防止在玉米根虫(根萤叶甲)中形成抗性的包括Cry34Ab/35Ab和Cry3Aa蛋白的组合的制作方法

专利名称：防止在玉米根虫(根萤叶甲)中形成抗性的包括Cry34Ab/35Ab和Cry3Aa蛋白的组合的制作方法
防止在玉米根虫(根萤叶甲)中形成抗性的包括Cry34Ab/35Ab和Cry3Aa蛋白的组合
背景技术：
人类为食物和能量应用而种植玉米。玉米是一种重要的作物。它在世界许多地区是食物、食品、和动物饲料的重要来源。昆虫进食和损害植物，并由此破坏这些人类努力。每年花费数十亿美元来控制昆虫害虫，并且它们造成的损害另外损失数十亿。昆虫害虫引起的损害是世界玉米作物损失的一个主要因素，尽管使用了保护措施诸如化学杀虫剂。鉴于这一点，已经通过遗传工程将昆虫抗性改造到作物诸如玉米中以控制昆虫损害和降低对传统化学杀虫剂的需要。在美国，每年有超过I千万英亩的玉米感染玉米根虫物种联合体(cornrootwormspecies complex)。玉米根虫物种联合体包括北方玉米根虫(Diabrotica barberi)、南方玉米根虫(D.undecimpunctata howardi )、和西方玉米根虫(D.virgifera virgifera)。(其它物种包括 Diabrotica virgifera zeae (墨西哥玉米根虫)、Diabrotica balteata (巴西玉米根虫)、和巴西玉米根虫联合体(Diabrotica viridula和Diabrotica speciosa)。这些根萤叶甲物种(Diabrotica species)的土栖幼虫以玉米植物的根为食,引起倒伏。倒伏最终降低玉米产量，而且常常导致植物死亡。通过以玉米穗丝为食，成年甲虫降低授粉，并因此对每株植物的玉米产量产生有害影响。另外，根萤叶甲属的成虫和幼虫攻击葫芦科作物(cucurbit crops)(黄瓜、甜瓜(melons)、南瓜(squash)、等)和商业生产的许多蔬菜和田地作物以及宅园中种植的那些。合成有机化学杀虫剂已经成为用于控`制昆虫害虫的主要工具，但是生物学杀虫剂(诸如自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thruingiensis,Bt)衍生的杀虫蛋白)已经在一些地区发挥重要作用。经由用Bt杀虫蛋白基因转化来生成昆虫抗性植物的能力已经改革了现代农业，并且提高了杀虫蛋白及其基因的重要性和价值。来自一些苏云金芽孢杆菌(B.t.)菌株的杀虫晶体蛋白是本领域公知的。参见例如 Hofte 等人，Microbial Reviews, Vol.53, N0.2, pp.242-255 (1989)。这些蛋白质通常由细菌作为大约130kDa毒素原生成，然后在被昆虫摄取后受到昆虫中肠中的蛋白酶的切割以产生大致60kDa核心毒素。这些蛋白质称作晶体蛋白，因为用一些B.t菌株的孢子能观察到独特晶体内含物。这些晶体内含物常常由数种独特蛋白质构成。已经用于生成转基因昆虫抗性作物的一组基因是来自苏云金芽孢杆菌(B.t.)的德尔塔-内毒素。德尔塔-内毒素已经在作物植物(诸如棉花、马铃薯、稻、向日葵、以及玉米)中成功表达，而且已经证明对昆虫害虫提供卓越的控制。(Perlak，F.J.等人(1990) Bio/Technology 8,939-943 ；Perlak, F.J.等人(1993)Plant Mol.Biol.22:313-321 ；Fujimoto H.等人(1993)Bio/Technology 11:1151-1155 ;Tu 等人(2000)NatureBiotechnologyl8:1101-1104 ;PCT 申请号 WO 01/13731 jBing J W 等人(2000)EfficacyofCry IF Transgenic Maize,14th Biennial International Plant Resistance toInsectsfforkshop, Fort Collins, Col0.X迄今为止，已经使用数种Bt蛋白创建了昆虫抗性转基因植物，它们已经成功登记和商品化。