烟草近交植物ncbex1f、ncbex1ms和nc ex90的制作方法
【专利摘要】本发明提供了烟草近交植物NCBEX1F和NCBEX1MS以及NCEX90。本发明还提供了这些植物的部分以及由这些部分制造的产品，本发明还包括所提供的植物的后代，包括杂种。
【专利说明】烟草近交植物 NCBEX1F、NCBEX1MS 和 NC EX90
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请依据35U.S.C.§ 119要求2011年2月28日提交的美国临时申请号N0.61 / 447,443(待决)和2011年10月13日提交的美国临时申请号61 / 546，573 (待决)的利益，各所述临时申请的全部内容、包括其相应的序列表，通过引用并入本文。
[0003]序列表并入
[0004]序列表的全部内容通过引用并入本文，包括名为P33831US02.txt的文件，该文件大小为28,672字节，在2012年2月17日生成，所述文件的全部内容同样地通过引用并入本文。
发明领域
[0005]本发明提供了烟草近交植物NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90。本发明还提供了这样的植物的部分以及从这些部分制造的产品。本发明还包括所提供的植物的后代，包括杂种。
_6]发明背景
[0007]烟草(Nicotiana tabacum L.)在美国以及其他国家是重要的经济作物。在烟草植物中，烟碱的N-脱甲基化作用形成去甲烟碱，它是干烟叶中已知是作为用于形成N-亚硝基去甲烟碱(“NNN”)的前体的次生生物碱。NNN是不希望存在于干烟叶中的成分。
[0008]商业烟草品种中发现的主要生物碱是烟碱，通常占据总生物碱集合的90-95%。剩余的生物碱部分主要由三种其他吡唳生物碱组成:去甲烟碱、假木贼碱(anabasine)和新烟草碱(anatabine)。去甲烟碱通过烟碱N-脱甲基酶的活性从烟碱直接产生。去甲烟碱通常占总吡啶生物碱集合的低于5%，但通过称为“转化”的过程，最初产生非常低量的去甲烟碱的烟草植物产生了通过代谢将大比例的烟叶烟碱“转化”成去甲烟碱的后代。在遗传上发生转化的烟草植物(称为“转化体”)中，大部分的去甲烟碱的产生发生在成熟烟叶的衰老和晾干的过程中(Wemsman 和 Matzinger (1968) Tob.Sc1.12:226-228)。白莱(burley)烟特别容易遗传转化，其中在一些栽培品种中观察到每代高达20%的比例。
[0009]在烟叶调制和加工过程中，一部分的去甲烟碱代谢成化合物NNN，这是已经宣称在实验室动物中致癌的烟草特异性亚硝胺(TSNA) (Hecht和Hoffmann (1990)Cancer Surveys8:273-294 ；Hoffmann 等(1994) J.Toxicol.Environ.Health41:1-52 ；Hecht (1998) Chem.Res.Toxicol.11:559_603)。在烤烟中，发现TSNA主要通过生物碱与传统烤房中存在的直接火焰加热系统形成的燃烧气体中存在的微量氮氧化物的反应来形成(Peele和Gentry(1999)“Formation of Tobacco-specific Nitrosamines in Flue-curedTobacco (烤烟中烟草特异性亚硝胺的形成)”，C0RESTA Meeting, Agro-Phyto Groups,Suzhou, China)。用热交换器改装这些烤房实质性地消除了燃烧气体与风干空气的混合并且显著地降低了以这种方式风`干的烟草中的TSNA的形成(Boyette和Hamm(2001)Rec.Adv.Tob.Sc1.27:17-22)。相反，在风干的白莱烟中，TSNA形成主要通过烟草生物碱与亚硝酸盐的反应来进行，该过程是通过烟叶携带的微生物来催化的(Bush等，(2001), Rec.Adv.Tob.Sc1.27:23-46)。迄今为止，对于风干的烟草，通过改变调制条件来降低TSNA同时保持可接受的质量标准的尝试尚未成功。
[0010]发明概沭
[0011]一个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1F的种子，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
[0012]另一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
[0013]在进一步的方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分的采收烟叶或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718 保藏于 ATCC。
[0014]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或更稳定的低烟碱转化率。
[0015]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的采收烟叶或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率，并且所述降低量的去甲烟碱和/或N'-亚`硝基去甲烟碱(NNN)是与燃烧来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比在燃烧所述烟叶产生的烟气流中降低。
[0016]在进一步的方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述产品选自烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
[0017]一个方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式(recess)过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟。
[0018]另一个方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述产品选自小雪茄、不通气凹过滤嘴香烟、通气隐藏式凹过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟，并且其中所述产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率。
[0019]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物的部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述部分选自叶、花粉、胚珠、胚、子叶、胚轴、分生细胞、原生质体、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄。
[0020]另一个方面，本发明包括从来自通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分的原生质体或细胞产生的组织培养物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA_11718保藏于ATCC，其中所述组织培养物的细胞或原生质体从选自叶、花粉、胚、子叶、胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄的植物部分产生。
[0021]一个方面，本发明包括从组织培养物再生的烟草植物，所述组织培养物从来自通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物或其部分的原生质体或细胞产生，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述组织培养物的细胞或原生质体从选自叶、花粉、胚、子叶、胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄的植物部分产生，并且当在相同环境条件下生长时，所述再生的植物具有栽培品种NCBEX1F的基本上所有形态和生理特征。
[0022]另一个方面，本发明包括烟草栽培品种NC EX90的种子。
[0023]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物或其部分。
[0024]在进一步的方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分。
[0025]另一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分，其中所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟 碱转化率。
[0026]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分，其中所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比，具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率，并且所述降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)是与燃烧来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比，在燃烧所述烟叶产生的烟气流中降低。
[0027]在进一步的方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述产品选自烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
[0028]一个方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟。
[0029]另一个方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟，其中所述产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率。
[0030]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物的部分，其中所述部分选自叶、花粉、胚珠、胚、子叶、胚轴、分生细胞、原生质体、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、莖、荚和叶柄。
[0031]另一个方面，本发明包括从来自通过栽培烟草栽培品种NCEX90的种子生产的烟草植物或其部分的原生质体或细胞产生的组织培养物，其中所述组织培养物的细胞或原生质体从选自叶、花粉、胚、子叶、胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄的植物部分产生。
