专利名称：一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法
技术领域：
本发明属于一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法。
背景技术：
随着我国与国际社会的接轨，人们的生活节奏变得越来越快，大家都处于忙碌之 中学生们几乎每天都被繁重的学习任务压得筋疲力尽，中青年人为了工作和生活而疲于 奔命。人们只有迅速消除疲劳，尽快恢复体能，才能完成未来艰辛的工作和繁重的学习任 务。服食具有抗疲劳作用的产品是实现上述目的的一个有效办法。目前，国内很多学者进行过肽的抗疲劳效果试验。如《食品科技》2010年第二期 报道，广东海洋大学吉宏武教授等将近江牡蛎肉浆调至PH7.0，酶与底物浓度比为1 1，水 解温度53°C，酶解5. 7小时，加酶量997U/g肉，水解完成后灭酶，离心取清液，喷雾干燥，得 到白色的水解物干粉。经昆明种雄性小白鼠的抗疲劳效果试验，结果发现，水解物中剂量组 (4g/Kg. d)和高剂量组(8g/Kg. d)可明显延长小白鼠的负重游泳实验时间，显著降低小白 鼠运动后的血清尿素氮水平，并且有助于肝糖原储备能力的提高。根据我国抗疲劳保健食 品的功能评价程序和检验方法，若1项以上(含1项)运动实验和2项以上(含2项)生 化指标为阳性，即可判断该受试物具有抗疲劳作用。故认为中剂量组和高剂量组的近江牡 蛎肉水解物具有抗疲劳作用[1]。《东北农业大学学报》2005年第四期报道，赵玉红等将鲢鱼副产物(鱼头、鱼皮、鱼 骨)用水清洗，于120°C高压灭菌器中蒸煮30分钟，高速组织捣碎机勻浆，恒温干燥后脱脂， 取适量加适量水调成溶液，用碱性蛋白酶Alcalase水解，得到分子量在IXlO2 105ku范 围分子的鱼肽。经小白鼠试验证明，该鱼肽具有良好的抗疲劳作用[2]。虽然国内学者进行了大量抗疲劳方面的基础研究，但是到目前为止，尚无关于长 牡蛎肉抗疲劳功能营养液制备方法的报道。牡蛎是一种营养价值很高的珍贵海产品，是中国最重要、产量最大的海产经济贝 类。长牡蛎(Ostrea gigas Thunberg)是牡蛎的主要品种，是南方沿海主要养殖品种之一， 近年我国人工养殖迅速发展，产量迅速增加。长牡蛎肉富含蛋白质及鲜味物质，味道鲜美， 深受人们喜爱，除了鲜吃之外，主要加工成干品及制成蚝油销售。大力开展长牡蛎肉的深加 工有利于我国牡蛎人工养殖业发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法，使长牡蛎的经 济效益得到明显的提高。本发明将长牡蛎肉打成浆状后，经乙酸乙酯脱脂去腥味，脱脂去腥味的肉浆加水 搅拌均勻，加热，先按长牡蛎肉浆质量加中性蛋白酶酶解，酶解完成后灭活中性蛋白酶；再 按肉浆质量加木瓜蛋白酶酶解，酶解完成后灭活木瓜蛋白酶；然后按肉浆质量加菠萝蛋白 酶酶解，酶解完成之后灭活菠萝蛋白酶，冷却至室温。离心收集水溶液，滤液真空浓缩，用无
3菌水稀释至合适，加蔗糖、柠檬酸、食盐混合均勻制成产品。所述的长牡蛎肉浆脱脂去腥是按肉浆的体积加入4倍量的乙酸乙酯300r/min搅 拌120min，去除其中的脂类腥味物质以提高产品的品质，4800r/min离心30min去乙酸乙酯 后，得到除腥味的长牡蛎肉浆。所述的酶解是，将经乙酸乙酯脱脂去腥的长牡蛎肉浆按质量加5倍水搅拌成悬浮 后加热至55°C恒温，按每克肉浆加3000活力单位酶的比例加入中性蛋白酶，300r/min连续 搅拌ISOmin后，迅速升温至100°C并保持IOmin以灭活中性蛋白酶，得酶解液1。然后冷却 至55°C，恒温。再按前面肉浆的质量，每克加3000活力单位酶的比例加木瓜蛋白酶入酶解 液1中，300r/min连续搅拌180min后，迅速升温至100°C并保持IOmin灭活木瓜蛋白酶，得 酶解液2。然后冷却至50°C，恒温。