醇提取。过滤提取混合物，然后滤液在1.75LHP-20SS吸附剂上以不连续梯度(3倍CV的40:60(v/v)曱醇:水、3倍CV的50:50(v/v)曱醇:水、3倍CV的60:40(v/v)曱醇:水、3倍CV的70:30(v/v)曱醇:水和3倍CV的80:20(v/v)曱醇:水)进行色谱分离。将含有化合物III-a的馏分合并，并在l.OLds吸附剂上以45:55(v/v)曱醇:水进行色谱分离。富集的馏分在400mLC,8吸附剂上以30:70(v/v)乙腈:水进一步纯化，得到357mg化合物in-a，其为黄色固体。化合物III-d的分离.通过离心对使用3-氨基-5-氟苯曱酸作为替换起子单元的九升发酵物肉汤进行沉降。滗出上清液并静置。XAD-16HP树脂和细胞沉淀用9L曱醇提取，然后过滤。然后合并滤液和上清液，并在1.5LHP-20SS吸附剂上以不连续梯度(3倍CV的40:60(v/v)曱醇:水、3倍CV的50:50(v/v)曱醇:水、3倍CV的60:40(v/v)曱醇:水和3倍CV的70:30(v/v)曱醇:水)进行色谱分离。将含有化合物III-d的馏分合并，并在1.0Lds吸附剂上以50:50(v/v)曱醇:水进行色语分离。富集的馏分在400mlCw吸附剂上以27:73(v/v)乙腈:水进一步纯化，得到1.3g化合物III-d，其为黄色固体。化合物IV-b的分离.从在XAD-16HP的存在下产生化合物III-a的发酵物(如上所述)中分离化合物IV-b。对来自在纯化化合物III-a中的第一个C18色谱步骤的含有目标化合物IV-b的馏分(通过LC-MS(m/z-565[M-H]-)来确定)进行合并。在400mLC,8吸附剂上以42:58(v/v)曱醇:水对产物池进行色谱分离。富集的馏分通过制备性HPLC以27:73(v/v)乙腈:水进一步纯化，得到23mg化合物IV-b,其为黄色固体。实施例12:对大环内酰胺的表征大多数时候，向菌林K554-161中进料替换起子单元导致大环内酰胺混36合物的产生，如表2所总结的那样。(如表2所注明的那样，在一些情况下，替换起子单元是商购物质)表2-通过进料替换起子单元而产生的大环内酰胺替换起子单元所产生的大环内酰胺3-氨基-5-氯笨甲酸m-a(主要产物)，III-b，m-c，IV-b3-氨基-5-氟苯曱酸m-d(主要产物)，III-e,III-f,IV-c3-氨基-5-甲氧基苯曱酸in-g3-氨基苯曱酸(a)m-h,m-i,iv-a3-氨基-2-氯笨甲酸(a)m-j3-氨基-2-氟苯甲酸ni-k3-氨基-4-氟苯甲酸III-l，III-m3-氨基-6-氟苯甲酸III-n,iii-o3-氨基-4-羟基苯甲酸(a)iii-p,iv-d3-氨基-5-氯-4-羟基苯曱酸III-q(a)商购化合物所产生的大环内酰胺的分析特征如下给出化合物III-a.NMR(400MHz，THF-d8,320K》8.44(1H，s)，7.68(非常宽的单峰)，7.42(1H，brs)，6.76(1H,d,J=2.5Hz)，5.87(1H,t,J=6.5Hz),5.75(2H,brs),5.31(1H，d,J=10.0Hz),5.06(1H，d，J=6.0Hz)，3.52(1H,dd，J=7.0,4.0)，3.35(3H，s),3.32(3H,s)，3.31(1H,m),3.13(1H，dt,J=8.0,4.0Hz)，2.80(1H,dd，J=14.0,5.5Hz),2.48(1H,dqd，J-IO.O，7.0,6.5Hz),2.44(1H,dd，J=14.0,5.5Hz)，2.31(1H，m)，2.15(1H,m),1.96(1H,m),1.80(3H,s)，1.68(1H，m),L50(3H,s),L40(2H，m),L21(1H，m)，0.99(3H,d,J=6.5Hz)，0.88(3H,d，J=7.0Hz)。13CNMR(100MHz，THF-d8，320K》170.7,157.3，148.6,134,7，133.5,133.4,132.7，131.5,130.2,125.5,120.8,120.4,82.6,81.4，80,9，75.1,58.7,57.0,37.1,35.3,34.6,32.4,30.9,25.2，19.8,17.0,13.4,12.9。HR-ESI-MSm/z575.2479[M+Na]+;C28H410735ClN2Na的计算值为575.2495。