这些包括玉米中的CrylAb、CrylAc、CrylF、Cry3Aa、和Cry3Bb,棉花中的CrylAc和Cry2Ab，及马铃薯中的Cry3A。还有玉米中的SMART STAX，它包含CrylA.105和Cry2Ab。表达这些蛋白质的商业产品表达单一蛋白质，想要两种蛋白质的组合杀虫谱的情况(例如组合玉米中的CrylAb和Cry3Bb以分别提供对鳞翅目害虫和根虫的抗性)或蛋白质的独立作用使得它们作为用于延迟在易感昆虫群体中形成抗性的工具是有用的情况(例如组合棉花中的CrylAc和Cry2Ab以提供对烟草蚜虫的抗性管理)除外。导致快速和广泛采用这种技术的昆虫抗性转基因植物的一些性质也产生害虫群体会对由这些植物生成的杀虫蛋白形成抗性的担忧。已经提出数种策略来保持基于Bt的昆虫抗性性状的效用，包括以高剂量部署各蛋白质并与庇护(refuge)组合，及与不同毒素交替或共同使用(McGaughey 等人(1998), “B.t.Resistance Management”，NatureBiotechnol.16:144_146)。为在昆虫抗性管理(IRM)堆叠中使用而选择的蛋白质应当是有活性的，使得对一种蛋白质形成的抗性不赋予对第二蛋白质的抗性(即没有对各蛋白质的交叉抗性)。例如，如果为对“蛋白A”的抗性 选择的害虫群体对“蛋白B”敏感，那么会得出结论，没有交叉抗性且蛋白A和蛋白B的组合会有效延迟对单独的蛋白A的抗性。在抗性昆虫群体缺失下，可以基于假设涉及交叉抗性潜力的其它特征来进行评估。已经提出利用受体介导的结合来鉴定很可能不展现交叉抗性的杀虫蛋白(vanMellaert等人，1999)。这种办法中内在交叉抗性缺失的关键预示在于杀虫蛋白在敏感昆虫物种中不竞争受体。如果两种Bt毒素竞争同一受体，那么如果该受体在该昆虫中突变，使得毒素之一不再结合该受体并因此不再对昆虫有杀虫活性，那么情况可能是昆虫也会对第二毒素(其竞争性结合同一受体)有抗性。就是说，昆虫据说对两种Bt毒素有交叉抗性。然而，如果两种毒素结合两种不同受体，那么这可能指示昆虫不会同时对那两种毒素有抗性。在苏云金芽孢杆菌中发现了一种相对较新的杀虫蛋白系统，如W097/40162中公开的。这种系统包含两种蛋白质一一种大约15kDa,另一种约45kDa。还可参见美国专利N0.6，083，499和N0.6，127，180。这些蛋白质现在已经分派到它们自己的类，而且相应地分别得到 Cry 名称 Cry34 和 Cry35。参见 Crickmore 等人的网站(biols.susx.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/)0现在已经公开了这种类型的系统的许多其它相关蛋白质。参见例如美国专利N0.6，372，480 ；W0 01/14417 ;和WO 00/66742。还已经公开了经过植物优化的编码此类蛋白质的基因，其中基因改造成使用植物中最优化表达的密码子。参见例如美国专利 N0.6，218，188。Cry34/35系统的确切作用模式还有待确定，但是它看来在昆虫肠细胞的膜中形成孔。参见 Moellenbeck 等人，Nature Biotechnology, vol.19, p.668 (July 2001) ；Masson等人，Biochemistry，43( 12349-12357)(2004)。确切作用机制仍然不清楚，尽管知道Cry34和Cry35蛋白的3D原子坐标和晶体结构。参见美国专利N0.7，524，810和N0.7，309, 785。例如，不清楚这两种蛋白质之一或二者是否结合典型类型的受体，诸如碱性磷酸酶或氨肽酶。此外，因为昆虫对Cry蛋白形成抗性存在不同的机制(诸如通过改变受体的糖基化[参见Jurat-Fuentes 等人(2002) 68AEM 5711-5717]、通过去除受体蛋白[参见 Lee 等人(1995)6IAEM 3836-3842]、通过突变受体或通过其它机制[参见Heckel等人，J.1nv.Pathol.95(2007)192-197])，所以不可能先验地预测Cry34/35与其它Cry蛋白之间是否会有交叉抗性。预测Cry34/35系统的竞争性结合还因Cry34/35 二元系统涉及两种蛋白质的事实而进一步复杂化。