[0032]一个方面，本发明包括从组织培养物再生的烟草植物，所述组织培养物从来自通过栽培烟草栽培品种NC EX90的种子生产的烟草植物或其部分的原生质体或细胞产生，其中所述组织培养物的细胞或原生质体从选自叶、花粉、胚、子叶、胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花、苗、茎、荚和叶柄的植物部分产生，并且当在相同环境条件下生长时，所述再生的植物具有栽培品种NC EX90的基本上所有形态和生理特征。
[0033]另一个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1MS的种子，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
[0034]另一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS芽的种子生产的烟草植物或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
[0035]另一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
[0036]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率。
[0037]另一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物的采收烟叶或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比，具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率，并且与燃烧来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比，所述降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)是在燃烧所述烟叶产生的烟气流中降低。
[0038]在进一步的方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述产品选自烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
[0039]一个方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产品，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟。
[0040]另一个方面，本发明包括从通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物或其部分制备的烟草产 品，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟，并且其中所述产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率。
[0041]一个方面，本发明包括通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物的部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述部分选自叶、花粉、胚珠、胚、子叶、胚轴、分生细胞、原生质体、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄。
[0042]另一个方面，本发明包括从来自通过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物或其部分的原生质体或细胞产生的组织培养物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA_11719保藏于ATCC，其中所述组织培养物的细胞或原生质体从选自叶、花粉、胚、子叶、胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄的植物部分产生。
[0043]一个方面，本发明包括从组织培养物再生的烟草植物，所述组织培养物从来自通 过栽培烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生产的烟草植物或其部分的原生质体或细胞产生，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC，其中所述组织培养物的细胞或原生质体从选自叶、花粉、胚、子叶、胚轴、分生细胞、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚和叶柄的植物部分产生，并且当在相同环境条件下生长时，所述再生的植物具有栽培品种NCBEX1MS的基本上所有形态和生理特征。
[0044]—个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1F的F1后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
的F1后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
[0046]一个方面，本发明包括烟草栽培品种NC EX90的F1后代植物。
[0047]另一个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1F的F1后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述F1植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0048]另一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
[0049]另一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述烟草栽培品种NCBEX1F的植物是母本。
[0050]另一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0051]另一个方面，本发明包括F1后代种子，其通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0052]一个方面，本发明还包括F1后代种子的容器，所述F1后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0053]一个方面，本发明包括通过栽培种子产生的F1后代植物，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0054]一个方面，本发明还包括通过栽培种子产生的F1后代植物的采收烟叶，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0055]另一个方面，本发明还包括通过栽培种子产生的F1后代植物的采收烟叶，所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比具有降低量的去甲烟碱和/或N’ -亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0056]一个方面，本发明还包括F1后代植物的采收烟叶，其中与燃烧来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比，所述采收烟叶在燃烧烟叶产生的烟气流中具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)，其中所述植物通过栽培种子来产生，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0057]—个方面，本发明包括从F1后代烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述植物或其部分通过栽培F1后代种子产生，所述F1后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，并且其中所述烟草产品选自烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
[0058]一个方面，本发明还包括从F1后代烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述植物或其部分通过栽培F1后代种子产生，所述F1后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA_11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，并且其中所述烟草产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟。
[0059]一个方面，本发明还包括从F1后代烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述植物或其部分通过栽培F1后代种子产生，所述F1后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，并且其中所述烟草产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟，且进一步地其中所述产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率。
[0060]一个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1F的后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
[0061]一个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1MS的后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
[0062]一个方面，本发明包括烟草栽培品种NC EX90的后代植物。
[0063]另一个方面，本发明包括烟草栽培品种NCBEX1F的后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述后代植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0064]另一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
[0065]另一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中所述烟草栽培品种NCBEX1F的植物是母本。