化合物III-b.ESI-MSm/z567.3;028^14035(:1>^08|>1-11]-的计算值为567.3。化合物III-c.ESI-MSm/z551.3;(:28^0350;1]^207[]^-^-的计算值为551.3。化合物IH-d.NMR(400顧z,THF-d8，330K)58'39(1H，s)，7'96(1H，d，J=1.0Hz),7.25(1H,d,3JH.F=11.5Hz),6.63(1H,s)，5.92(1H，brt,J=7.0Hz),5.70(2H,brs)，5.35(1H,d,J=10.0Hz),5'08(1H，d，J=5.5Hz)，3.51(1H,dt,J=7.0，4.0Hz)3.35(3H,s),3.32(3H,s)，3.32(1H,m)，3.17(1H,d,J=4.0Hz,可交换)，3.15(1H,dt，J=8.0，4.0Hz)，2.75(1H,dd，J=14.0，6.0Hz),2.50(1H，dqd,J=10.0，377.0,6,5Hz),2,44(1H，dd，J=14.0，6.0)，2.32(1H,m)，2.17(1H，m)，L92(1H，dqtd，J=7.5,7.0，6.0,5.5Hz)，L79(3H,d,J=1.0Hz),L66(1H,ddd,J=14.0,8.0,5.5Hz)，L53(3H,d,J=1.5Hz),L47(2H,m)，1.29(1H,ddd，J=14.0,7.5，4.0Hz),0.99(3H，d,J=6.5Hz),0.89(3H,d,J=7.0Hz)。'3C画R(100MHz,THF-d8，335K》170.5,157.3,152.2(d，Jc_F=235Hz),140.5(d，J。产15Hz)，134.5,133.9(br),132.9，132.4(Jc_F=llHz)，120.9(br)，131.6，131.0,107.2(Jc.F=23Hz)，82.9，81.6，80.9,75.4,58.6,57.1,36.4，35.2，35.1,32.7，30.9,25.3,20.2,16.7，13.3,12.9。HR-ESI-MSm/z559.2806[M+Na]+;C28H4107FN2Na的计算值为559.2790。化合物III-e.ESI-MSm/z551.3;C28H4。FN208[M-H]-的计算值为551.3。化合物III-f.ESI-MSm/z535.3;C28H4。FN207[M-H]-的计算值为535.3。ESI-MSm/z531.3;(2291^3]^207[]^-司-的计算值为531.3。HR-ESI-MSm/z525.2950;C2sH42N206Na[M+Na]+的计算化合物化合物III-h值为525.2935。化合物Ill-i.值为541.2884。化合物551.3。化合物IH-k.化合物III-l.化合物III-m.化合物III-n.化合物III-o.化合物III-p.化合物567.3。HR-ESI-MSm/z541.2880;C28H42N207Na[M+Na]+的计算ESI-MSm/z551.3;(:28114035(:^207[]\4-司-的计算值为ESI-MSm/z535.3;C28H4oFN207[M-H]-的计算值为535.3。ESI-MSm/z519.3;C28H4。FN206[M-H]-的计算值为519.3。ESI-MSm/z535.3;C28H4oFN207[M-H]-的计算值为535.3。ESI-MSm/z535.3;<:2811^>1207[1^-司-的计算值为535.3。ESI-MSm/z519.3;C28H4oFN206[M-H]-的计算值为519.3。ESI-MSm/z517.3;C2sH42N207[M-H]-的计算值为517.3。ESI-MSm/z567.3;C28H4iClN208[M-Hr的计算值为化合物IV-a.HR-ESI-MSm/z539.2749;C2sH4oN207Na[M+Na]+的计算值为539.2728。化合物IV-b.HR-ESI-MSm/z589.2299;C28H3935ClN208Na[M+Na]、々计算值为589.2287。'