专利名称：油松花粉小肽的提取方法
技术领域：
本发明属于分子生物工程与生物化学工程领域，尤其是一种油松花粉小肽的提取方法。
背景技术：
油松花粉含有人体所需的全部营养成分，且搭配合理，能够全部补充、均衡人体所需的营养，素有“绿色黄金”之称。近年来的研究表明，蛋白质在动物消化道中的消化酶作用下水解终产物大部分是2或3个氨基酸残基组成的小肽，肽的吸收具有速度快、耗能低、 不易饱和且各种肽之间转运无竞争性和抑制性的特点，生物酶工程加工方法在温和反应条件下，水解生成多肽及氨基酸等物质，具有很高营养价值与功能特性，具有反应可控、副反应少、产品质量好和不破坏氨基酸等特点，生物酶法将是植物蛋白资源开发利用最有效、最有前途的加工方法。油松花粉破壁一般采用气流干法法，能耗高，营养物损失大，有文献报道采用湿法破壁比较理想，但需要添加助磨剂，而且破壁后糊状物需要干燥。本发明的方法的优势在于将湿法破壁时的水量提高数倍，避免了研磨过程中物料粘稠问题，固液分离后的滤液可以在酶水解制备小肽时作为媒介使用。专利文献CN101100691公开了一种用复合酶从油松花粉中提取小肽的方法，由于审查员认为该申请没有充分说明油松花粉的溶出方法，因此被认为公开不充分，本申请基于该申请的基础上，充分说明了油松花粉的破壁方法，并获得良好的效果。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种油松花粉小肽的提取方法，本方法在于采用湿法胶体磨破壁，加入的水可以用于酶法水解蛋白质的介质，该方法不仅生产周期短，产品收率高。一种油松花粉小肽的提取方法，其特征在于提取小肽的方法包括以下步骤(1)将油松花粉与水混合，用胶体磨将油松花粉进行湿法破壁，破壁后过滤，得到破壁油松花粉及过滤液；(2)将破壁油松花粉用溶剂萃取出可溶性的成分；(3)将萃取后的油松花粉脱溶剂后放入带有搅拌器的容器内，加入过滤液，调节溶液PH值为8 9后，在20 70°C条件下搅拌2 4小时，形成油松花粉混合液；(4)在油松花粉混合液中加入复合酶，充分搅拌2 8小时；(5) 90°C条件下灭酶，离心分离去除料渣，即得到小肽营养液。而且，所述步骤O)的溶剂为食用溶剂油或超临界C02。而且，所述的油松花粉与水的质量比为1 5 15。而且，所述的在油松花粉混合液中加入的酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中的其中几种的混合物。
而且，所述的酶的添加量与油松花粉干基的重量比为0. 2 0. 4 50 150。而且，所述小肽营养液中小肽分子量为300-1000道尔顿，即2 8个氨基酸所组成小分子肽。本发明的优点和有益效果为1.本发明是利用湿法将油松花粉破壁，破壁后含有营养组分的滤液可以用于酶水解工艺用媒介，克服了湿法破壁时由于料液比小物料粘稠，料液比大后续处理费用高的问题，最大限度保留油松花粉天然、高营养的性质。2.采取本发明的方法制得的油松花粉提取液，由于破壁彻底，使活性的小分子肽以及维生素、多糖、矿物质等营养成分充分溶出，更加适合食用，营养更加丰富。3.采用本发明制得的油松花粉提取液容易分离，水溶性高，不破坏花粉的营养成份，而且不存在花粉提取液受热产生蛋白质凝固的现象，这种产品具有易于人体吸收的活性小肽及一些矿物质等微量营养元素。4.本发明是利用复合酶水解油松花粉蛋白，根据不同酶的反应特点，不用调节PH 值，由于蛋白质在水解过程中产生较多的羧基，使体系PH值不断降低，最初体系为碱性，采用2709枯草杆菌发酵得到的碱性蛋白酶，最适于PH值为9-11，主要催化丝氨酸，当体系pH 值降到8以下时，中性蛋白酶发挥作用，中性蛋白酶由枯草芽孢杆菌发酵得到，最适于pH值为6. 0-7. 5，可由于多种蛋白质水解；而木瓜蛋白酶有较宽的pH范围，由于不用碱调节pH 值，体系不产生盐。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。实施例1 本发明用酶从油松花粉中提取小肽的方法，是利用复合酶的催化反应作用，使油松花粉中的蛋白质转变为易被人体吸收的活性小分子肽，其提取方法包括以下步骤(1).在敞口容器中中加入除杂后油松花粉200份，饮用水2000份，用胶体磨研磨破壁，在显微镜下观察破壁达到95%时，用板框压滤机分离，得到破壁油松花粉和滤液；(2).