[0066]另一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0067]另一个方面，本发明包括后代种子，其通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0068]一个方面，本发明还包括后代种子的容器，所述后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0069]一个方面，本发明包括通过栽培种子产生的后代植物，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0070]一个方面，本发明还包括通过栽培种子产生的后代植物的采收烟叶，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0071]另一个方面，本发明还包括通过栽培种子产生的后代植物的采收烟叶，所述烟叶与来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比具有降低量的去甲烟碱和/或N’ -亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0072]一个方面，本发明还包括后代植物的采收烟叶，其中与燃烧来自于在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种的烟叶相比`，所述采收烟叶在燃烧烟叶产生的烟气流中具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)，其中所述植物通过栽培种子来产生，所述种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物是通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子生产的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，并且其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
[0073]—个方面，本发明包括从后代烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述植物或其部分通过栽培后代种子产生，所述后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，并且其中所述烟草产品选自烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
[0074]一个方面，本发明还包括从后代烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述植物或其部分通过栽培后代种子产生，所述后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA_11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，并且其中所述烟草产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟。
[0075]—个方面，本发明还包括从后代烟草植物或其部分制备的烟草产品，其中所述植物或其部分通过栽培后代种子产生，所述后代种子通过包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子的方法来生产，其中至少一种烟草植物通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，并且其中所述烟草产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟和嚼烟，且进一步地其中所述产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，具有降低量的去甲烟碱和/或N'-亚硝基去甲烟碱(NNN)和/或具有更稳定的低烟碱转化率。
[0076]一个方面，本发明包括生产烟草种子的方法，所述方法包括将两种烟草植物杂交并收获得到的烟草种子，其中至少一种烟草植物是细胞质雄性不育的，其中所述细胞质雄性不育的植物是烟草栽培品种NCBEX1MS的植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
[0077]一个方面，本发明包括无性繁殖烟草栽培品种的植物的方法，所述方法包括下列步骤:(a)对能够从选自NCBEX1F (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEX1MS(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物繁殖的组织进行培养以获得增殖的芽；以及(b)使所述增殖的芽生根以获得生根的幼苗。
[0078]—个方面，本发明包括无性繁殖烟草栽培品种的植物的方法，所述方法包括下列步骤:(a)对能够从选自NCBEX1F (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEX1MS(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物繁殖的组织进行培养以获得增殖的芽；(b)使所述增殖的芽生根以获得生根的幼苗；以及(c)从所述生根的幼苗生长植物。
[0079]—个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEXIMS (该栽培品种的代`表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的第二烟草植物进行杂交以产生F1后代种子；(b)栽培所述F1后代种子并选择包含所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交F2后代种子；(d)栽培所述F2后代种子并选择包含所述所需性状的回交F2后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和(d)三次或以上，以产生选择的第四代或更高世代的回交后代，其包含所述所需性状并且当在相同环境条件下生长时，包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征。
[0080]一个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEXIMS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的第二烟草植物进行杂交以产生F1后代种子；(b)栽培所述F1后代种子并选择包含所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交F2后代种子；(d)栽培所述F2后代种子并选择包含所述所需性状的回交F2后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和(d)三次或以上，以产生选择的第四代或更高世代的回交后代，其包含所述所需性状并且当在相同环境条件下生长时，包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征，其中所述性状是细胞质雄性不育(CMS)。
[0081]一个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEXIMS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的第二烟草植物进行杂交以产生F1后代种子；(b)栽培所述F1后代种子并选择包含所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交&后代种子；(d)栽培所述F2后代种子并选择包含所述所需性状的回交F2后代植物；以及(e)连续重复步骤(C)和(d)三次或以上，以产生选择的第四代或更高世代的回交后代，当在相同环境条件下生长时，其包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征，并且包含所需性状，其中所述性状是细胞质雄性不育(CMS)，并且所述CMS性状从Nicotiana suaveolens的细胞质获得。
[0082]一个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEXIMS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的第二烟草植物进行杂交以产生F1后代种子；(b)栽培所述F1后代种子并选择包含所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交F2后代种子；(d)栽培所述F2后代种子并选择包含所述所需性状的回交F2后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和(d)三次或以上，以产生选择的第四代或更高世代的回交后代，当在相同环境条件下生长时，其包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征，并且包含所述所需性状，其中所述性状是细胞质雄性不育(CMS)并且所述CMS性状从Mcotiana suaveo lens的细胞质获得，并且其中所述第二烟草植物是TN90LC CMS0
[0083]一个方面，本发明包括通过包括将所需性状引入烟草栽培品种的方法来生产的烟草植物，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEX1MS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的第二烟草植物进行杂交以产生F1后代种子；(b)栽培所述F1后代种子并选择包含所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交F2后代种子；(d)栽培所述F2后代种子并选择包含所述所需性状的回交F2后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和(d)三次或以上，以产生选择的第四代或更高世代的回交后代，其包含所述所需性状，并且当在相同环境条件下生长时，包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征。
