专利名称：一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法
技术领域：
本发明属材料及其制品的抑制霉菌效果的检测领域，特别是涉及一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法。
背景技术：
皮革是由动物皮经过一系列物理和化学的加工处理而转变成的一种固定耐用的物质，主要成分是交联蛋白质，在制革过程中使用的原辅材料中许多也包含蛋白质、糖类、脂肪等营养物质，因此皮革及其皮革制品中含有丰富的营养能被微生物所利用，只要外界温度、湿度条件适合，微生物就会生长繁殖，严重影响皮革及其制品的质量。影响皮革最主要的微生物是霉菌，产生霉变，因此皮革抗菌防霉是制革行业和皮革制品使用过程中不可忽视的，而对其抗霉菌性能的检测和评价既有利于生产厂家和管理部门对产品的监测，也可以
为消费者提供较好的保障。
目前，抑制霉菌效果的检测方法有很多，主要涉及塑料、织物、涂料、陶瓷等材料及其制品，但关于皮革材料及其制品抑制霉菌效果的实用的检测方法却未见有系统详细的报道。
美国化学家协会规定的方法包括l.样品；2.样品的处理；3.试验用沙土孢子混合物或水孢子混合悬液；4.操作和培养条件；5.评价与报告。其中在相对湿度85%下至少培养30天，检测周期较长，实用性较差。
另外，辜海彬等在"一种新型抗菌防霉剂在涂层上的应用研究"中应用奎因法测定鞋衬里革的抑霉菌性能包括l.霉菌孢子悬浮液的制备；2.步骤。其中在染菌皮片中央滴加涂布察氏培养基等步骤较烦琐，且在该实验条件下极易凝固，不易涂开；培养15天，实验周期较长；在样品上滴加富集营养的培养基与实际使用中皮革材料及其制品长霉条件相差较远。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法，该检测方法操作简单，检测周期较短，实用性强，只在样品表面接种霉菌孢子，避免了霉菌孢子太多引起的菌丝体疯长带来的影响，并且模拟了自然环境，可直观的分析霉菌的生长情况。
本发明的一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法，包括
3(1) 孢子悬液的制备
将8~15ml灭菌的0.85%NaCl溶液或PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)加入到一支培养5~7天的霉菌斜面培养物中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子，轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，调整孢子浓度在lX104 10X107cfu/ml，制成孢子悬浮液，或将各单种霉菌孢子悬浮液按等体积混合，制成混合霉菌孢子悬浮液；
(2) 试验样品的制备及操作
将皮革材料及其制品剪成(2. 5±0. 5)cmX (3. 8±0. 5)cm长方形或直径为2. 5cm的圆片，经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上，用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在皮革样品上，使菌液边沿大于样品边沿2. 5mm的距离，待其完全吸收，将样品在28'C土rC培养3 5天；
(3)评价和报告
直观评价报告在样品上真菌生长的程度，必要时可使用显微镜(X50)，按照以下生长情况分类
不长I级
生长low (生长覆盖面积)<10%II级
10%<medium (生长覆盖面积)<50%m级
50%<high (生长覆盖面积)<90%廳
宏观生长(生长覆盖面积)>90%无抑制霉菌性
所述步骤(1)中的霉菌为黑曲霉、黑根霉、产黄青霉、总状毛霉或白地霉；所述步骤(1)中的孢子悬液为含有非离子润湿剂的NaCl溶液的斜面培养物，其中非
离子润湿剂为可分散、悬浮微生物且保持水分作用的无毒表面活性剂Tween20或Tween80，
该非离子润湿剂在NaCl溶液中的质量百分含量为0.05% 0.2%;
所述步骤(2)中的培养基为马铃薯一葡萄糖琼脂培养基或马丁氏培养基。
有益效果
(1) 本发明的检测方法操作简单，检测周期较短，实用性强，有利于生产厂家和管理部门对产品的检测，也可以为消费者提供较好的保障；
(2) 该检测方法只在样品表面接种霉菌孢子，避免了霉菌孢子太多引起的菌丝体疯长带
4来的影响，并且模拟了自然环境，可直观的分析霉菌的生长情况。
图1为实施例1的霉菌生长情况照片图；图2为实施例2的霉菌生长情况照片图；图3为实施例3的霉菌生长情况照片图；图4为实施例4的霉菌生长情况照片图；图5为实施例5的霉菌生长情况照片图6为实施例6的霉菌生长情况照片图。
具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限
定的范围。
实施例1