再按前面肉浆的质量，每克加12000活力单位酶的比 例加菠萝蛋白酶入酶解液2中，300r/min连续搅拌^^二后，迅速升温至保持 IOmin灭活菠萝蛋白酶，得酶解液3。然后冷却至室温。与现有的技术相比，本发明的突出实质性特点和显著的进步是1、以长牡蛎肉为主要原料批量生产抗疲劳功能营养液，生产工艺简单，周期短，产 量大，成本低廉，经济效益高，产品抗疲劳效果显著，味道纯正。2、采用乙酸乙酯处理长牡蛎肉浆，能除去其中的脂类物质，腥味显著减少。3、采用三酶复合水解能显著提高长牡蛎肉蛋白质的水解度，产生更多的氨基酸和 小肽，使产品品质显著提高。4、长牡蛎肉抗疲劳功能营养液用昆明种小白鼠进行抗疲劳效果试验，试验数据的 平均值及标准差用EXcel2003软件处理，结果用Gc土 S)表示；组间比较用t检验，数据用 Origan v6. 1软件处理。经动物抗疲劳试验结果表明，与对照组相比，高剂量组(9g -Kg. cf1) 的长牡蛎肉抗疲劳功能营养液能明显延长昆明种小白鼠负重游泳及低压耐缺氧时间，血乳 酸、血清尿素氮含量明显降低，肝糖原含量明显增加，红细胞(Hb)及肝脏超氧化物歧化酶 (SOD)活性明显增加。试验结果如下表1 5。表1长牡蛎肉抗疲劳功能营养液对小鼠游泳时间的影响
组别动物数 剂量游泳时间(只) (g.kg-^d·1)(χ土s，min)对照组15 943.44士 1.73剂量组_15_9_52.17士 2.15** (/ <0·01)表2长牡蛎肉抗疲劳功能营养液对小鼠低压耐缺氧的影响
动物数 MA 观察时间 动物死亡数 组别_(只)(g ^kg-Ld.1) (min)_(只)对照组 15 9~ 5 13 剂量组_15_9_5_8**(/ <0.01)表3长牡蛎肉抗疲劳功能营养液对小鼠血清尿素氮和血乳酸含量的影响
4组别各检测项目动物数剂量 (只) (g.kf.d-1)血清尿素氮 (mmol * L"1)血乳酸 (mg · IOOmL-1)对照组 剂量组15 9 15 920·40±1.39 15.68±1.19**(><0.01)49.39 土 1.38 40.28 士 1.96** (ρ<0·01)
表4长牡蛎肉抗疲劳功能I蒙养液对小鼠肝糖原含量的影响οΓ士 s)^nal 各检测项目动物数 组别 (只)剂量 (8 · kg"1 . d"1)肝糖原 (mmol · L"1)对照组 15 剂量组 159 9 4.3.37±0.23 09±0.28**(/ <0.01)
表5长牡蛎肉抗疲劳功能I蒙养液对小鼠红细胞(Hb)及肝脏SOD活性的影响组别各检测项目动物数剂量SOD 活性 OF土s)(只) (g · kg"1 ·d1)红细胞(Hb)肝脏(湿重)对照组 剂量组14 9 14 913.02±0.83 15.77 士 0.96** (p<0.01)11.91±1.09 14.65±0.64**(/3<0.01 =参照前面介绍的目前我国抗疲劳保健食品的功能评价程序和检验方法[1]，若1项 以上(含1项)运动实验和2项以上(含2项)生化指标为阳性，即可判断该受试物具有 抗疲劳作用。根据本长牡蛎肉抗疲劳功能营养液动物试验，高剂量组的2项运动实验和5 项生化指标均为阳性的实验结果，可认为高剂量组的长牡蛎肉抗疲劳功能营养液具有良好 的抗疲劳作用。
具体实施例方式实施例11、鲜活长牡蛎去杂，洗干净，开壳取肉，浙水。取长牡蛎肉于组织捣碎机中 10000 12000r/min反复处理5次，每次3min，得长牡蛎肉浆，称质量，量体积。2、按长牡蛎肉浆的体积加入4倍量乙酸乙酯，300r/min搅拌120min，4800r/min离 心30min去乙酸乙酯，得长牡蛎肉浆。 3、长牡蛎肉浆按质量加入5倍水搅拌均勻，300r/min连续搅拌IOmin成浑浊液，加