[0084]另一个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种中的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEXIMS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的另一种烟草栽培品种的植物进行杂交以产生后代植物，其中所述所需性状选自除草剂抗性、抗害虫性、抗病性、高产量、高等级指数、可保存性、晾干质量、机械采收性、保持能力、烟叶质量、高度、植物成熟、早熟、早至中熟、中熟、中至晚熟、晚熟；小茎、中茎、大茎、每株植物叶数、每株植物5-10片叶、每株植物11-15片叶、每株植物16-21片叶，及其任意组合，以产生F1后代种子；(b)将所述F1后代种子生长成F1后代植物并选择具有所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEXIMS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交后代植物种子；(d)将所述回交后代植物种子生长成回交后代植物并选择包含所述所需性状的回交后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和⑷一次或多次以产生选择的第四代或更高世代的回交后代植物，其包含所述所需性状，并且当在相同环境条件下生长时，包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征。 [0085]另一个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种中的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEX1MS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的另一烟草栽培品种的植物进行杂交以产生后代植物，其中所述所需性状选自除草剂抗性、抗害虫性、抗病性、高产量、高等级指数、可保存性、晾干质量、机械采收性、保持能力、烟叶质量、高度、植物成熟、早熟、早至中熟、中熟、中至晚熟、晚熟；小茎、中茎、大茎、每株植物叶数、每株植物5-10片叶、每株植物11-15片叶、每株植物16-21片叶，及其任意组合，以产生F1后代种子；(b)将所述F1后代种子生长成F1后代植物并选择具有所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEXIMS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交后代植物种子；(d)将所述回交后代植物种子生长成回交后代植物并选择包含所述所需性状的回交后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和⑷一次或多次以产生选择的第四代或更高世代的回交后代植物，其包含所述所需性状，并且当在相同环境条件下生长时，包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有的生理和形态特征。
[0086]另一个方面，本发明包括将所需性状引入烟草栽培品种中的方法，所述方法包括:(a)将选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC)、NCBEX1MS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl1719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物与包含所需性状的另一烟草栽培品种的植物进行杂交以产生后代植物，其中所述所需性状选自除草剂抗性、抗害虫性、抗病性、高产量、高等级指数、可保存性、晾干质量、机械采收性、保持能力、烟叶质量、高度、植物成熟、早熟、早至中熟、中熟、中至晚熟、晚熟；小茎、中茎、大茎、每株植物叶数、每株植物5-10片叶、每株植物11-15片叶、每株植物16-21片叶，及其任意组合，以产生F1后代种子；(b)将所述F1后代种子生长成F1后代植物并选择具有所述所需性状的F1后代植物；(c)将所选择的F1后代植物与选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的植物进行杂交以产生回交后代植物种子；(d)将所述回交后代植物种子生长成回交后代植物，并选择包含所述所需性状以及当在相同环境条件下生长时包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有生理和形态特征的回交后代植物；以及(e)连续重复步骤(c)和(d) —次或多次以产生选择的第四代或更高世代的回交后代植物，其包含所述所需性状，并且当在相同环境条件下生长时，包含选自NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的烟草栽培品种的基本上所有的生理和形态特征，其中所述植物具有抗病性的所需性状。[0087]另一个方面，本发明包括用于生产与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比具有降低的和更稳定的烟碱转化率的烟草植物的方法，所述方法包括:鉴定具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的第一烟草植物；将所述第一烟草植物与第二烟草植物杂交并收集F1种子；使从所述F1种子生长的植物自交或将从所述F1种子生长的植物与第三烟草植物杂交以获得F2种子；以及鉴定对于SEQID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的所述核苷酸序列来说纯合的从所述F2种子生长的烟草植物。
[0088]一个方面，本发明包括用于生产与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比具有降低的和更稳定的烟碱转化率的烟草植物的方法，所述方法包括:鉴定具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的第一烟草植物；将所述第一烟草植物与第二烟草植物杂交并收集F1种子；使从所述F1种子生长的植物自交或将从所述F1种子生长的植物与第三烟草植物杂交以获得F2种子；以及鉴定对于SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2中所示的所述核苷酸序列来说纯合的从所述&种子生长的烟草植物，其中所述第二烟草植物具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列。
[0089]一个方面，本发明包括用于生产与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比具有降低的和更稳定的烟碱转化率的烟草植物的方法，所述方法包括:鉴定具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的第一烟草植物；将所述第一烟草植物与第二烟草植物杂交并收集F1种子；使从所述F1种子生长的植物自交或将从所述F1种子生长的植物与第三烟草植物杂交以获得F2种子；以及鉴定对于SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列来说纯合的从所述F2种子生长的烟草植物，其中所述第二烟草植物不具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列，并且所述第三烟草植物是具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的烟草植物。
[0090]一个方面，本发明包括用于生产与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比具有降低的和更稳定的烟碱转化率的烟草植物的方法，所述方法包括:鉴定具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的第一烟草植物；将所述第一烟草植物与第二 烟草植物杂交并收集F1种子；使从所述F1种子生长的植物自交或将从所述F1种子生长的植物与第三烟草植物杂交以获得F2种子；以及鉴定对于SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列来说纯合的从所述F2种子生长的烟草植物，其中所述第三烟草植物是具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的烟草植物。
[0091]一个方面，本发明包括用于生产与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比具有降低的和更稳定的烟碱转化率的烟草植物的方法，所述方法包括:鉴定具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的第一烟草植物；将所述第一烟草植物与第二烟草植物杂交并收集F1种子；使从所述F1种子生长的植物自交或将从所述F1种子生长的植物与第三烟草植物杂交以获得F2种子；以及鉴定对于SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列来说纯合的从所述F2种子生长的烟草植物，其中所述第一烟草植物是选自NCBEX1F (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1718保藏于ATCC)、NCBEX1MS(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物。
[0092]一个方面，本发明包括用于生产与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业化白莱烟栽培品种相比具有降低的和更稳定的烟碱转化率的烟草植物的方法，所述方法包括:鉴定具有SEQID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列的第一烟草植物；将所述第一烟草植物与第二烟草植物杂交并收集F1种子；使从所述F1种子生长的植物自交或将从所述F1种子生长的植物与第三烟草植物杂交以获得F2种子；以及鉴定对于SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2中所示的核苷酸序列来说纯合的从所述F2种子生长的烟草植物，其中所述第三烟草植物是选自NCBEX1F (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTAl 1718保藏于ATCC)、NCBEX1MS(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90的烟草栽培品种的植物。
[0093]另一个方面，本发明包括生产具有其他所需性状的选自NCBEX1F、NCBEXIMS和NCEX90的烟草栽培品种的植物的方法，所述方法包括下列步骤:(a)将赋予所需性状的转基因导入到能够从烟草栽培品种的植物繁殖的组织中，所述烟草栽培品种选自NCBEX1F(该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA 11718保藏于ATCC)、NCBEXIMS (该栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11719保藏于ATCC)和NC EX90。