HNMR(400MHz,THF-d8，335K)S8.37(1H,s),7.98(1H，brs),7.72(1H,brs),6.97(1H，brd,J=11.5Hz),6.46(1H,td，J=11.5，1.5Hz)，5.8-5.2(4H,m),5.00(1H,d，J=1.5Hz)，4.34(1H,d,J=9.5Hz),3.35(1H,m),3.33(3H,s),3.15(3H，s)，2.85(1H,dd,J=13.5,9.0),2.77(1H，m),2.64(1H，dd，J=13.5,3.0Hz),1.88(3H，d,<1.0Hz)，L88(1H,重叠)，1.73(3H，s),0.98(3H,d，J=6.5Hz)，0.93(3H,d,J=7.0Hz)。13C雨R(100MHz,THF-d8,335K)S168.5，157.3,147.8,145.8，137.2，134.9，134.6,133.3，127.3,125.8,122.7,118.2,117,8111.6,82.4，82.1，81.9，75.4,57.0,56.5,36.3，34.1,33.7,30.3，23.2，13.1,12.8，12.7。化合物IV-c.ESI-MSm/z533.3;(:281"13^&07[1^-11]-的计算值为533.3。化合物IV-d.ESI-MSm/z515.3;(:28114()>1207[]^-司-的计算值为515.3。实施例13:对癌细胞生长的抑制使用Patel(如上所述)的方法来评价本发明大环内酰胺抑制癌细胞生长的能力。结果呈现在表3中。MCF-7、、SKBr3、MX-1、BT-474和NCI/ADR是人乳腺癌细胞系，其中后者对多种药物是具有抗性的。SKOV3是人卵巢癌细胞系。K-562是人白血病细胞系(慢性髓细胞性白血病或CML)。RPMI-8226是另一种人白血病细胞系(骨髓瘤)。MV-4-11是另一种人白血病细胞系(急性髓细胞样白血病(acutemyeloidleukemia)或AML)。HCT-116、HT-29和COLO205是人结肠癌细胞系。为了进行比较，现有技术化合物17-AAG和17-DMAG的数据也包括在本申请中。当测定进行多次时，给出测量值的范围。表3(A部分)-对癌细胞的抑制活性癌细胞系大环内酰胺(ICso,nM)BT-47421175780HCT-11699-29047120280-290K-5622304074290MX-158594266RPlVn隱822663564266SKBr321-15160-7736-14534-80SKOV3121-332跳190102-170230-237MCF-731-10041-9153-6073-160MV-4-1112-137-8一31-32HT-293117—110COLO205134一38NCI-ADR1,600-3,6001,100-1,600640-1,4003,200-5,000表3(B部分)-对癌细胞的抑制活性癌细胞系大环内酰胺(ICso,nM)III-hm-iIV-arv-bBT-474_一一140HCT-116240-2421,100177840K-562一一_1,40039<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>数据显示，本发明化合物为对抗癌细胞的生物活性化合物，特别是化合物III-a、III-d和IV-b就对抗所测试的癌细胞系而言如17-AAG和17-DMAG那样大体上是强效的。实施例14:效力和NOOl活性如上所述，呈醌氧化态的格尔德霉素衍生物依赖于酶NQOl来将它们还原成它们的氢醌衍生物，从而提高作为Hsp90抑制剂的活性。然而，一些癌细胞在NQOl活性方面是有缺陷的，因此不能实现从醌到氢醌的转化。本发明的大环内酰胺不是NQOl依赖性的，因此仍然可有效地对抗这样的癌细胞。这种例外通过表4所显示的结果而得以确认，其中使用与前述实施例相同的操作，对大环内酰胺m-a、III-d、IV-b、17-AAG和17-DMAG在对抗NQOl缺陷性乳腺癌(MDA-468)细胞和NQ01缺陷性肺癌(NCI-H596)细胞中的抑制效力进行了比较。如数据所示，本发明的大环内酰胺是基本上更强效的。表4-对抗NQOl缺陷性癌细胞的活性化合物抑制浓度(ICso，nM)MDA-468NCI-H596I7-AAG1,6001,60017-DMAG1,600700III-a卯190III-d100310IV-b450815不同的实验得到相同的结论。