专利名称：Nlp在乳腺癌和肺癌中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及Nlp在哺乳动物包括人乳腺癌和肺癌中的用途，特别地，本发明涉及 Nlp在制备诊断哺乳动物包括人乳腺癌和肺癌试剂中的用途、作为哺乳动物包括人乳腺癌 和肺癌药物靶点在制备治疗哺乳动物包括人乳腺癌和肺癌药物中的用途、在制备哺乳动物 乳腺癌和肺癌动物模型中的用途及所述动物模型的制备方法。
背景技术：
Ninein样蛋白(Ninein like protein，Wp)又称之为BRCAl相关中心体蛋白 (BRCA1 associated centrosomal protein，Bacp)。通过采用酵母双杂交实验，筛选得到一 个新的与BRCAl相互作用的蛋白并命名为Bacp (Entrez Gene 22981 ；UniProt :Q9Y216)，因 为从蛋白质结构看，Bacp与微管锚定蛋白ninein存在高度同源性，所以又被称为Nip。Nlp 是KIAA0980编码的，分子量为156kDa的中心体蛋白。现有技术已经对Nlp进行了生物信息学分析，结果显示，人Nlp基因位于 20pll. 22-pll. 1，包含 23个外显子，其mRNA为 4979个碱基(NCBI 登录号NM_025176. 4, SEQ ID NO 1), cDNA为4149个碱基，编码蛋白为1382个氨基酸(NCBI登录号NP_079452. 3，SEQ ID NO :2)，理论分子量为155，910Da。小鼠Nlp基因的mRNA为5104个碱基(NCBI登录号 NM_207204. 2)，编码蛋白为1394个氨基酸(NCBI登录号NP_997087. 2) Nlp蛋白与BRCAl之 间存在相互作用，而且还发现两者之间在中心体上存在共定位，并且受到正常细胞内BRCAl 的调节，内源性BRCAl突变或沉默都将导致Nlp从中心体上脱落并促进其降解[JinS.， Gao H. , et al. BRCAl Interaction of Centrosomal Protein Nlp Is Required for Successful Mitotic Progression[J]. J. Biol. Chem. ,2009, 284(34) :22970_22977.]。由 于Nlp是一个新近发现的蛋白，因此对其功能的研究并不是很充分。Nlp是一类重要的Y-微管蛋白结合蛋白，Y-微管蛋白与Nlp的相互作用为 Y-微管蛋白的中心体定位所必需，从而促进了微管在中心体的生发和锚定[Casenghi M.， Meraldi P.，Weinhart U.，et al. Polo—like kinase 1 regulates Nip, a centrosome protein involved in microtubule nucIeation[J]. Dev. Cell, 2003，5:113-125·； Mogensen Μ. Μ.，Malik Α.，Piel Μ.，et al. Microtubule minus-end anchorage at centrosomal and non-centrosomal sites :the role of ninein [J]. J. Cell Sci.,2000, 113 :3013-3023. ；Rapley J.，Baxter J. E.，Blot J.，et al. Coordinate regulation of the mother centriole component nip by nek2 and plkl protein kinases[J]. Mol. Cell. Biol.，2005，25 :1309-1324.]。但 是，Martina等研究表明，Nlp在中心体的定位是随 着细胞周期的变化而动态变化的在有丝分裂间期，Nlp通过与动力蛋白-动力蛋白激活蛋 白马达(dynein-dynactin motor)复合体的相互作用而转运至中心体，参与微管的生发和 锚定；在细胞进入有丝分裂期后，Nlp受到其它蛋白的调节作用，其与动力蛋白-动力蛋白 激活蛋白马达复合体的相互作用被抑制，Nlp从中心体上脱落而在胞质中被重新分配。因 此，Nlp在中心体的定位被认为是中心体成熟所必需，其在中心体位置的动态改变是纺锤体微管生发的必要条件。