(1) 孢子悬液的制备
将10ml灭菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培养5天的产黄青霉斜面中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子。轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，将孢子浓度调整到lX106 10X106cfu/ml。
(2) 试验样品的制备及操作
样品剪成(2. 5±0. 5) cmX (3. 8±0. 5) cm;
试验样品经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上。用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在样品上，使菌液边沿与样品边沿的距离大于2.5mm，待其完全吸收，将样品在28°C 土1。C培养5天。 、
(3) 结果如下图
结果表明经过防霉处理的皮革，无霉菌生成，而对照样显示宏观生长覆盖面积>90%，说明无抑制产黄青霉效果。
实施例2
(1)孢子悬液的制备
将10ml灭菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培养5天的黑根霉斜面中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子。轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，将孢子浓度调整到lXl06 10Xl06cfu/ml。
(2) 试验样品的制备及操作样品剪成(2. 5±0. 5) cmX (3. 8±0. 5) cm;
试验样品经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上。用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在样品上，使菌液边沿与样品边沿的距离大于2.5mm，待其完全吸收，将样品在28。C土rC培养5天。
(3) 结果如下图
结果表明经过防霉处理的皮革，无霉菌生成，而对照样显示宏观生长覆盖面积〉90%，说明无抑制黑根霉效果。
实施例3
(1) 孢子悬液的制备
分别将10ml灭菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培养5天的产黄青霉、黑曲霉斜面中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子。轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，将各单种霉菌孢子悬浮液按等体积混合，制成混合霉菌孢子悬浮液，将混合孢子液浓度调整到lX106 10X106CfU/mI。
(2) 试验样品的制备及操作样品剪成(2. 5±0. 5)cmX (3.8±0. 5) cm;
试验样品经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上。用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在样品上，使菌液边沿与样品边沿的距离大于2.5mra，待其完全吸收，将样品在28°C 士rC培养3天。
(3) 结果如下图-
结果表明经过防霉处理的皮革，无霉菌生成，而对照样显示宏观生长覆盖面积约18%,说明3天时抑制产黄青霉、黑曲霉等级为in级。
实施例4
(1)孢子悬液的制备
分别将10ml灭菌的含有0.1%TWeen80的0.85%NaCl溶液加入到一支培养5天的产黄青霉、黑曲霉斜面中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子。轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，将各单种霉菌孢子悬浮液按等体积混合，制成混合霉菌孢子悬浮液，将混合孢子液浓度调整到lX106 10X10ecfu/ml。
(2) 试验样品的制备及操作样品剪成(2.5土0. 5)cmX (3.8±0. 5) cm;
试验样品经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上。用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在样品上，使菌液边沿与样品边沿的距离大于2.5mm，待其完全吸收，将样品在28°C ± 1。C培养4天。
(3) 结果如下图
结果表明经过防霉处理的皮革，无霉菌生成，而对照样显示宏观生长覆盖面积约为75%，说明4天时无抑制产黄青霉、黑曲霉等级为IV级。
实施例5
(1) 孢子悬液的制备