取150份破壁后油松花粉，用二氧化碳超临界萃取提取出油松花粉可溶性非蛋白成分；将萃取后的油松花粉份放入一个带搅拌器的容器内，在45°C温度条件下，加入 1800份的滤液制成混合液，用碱调节混合液pH = 10，浸泡搅拌3小时。(3).在上述混合液中加入0. 2份碱性蛋白酶(南宁东恒华道生物科技有限责任公司，枯草杆菌碱性蛋白酶)，0. 2份中性蛋白酶(南宁东恒华道生物科技有限责任公司)，在 45°C温度条件下充分搅拌3小时，反应结束，pH = 5. 8 ；(4).在90°C条件下灭酶30min，冷却至40°C离心分离，除去料渣，制成小肽营养液。(5).采用高效液相色谱法测定分子量，主要出峰位置在300-700道尔顿，即2_8个氨基酸组成的小肽。实施例2 将实施例1中的工艺步骤O)中的pH值调整为9，将工艺步骤(3)中酶的种类由中性蛋白酶改成木瓜蛋白酶即可，反应结束，体系PH = 5. 8。其他操作方法同实施例1。实施例3(1).在敞口容器中中加入除杂后油松花粉200份，饮用水1000份，用胶体磨研磨破壁，在显微镜下观察破壁达到95%时，用板框压滤机分离，得到破壁油松花粉和滤液；(2).取100份破壁后油松花粉，用6#溶剂油(符合GB 16629-2008标准)萃取出油松花粉可溶性非蛋白成分；将萃取后的油松花粉放入一个带搅拌器的容器内，在50°C温度条件下，用1000份的滤液将溶液调节至pH = 10，浸泡搅拌3小时。(3).在上述溶液中加入0. 2份碱性蛋白酶，0. 1份中性蛋白酶，0. 2份木瓜蛋白酶充分搅拌3小时，反应结束，pH = 5. 5 ；(4).在90°C条件下灭酶30min，冷却至40°C离心分离，离心分离，除去料渣，制成
小肽营养液。
权利要求
1.一种油松花粉小肽的提取方法，其特征在于提取小肽的方法包括以下步骤(1)将油松花粉与水混合，用胶体磨将油松花粉进行湿法破壁，破壁后过滤，得到破壁油松花粉及过滤液；(2)将破壁油松花粉用溶剂萃取出可溶性的成分；(3)将萃取后的油松花粉脱溶剂后放入带有搅拌器的容器内，加入过滤液，调节溶液 PH值为8 9后，在20 70°C条件下搅拌2 4小时，形成油松花粉混合液；(4)在油松花粉混合液中加入复合酶，充分搅拌2 8小时；(5)90°C条件下灭酶，离心分离去除料渣，即得到小肽营养液。
2.根据权利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述步骤O)的溶剂为食用溶剂油或超临界C02。
3.根据权利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的油松花粉与水的质量比为1 5 15。
4.根据权利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的在油松花粉混合液中加入的酶为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中的其中几种的混合物。
5.根据权利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述的酶的添加量与油松花粉干基的重量比为0.2 0.4 50 150。
6.根据权利要求1所述的油松花粉小肽的提取方法，其特征在于所述小肽营养液中小肽分子量为300-1000道尔顿，即2 8个氨基酸所组成小分子肽。
全文摘要
本发明涉及一种油松花粉小肽的提取方法，该方法包括以下步骤(1)将油松花粉与水混合，用胶体磨将油松花粉湿法破壁，过滤；(2)将过破壁后的油松花粉用溶剂油萃取出可溶性的成分；(3)将溶剂萃取后的油松花粉放入带有搅拌器的容器内，加入(1)中得到的滤液，用碱调节pH值为8～9，在20～70℃条件下搅拌2～4小时，形成油松花粉混合液；(4)酶解、灭酶，离心分离去除料渣，即得到富含小肽的油松花粉营养液。本发明不仅生产周期短，产品收率高，而且提取液的营养成份是容易被人体吸收的小分子肽，所得的活性小分子肽营养液水溶性高，可直接使用。
文档编号C12P21/06GK102229973SQ20111016134
公开日2011年11月2日 申请日期2011年6月15日 优先权日2011年6月15日
发明者尹树花, 王贵玉, 薛润鹏, 郭丽梅 申请人:承德畅达生物科技有限公司