再次，不清楚这些蛋白质是否和如何有效结合昆虫肠/肠细胞，及它们是否和如何彼此相互作用或结合。用于控制鞘翅目的其它选择包括Cry3Bb毒素、Cry3C、Cry6B、ET29、ET33及ET34、TIC407、TIC435、TIC417、TIC901、TIC1201、ET29 及 TIC810、ET70、ET76 及 ET80、TIC851、等等。还已经提出了 RNAi 办法。参见例如 Baum 等人,Nature Biotechnology, vol.25,n0.11(Nov.2007)pp.1322-1326。发明概述本发明部分涉及Cry34Ab/35Ab与Cry3Aa的组合。本发明部分涉及令人惊讶的发现，即Cry34Ab/Cry35Ab和Cry3Aa对于防止玉米根虫(根萤叶甲(Diabrotica spp.))群体形成抗性(对单独的任一杀虫蛋白系统)是有用的。正如本领域技术人员借助此公开内容会认识到的，生成这些杀虫Cry蛋白的植物对减轻会形成对单独的任一这些杀虫蛋白系统有抗性的玉米根虫群体的担忧会是有用的。本发明部分得到下述发现的支持，即这些Cry蛋白系统的各成分没有彼此竞争对玉米根虫肠受体的结合。本发明还部分涉及三种(或更多种)毒素系统的三重堆叠或“金字塔”，其中Cry34Ab/Cry35Ab和Cry3Aa作为基础对。如此，生成这两种杀虫蛋白系统的植物(和种植此类植物的土地)包括在本发明的范围内。附图简述对图的详细描述特别指附图，其中:

图1。作为输入放射性`标记的Cry毒素的函数，125I_Cry35Abl (A)和125I_Cry3Aa(B)对自西方玉米根虫幼虫制备的BBMV的结合。特异性结合=总结合-非特异性结合，误差条=SEM (均值的标准误差)。结合实验证明了 125I_Cry35Abl和125I_Cry3Aa都能够特异性结合BBMV (图1A和IB)。1251-Cry35Abl 和 1251-Cry3Aa 分别具有结合亲和力 Kd=2.31 ± 1.26,24.0±9.7 (nM),而且分别具有结合位点浓度 Bmax=31.69±6.38，146.3±39.9 (pmole/ug BBMV)0图2。在不同浓度的未标记竞争者的情况中，125I_Cry3Aa对自西方玉米根虫幼虫制备的BBMV的结合。同源竞争结合的误差条代表标准偏差，而异源竞争的误差条未显示。实验结果证明了当摩尔浓度升高至500nM (100倍过量于125I_Cry3Aa)时，Cry3Aa能够完全置换自身(图2)。然而，单独的Cry35Abl或Cry35Abl+Cry34Abl (1:3)混合物均不能置换1251-Cry3Aa。这些数据指示了单独的Cry35Abl或Cry35Abl+Cry34Abl (1:3)不与Cry3Aa分享受体。序列简述SEQ ID NO:1:全长,天然Cry35Aa蛋白序列SEQ ID NO:2:胰蛋白酶截短的Cry3Aa核心蛋白序列SEQ ID NO:3:全长,天然 Cry34Abl 蛋白序列SEQ ID N0:4:全长,天然 Cry35Abl 蛋白序列SEQ ID NO:5:胰凝乳蛋白酶截短的Cry35Abl核心蛋白序列
SEQ ID NO:6:cry34Ab DNASEQ ID NO:7:cry35Ab DNASEQ ID NO:8:cry3Aa DNA发明详述Cry34Ab/35Ab蛋白的序列可以自例如苏云金芽孢杆菌隔离群PS149B1获得。对于依照本发明使用的其它基因、蛋白质序列、和来源隔离群，参见例如Crickmore等人的网站(lifesc1.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/intro, html)。本发明包括Cry34Ab/35Ab杀虫蛋白与Cry3Aa毒素的组合保护玉米免于由可能对单独的任一这些Cry蛋白系统形成抗性(对另一种则不形成抗性)的玉米根虫群体的玉米根虫进食引起的损害和产量损失的用途。如此，本发明教导昆虫抗性管理(IRM)堆叠以防止玉米根虫对Cry3Aa和/或Cry34Ab/35Ab 形成抗性 。本发明提供用于控制根虫害虫的组合物，其包含生成Cry3Aa毒素蛋白和Cry34Ab/35Ab毒素系统的细胞。