专利名称：一种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法
技术领域：
本发明属于微生物发酵技术领域，特別是ー种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法。
背景技术：
透明质酸(Hyaluronic Acid，简称HA)，又名玻璃酸，其分子量在几十万到几百万之间，由于结构上的特点，决定它具有比较特殊的物理化学性质，其水溶液有着良好的粘弹性和流变性，在食品，化妆和医用方面都有应用。不同用途的HA对分子量有不同要求，小分子量的HA多用于保健品中，中等分子量的HA主要应用于化妆品，而高分子量的HA可用于眼科粘性手术、治疗关节病、软组织修复和作为药物载体等，特別是在预防和减少外科手术后组织粘连中具有很高的应用价值。因此HA的生产中，高分子量和高产率依然是研究的主要目标。近年来我国HA组织提取法研究已趋于成熟。但原料紧缺，エ艺复杂，成本高，无法满足国内市场需要。目前透明质酸已由传统的动物器官提取法转为微生物发酵法生产，微生物发酵法是制备HA的主要方法，国外对发酵法研究较早，技术也日见成熟，但因生产厂家少，世界需求仍然缺口大；近年来我国不少学者虽积极进行这方面的研究，但由于在菌种选育、发酵エ艺和提取纯化等方面的难题，使我国在这方面的研究进展缓慢。我国应加快发酵法生产透明质酸的步伐，关键是在提高产率，提高产品分子量和分离纯化的技术方面进行攻关，赶上世界先进水平，以减少进ロ量。在兽疫链球菌发酵过程中，透明质酸的产量在一定范围内随着底物浓度的增加而増加，若底物浓度过高，对透明质酸的生产有抑制作用，得到的透明质酸相对分子质量也较小。而且在产生HA的同时还会有乳酸生成，对菌体的生长和HA的产生都有抑制作用，在此发明中，针对发酵底物的不同和生成产物的多少，研究底物和产物对透明质酸生产的抑制作用，井指出解除抑制的方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供ー种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法。为达到上述目的，本发明的方案为透明质酸的发酵エ艺，以兽疫链球菌为种子，包括ー级种培养，ニ级种培养及发酵培养，各过程培养基重量配方如下表
权利要求
1. ー种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法，以兽疫链球菌为种子，发酵エ 艺过程包括ー级种培养，ニ级种培养及发酵培养，其特征在于各过程培养基重量配方如下表培养基组成一级种子(％)ニ级种子(％)发酵培养(％)蛋白膝1.0。-3.01.0-3.01.0-3.0酵母膏1.0。-4.01.0-4.01.0-3.0氯化钠0.5。-1.50.5-1.5硫酸镁0.05-0.2磷酸钾0.05-0.2硫酸铵0.5-1.5葡萄糖0.5。-3.00.5-3.05.0-7.0琼脂2.0。-3.0PH7.5。-8.07.5-8.07.5-8.0灭菌112°C 20min112°C 20min121°C 20min
2.如权利要求1所述的克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法，其特征在于ー级种培养是从斜面试管转种到锥形瓶中进行，培养温度33°C 37°C，培养时间18 M小吋。
3.如权利要求1所述的克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法，其特征在于ニ级种培养的步骤为首先配制ニ级种子培养基，按照重量8% 12%的接种量接入一级种子进行培养，培养温度33°C 37°C，培养时间20 M小吋，OD66tl值增加到0. 8 1. 2时接入发酵液中。
4.如权利要求1所述的克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法，其特征在于发酵培养的步骤为首先配制发酵培养基，按照重量5% 10%的接种量接入ニ级种子进行培养，发酵温度33°C 37°C，发酵周期30 35小吋。
全文摘要
一种克服葡萄糖及乳酸抑制的透明质酸发酵方法，以兽疫链球菌为种子，发酵工艺过程包括一级种培养，二级种培养及发酵培养。一级种培养是从斜面试管转种到锥形瓶中进行，培养温度33℃～37℃，培养时间18～24小时；二级种培养的步骤为首先配制二级种子培养基，按照8％～12％的接种量接入一级种子进行培养，培养温度33℃～37℃，培养时间20～24小时，OD660值增加到0.8～1.2时接入发酵液中；发酵培养的步骤为首先配制发酵培养基，按照5％～10％的接种量接入二级种子进行培养，发酵温度33℃～37℃，发酵周期30～35小时。
文档编号C12R1/46GK102559801SQ201110429599
公开日2012年7月11日 申请日期2011年12月20日 优先权日2011年12月20日
发明者余永红, 刘晓连, 李亚蕾, 杨波, 罗瑞明 申请人:宁夏大学