分别将10ml灭菌的含有0.1%Tween80的0.85%NaCl溶液加入到一支培养5天的产黄青霉、黑曲霉斜面中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子。轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，将各单种霉菌孢子悬浮液按等体积混合，制成混合霉菌孢子悬浮液，将混合孢子液浓度调整到lX106 10X106cfu/ml。
(2) 试验样品的制备及操作样品剪成(2. 5±0. 5)craX (3. 8±0. 5)cm;
试验样品经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上。用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在样品上，使菌液边沿与样品边沿的距离大于2.5咖，待其完全吸收，将样品在28。C土rC培养5天。
(3) 结果如下图
结果表明经过防霉处理的皮革，无霉菌生成，而对照样显示宏观生长覆盖面积>90%,说明无抑制产黄青霉和黑曲霉效果。
实施例6
(1)孢子悬液的制备
将10ml灭菌的含有0.P/。Tween80的PBS缓冲液溶液加入到一支培养5天的产黄青霉斜面中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子。轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，将孢子浓度调整到lX106 10X].06CfU/ml。
(2) 试验样品的制备及操作样品剪成(2.5士0.5)cmX (3.8土0.5)cm;
试验样品经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上。用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在样品上，使菌液边沿与样品边沿的距离大于2.5mm，待其完全吸收，将样品在28。C土rC培养5天。
(3) 结果如下图
结果表明经过防霉处理的皮革，无霉菌生成，而对照样显示宏观生长覆盖面积约为75%，说明5天时抑制产黄青霉等级为IV级。
8
权利要求
1. 一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法，包括(1)孢子悬液的制备将8～15ml灭菌的0.85％NaCl溶液或磷酸盐缓冲液加入到一支培养5～7天的霉菌斜面培养物中，用接种环慢慢地从培养物表面刮离孢子，轻轻地振荡液体分散孢子而未分离菌丝体，并且慢慢地将霉菌悬液倒入装有少量玻璃珠的烧瓶中，充分振荡孢子悬液，然后用灭菌的单层棉布或玻璃纤维棉过滤，调整孢子浓度在1×104～10×107cfu/ml，制成孢子悬浮液，或将各单种霉菌孢子悬浮液按等体积混合，制成混合霉菌孢子悬浮液；(2)试验样品的制备及操作将皮革材料及其制品剪成2.5±0.5cm×3.8±0.5cm长方形或直径为2.5cm的圆片，经紫外线照射灭菌后，放在倒入平皿中的培养基上，用移液器或无菌吸管取0.2ml的孢子悬液或混合孢子悬浮液均匀地滴加在皮革样品上，使菌液边沿大于样品边沿2.5mm的距离，待其完全吸收，将样品在28℃±1℃培养3～5天；(3)评价和报告直观评价报告在样品上真菌生长的程度，必要时可使用显微镜×50进行镜检。
2. 根据权利要求1所述的一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法，其特征在 于所述步骤(1)中的霉菌为黑曲霉、黑根霉、产黄青霉、总状毛霉或白地霉。
3. 根据权利要求1所述的一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法，其特征在于所述步骤(2)中的培养基为马铃薯一葡萄糖琼脂培养基或马丁氏培养基。
全文摘要
本发明涉及一种皮革材料及其制品的抑制霉菌效果的检测方法，包括(1)将NaCl溶液或PBS缓冲液加入到霉菌斜面培养物中，调整孢子悬液浓度在1×10<sup>4</sup>～10×10<sup>7</sup>cfu/ml，制成霉菌孢子悬液，或将各单种霉菌孢子悬浮液按等体积混合，制成混合霉菌孢子悬浮液；(2)将皮革材料及其制品经紫外线照射灭菌后，放在培养基上，将孢子悬液滴加在皮革样品上，于28℃±1℃培养3～5天；(3)直观评价在样品上真菌生长的程度，必要时可使用显微镜×50进行镜检。该检测方法操作简单，检测周期较短，实用性强，只在样品表面接种霉菌孢子，避免了霉菌孢子太多引起的菌丝体疯长带来的影响，并模拟自然环境，分析霉菌的生长情况。
文档编号C12R1/82GK101497916SQ20091004580
公开日2009年8月5日 申请日期2009年1月23日 优先权日2009年1月23日
发明者鹃 杜, 汪姣宁, 艳 罗, 邓云霞, 毅 钟 申请人:东华大学