本发明进一步包含经过转化以生成Cry3Aa蛋白和Cry34Ab/35Ab 二元毒素的宿主，其中所述宿主为微生物或植物细胞。另外，本发明提供控制根虫害虫的方法，包括使所述害虫或所述害虫的环境与有效量的含有Cry3Aa蛋白且进一步含有Cry34Ab/35Ab 二元毒素的组合物接触。本发明的一个实施方案包含玉蜀黍植物，其包含编码Cry34Ab/35Ab 二元毒素的植物可表达基因和编码Cry3Aa蛋白的植物可表达基因，及此类植物的种子。本发明的又一个实施方案包含玉蜀黍植物，其中编码Cry34Ab/35Ab 二元毒素的植物可表达基因和编码Cry3Aa蛋白的植物可表达基因已经渐渗入所述玉蜀黍植物中，及此类植物的种子。如实施例中描述的，使用放射性标记的Cry35Ab核心毒素蛋白的竞争性受体结合研究显示Cry3Aa核心毒素蛋白在CRW昆虫组织样品中不竞争结合Cry35Ab所结合的。参见图2。这些结果指示Cry3Aa和Cry34Ab/35Ab蛋白的组合是减轻CRW群体中对单独的任一蛋白质系统形成抗性的有效手段。如此,部分基于上文和本文中别处描述的数据,可使用Cry34Ab/35Ab和Cry3Aa蛋白生成IRM组合来防止或减轻CRW形成抗性。例如，可将其它蛋白质添加至这种组合以扩展昆虫控制谱。还可以在一些优选的“三重堆叠”或“金字塔”中与用于控制根虫的又一种蛋白质(诸如Cry3Ba和/或Cry6Aa)组合使用主题对/组合。针对根虫的RNAi又是另一种选择。参见例如 Baum等人,Nature Biotechnology, vol.25,N0.ll(Nov.2007)pp.1322-1326。此外，根据本文中呈现的数据和教导，可以代入Cry3Ba和/或Cry6Aa，代替本文中示例的Cry3Aa，作为与Cry34A/35A配对的基础组合。如此，主题组合提供多种针对根虫的作用模式。本发明的部署选项包括在根萤叶甲成问题的玉米种植地区使用Cry3Aa和Cry34Ab/35Ab蛋白。另一个部署选项会是使用Cry3Aa和Cry34Ab/35Ab蛋白之一或二者，并与其它性状组合。根据USSN 61/388，273 (2010 年 9 月 30 日提交)(涉及 Cry34Ab/35Ab 和 Cry6Aa蛋白的组合)、USSN 61/476, 005 (2011 年 4 月 15 日提交)(涉及 Cry34Ab/35Ab 和 Cry3Ba蛋白的组合)、和USSN 61/477，447 (2011年4月20日提交)(涉及Cry3Aa和Cry6Aa的组合)的公开内容，本发明的一些优选的“三重堆叠”或“多重作用模式堆叠”包括Cry3Aa蛋白，其与Cry34Ab/35Ab蛋白组合,又与Cry6Aa蛋白和/或Cry3Ba蛋白一起。包含cry3Ba基因、cry34Ab/35Ab基因、和第三或第四毒素系统(例如cry3Aa和/或cry6Aa基因)的转基因植物(包括玉米)包括在本发明的范围内。如此，此类实施方案以至少三种作用模式靶向昆虫。本领域技术人员会领会，Bt毒素(即使在某一类内，诸如Cry3Aa和Cry34Ab/35Ab)可以有一定程度的变化。基因和毒素。术语“分离的”指非天然发生构建物中的多核苷酸，或纯化的或其它非天然发生状态的蛋白质。依照本发明有用的基因和毒素不仅包括公开的全长序列，而且包括这些序列的片段、变体、突变体、和融合蛋白，它们保留本文中具体示例的毒素的特征性杀虫活性。如本文中使用的，术语基因的“变体”或“变异”指编码相同毒素或编码具有杀虫活性的等同毒素的核苷酸序列。如本文中使用的，术语“等同毒素”指针对靶害虫与要求保护的毒素具有相同或本质上相同的生物学活性的毒素。可以交换这些蛋白质的域/亚域以生成嵌合蛋白。参见例如美国专利N0.7，309, 785和7，524，810。’785专利还教导截短的Cry35蛋白。本文中也示例截短的毒素。如本文中使用的，遵照“Revision of the Nomenclature for theBacillusthuringiensis Pesticidal Crystal Proteins，，，N.Crickmore, D.R.Zeigler,J.Feitelson, E.Schnepf, J.Van Rie, D.Lereclus, J.Baum,和 D.H.Dean。