专利名称：一种人骨巨细胞瘤细胞株及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞株，尤其涉及一种人骨巨细胞瘤细胞株及其应用。
背景技术：
骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,简称GCT)是一种常见的原发性骨肿瘤，占原发骨肿瘤的20%。一般认为它属良性，曾被称为“良性骨巨细胞瘤(Blood- good)”。但是按良性肿瘤常规方法治疗后却容易复发，近年来它被放在良、恶性之间的位置，属中间性(Intermediate)或侵袭性(Aggressive)肿瘤。骨巨细胞瘤病因不明，有几种不同说法。骨巨细胞瘤主要组织成分为类似破骨细胞的巨细胞和比较瘦小的梭形或圆形的基质细胞。由于巨细胞很象破骨细胞，英国学者Stewart称之为“破骨细胞瘤”。不过多数人认为基细胞(Stroma cell)是主要的,可能来自未分化结缔组织细胞(Undif ferentiated con-nectivetissue cell)。也有人认为基细胞来自未分化中胚细胞(Undifferen tiated mesenchymalcell)，并转化成巨细胞。又有人认为它们属内皮细胞来源。还有人将之归属纤维组织细胞 (Fibroushistiocytic cell)来源。骨巨细胞瘤生物学行为复杂，多变。GCT具有明显的局部侵袭性，复发率高，并可发生转移骨巨细胞瘤。目前治疗方法主要以手术治疗为主，采用切刮术加灭活处理，植入自体或异体松质骨或骨水泥，但易复发，复发率达40 70%。而广泛的扩大切除或节段截除术将严重影响患者肢体功能，且同样具有相对较高的复发率(10%左右)。再加上对化疗无效，放疗后也易肉瘤变，所以GCT的治疗一直比较棘手，医生能选择的治疗方法也少之又少。加快GCT在基础及临床上的研究势在必行。目前,在细胞水平上对骨巨细胞瘤的研究主要是通过临床活体标本培养出原代细胞再加以研究，相关文献报道也比较少。而对于骨巨细胞瘤特别是恶性骨巨细胞瘤这种稀有的肿瘤，临床活体标本是很难得到的，再加上原代细胞经过很有限传代后就会死亡或失去原有的特征，这大大限制了对骨巨细胞瘤的研究.目前，布达佩斯条约国际确认的培养物保藏单位还没有收录骨巨细胞瘤细胞株。建立GCT细胞株的相关文献也仅有1993年来自日本的一篇(Establishment of a Cell Line from a Human Giant Cell Tumor of Bone),且文献中所提到的细胞株CG-I现在已无法得到。
发明内容
本发明的目的是提供了一种人骨巨细胞瘤细胞株及其应用。本发明提供的人骨巨细胞瘤细胞株为人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WF，保藏编号为CCTCC NO. C2012101，于2012年9月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCCJi址武汉市武昌区珞珈山武汉大学)。所述人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可作为研究骨巨细胞瘤发生、骨巨细胞瘤发展或骨巨细胞瘤转移的细胞模型。所述人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可用于建立骨巨细胞瘤动物模型。所述人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WF CCTCC NO. C2012101可应用于筛选和/或研制
治疗骨巨细胞瘤药物。本发明提供的人骨巨细胞瘤GCT-WF可以用于在细胞水平上研究骨巨细胞瘤的发生、发展和转移的机理，建立骨巨细胞瘤动物模型，并将其作为靶标筛选或研制抗癌药物。
图I为本发明人骨巨细胞瘤GCT-WF细胞在显微镜下观察的细胞形态图。
具体实施例方式下面参照附图，结合具体实施例对本发明所述的人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101进行详细的介绍和描述，以更好的理解本发明，但是应当理解的是，下述实施例并不限制本发明范围。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。I.骨巨细胞瘤标本的获得
本发明的骨巨细胞瘤标本来自于一骨巨细胞瘤患者，该患者为男性，35岁，进行右股骨上段骨巨细胞瘤切除手术。从手术切除标本中选取活性良好肿瘤组织数块作为本发明的骨巨细胞瘤标本。2.原代培养
采用组织块贴壁法进行骨巨细胞瘤细胞的原代培养，使用含10%胎牛血清的DMEM培养基，37°C，CO2浓度为5%，饱和湿度下培养，直至培养皿中的细胞长至80%左右。3.传代培养
采用细胞消化法进行骨巨细胞瘤细胞的传代培养将原代培养的培养皿中的培养液弃去，加入O. 25%胰酶溶液，使充分浸润；肉眼观察细胞层，当见到出现细针孔空隙时，弃去胰酶溶液，并加入含10%胎牛血清的DMEM培养基终止消化，稳定传代至第五代后，得到骨巨细胞瘤细胞株。将得到的骨巨细胞瘤细胞株命名为人骨巨细胞瘤GCT-WF，并于2012年9月18日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称0^0，地址武汉市武昌区珞珈山武汉大学)，保藏编号为 CCTCC NO. C2012101。在显微镜下观察获得的人骨巨细胞瘤GCT-WF细胞形态，结果如图I所示，细胞呈梭型，类似于骨巨细胞瘤中基质细胞的形状。人骨巨细胞瘤GCT-WF的倍增时间约为48小时。人骨巨细胞瘤GCT-WF的细胞周期中各期间所占周期时间的比例为=Gtl和G1 60%，
S17%，G2和M 23%，其中Gtl休眠期，G1为DNA合成前期，S为DNA合成期，G2为DNA合成后期，M为分裂期。人骨巨细胞瘤GCT-WF可以用于研究骨巨细胞瘤的发生、发展和转移的机理，建立骨巨细胞瘤动物模型，并将其作为靶标筛选或研制抗癌药物。以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
权利要求
1.一种人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WF，其特征在于，所述细胞株保藏编号为CCTCCNO.C2012101。
2.权利要求I所述人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在建立骨巨细胞瘤发生、骨巨细胞瘤发展或骨巨细胞瘤转移的细胞模型中的应用。
3.权利要求I所述人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在建立骨巨细胞瘤动物模型中的应用。
4.权利要求I所述人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WFCCTCC NO. C2012101在筛选治疗骨巨细胞瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开一种人骨巨细胞瘤细胞株及其应用，该人骨巨细胞瘤细胞株为人骨巨细胞瘤细胞株GCT-WFCCTCCNO.C2012101，可以用于在细胞水平上研究骨巨细胞瘤的发生、发展和转移的机理，建立骨巨细胞瘤动物模型，并将其作为靶标筛选抗癌药物。
文档编号C12N5/09GK102943065SQ20121046758
公开日2013年2月27日 申请日期2012年11月19日 优先权日2012年11月19日
发明者华莹奇, 蔡郑东, 尹飞, 孙伟, 王卓莹, 郑龙坡, 曾辉, 孙梦熊 申请人:上海市第十人民医院