Martina等的研究还发现，Nlp还与高尔基体的功能有一定的关系。 当细胞内Nlp高表达时，能够导致高尔基体的破裂和弥散。由于高尔基体的功能与溶酶体 和膜泡的分泌相关，这一实验现象也提示Nlp与膜泡的转运可能存在一定的联系[Martina C. , Francis Α. B. , Nigg Ε. Α. Phosphorylation of Nlp by Plkl negatively regulates its dynein-dynactin-dependent targeting to the centrosome [J]. J.Cell Sci., 2005，108 :5101-5108.]。Wang等的实验证明，Nlp的蛋白水平在细胞中呈周期依赖性，并且其降解是通 过泛素-蛋白酶体途径进行的。该降解途径主要包括蛋白的泛素化和后期促进复合体 (Anaphase Promoting Complex/cyclosome，APC/C)介导的蛋白水解两个阶段。Wang 等 的实验发现，Nlp可以与APC/C之间发生物理的相互作用，从而最终促进Nlp在特定细胞 周期内的降角军[Wang Y.，Zhan Q. M. Cell cycle-dependent expression of centrosomal ninein—like protein in human cells is required by the anaphase—promoting complex [J] · J. Biol. Chem.，2007，282 (24) :17712_17719·]。Nlp的另一个重要的蛋白修饰途径是磷酸化作用。到目前为止，报道较多的Wp的 磷酸化激酶主要包括PLKl和Nek2，这两个磷酸化激酶对Wp的磷酸化作用所引起的功能调 控主要集中在Wp与中心体的关系上。在有丝分裂的特定时相，活化的激酶对Wp产生磷酸 化作用，破坏Wp与中心体以及Y-微管蛋白的相互作用，引起Nlp从中心体脱离，允许有 丝分裂装置-纺锤体的构建[Martina C.，Francis A. B.，Nigg Ε. A. Phosphorylation of Nlp by Plkl negatively regulates its dyne in-dynact in-dependent targeting to the centrosome[J]. J. Cell Sci. ,2005,108 5101-5108. ；Martina C. , Patrick Μ. , Ulrike W.，et al. Polo-like kinase lregulates Nip, a centrosome protein involved in microtubule nucleation[J]. Dev. Cell,2003, 5 :113_125. ；Fry A. M.，Mayor T.，Meraldi P.,et al. C-Napl,a novel centrosomal coiled—coil protein and candidate substrate of the cell cycle-regulated protein kinase Nek2[J]. J. Cell Biol.，1998，141 1563-1574. ；Fry A. M.，Meraldi P.，Nigg Ε. A. Acentrosomal function for the human Nek2 protein kinase，a member of the NIMA family of cell cycle regulators[J]. EMBO J.，1998，17 :470_481.]。据文献报道这两个磷酸化激酶对Wp的磷酸化作用还具 有时序性和协同性，说明它们对Wp蛋白功能的调控具有复杂性和系统性[Martina C.， Francis Α. B.，Nigg Ε.A. Phosphorylation of Nlp by Plkl negatively regulates its dynein-dynactin-dependent targeting to the centrosome[J]. J. Cell Sci·，2005，108 : 5101-5108. ；Martina C.，Patrick M.，Ulrike W.