[0094]另一个方面，本发明包括生产除草剂抗性烟草植物的方法，所述方法包括用转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物或其部分，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC，其中所述转基因赋予对除草剂的抗性。在某些非限制性实例中，所述除草剂选自咪唑啉酮、环己二酮、磺酰脲、草甘膦、草铵膦、苯氧基丙酸、L-草丁膦、三嗪和苯甲腈。
[0095]另一个方面，本发明包括除草剂抗性的烟草植物，其通过包括用转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物或其部分的方法来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC，其中所述转基因赋予对除草剂的抗性，所述除草剂选自咪唑啉酮、环己二酮、磺酰脲、草甘膦、草铵膦、苯氧基丙酸、L-草丁勝、二嗪和苯甲臆。
[0096]另一个方面，本发明包括生产抗害虫或昆虫的烟草植物的方法，其中所述方法包括用赋予害虫或昆虫抗性的转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC。
[0097] 在进一步的方面中，本发明包括抗害虫或昆虫的烟草植物，其通过包括用赋予害虫或昆虫抗性的转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物的方法来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC。
[0098]在进一步的方面中，本发明包括抗害虫或昆虫的烟草植物，其通过包括用赋予害虫或昆虫抗性的转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物的方法来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC。在某些情况下，所述转基因编码苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) (BT)内毒素。
[0099]另一个方面，本发明包括生产抗病性烟草植物的方法，其中所述方法包括用赋予抗病性的转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC。
[0100]在进一步的方面中，本发明包括抗病性烟草植物，其通过包括用赋予抗病性的转基因转化通过栽培烟草栽培品种NCBEX1F的种子而产生的烟草植物的方法来生产，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA11718保藏于ATCC。[0101]序列简述[0102]SEQ ID NO:1 示出了 cyp82e4W329Stop 核苷酸序列。
[0103]SEQ ID NO:2 示出了 cyp82e5v2W422Stop 核苷酸序列。
[0104]SEQ ID NO:3 示出了 cyp82e4W329Stop 氨基酸序列。
[0105]SEQ ID N0:4 示出了 cyp82e5v2W422Stop 氨基酸序列。
[0106]SEQ ID NO:5示出了 CYP82E4野生型核苷酸序列。
[0107]SEQ ID NO:6示出了 CYP82E5v2野生型核苷酸序列。
[0108]SEQ ID NO:7示出了 CYP82E4野生型氨基酸序列。
[0109]SEQ ID NO:8示出了 CYP82E5v2野生型氨基酸序列。
[0110]附图简沭
[0111]图1示出了证实的TN90LC植物和NC EX90 ( “TN90RC”)植物。
[0112]图2示出了本发明的核苷酸和氨基酸序列。
[0113]图2A和2B分别示出了 50株TN90LC和NCBEX1MS植物的烟碱转化百分比。
[0114]发明详沭
[0115]现在，将在后文中参考示出了本发明的优选实施方式的附图和说明对本发明进行更充分地描述。然而，本发明可以以不同方式体现，并且不应被解释为限于本文中提出的实施方式。
[0116]除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员所通常理解的相同的意义。在本发明的描述中使用的术语仅仅是出于描述特定实施方式的目的，并非意图限制本发明。
[0117]本文中引用的所有出版物、专利、专利申请和其他参考文献将其全部内容通过引用并入本文以提供与所述引用出现的句子和/或段落相关的教导。
[0118]当在本发明的描述和随附的权利要求书中使用时，单数形式“一”、“一个”和“该”打算也包括其复数形式，除非上下文清楚地指明不是如此。
[0119]此外，当在本文中使用时，“和/或”指称并涵盖所列相关项的任一种和其一种或多种的所有可能的组合，并且当以可选方式(“或”)解释时不包含组合。
[0120]当在本文中用于指称可测量的值例如化合物的量(例如去甲烟碱的量)等时，术语“约“意味着涵盖所指定量的±20%、±10%、±5%、±1%、±0.5%或甚至±0.1%的变化。
[0121]NC EX90
[0122]本发明包括来自于NC EX90的烟草栽培品种及其部分。另一个方面，本发明包括通过栽培NC EX90的种子产生的烟草植物或其部分。本发明的植物可以包括当在相同环境条件下生长时，具有栽培品种NC EX90的基本上所有形态和生理特征的植物。
[0123]尽管不受方法的限制，NC EX90是将两个突变的CYP82基因引入到Tennessee90低转化体(“TN90LC”)栽培品种中的结果。这两个基因是在Lewis等(三个烟碱脱甲基酶基因介导烟草中的去甲烟碱生物合成:CYP8 2E10基因的功能性研究(Thre enicotine demethylase genes mediate nornicotine biosynthesis in Nicotianatabacum L:Functional characterization of the CYP82E10gene), Phytochemistry71(2010) 1988-1998)中被称为 325_6#775 的突变的 CYP82E4 基因(SEQ ID N0:1，其示出了 cyp82e4W329Stop,其全部内容通过引用并入本文)，以及在Lewis等(同上)中被称为 325-6#1-13 的突变的 CYP82E5v2 (SEQ ID NO:2，其示出了 cyp82e5v2W422Stop，其全部内容通过引用并入本文)。这两个突变产生截短的蛋白。将cyp82e4W329Stop和Cyp82e5V2W422St0p从Lewi s等(同上)的表2中所列的强转化体白莱背景(株系DH98-325-6)中的e4e5 | e4e5双突变体引入到TN90LC背景中。
[0124]通过与作为轮回亲本的TN90LC回交5次并自交两次产生NC EX90。NC EX90对于cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop两者来说是纯合的。同样地，不受任何特定科学理论的限制，cyp82e4W329Stop 和 cyp82e5v2W422Stop 是隐性的。cyp82e4W329Stop 和Cyp82e5V2W422St0p编码的蛋白质具有降低或消除的转化烟碱或去甲烟碱的能力。NC EX90具有与TN90LC至少95 %、至少97 %、至少98%或至少99%相似的遗传背景。NC EX90表现出低NNN，并且不容易转化成高NNN。(参见图1)
[0125]NCBEXIMS
[0126]本发明还提供了来自于NCBEX1MS的烟草栽培品种及其部分，其中这种栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。本发明还包括通过栽培NCBEX1MS的种子产生的烟草植物或其部分。本发明的植物可以包括当在相同环境条件下生长时具有栽培品种NCBEX1MS的基本上所有形态和生理特征的植物。尽管不受方法的限制，NCBEXIMS是通过将NC EX90BCR作为父本与TN90LC CMS进行杂交而将来自于NC EXgOBC5F1的 cyp82e4W329Stop 和 cyP82e5v2W422Stop 突变引入到 TN90LC 细胞质雄性不育(“CMS”)植物中以制备CMS F1后代植物的结果。
[0127]BC5Flx TN90LC CMS杂交的CMS F1后代植物是雄性不育的。从多个BC5F1X TN90LCCMS F1 植物(例如 CMS ?!后代植物)中筛选 cyp82e4W329Stop 和 cyp82e5v2W422Stop突变，并作为母本与NC EX90杂交以制备BC7F1CMS后代。通过基因分型鉴定对cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变纯合的BC7F1CMS后代，并将其命名为NCBEXIMSo NCBEXIMS具有与TN90LC至少95%、至少97%、至少98%或至少99%相似的遗传背景。NCBEX1MS表现出低NNN，并且不容易转化成高NNN。
[0128]NCBEX1F
[0129]本发明还提供了来自于NCBEX1F的烟草栽培品种及其部分，这种栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。本发明还包括通过栽培NCBEX1F的种子产生的烟草植物或其部分。本发明的植物还可以包括当在相同环境条件下生长时具有栽培品种NCBEX1F的基本上所有形态和生理特征的植物。NCBEX1F是与作为轮回亲本的TN90LC回交7次，然后进行两轮自交以选择对于cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变的纯合性而产生BC7F3植物的结果。NCBEX1F具有与TN90LC至少95%、至少97%、至少98%或至少99%相似的遗传背景。NCBEX1F表现出低NNN，并且不容易转化成高NNN。
[0130]其他植物
[0131]本申请的后代植物可以是通过两种亲本植物的杂交或一种植物的自交获得的Fpf2、f3、f4或更高世代的植物。
[0132]本申请中所定义的在相似条件下可以是在相似的环境条件下或在相似的实验室条件下。
[0133]本发明包括通过将两种亲本烟草植物进行杂交并收获得到的烟草种子而生产的烟草种子，其中至少一种亲本烟草植物是NCBEX1F。在一个方面，NCBEX1F是父本植物。在另一个方面，NCBEX1MS是母本植物。本发明的一个方面提供了在cyp82e4和cyp82e5v2两个基因座处分别对SEQ ID NO:1和SEQ ID N0:2纯合的烟草植物，其具有高于75%、80%、85 %、90 %、95 %、98 %或99 %的TN90或TN90LC的共同遗传背景。在一个方面，本发明的在cyp82e4和cyp82e5v2两个基因座处对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2纯合的植物提供了接近或超过50%、75%或100%的后代遗传。在一个方面，本发明的植物具有与TN90LC至少95 %、至少97 %、至少98 %或至少99 %相似的遗传背景。在另一个方面，本发明的植物表现出低NNN，并且不容易转化成高NNN。在一个方面，本发明的植物是抗镰刀霉枯萎病的母本或父本植物的后代植物。