Microbiologyand Molecular Biology Reviews (1998)Vol 62:807-813,边界代表大约 95% (Cry3Aa 和Cry34Ab 和 Cry35Ab)、78% (Cry3A 和 Cry34A 和 Cry35A)、和 45% (Cry3 和 Cry34 和 Cry35)序列同一性。依照本发明，同样适用于Cry6，如果例如在三重堆叠中使用的话。对本领域技术人员应当显然的是，编码活性毒素的基因可以经由数种手段来鉴定和获得。本文中示例的具体基因或基因部分可以自保藏于培养物保藏机构的隔离群获得。这些基因或其部分或变体也可以`合成构建，例如通过使用基因合成仪。基因的变异可以使用用于生成点突变的标准技术容易地构建。还有，这些基因的片段可以使用商品化外切核酸酶或内切核酸酶依照标准规程生成。例如，可以使用酶(诸如Bal31)或定点诱变自这些基因的末端系统切除核苷酸。编码活性片段的基因也可以使用多种限制性酶来获得。可以使用蛋白酶直接获得这些蛋白质毒素的活性片段。保留示例毒素的杀虫活性的片段和等同物会在本发明的范围内。还有，由于遗传密码的冗余，多种不同DNA序列可编码本文中公开的氨基酸序列。创建这些编码相同或本质上相同的毒素的备选DNA序列完全在本领域技术人员的技术内。这些变体DNA序列在本发明的范围内。如本文中使用的，提到“本质上相同的”序列指具有对杀虫活性没有实质影响的氨基酸替代、删除、添加、或插入的序列。编码保留杀虫活性的蛋白质的基因的片段也包括在此定乂中。用于鉴定依照本发明有用的编码毒素的基因和基因部分的又一种方法是经由使用寡核苷酸探针。这些探针是可检测核苷酸序列。这些序列可以借助适宜的标记物来检测，或者可以制成内在发荧光的，如记载于国际申请号W093/16094。如本领域公知的，如果探针分子和核酸样品通过在两分子间形成强键而杂交，那么可以合理假设探针和样品具有实质性同源性。优选地，通过本领域公知的技术在严格条件下进行杂交，如记载于例如Keller，G.H., Μ.M.Manak (1987) DNA Probes, Stockton Press, New York, N.Y., pp.169-170。盐浓度和温度组合的一些例子如下(以严格性升高的次序):2X SSPE或SSC，于室温；1X SSPE或 SSC，于 42。C ;(λ IX SSPE 或 SSC，于 42。C ;0.IX SSPE 或 SSC，于 65。C。探针的检测提供用于以已知方式确定是否发生杂交的手段。此类探针分析提供用于鉴定本发明的毒素编码基因的快速方法。依照本发明用作探针的核苷酸区段可使用DNA合成仪和标准规程来合成。这些核苷酸序列还可作为PCR引物用于扩增本发明的基因。变体毒素。本文中已经具体示例了本发明的某些毒素。由于这些毒素仅仅是本发明毒素的示例，应当显而易见的是，本发明包含与示例毒素具有相同或相似杀虫活性的变体或等同毒素(和编码等同毒素的核苷酸序列)。等同毒素会与示例毒素具有氨基酸同源性。在一些实施方案中，这种氨基酸同一性通常会大于75%、或优选大于85%、优选大于90%、优选大于95%、优选大于96%、优选大于97%、优选大于98%、或优选大于99%。氨基酸同一性通常会在毒素的关键区中最高，关键区负责生物学活性或涉及决定最终负责生物学活性的三维构型。在这点上，某些氨基酸替代是可接受的且可预期的，如果这些替代在对活性不是至关重要的区域中或是不影响分子三维构型的保守氨基酸替代的话。例如，可以将氨基酸归入下述类别:非极性的，不带电荷的极性的，碱性的，和酸性的。其中一个类别的氨基酸用同一类型的另一种氨基酸替换的保守替代落在本发明的范围内，只要该替代没有实质性改变化合物的生物学活性。表I提供属于每一个类别的氨基酸实例的列表。表I
权利要求
1.一种转基因植物，其生成Cry34蛋白、Cry35蛋白、和Cry3A杀虫蛋白。
2.权利要求1的转基因植物，所述植物进一步生成选自Cry3B和Cry6A的第四杀虫蛋白。