，et al. Polo-like kinase 1 regulates Nip, a centrosome protein involved in microtubule nucleation[J]. Dev. Cell,2003, 5 :113-125. ；Fry A. M.，Mayor T.，Meraldi P.，et al. C-Napl, a novel centrosomal coiled-coil protein and candidate substrate of the cell cycle-regulated protein kinase Nek2 [J]. J. Cell Biol.，1998，141 :1563_1574. ； Fry A.M. ,Meraldi P. ,Nigg E. A. A centrosomal function for the human Nek2protein kinase， a member of the NIMA family of cell cycle regulators [J]. EMBO J.，1998，17 :470_481·]。目前，Nlp 的调控机 制研究很有限，本发明发现，Nlp在体外还能被其它多种蛋白激酶磷酸化，如CdC2/CyClin Bi，Aurora-A和Aurora-B等，这些激酶构成复杂的Nlp磷酸化调控体系，并通过对Wp的功能调控，参与到细胞周期调控过程之中，在细胞周期过程中发挥重要的调控功能。Qu等的研究报道证实，在人卵巢癌中具有Wp高表达的现象[Qu D.，Qu H.，FuM.， et al. Increased expression of Nip, a potential oncogene in ovarian cancer, and its implication in carcinogenesis[J]. Gynecol. Oncol. ,2008,110(2) :230_236.]。然 而，截至目前，尚未有人乳腺癌和肺癌中Nlp表达情况及其对人乳腺癌和肺癌作用情况的 报道。乳腺癌和肺癌是当前危害人类健康的两类重要恶性肿瘤，虽然已经对其治疗进行了 大量研究，但截至目前仍未有令人满意的治疗效果。鉴于Nlp在细胞周期调控中可能具有 的重要作用，如果能证明Nlp也在乳腺癌和肺癌中高表达，将会对乳腺癌和肺癌的诊断和 治疗产生积极的作用。
发明内容
本发明的目的是研究Nlp在乳腺癌和肺癌中的表达情况、探究Nlp在制备诊断哺 乳动物包括人乳腺癌和肺癌试剂中的用途并探究Nlp在制作哺乳动物乳腺癌和肺癌动物 模型中的用途。因此，本发明的第一方面涉及Nlp基因在制备诊断哺乳动物包括人的乳腺癌和肺 癌试剂中的用途，优选地，所述试剂是用于Western Blot或免疫组化的对Nlp特异的抗体、 用于RT-PCR或实时PCR的对Nlp特异的引物或用于荧光原位杂交的对Nlp特异的探针。本发明的第二方面涉及Nlp基因作为哺乳动物包括人的乳腺癌和肺癌药物靶点 在制备治疗哺乳动物包括人的乳腺癌和肺癌药物中的用途。本发明的第三方面涉及Nlp基因在制作哺乳动物乳腺癌和肺癌动物模型中的用 途，优选地，所述哺乳动物为恶性肿瘤研究领域常用的啮齿类动物或非人灵长类动物，更优 选地，所述啮齿类动物为大鼠或小鼠，所述非人灵长类动物为松鼠猴、小猿、短尾猿、猩猩、 黑猩猩或狐猴。本发明的第四方面涉及高表达Nlp的哺乳动物模型的制备方法，其包括下述步 骤a)利用哺乳动物高表达载体制备高表达Nlp的重组质粒；b)将合适量的步骤a)的重组质粒用常规转染方法转染哺乳动物细胞；c)用相应筛选压力筛选表达Nlp的阳性克隆；d)用步骤C)的阳性克隆注射哺乳动物，优选地，所述哺乳动物高表达载体是pEGFP-C3、、pcDNA3. 1、pCMV_MCS、pEGFP-Cl、 pGL3-Basic, pTAL-Luc或pGFP_N2，所述转染方法是电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙 共沉淀法、脂质体转染方法、阳离子物质介导的转染或各种病毒介导的转染技术。优选地， 所述哺乳动物是恶性肿瘤研究领域常用的啮齿类动物或非人灵长类动物，更优选地，所述 啮齿类动物为大鼠或小鼠，所述非人灵长类动物为松鼠猴、小猿、短尾猿、猩猩、黑猩猩或狐 猴。换言之，本发明通过转基因小鼠实验发现，当小鼠中Nlp高表达时，其自发肿瘤的 机率会大幅度升高，并且对外界致瘤药物的反应性也大大提高。