在加入或不加入双香豆素(dicoumarol)(—种已知的NQOl抑制剂)的情况下，就对抗SKBr3和MCF7癌细胞(参见如上所述的实施例12)(这两种癌细胞都表达NQ01)而言测试了17-AAG、17-DMAG、化合物III-a和化合物III-d。在双香豆素的存在下，17-AAG和17-DMAG的Hsp90抑制活性降低约一个数量级，而化合物III-a和III-d的Hsp90抑制活性基本上不变。结果显示在表5中。_表5-双香豆素对抑制活性的影响化合物细胞类型和抑制活性(IC5。，nM:>没有加入任何双香豆素加入双香豆素(50nM)SKBr3MCF7SKBr3MCF74017-AAG395441066217-DMAG3640230882m-a39575469III-d4211269161因此，前述结果显示本发明化合物(特别是化合物III-a、III-d和IV-b).适于在治疗高增殖性疾病例如癌症特别是乳腺癌、卵巢癌、肺癌、白血病(特别是CML、骨髓瘤和AML)和结肠癌中使用。实施例15:对客户蛋白的影响如下确认本发明的大环内酰胺作为Hsp90抑制剂的活性对暴露于本发明的大环内酰胺对Hsp90客户蛋白的影响和当抑制Hsp90时对所诱导的蛋白的影响进行监测。当将SKBr3乳腺癌细胞连续暴露于lpM测试化合物时的结果呈现在图5中，其中17-AAG作为参考。所使用的操作描述在Munster等人，CancerResearch2002,62，3132-3137中。ErbB2蛋白是Hsp90客户蛋白，因此当抑制Hsp90时，ErbB2被间接地抑制(Schnur等人，J.Med.Chem.1995,38(19),3813-3820)。图5上部的凝胶图显示，与17-AAG相似，大环内酰胺m-a和III-d抑制了ErbB2。热休克蛋白-70("Hsp70")(3—种蛋白质，其履行蛋白伴侣(chaperone)功能)是当抑制Hsp90时所诱导的蛋白质(Brodsky&Chiosis,CumTopicsMed.Chem.2006,6(11),1215-1225)。因此，对Hsp70的诱导可用作对Hsp90抑制的标记。图5中部的凝胶图显示，Hsp70被大环内酰胺III-a和III-d所诱导，正如其被17-AAG所诱导的那样。因此，本发明的大环内酰胺明确地具有与已知Hsp90抑制剂即17-AAG相同的作用机理。(第三行显示了甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)的浓度。GAPDH是参与糖酵解的酶，在所有细胞中被组成性地(constitutively)表达，并且在WesternBlotting实验中是作为负载对照(loadingcontrol)而选择的标记)。本发明的以上详细描述包括与本发明的具体部分或方面主要相关或专有相关的章节。应该理解的是，这是为了清楚和方便，具体的特征与本发明相关的程度可能比披露该特征的章节所描述的更深入，以及本申请所公开的内容包括在不同的章节所披露信息的所有合适组合。相似地，尽管本申请的各项附图和描述涉及本发明的具体实施方案，但应该理解的是，当在具体附图或实施方案的上下文中披露具体的特征时，所述特征也可在合适的程度上用在另一附图或实施方案的上下文中，与另一个特征组合使用，或在总体上用在本发明中。4权利要求1.具有式I所示结构的化合物id="icf0001"file="A2008800099360002C1.tif"wi="96"he="50"top="35"left="76"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>其中X为H、Cl、F或甲氧基；R1、R2和R3独立地为H或OH；以及R4和R5各自为H，或R4和R5组合形成键；条件是(i)R1、R2和R3中的至少一个为H，以及(ii)如下部分不是id="icf0003"file="A2008800099360002C3.tif"wi="73"he="23"top="142"left="39"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>2.权利要求l所述的化合物，其具有式I-a所示结构<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3.