[0134]一个方面，本发明的植物是具有适度高产潜力的中-晚熟品种。另一个方面，本发明的植物提供了广范的重要农艺特征。在进一步的方面中，本发明的植物具有1、2、3、4或更多种性状，包括对黑胫病的适度抗性、对青霉病的一定耐受性、黑根腐病抗性和对常见病毒疾病的抗性。另一个方面，本发明的植物具有青霉病耐受性和对两类黑胫病的4级抗性以及高的根腐病抗性。一个方面，本发明的植物例如NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90缺乏镰刀霉枯萎病抗性。另一个方面，本发明的植物抗镰刀霉枯萎病。
[0135]一个方面，本发明的植物具有降低或消除的将烟碱转变成去甲烟碱的能力。一个方面，烟碱转化百分率低于在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种中发现的转化百分率的约75%、约70%、约60%、约50%或约25%。在本发明的植物(包括NCBEX1F、NCBEXIMS和NC EX90)中的烟碱转化率可以低于约4%、约3.5%、约3%、约2.5%、约2%、约1.5%、约1%、约3-1%、约3-0.5%或约2-0.5%。在优选方面中，烟碱转化百分率低于不具有cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop的TN90中发现的转化百分率的约25%、约10%、约5%或约2%。一个方面，本发明的烟草植物具有约
3.5、约3.25、约3.0或约2.75%或更低的烟碱转化率。另一个方面，本发明的烟草植物的烟碱转化率可以为约 4.0,3.9,3.8,3.7,3.6,3.5,3.4,3.3,3.2,3.1,3.0,2.9,2.8,2.7,2.6、2.5、2.4、2.3、2.2、2.1、2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6,0.5%或更低。另一个方面，本发明的烟草植物的烟碱转化率可以为约2.9,2.8,2.7、2.6、2.5、2.4、2.3、2.2、2.1、2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、
0.7、0.6%或更低。另一个方面，烟碱转化率可以为约0.5至0.9%、0.5至1.5%,0.5至2.0%,0.5至2.5%,0.5至2.75%和0.5至3.0%。另一个方面，烟碱转化率可以为约1.0至 1.5%、1.0 至 1.75%、1.0 至 2.0%、1.0 至 2.5%、1.0 至 2.75%和 1.0 至 3.0%。另一个方面，在本发明的植物中烟碱转化率可以低于约2.9,2.75,2.5,2.25,2.0、1.9、1.8、1.7、
1.6,1.5,1.4,1.3,1.2,1.1或1.0%。一个方面，本发明的烟草植物具有3.5,3.25,3.0或
2.75%或更低的烟碱转化率。 [0136]另一个方面，本发明的烟草植物与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比，通常具有低于约0.10%干重的降低量的去甲烟碱。例如，在这样的植物中，去甲烟碱含量可以为约1.2,1.0,0.7,0.5,0.4,0.2,0.1,0.09,0.085、0.08,0.075,0.07,0.065,0.06,0.055,0.05,0.045,0.04,0.035,0.025,0.01,0.009、0.0075,0.005,0.0025,0.001,0.0009,0.00075,0.0005,0.00025,0.0001 % 干重或不可检测。另一个方面，去甲烟碱含量可以低于约1.2、1.0、0.9、0.8、0.7、0.5、0.4、0.2、0.1、0.075,0.05,0.025,0.01,0.009,0.0075,0.005,0.0025,0.001,0.0009,0.00075,0.0005、0.00025,0.0001 %干重。另一个方面，在这样的植物中，去甲烟碱含量可以为约1.2-1.0、0.7-0.5,0.4-0.2,0.1-0.075,0.05-0.025,0.0L0.0075,0.005-0.0025,0.001-0.00075、
0.0005-0.00025或0.0005—0? 0001 %干重。在本发明的植物中，与TN90LC的商业种批(seedlot)相比，去甲烟碱在植物总生物碱类中的百分比相对较低。在本发明的植物中，去甲烟碱可以为总生物碱的2-1 %、低于3%、约2%、约1.5%、约1%或0.75%。
[0137]使用来自于本发明的植物和植物部分的烟草植物材料可以制造与从在相似条件下生长并加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，具有降低的亚硝基胺含量和/或更稳定的低烟碱转化率的烟草产品。从本发明的烟草植物生产的烟草产品可以具有低于约3mg / g的去甲烟碱量。例如，在这样的产品中，去甲烟碱含量可以为约 3.0mg / g、2.5mg / g、2.0mg / g、1.5mg / g、1.0mg / g>750 u g / g、500pg / g、250pg / g、IOOpg / g、75pg / g、50pg / g、25pg / g、10pg / g、7.0pg / g、5.0pg / g、
4.0pg / g、2.0pg / g、1.0pg / g、0.5pg / g、0.4pg / g、0.2pg / g、0.1pg / g、0.05pg /g、0.01pg / g或不可检测。在某些方面，从本发明的烟草植物生产的烟草产品可以具有低于约IOpg / g的NNN量。例如，在这样的植物中，NNN含量可以为约IOpg / g、7.0pg / g、
5.0pg / g、4.0pg / g、2.0pg / g、1.0pg / g、0.5pg / g、0.4pg / g、0.2pg / g、0.1pg /g、0.05pg / g、0.01pg / g或不可检测。在本发明的植物中包含的次生生物碱相对于总生物碱含量的百分比与来自于 TN90LC的商业种批的百分比可能没有统计学差异。
[0138]两种近交烟草品种或两种杂种烟草品种之间的差异可以使用统计学方法来评估。统计学分析包括计算平均值、确定变异来源的统计学显著性以及计算适当的方差分量。用于确定统计学显著性的方法在本领域中是已知的。统计学软件是可以获得的，例如SAS的PROC GLM功能。显著性一般表不为“p-值”。统计学显著的p-值低于0.10。在优选方面，P-值低于或等于0.05。另一个方面，P-值为0.04或更低、0.03或更低、0.02或更低。在再另一个方面，统计学显著的值低于0.01。在再另一个方面，它可以低于0.009、低于0.008、低于0.007、低于0.006、低于0.005、低于0.004、低于0.003、低于0.002或低于0.001。
[0139]本发明的对cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop等位基因纯合的烟草植物与具有野生型烟碱去甲基酶CYP82E4和E5基因的相应对照低转化体植物相比，具有统计学上显著更低的回复率。此外，纯合的CYP82E4和CYP82E5双突变体烟草植物具有低于约
2.0%，例如不可检测至约2.0%、约1.0至2.0%、约0.8至1.8%、约0.8至2.0%或约1.0至2.0%的烟碱向去甲烟碱的转化百分率。
[0140]可以使用本领域中已知的方法(例如气相色谱)在乙烯处理的叶中测量烟碱和去甲烟碱。通过用样品中测量的去甲烟碱水平除以烟碱和去甲烟碱的总水平并乘以100来计算样品中烟碱去甲基化的百分比。在来自于本发明植物的样品中，烟碱去甲基化的百分比为来自于从TN90的商业种批生长的个体植物的样品的50、40、30、20、10%。
[0141]一个方面，本发明的烟草植物具有约73、约72、约71、约70、约69、约68、约67或约66的USDA质量指数。一个方面，本发明的烟草植物具有约65的USDA质量指数。另一个方面，质量指数可以为至少约55、60、62.5或更高。另一个方面，本发明的烟草植物可以具有约60-65、约60-70、约62.5_65、约62.5-70或约65-70的范围或其中的任何范围之内的质量指数。[0142]本发明的植物，包括NCBEX1MS、NCBEX1F和NC EX90，可以具有任何产量，包括高(例如高于30001bs / A)、中等高(例如2200-30001bs / A)和中等(例如低于20001bs /A)的产量潜力。
[0143]另一个方面，本发明还提供了从NCBEX1F、NCBEX1MS或NCEX90植物的种子生长的植物，其中从由所述种子生长的烟草植物获得的生物碱与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比，具有降低的去甲烟碱和/或更稳定的低烟碱转化率，还提供了来自于这样的植物的植物部分和组织培养物，这些栽培品种的代表性样品种子已保藏于ATCC，例如NCBEX1F的ATCC保藏号为PTA-11718，NCBEXIMS的ATCC保藏号为 PTA-11719。
[0144]本发明的一个方面提供了栽培品种NCBEX1F、NCBEX1MS和NC EX90的部分。例如，当在本文中使用时，植物部分包括但不限于栽培品种NCBEX1F、NCBEX1MS和/或NC EX90的叶、花粉、胚、子叶、胚轴、根、根尖、花药、花、胚珠、芽、茎、杆、木髓和蒴果、叶柄、荚、包含组织、愈伤组织、细胞或原生质体的组织培养物。另一个方面，本发明提供了来自于以栽培品种NCBEX1F、NCBEX1MS和/或NC EX90为亲本或祖先的杂种以及来自于NCBEX1F、NCBEX1MS和/或NC EX90衍生的烟草植物的部分。再另一个方面，本发明提供了来自于上述植物和组织培养物的遗传修饰(例如通过常规育种或遗传工程技术)的形式的部分。
[0145]本发明的另外的方面提供了包含烟草的产品，其中所述烟草还包含来自于本发明的植物及其部分的烟草。本发明的其他方面提供了来自于本发明的植物的调制植物烟叶和其他植物部分。因此，在某些方面，调制的植物部分包括但不限于叶、花粉、胚珠、胚、子叶、胚轴、分生细胞、原生质体、根、根尖、雌蕊、花药、花、芽、茎、荚、叶柄、蒴果等及其组合。
[0146]因此，在某些方面，本发明提供了调制的烟草，其包含被称为NCBEX1F的烟草植物的叶，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。另一个方面，本发明提供了调制的烟草，其包含被称为NCBEX1MS的烟草植物的烟，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA`-11719保藏于ATCC。再另一个方面，本发明提供了包含被称为NC EX90的烟草植物的烟的调制烟草。
[0147]一个方面，本发明提供了调制的烟草，其包含被称为NCBEX1F的烟草植物的茎，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。另一个方面，本发明提供了调制的烟草，其包含被称为NCBEX1MS的烟草植物的茎，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。再另一个方面，本发明提供了包含被称为NCEX90的烟草植物的茎的调制烟草。
