技术简介：
该专利针对现有BIM基因突变检测技术自动化程度低、成本高和难以并行检测的问题，提出了一种新型液相芯片及其探针设计方法。它利用带有特定序列（SEQ ID NO.1至NO.4）的微球和扩增引物，在同一反应体系中实现了对BIM基因野生型和突变型的有效并行检测，提升了检测信号-噪声比，并减少了交叉反应的可能性。
关键词：BIM基因,液相芯片,突变检测
Bim基因缺失突变检测探针和液相芯片的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种BIM基因缺失突变检测液相芯片和检测探针，该BIM基因缺失突变检测液相芯片包括有：分别包被有针对BIM基因缺失突变的野生型和突变型检测探针的微球，所述野生型检测探针为SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2，所述突变型检测探针为SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4；带有生物素标记的扩增引物。所制备的BIM基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的检测探针与扩增引物、扩增产物之间基本上不存在交叉反应，在同一个反应体系中实现野生型和突变型序列的并行检测。
【专利说明】BIM基因缺失突变检测探针和液相芯片
【技术领域】
[0001]本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种BIM基因缺失突变检测探针和液相芯片。
【背景技术】
[0002]BM基因存在于人2号染色体上，是一种B细胞白血病/淋巴瘤2 (BCL2基因)蛋白家族促凋亡成员。BM基因表达一个包含BH3 (BCL2-homology domain3)结构域的蛋白， 通过和Bcl2家族Bcl2-ll，BCL-XL, BCL2A1, MCLl等一些促生长的蛋白相结合抑制肿瘤细胞生长，或者和促进凋亡的蛋白BAX、BAK1相结合促进肿瘤细胞凋亡。BH3结构域是BIM基因发挥作用的关键功能域，研究发现该功能域与TKIs发挥作用密切相关。例如在TKIs药物吉非替尼治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)中需要BM基因的正常表达，并且BH3-类似药物能够明显增强其治疗效果。人类很多激酶表达异常导致的人类肿瘤细胞都会通过抑制BIM 基因的表达或者通过MAPKl磷酸化修饰BM蛋白来保持自身的生长优势。在几乎所有人类肿瘤中BM基因的激活表达对于TKIs类药物发挥作用是必须的，而抑制BM基因的表达则会导致TKIs耐药。表明BM基因在TKIs药物发挥作用过程中发挥重要作用。
[0003]目前，BM基因突变检测方法主要有=Illumina光纤微珠芯片技术、 Affymetrix6.0芯片技术。虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，高通量的 Affymetrix SNP6.0芯片技术比较成熟，然而该芯片技术对于中低密度的临床诊断型芯片并不合适，很难在同一个反应体系中扩展检测众多生物学性状相关的SNP或标签SNP。另外，Affymetrix SNP6.0芯片主要在表达谱芯片上比较强，物种较多，在SNP芯片上相对较弱，而且检测价格昂贵，并不能满足实际需要。
[0004]本发明目标检测的BM基因突变突变，该序列(SEQ IDN0.16:发生缺少突变后的序列)从第169位碱基开始，有2903位碱基发生了缺失突变，框中序列即为缺失区域，本领域技术人员使用常规技术手段，根据缺失区域前后的碱基组成，在基因库中便能容易获得该缺失区域的碱基组成，因此，本发明目标检测的BIM基因缺失突变的内容是充分公开的。
[0005]SEQ ID N0.16BM基因缺失突变
[0006]GTTGGTAGAGTTATCAATT`AGGAAACCCAGTACAGAGTCTATTATAATTTAGATTGTACCTCATGATG AAGGCTAACTCAACAAACCCATCAGAACAGACACTGGAACAAAATGACATTTCTAAATACCATCCAGCTCTGTCTT CATAGGCTTCAGTGAGGTAAATCA \GGCA(K}C(%
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【权利要求】
1.一种BIM基因缺失突变检测液相芯片，其特征在于，包括有A、分别包被有针对BIM基因缺失突变的野生型和突变型检测探针的微球，所述野生型检测探针为SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2，所述突变型检测探针为SEQ ID N0.3或SEQ ID N0.4 ；B、用于扩增出需要检测的、带有生物素标记的、含有BIM缺失突变基因型的目标序列的引物。
2.根据权利要求1所述的BM基因缺失突变检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引物的碱基序列为:SEQ ID N0.5—SEQ ID N0.7。
3.根据权利要求2所述的BM基因缺失突变检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引物的生物素标记位于SEQ ID N0.5的5’端，或所述扩增引物的生物素标记位于SEQ ID N0.6 和 SEQ ID N0.7 的 5，端。
4.根据权利要求1至3任一项所述的BIM基因缺失突变检测液相芯片，其特征在于，检测探针与微球连接中间还设有间隔臂序列。
5.根据权利要求4所述的BM基因缺失突变检测液相芯片，其特征在于，所述间隔臂序列为20-50个T。
6.用于BIM基因缺失突变检测的探针，其特征在于，所述探针为:针对野生型的检测探针SEQ ID N0.1或SEQ ID N0.2，和针对突变型的检测探针SEQ ID N0.3或SEQ ID N0.4。
【文档编号】C12N15/11GK103571923SQ201210250293
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月18日 优先权日:2012年7月18日
【发明者】许嘉森, 刘志明 申请人:益善生物技术股份有限公司