权利要求l的化合物，其具有式I-b所示结构:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>4.权利要求1所述的化合物，其中X为Cl或F。5.权利要求2所述的化合物，其中X为Cl或F。6.权利要求2所述的化合物，其中式I-a中的如下部分:7.权利要求l所述的化合物，其具有式III-a所示结构:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>8.权利要求l所述的化合物，其具有式III-d所示结构:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>9.权利要求l所述的化合物，其具有式IV-a、IV-b或IV-c所示结构:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>10.—种制备具有式I-c所示结构的化合物的方法:所述方法包括如下步骤(a)向不能产生3-氨基-5-羟基苯曱酸但含有用于合成格尔德霉素的完整基因簇的吸水链霉菌去势变种NRRL3602菌抹的培养物中加入具有式II或II-a所示结构的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>以及(b)在产生具有式I-c所示结构的化合物的条件下发酵所述培养物，其中X为H、Cl、F或曱氧基；R6、117和118独立地为H或OH;以及W和R"各自为H,或W和RW组合形成键；条件是R6、W和RS中的至少一个为H。11.权利要求10所述的方法，其中具有式II或II-a所示结构的化合物选自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>12.权利要求10所述的方法，其中步骤(a)中的化合物具有式II所示结构，并且是H02CNH2或H02C13.权利要求10所述的方法，其中步骤(a)中的化合物具有式II所示结构，并且X为F或C1。14.权利要求10所述的方法，其中所述吸水链霉菌去势变种NRRL3602菌株为菌才朱K554-161。15.权利要求10所述的方法，其中发酵所述培养物是在吸附树脂的存在下进行的。16.—种在患有高增殖性疾病的患者中治疗所述疾病的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的权利要求1所述的化合物。17.权利要求16所述的方法，其中所述高增殖性疾病的特征为细胞在NAD(P)H:醌氧化还原酶1活性方面是有缺陷的。18.权利要求16所述的方法，其中所述高增殖性疾病为乳腺癌、卵巢癌、白血病、结肠癌或肺癌。19.权利要求18所述的方法，其中所述化合物具有式m-a所示结构<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>20.权利要求18所述的方法，其中所述化合物具有式III-d所示结构:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>21.—种药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物和可药用赋型剂。22.权利要求21所述的药物组合物，其中所述化合物具有式III-a所示结构23.权利要求21所述的药物组合物，其中所述化合物具有式III-d所示结构24.—种抑制耙标细胞增殖的方法，所述方法包括使所述靶标细胞与有效量的权利要求1所述的化合物接触。25.权利要求24所述的方法，其中所述靶标细胞在NAD(P)H:醌氧化还原酶1活性方面是有缺陷的。26.权利要求22所述的方法，其中所述靶标细胞是乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、结肠癌细胞或肺癌细胞。全文摘要如下制备大环内酰胺向产生格尔德霉素的微生物即吸水链霉菌去势变种NRRL3602的突变株中进料芳族氨基酸作为替换起子单元，其中已经将对用于生物合成天然起子单元3-氨基-5-羟基苯甲酸的酶进行编码的基因簇删除。文档编号C12P19/00GK101688227SQ200880009936公开日2010年3月31日申请日期2008年1月23日优先权日2007年1月26日发明者加里·阿什利,约翰·R·卡尼,贾尼丝·L·威,雨果·G·门泽拉申请人:科森生物科学公司