[0148]在再其它的方面，本发明提供了调制的烟草，其包含被称为NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90的烟草植物的叶和茎，这些栽培品种的代表性样品种子已保藏于ATCC，NCBEX1F 的 ATCC 保藏号为 PTA-11718，NCBEXIMS 的 ATCC 保藏号为 PTA-11719。
[0149]本发明还提供了 NCBEX1F、NCBEXIMS或NC EX90种子或本发明的其他种子(例如杂种、近交系等)的容器，其中从超过50%的所述种子生长的烟草植物获得的生物碱与在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比，具有降低的去甲烟碱和/或更稳定的低烟碱转化率。另一个方面，从容器中超过55%、60%、65%、70%、75%、80%,85%,90%,95%的种子生长的NCBEX1F、NCBEX1MS或NC EX90植物或本发明的其他植物获得的生物碱与在相似条件下生长的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比，具有降低的去甲烟碱和/或更稳定的低烟碱转化率，栽培品种NCBEX1F和NCBEX1MS的代表性样品种子已保藏于ATCC，NCBEX1F的ATCC保藏号为PTA_11718，NCBEX1MS的ATCC保藏号为 PTA-11719。
[0150]NCBEX1F、NCBEXIMS或NC EX90种子或本发明的其他种子的容器可以含有任何数目、重量或体积的种子。例如，容器可以含有至少或超过约100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000个或更多种子。或者，容器可以含有至少或超过约I盘司、5盘司、10盘司、I膀、2膀、3膀、4膀、5膀或更多种子。NCBEXIF和NCBEXIMS栽培品种的代表性样品种子已分别以ATCC保藏号PTA-11718和PTA-11719保藏于ATCC。
[0151]NCBEX1F、NCBEXIMS或NC EX90种子或本发明的其他种子的容器可以是在本领域中可以获得的任何容器。作为非限制性实例，容器可能是盒、袋、包、小袋、带卷、桶、箔包或管，这些栽培品种的代表性样品种子已保藏于ATCC。NCBEX1F和NCBEX1MS栽培品种的代表性样品种子已分别以ATCC保藏号PTA-11718和PTA-11719保藏于ATCC。
[0152]另一个方面，本发明还提供了 NCBEX1F、NCBEX1MS或NC EX90种子的容器，其中超过50%的NCBEX1F、NCBEX1MS或NC EX90种子或本发明的其他种子与在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种相比，具有降低的去甲烟碱和/或更稳定的低烟碱转化率。NCBEX1F和NCBEX1MS栽培品种的代表性样品种子已分别以ATCC保藏号 PTA-11718 和 PTA-11719 保藏于 ATCC。
[0153]一个方面，本发明提供了 NCBEX1F、NCBEX1MS或NC EX90植物或本发明的其他植物的种子，其中从所述种子生长的植物是雄性不育的。NCBEX1F和NCBEX1MS栽培品种的代表性样品种子已分别以ATCC保藏号PTA-11718和PTA-11719保藏于ATCC。
[0154]从本发明的烟草栽培品种、株系、品种或杂种获得的烟草材料，包括不限于任何植物部分例如叶、中脉和杆，可用于制造烟草产品，包括但不限于香烟产品(例如香烟和比迪(bidi)烟)、雪茄产品(例如雪茄卷烟和小雪茄)、烟斗烟产品、无烟香烟产品、无烟烟草产品(例如湿鼻烟、干鼻烟和嚼烟)、薄膜、可咀嚼物、片、成型部分、凝胶、可食用单元、不溶性基质、空心形状等。参见例如美国专利公布号US2006 / 0191548，将其全部内容通过引用并入本文。
[0155]源自于本发明的植物的烟草产品还包括香烟以及其它吸烟制品，特别是包括过滤元件的吸烟制品，其中可抽吸材料的杆包括烟草掺混物中的调制烟草。一个方面，烟草产品可以是烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
[0156]一个方面，本发明的烟草产品可以是掺混的烟草产品。在本发明的其它方面中，本发明的烟草产品可以是低烟碱烟草产品。在再其他的方面，本发明的烟草产品可以是具有低烟碱含量的掺混烟草产品。因此，本发明的烟草产品可以是掺混的低烟碱烟草产品。烟草产品材料包括来自于本发明的烟草材料的掺混物，其中所述掺混物以烟草材料的干重计，包含至少约5、10、20、30、40、50、60、70、80、90或95重量百分数的调制烟草。US2008 /0245377以其关于掺混混合物的全部内容通过引用并入本文。
[0157]一个方面，可以使用来自于本发明的植物和/或植物部分的烟草植物材料来制造具有降低量的亚硝基胺含量的烟草产品。所述烟草产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，通常具有小于约3mg / g的降低量的去甲烟碱。 例如，在这样的产品中，去甲烟碱含量可以为3.0mg / g、2.5mg / g、2.0mg / g、1.5mg / g、1.0mg / g>750 u g / g、500Pg / g、250Pg / g、IOOPg / g、75Pg /g、50Pg / g、25Pg / g、10Pg / g、7.0Pg / g、5.0Pg / g、4.0Pg / g、2.0Pg / g、1.0Pg /g、0.5Pg / g、0.4Pg / g、0.2Pg / g、0.1pg / g、0.05pg / g、0.01pg / g 或不可检测。包含来自于本发明的植物或其部分的烟草材料的烟草产品与从在相似条件下生长和加工的TN90LC或大多数其他商业白莱烟栽培品种制备的产品相比，通常具有低于约IOpg / g的降低量的NNN。例如，在这样的产品中，去甲烟碱含量可以为约IOPg / g、7.0pg / g、5.0pg /g、4.0Pg / g、2.0Pg / g、l.0Pg / g、0.5Pg / g、0.4Pg / g、0.2Pg / g、0.1Pg / g、0.05Pg /g、0.01Pg / g或不可检测。在本发明的植物中包含的次生生物碱相对于总生物碱含量的百分比可以与TN90LC的商业种批没有统计学差异。[0158]被称为NCBEX1F、NCBEX1MS 或 NC EX90 的带有 cyp82e4W329Stop 和cyp82e5v2W422Stop等位基因的本发明烟草植物可以在植物育种计划中用于产生有用的株系、栽培品种、品种、后代、近父系和/或杂种。因此，在一些方面，将含有cyp82e4W329Stop和Cyp82e5V2W422St0p等位基因的F1、F2、F3或更晚世代的烟草植物与第二烟草属(Nicotiana)植物杂交，并鉴定其中存在cyp82e4W329Stop和cyp82e3v2W422Stop等位基因的杂交后代。应该认识到，所述第二烟草属植物是任选地具有其他所需性状的TN90或TN90LC。在一些方面，其他所需性状可以是下面描述的除草剂抗性。还应该认识到，第二TN90或TN90LC烟草属植物可以含有cyp82e4W329Stop和cyp82e3v2W422Stop等位基因。
[0159]在再其它的方面中，本发明的方法还包括自花授粉，或对雄性不育花粉受体用能够用于生产本发明的后代植物(例如本发明的雄性不育杂种)的花粉供体进行授粉。雄性不育花粉受体植物或花粉供体植物在烟碱去甲基酶基因座处具有至少一个、优选两个突变的等位基因，例如cyp82e4W329Stop和cyp82e3v2W422Stop。在一个方面，在各个烟碱去甲基酶基因座处的两个等位基因都是突变的等位基因，使得植物对cyp82e4W329St0p和cyp82e5v2W422Stop 是纯合的。
[0160]育种可以通过任何已知程序来进行。DNA指纹、SNP或相似技术可以用于标记辅助选择(MAS)育种程序中，以将烟碱脱甲基酶基因的突变等位基因转移或繁殖至其他烟草中。例如，育种者可以从含有cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop等位基因的基因型与农艺学所需的基因型的杂交来形成隔离群。可以使用从cyp82e4W329St0p或cyp82e5v2W422Stop等位基因或其片段产生的标志物，利用本领域已知的或本文中所列的技术之一筛选F2或回交世代的植物。可以将鉴定为具有cyp82e4W329St0p和cyp82e5v2W422Stop等位基因的植物回交或自花授粉以形成待筛选的第二群体。根据预期的遗传模式或所用的MAS技术，在每轮回交之前，可能需要将选定的植物自花授粉以帮助鉴定所需的单株植物。回交或其他育种程序可以重复直至恢复回交亲本的所需表型。本发明中的轮回亲本可以是NCBEX1F或NC EX90。其他育种技术可以在例如Wersman，E.A.和Ruffy, R.C.1987,第 17 章，Tobacco,第 669-698 页，见:Cultivar Development.CropSpecies.W.H.Fehr (编辑)，MacMillan Publishing G0., Inc., New York, N.Y.中找到，通过引用将其全部并入本文中作为参考。
[0161]与烟草(Nicotiana tabacum)表现出育种相容性的烟草属物种包括Nicotianaamplexicaulis PI271989、本塞姆氏烟草(Nicotiana benthamiana)PI555478、印度烟草(Nicotiana bigelovii)PI555485、迪勃纳氏烟草(Nicotiana debneyi)、Nicotianaexcelsior PI224063、粘毛烟草(Nicotiana glutinosa)PI555507>Nicotiana goodspeediiPI241012、野生烟草(Nicotiana gossei)PI230953、西烟草(Nicotiana hesperis)PI271991、Nicotiana knightiana PI555527、Nicotiana maritima PI555535、麦格隆熄丰烟草(Nicotiana megalosiphon)PI555536、Nicotiana nudicaulis PI555540、Nicotianapaniculata PI555545、皱叶烟草(Nicotiana plumbaginifolia)PI555548、波缘烟草(Nicotiana repanda) PI555552、黄花烟草(Nicotiana rustica)、Nicotiana suaveolensPI230960、林烟草(Nicotianasylvestris)PI555569、Nicotiana tomentosa PI266379、绒毛烟草(Nicotiana tomentosiformis)和 Nicotiana trigonophyllaPI555572。也参见由美国植物病理学会(American Phytopathology Society)出版的《烟草疾病纲要》(Compendium of Tobacco Diseases)或由 Japan Tobacco Inc 出版的《烟草属图解》(TheGenus Nicotiana Illustrated),其全部内容通过引用并入本文。