3.依照权利要求1-2任一项的植物的种子，其中所述种子包含所述DNA。
4.一种植物田地，其包含多个依照权利要求1-2任一项的植物。
5.权利要求4的植物田地，所述田地进一步包含非Bt庇护植物，其中所述庇护植物占所述田地中所有作物植物的少于40%。
6.权利要求5的植物田地，其中所述庇护植物占所述田地中所有作物植物的少于30%。
7.权利要求5的植物田地，其中所述庇护植物占所述田地中所有作物植物的少于20%。
8.权利要求5的植物田地，其中所述庇护植物占所述田地中所有作物植物的少于10%。
9.权利要求5的植物田地，其中所述庇护植物占所述田地中所有作物植物的少于5%。
10.权利要求4的植物田地，其中所述田地没有庇护植物。
11.权利要求5的植物田地，其中所述庇护植物成片或条。
12.—种种子混合物，其包含来自非Bt庇护植物的庇护种子和多个权利要求3的种子，其中所述庇护种子占该混合物中所有种子的少于40%。
13.权利要求12的种子混合物，其中所述庇护种子占该混合物中所有种子的少于30%。
14.权利要求12的种子混合物，其中所述庇护种子占该混合物中所有种子的少于20%。
15.权利要求12的种子混合物，其中所述庇护种子占该混合物中所有种子的少于10%。
16.权利要求12的种子混合物，其中所述庇护种子占该混合物中所有种子的少于5%。
17.—种种子袋或容器，其包含多个权利要求3的种子，所述袋或容器具有零个庇护种子。
18.—种管理昆虫形成对Cry蛋白的抗性的方法，所述方法包括种植种子以生成权利要求5或10的植物田地。
19.权利要求5-11任一项的田地，其中所述植物占地超过10英亩。
20.权利要求1-2任一项的植物，其中所述植物为玉蜀黍植物。
21.权利要求1-2任一项的植物的植物细胞，其中所述Cry35蛋白与选自SEQIDNO:4和SEQ ID NO: 5的序列至少95%相同，所述Cry3A杀虫蛋白与选自SEQ ID ΝΟ:1和SEQ IDNO: 2的序列至少95%相同，且所述Cry34蛋白与SEQID NO: 3至少95%相同。
22.权利要求1-2任一项的植物，其中所述Cry35蛋白包含选自SEQID N0:4和SEQID NO: 5的序列，所述Cry3A杀虫蛋白包含选自SEQ ID ΝΟ:1和SEQ IDNO: 2的序列，且所述Cry34A 蛋白包含 SEQ ID NO:3。
23.一种生成权利要求21的植物细胞的方法。
24.—种控制根虫昆虫的方法,其通过使所述昆虫与Cry34蛋白、Cry35蛋白、和Cry3A杀虫蛋白接触。
25.权利要求1的植物，其中所述Cry34蛋白为Cry34A蛋白，所述Cry35蛋白为Cry35A蛋白，且所述Cry3A蛋白为Cry3Aa蛋白。
26.权利要求1的植物，其中所述Cry34蛋白为Cry34Ab蛋白且所述Cry35蛋白为Cry35Ab 蛋白。
27.权利要求2的植物， 其中所述Cry3B蛋白为Cry3Ba蛋白且所述Cry6A蛋白为Cry6Aa 蛋白。
28.权利要求24的方法，其中所述Cry34蛋白为Cry34A蛋白，所述Cry35蛋白为Cry35A蛋白，且所述Cry3A蛋白为Cry3Aa蛋白。
29.权利要求24的方法，其中所述Cry34蛋白为Cry34Ab蛋白且所述Cry35蛋白为Cry35Ab 蛋白。
全文摘要
本发明部分涉及Cry34Ab/35Ab与Cry3Aa的组合。本发明部分涉及令人惊讶的发现，即Cry34Ab/Cry35Ab和Cry3Aa的组合对于防止玉米根虫(根萤叶甲)群体形成抗性(对单独的任一杀虫蛋白系统)是有用的。正如本领域技术人员借助此公开内容会认识到的，生成这些杀虫Cry蛋白的玉米植物对减轻会形成对单独的任一这些杀虫蛋白系统有抗性的玉米根虫群体的担忧会是有用的。生成这两种杀虫蛋白系统的植物(和种植此类植物的土地)包括在本发明的范围内。
文档编号C12N5/04GK103108540SQ201180031054
公开日2013年5月15日 申请日期2011年4月22日 优先权日2010年4月23日
发明者K.E.纳瓦, T.米德, K.J.芬希尔, H.李, T.D.海伊, A.T.伍斯利, M.B.奥尔森 申请人:陶氏益农公司