本发明构建了高表达Nlp 的重组质粒pEGFP-C3-Nlp全长表达质粒，用其转染NIH3T3细胞后，筛选得到了高表达Nlp 的阳性克隆，细胞生长曲线实验结果表明，Nlp对体外细胞生长有促进作用，软琼脂群落形成实验结果表明转染并高表达Nlp的细胞都能在软琼脂上形成肉眼可见的克隆，而转染空 质粒的细胞不能在软琼脂上形成肉眼可见的克隆，将高表达Nlp的阳性克隆接种裸鼠后在 接种部位均形成肿瘤，而接种空载体的没有形成肿瘤。对分离获得的肿瘤进行分析，发现肿 瘤中都存在Nlp的高表达。上述结果表明，Nlp的高表达和正常细胞的恶性肿瘤化存在直接 的关系，直接促成了正常细胞的癌变。本发明继而采用对Nlp特异的抗体和引物检测了乳 腺癌和肺癌样本及相应的癌旁组织中Nlp的表达情况，结果表明，乳腺癌和肺癌组织中Nlp 高表达，而癌旁组织中Nlp表达呈阴性。即，本发明证实了 Nlp的高表达促进了正常细胞和 组织的恶性肿瘤化，而Western Bot, RT PCR、实时PCR和荧光原位杂交试验结果证实乳腺 病和肺癌组织中Nlp也相应的高表达。因此，Nlp可作为检测乳腺癌和肺癌的生 物靶标，用 于诊断诊断乳腺癌和肺癌，同时，Nlp也可作为乳腺癌和肺癌药物治疗的靶点，通过抑制或 沉默Nlp的表达实现乳腺癌和肺癌的治疗。另外，利用Nlp也可制备高表达Nlp的动物模 型并继而用于乳腺癌和肺癌的研究。本发明通过建模证实了 Nlp的致癌作用并证实了乳腺 癌和肺癌中高表达Nlp，将为乳腺癌和肺癌的研究、诊断和治疗提供一条有益的新方案。
图1 显示了高表达Nlp NIH3T3细胞系的构建及鉴定。本发明构建了 pEGFP-C3-Nlp全长表达质粒(为Nlp真核表达质粒，将人Nlp全长cDNA定向克隆至 PEGFP-C3的Sal I和Sma I酶切位点)，用该质粒和相应的pEGFP_C3空载体质粒分别 转染细胞系NIH3T3，建立了 Nlp稳定高表达细胞株及空载对照细胞株，提取细胞总蛋白 质，用Nlp特异性抗体进行western blotting检测，对Nlp的表达在蛋白水平做出鉴定。 Endogenous Bacp代表细胞内源性表达的Bacp，EGFP-Bacp代表质粒导入细胞后所表达的 Bacp，Actin是用来作为对照的内参。图中条带的深浅代表了蛋白表达水平的高低。因此 本发明获得了 NIH3T3 Nlp 高表达细胞株 NIH3T3-53, NIH3T3-58 和 NIH3T3-78。图 2 显示了生长曲线绘制。将 2X104 个 NIH3T3-EGFP，NIH3T3，NIH3T3-53， NIH3T3-58和ΝΙΗ3Τ3_78Ν1ρ细胞接种于60mm培养皿中，培养条件DMEM培养基，10%进口 胎牛血清，37°C，5%C02培养。在其后的每24小时消化细胞进行计数。以细胞培养时间为 横坐标，细胞数为纵坐标，绘制生长曲线。如图2所示，与野生型细胞和空载细胞相比，Nlp 细胞曲线斜率明显增大，表明细胞的生长速度加快，表明Nlp对体外细胞生长有促进作用。图3 软琼脂集落形成实验。消化细胞计数，50000个/ml，置37度孵箱中。下层 将IOml 2*DMEM混合IOml 1. 2% agar，混勻后立即铺皿，每个平皿加lml，共18个平皿，备 用。每种细胞的上层-.2. 5ml 2*DMEM完全培养基与0. 7% agar2. 5ml混勻，取50ul细胞悬液 加入，混勻后立即接种于涂有底层琼脂的平皿中，每个平皿加1ml，相当于500个细胞/皿， 至净化台中，待冷凝后，加入Iml 1*DMEM完全培养基防止干，放入饭盒中，放入培养箱中， 培养3周观察集落形成情况。转染带绿色荧光蛋白标签的空载质粒的OTH3T3细胞在软琼 脂中并不形成克隆，然而，高表达Nlp的NIH3T3-53，NIH3T3-58和NIH3T3-78都能在软琼脂 上形成肉眼可见的克隆。图4 取4周龄Balb/c-Nu雌性裸鼠(中国医学科学院肿瘤所动物中心提供并饲 养)32只，随机分为三个Nlp高表达实验组和一个空载体对照组，每组8只。SPF裸鼠实验 室专人饲养。计数培养细胞，取200μ 1即2Χ IO6个细胞接种于每只裸鼠右后肢皮下，观察瘤细胞接种后生长情况。结果见图4，接种空载体的裸鼠没有长肿瘤，而接种了三种高表达 Nlp NIH3T3-53, NIH3T3-58和NIH3T3-78的裸鼠都在接种部位出现了肿瘤，箭头所指即为 肿瘤的位置。