热至55 °C后，恒温。4、在上述55°C恒温的浑浊液中，按长牡蛎肉浆的质量，每克加入3000活力单位中 性蛋白酶，300r/min连续搅拌酶解180min。5、酶解完毕，迅速升温至100°C，保持10分钟灭活中性蛋白酶后，得酶解液1。冷 却至55 °C时恒温。6、在上述酶解液1中，按长牡蛎肉浆的质量，每克加入3000活力单位木瓜蛋白酶， 300r/min连续搅拌酶解180min。7、酶解完毕，迅速升温至100°C，保持10分钟灭活木瓜蛋白酶后，得酶解液2。冷 却至50°C时恒温。8、在上述酶解液2中，按长牡蛎肉浆的质量，每克加入12000活力单位菠萝蛋白酶，300r/min连续搅拌酶解240min。9、酶解完毕，迅速升温至100°C，保持10分钟灭活菠萝蛋白酶后，得酶解液3。冷 却至室温。10、酶解液3于4800r/min离心30min，去沉淀，收集滤液。11、滤液于50 52°C真空浓缩到氨氮含量20 22g/L，得长牡蛎肉抗疲劳功能营 养液母液。12、长牡蛎肉抗疲劳功能营养液母液用无菌水稀释至氨氮含量17. 8g/L，得到长牡 蛎肉抗疲劳功能营养液稀释液，按长牡蛎肉抗疲劳功能营养液稀释液的质量加入10%蔗 糖、0.2%柠檬酸、0. 食盐，溶解，混合均勻，得长牡蛎肉抗疲劳功能营养液。13、长牡蛎肉抗疲劳功能营养液分装、灭菌、检测、包装即可得到产品。实施例21、将于-18°C冷冻保存的长牡蛎肉取出熔融，洗干净，加水煮沸3min，放冷至室 温，浙水。然后于组织捣碎机中10000 12000r/min反复处理5次，每次3min，得长牡蛎肉 浆，称质量，量体积。2、其余同实施例1步骤2 13。
权利要求
一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法，包括长牡蛎肉的打浆及除腥、长牡蛎肉浆的三酶复合水解、酶解液的浓缩及功能营养液的配制，其特征在于长牡蛎肉打成浆状，加入4倍体积乙酸乙酯搅拌除腥味，离心收集长牡蛎肉浆加5倍质量水搅拌，先后加入中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶酶解得酶解液，将酶解液离心取清液于50～52℃真空浓缩至氨氮含量20～22g/L，用无菌水稀释到氨氮含量17.8g/L，加入10％蔗糖、0.2％柠檬酸、0.1％食盐，制成产品。
2.根据权利要求1所述的一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法，其特征在于 三酶复合水解是按长牡蛎肉浆的质量，每克分别加入中性蛋白酶3000活力单位、木瓜蛋白 酶3000活力单位、菠萝蛋白酶12000活力单位。
3.根据权利要求1所述的一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法，其特征在于 三酶复合水解的中性蛋白酶于55°C连续酶解180min，木瓜蛋白酶于55°C连续酶解180min， 菠萝蛋白酶于50°C连续酶解240min。
全文摘要
一种长牡蛎肉抗疲劳功能营养液的制备方法，是将长牡蛎肉捣成浆状，加入乙酸乙酯搅拌除腥，离心，去乙酸乙酯，收集长牡蛎肉浆，加水搅拌均匀，加热，按长牡蛎肉浆质量加中性蛋白酶酶解，灭活中性蛋白酶后按长牡蛎肉浆质量加木瓜蛋白酶酶解，灭活木瓜蛋白酶后，再按长牡蛎肉浆质量加菠萝蛋白酶酶解，之后灭活菠萝蛋白酶，冷却至室温。离心收集水溶液真空浓缩，用无菌水稀释至合适，加蔗糖、柠檬酸、食盐混合均匀制成产品。本发明的技术先进，工艺简单易行，特别是采用三酶复合水解能显著提高长牡蛎肉蛋白质的水解度，产生更多的氨基酸和小肽，使产品品质显著提高。动物实验证明，具有良好的抗疲劳作用。
文档编号A23L1/33GK101982113SQ20101050096
公开日2011年3月2日 申请日期2010年9月26日 优先权日2010年9月26日
发明者宋文东, 方富永, 王宏波, 苗艳丽 申请人:广东海洋大学