图5 接种12周后，断颈处死，照相，取出瘤体组织，进行10%甲醛固定，常规石蜡 包埋制作5 μ m厚的连续切片，分别作H. E.染色，Vimentin染色以及DAB染色用作病理诊 断。如图5所示，H. E.染色，Vimentin染色(a，b和c，d)显示肿瘤组织成纤维样结构，细 胞成梭形，DAB染色(e，f)细胞染色为强阳性，细胞核、浆均有着色，涂片中可见一些细胞中 存在有棕色颗粒即为Nlp存在部位，实验中视为阳性。这表明肿瘤组织来源于成纤维细胞， 并且是单个细胞克隆，同时Nlp高表达，这些特征同NIH 3Τ3Ν1ρ稳定高表达细胞完全对应。图6 常规方法提取裸鼠肿瘤组织总RNA，使用人特异和小鼠特异Nlp序列引物进 行PCR扩增，其中GAPDH作为内参照。PCR反应产物10 μ 1上样于1. 5%琼脂糖凝胶电泳 分析。人特异Nlp特异片段大小为424bp，小鼠特异Nlp特异片段大小为517bp，GAPDH为 299bp。其中，MEF为鼠源参照，HeLa为人源参照。如图6所示，条带的深浅表示mRNA的表 达水平，四个检测的肿瘤组织中均有鼠源和人源特异片段的扩增。图7 =Western blot检测30例肺癌临床标本及其与之对应的癌旁组织Nlp蛋白的 表达图，其中现有技术的方法分别提取肺癌临床标本及癌旁组织总蛋白，利用Nlp特异性 抗体采用Western blot方法检测Nlp蛋白的表达水平，结果显示其中12例肿瘤组织中的 Nlp表达水平明显高于与之对应的癌旁组织，图7是其中有代表性的5例，图中条带深浅代 表蛋白表达水平的高低。具体方法同图1。图8 =RT-PCR检测30例肺癌临床标本及其与之对应的癌旁组织Nlp mRNA表达水 平，其中现有技术的方法分别提取肺癌临床标本及癌旁组织总RNA，采用RT-PCR方法检测 Nlp mRNA的表达水平，结果显示其中14例肿瘤组织中的NlpmRNA表达水平明显高于与之对 应的癌旁组织，图8是其中有代表性的5例，图中条带深浅代表mRNA表达水平的高低。具 体方法同图6。图9 =Real time PCR检测15例肺癌临床标本及其与之对应的癌旁组织NlpDNA 水平，其中现有技术的方法分别提取肺癌临床标本及癌旁组织基因组DNA，采用Real time PCR方法检测Nlp DNA水平，结果如图9所示，白色表示正常组织，黑色代表肿瘤组织，柱形 图的高低表示扩增的幅度。其中有5例检测出Nlp基因在基因组水平存在扩增，其在肿瘤 组织中的DNA水平比癌旁正常组织高出2倍以上。图10 荧光原位杂交检测Nlp基因在不同细胞中的扩增情况，其中当Nlp信号数 目/着丝粒信号数目> 2时，即图中的红色荧光，可认为Nlp基因存在基因组水平的扩增。 图中293是人胚肾细胞系；MCF-7是乳腺癌细胞系；A549是肺癌细胞系；后两例是来自于肺 癌组织的细胞。可见在MCF-7，A549和两例肺癌组织中均出现了不同程度的扩增。图11 乳腺癌组织中Nlp蛋白表达的免疫组织化学检测结果，其中，采用免疫组织 化学的方法，使用DAB染色检测乳腺癌组织(图c和d)与正常癌旁组织(图a和b)中Nlp 的表达情况，图中棕色颗粒即为Nlp存在的部位，实验中视为阳性(如果使用黑白件，棕色 部分呈深色)。图12 肺癌组织中Nlp蛋白表达的免疫组织化学检测结果，其中，采用免疫组织化 学的方法，使用DAB染色检测肺癌组织(图c和d)与正常癌旁组织(图a和b)中Nlp的表达情况，图中棕色颗粒即为Nlp存在的部位，实验中视为阳性(如果使用黑白件，棕色部 分呈深色)。图13 以表格的形式对乳腺癌和肺癌的免疫组织化学检测结果的汇总，本发明利 用免疫组化技术对90例乳腺癌的临床标本和15例正常乳腺组织的临床标本以及229例肺 癌的临床标本和20例正常支气管上皮标本中的Nlp表达水平进行了检测。
具体实施例方式下面将通过下述非限制性实施例进一步说明本发明，本领域技术人员公知，在不 背离本发明精神的情况下，可以对本发明做出许多修改，这样的修改也落入本发明的范围。下述实验方法如无特别说明，均为常规方法，所述试剂如无特别说明，均为从商业 公司购买。
实施例材料与方法质粒pEGFP-C3 真核细胞EGFP表达载体，购自Clonetech。pEGFP-C3-Nlp质粒为Nlp真核表达质粒，将人Nlp全长cDNA定向克隆至 PEGFP-C3的Sal I和Sma I酶切位点。细胞株小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞，购自ATCC。培养条件DMEM培养基，10%进口胎牛血清，37°C，5% CO2培养。实验动物裸鼠品种Balb/c-Nu，4周龄，雌性，购自中国医学科学院实验动物研究所。引物本发明所用引物均由赛百胜公司合成。人Nlp上游引物5，-ggccattcaggaagagc gagca-3，(SEQ ID NO :3)，下游引物5，-ctgtgcaycgtgagtactttctgca-3，(SEQ ID NO 4), 退火温度是61°C，扩增片断长度是424bp ；Mouse Nlp上游引物5，-agctgcaggctgtgatgag tga-3，(SEQ ID NO :5)，下游引物5，-agcatctgtggatgaacaggcaa-3，(SEQ ID N0:6)，退火 温度是 55°C，扩增片断长度是 517bp ；GAPDH 上游引物5，-gctgagaacgggaagcttgt-3，(SEQ ID NO :7)，下游引物5，-gccaggggtgctaagcagtt-3，(SEQ ID NO :8)，退火温度是 55°C，扩 增片断长度是299bp。抗体
权利要求
1.Nlp基因在制备诊断哺乳动物包括人的乳腺癌和肺癌试剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述试剂是用于WesternBlot或免疫组化 的对Nlp特异的抗体、用于RT-PCR或实时PCR的对Nlp特异的引物或用于荧光原位杂交的 对Nlp特异的探针。
3.Nlp基因作为哺乳动物包括人的乳腺癌和肺癌药物靶点在制备治疗哺乳动物包括人 的乳腺癌和肺癌药物中的用途。
4.Nlp基因在制作哺乳动物乳腺癌和肺癌动物模型中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述哺乳动物为恶性肿瘤研究领域常用的 啮齿类动物或非人灵长类动物。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述啮齿类动物为大鼠或小鼠，所述非人 灵长类动物为松鼠猴、小猿、短尾猿、猩猩、黑猩猩或狐猴。
7.高表达Nlp的哺乳动物模型的制备方法，其包括下述步骤a)利用哺乳动物高表达载体制备高表达Nlp的重组质粒；b)将合适量的步骤a)的重组质粒用常规转染方法转染哺乳动物细胞；c)用相应筛选压力筛选表达Nlp的阳性克隆；d)用步骤c)的阳性克隆注射哺乳动物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述哺乳动物高表达载体是 PEGFP-C3、pcDNA3. 1、pCMV-MCS、pEGFP-Cl、pGL3_Basic、pTAL-Luc 或 pGFP_N2，所述转染方 法是电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、阳离子物质介导的转 染或各种病毒介导的转染技术。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于所述哺乳动物是恶性肿瘤研究领域常 用的啮齿类动物或非人灵长类动物。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于所述啮齿类动物为大鼠或小鼠，所述 非人灵长类动物为松鼠猴、小猿、短尾猿、猩猩、黑猩猩或狐猴。
全文摘要
本发明涉及Nlp在乳腺癌和肺癌中的用途。本发明发现良性细胞在转染并高表达Nlp后变为恶性肿瘤细胞，在将所述恶性肿瘤细胞接种裸鼠后在接种部位形成恶性肿瘤，实验表明乳腺癌和肺癌中Nlp均高表达。因此，本发明涉及Nlp在制备诊断哺乳动物包括人乳腺癌和肺癌试剂中的用途、作为哺乳动物包括人乳腺癌和肺癌药物靶点在制备治疗哺乳动物包括人乳腺癌和肺癌药物中的用途、在制备哺乳动物乳腺癌和肺癌动物模型中的用途及制备所述动物模型的方法。本发明为乳腺癌和肺癌的诊断和治疗提供了新的途径。
文档编号C12N15/85GK102041302SQ20091020566
公开日2011年5月4日 申请日期2009年10月16日 优先权日2009年10月16日
发明者刘蓉, 宋咏梅, 汪洋, 詹启敏, 贾立立, 邵淑娟 申请人:中国医学科学院肿瘤研究所