[0162]使用本文描述的烟草植物的植物育种程序的结果包括有用的株系、栽培品种、品种、后代、近交系和杂种。当在本文中使用时，术语“品种”是指共有将它们与同一物种的其他植物区分开的恒定特征的植物群体。品种通常是、尽管并不总是商业销售的。尽管具有一种或多种独特性状，但品种的进一步特征在于该品种内的个体之间非常小的总体变异。通过几代的自花授粉和选择，或使用组织或细胞培养技术从单一亲本进行无性繁殖，可以产生“纯系”品种。品种可以基本上源自另一个株系或品种。正如由《国际植物新品种保护公约》(International Conventionfor the Protection of New Varieties of Plants) (1961年12月2日，并在1972年11月10日、1978年10月23日和1991年3月19日在日内瓦修订)所定义的，如果满足下述条件，则品种“基本上源自于”初始品种:a)它主要源自初始品种或源自主要从初始品种衍生的品种，同时保持由初始品种的基因型或基因型组合获得的关键特征的表达山)它可以与初始品种明显区分开；以及c)除了由源自衍生作用所产生的差异之外，它在由初始品种的基因型或基因型组合所产生的关键特征的表达方面与初始品种相符。基本上衍生的品种可以例如通过天然或诱发突变体的选择、体细胞无性系变体、来自于初始品种的植物的变体个体、回交或转化来获得。与品种有区别的“株系”最通常是指一组非商业化使用的植物，例 如在植物研究中使用的植物。对于一种或多种目标性状来说，株系通常在个体之间几乎不表现出总体变异，尽管对其他性状来说在个体之间可能存在一些变异。
[0163]可以通过防止第一品种的母本植物(即，种子亲本)的自花授粉，使得来自第二品种的父本植物的花粉使母本植物受精，并且允许在母本植物上形成F1杂体种子来产生杂种烟草品种。可以通过在花发育早期对花去雄来防止母本植物的自花授粉。或者，可以使用雄性不育形式防止母本植物上的花粉形成。例如，可以通过细胞质雄性不育(CMS)或其中转基因抑制小孢子发生和/或花粉形成的转基因雄性不育或自交不亲和性来产生雄性不育。含有CMS的母本植物特别有用。在其中母本植物是CMS的情形中，可以从雄性不育植物收集花粉并人工施用至CMS母本植物的柱头中，并收集所得到的F1种子。
[0164]植物可用于形成单交烟草F1杂种。在这样的情形中，亲本品种的植物可以作为基本上同源的邻接群来种植，以便于从父本植物向母本植物的自然异花授粉。通过常规手段选择性地收获母本植物上形成的F1种子。也可以将两种亲本植物品种成片种植，并收获在母本上形成的F1杂种种子和作为自花授粉的结果在父本上形成的种子的掺混物。或者，可以进行三元杂交，其中使用单交F1杂种作为母本并将其与不同的父本杂交。作为另一种可选方案，可以产生双交杂种，其中将两种不同单交的F1后代进行自交。自交不亲和性可以特别有利地在形成双交杂种时用于防止母本的自花授粉。
[0165]在某些情况下，成功的杂交产生具有cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop等位基因并且如果需要，可以与亲本例如NCBEX1F或NC EX90之一回交的F1植物(其是可育的)。在某些情况下，在F2代的植物群体中筛选cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop等位基因。可以将选择的植物与亲本之一杂交，并对第一代回交(BCl)植物自花授粉以产生BClF2群体，再一次对其进行变体烟碱去甲基酶基因表达(例如烟碱去甲基酶基因的无效形式)的筛选。将回交、自花授粉和筛选的过程重复例如至少4次，直至最终的筛选产生可育并且与轮回亲本相当相似的植物。如果需要，将该植物自花授粉，并随后对后代再一次进行筛选以确认植物表现出与NCBEX1F相同的低且稳定的烟碱转化表型。选择的植物的育种者种子使用标准方法来产生，包括例如田间试验、烟碱去甲基酶的无效状况的证实、调制烟叶的化学分析以确定生物碱水平和/或调制烟叶的化学分析以确定去甲烟碱与烟碱+去甲烟碱的比率。
[0166]一个方面，F1后代是NCBEX1F与NCBEX1MS之间杂交的结果，以产生雄性不育的F1后代。雄性不育的烟草植物可以通过本领域中已知的任何方法来生产。生产雄性不育烟草的方法描述在Wernsman, E.A.和Rufty, R.C.1987.《栽培品种开发，作物物种》(CultivarDevelopment.Crop Species.)第 17 章，烟草，第 669-698 页，W.H.Fehr (主编),MacMillanPublishing G0., Inc., New York, N.Y.761pp 中。
[0167]本发明还提供了通过将栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90之一与自身或不同烟草株系进行杂交来产生烟草植物的方法。本发明还涉及用于生产源自于栽培品种NCBEX1F.NCBEX1MS和/或 NC EX90的其他烟草栽培品种或育种株系的方法，所述方法包括将栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90的植物与第二烟草植物进行杂交并生长后代种子以产生源自于NCBEX1F、NCBEX1MS或NC EX90的烟草植物。本发明的另外的方面提供了用于生产在其遗传材料中含有一个或多个转基因的烟草植物的方法，所述方法包括将本发明的栽培品种与含有一个或多个转基因的第二烟草植物杂交以产生包含任选地可操作地与一个或多个调控元件连接的转基因的后代。在一个方面，第二栽培品种可以是源自于用一个或多个转基因转化的栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90的植物。
[0168]本发明还提供了栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90及其杂种和后代的植物的无性繁殖。一个方面，本发明提供了烟草栽培品种的植物的无性繁殖方法，所述方法包括对能够从栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90的植物繁殖的组织进行培育以获得增殖的芽，以及使所述增殖芽生根以获得生根的幼苗。另一个方面，植物组织可以来自于栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS和/或NC EX90的植物的F1杂种。一个方面，植物组织可以来自于通过对栽培品种NCBEX1F、NCBEX1MS和/或NC EX90进行繁育而获得的F2、F3、F4或更高世代的植物。
[0169]包含烟碱去甲基酶基因中的突变的植物可以通过选择或筛选诱变的植物材料或其后代来鉴定。这样的筛选和选择方法对于本领域普通技术人员来说是已知的。筛选和选择方法的实例包括但不限于Southern分析、用于检测多核苷酸的PCR扩增、Northern印迹、RNase保护、引物延伸、用于检测RNA转录本的RT-PCR扩增、用于检测多肽和多核苷酸的酶或核酶活性的酶学测定法、及蛋白质凝胶电泳、Western印迹、免疫沉淀和用于检测多肽的酶联免疫测定法。其他技术例如原位杂交、酶染色和免疫染色也可用于检测多肽和/或多核苷酸的存在或表达。用于执行所有所称技术的方法是已知的。
[0170]应该理解，本发明的烟草植物、包括NCBEX1F、NCBEX1MS和/或NC EX90，可以使用本领域已知的技术用遗传构建物或转基因进行转化。非限制性地，所需性状的实例是除草剂抗性、抗害虫性、抗病性、高产量、高等级指标、可保存性、调制质量、机械采收性、保持能力、烟叶质量、高度、植物成熟(例如，早熟、早至中熟、中熟、中至晚熟或晚熟)、茎大小(例如，小茎、中茎、大茎)或每株植物的叶数(例如，叶片数量少小(例如，5-10片叶)、中(例如，11-15片叶)或多(例如，16-21片叶)叶数)，或其任意组合。本发明的任何植物，可以用作组织培养、再生、转化或其任何组合的基础。一个方面，通过组织培养、转化或两者得到的本发明植物具有在相似条件下的栽培品种NCBEX1F、NCBEXIMS或NC EX90的基本上所有形态和生理特征。
[0171]已对本发明进行了一般性描述，通过参考下面的实施例，将会更容易地理解本发明，除非指明，提供这些实施例是出于说明的目的，而不打算限制本发明。
实施例
[0172]实施例1
[0173]纯合的cyp82e4W329Stop 和 cyp82e5v2W422Stop 突变体植物繁育至 TN90LC 背景中
[0174]NC EX90是白莱烟栽培品种TN90LC的回交衍生的形式，其携带导入的cyp82e4和cyp82e5v2中的有害突变，这两个基因先前被证实编码烟碱去甲基酶(Lewis等，同上)。为了制备NC EX90，对从TN90LC的商品种批生长的单个植物进行选择，并最初在温室中与植物 GH08B-14 杂交。GH08B-14 是由 Lewis 等(2010)描述的对 cyp82e4W329Stop 和cyp82e5v2W422Stop突变杂合的白莱烟栽培品种。在多个F1植物中筛选cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变的存在。选择个体F1植物并将其在温室中与TN90LC回交以产生BC1F1后代。筛选多个BC1F1后代，并鉴定对cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变杂合的个体植物。将杂合的所选BC1F1植物在温室中与TN90LC回交以产生BC2F1种子。在多个BC2F1植物中筛选cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变的存在以鉴定杂合的后代植物用于后一轮的回交育种。使用这种回交程序，在BC3Fp BC4F1和BC5F1后代中鉴定具有cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变的个体杂合植物。
[0175]为了产生对cyp82e4W329Stop 和 cyp82e5v2W422Stop 突变纯合的植物，在 BC5F1后代植物中筛选cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变以鉴定杂合植物。将对cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变杂合的个体植物自花授粉以产生BC5F2种子。对多个BC5F2后代进行基因分型以鉴定对cyp82e4W329Stop和cyp82e5v2W422Stop突变两者纯合的个体。将四个个体BC5F2后代植物自花授粉以产生4个BC5F3后代株系。BC5F3对CYP82E4W329Stop 和 CYP82E5v2W422Stop 突变是纯合的。
[0176] 具有所需性状的BC5F3后代株系的鉴定
[0177]在2010年，在三个NorthCarolina 田间研究位点(Waynesville、Laurel Springs和ReidsviIIe)，将来自于4个BC5F3后代株系的植物以随机完全区块设计进行生长，三个重复，以进行调制烟叶的化学、产量和物理质量的评估。各个重复区块是20株植物的地块。在成熟时将植物去茎(stalk cut)，风干，并通过以前的USDA烟草等级进行评估。使用地块体量来确定每英亩产量。从每个地块收集50克复合叶样品，并通过气相色谱分析烟碱、去甲烟碱、新烟草碱和假木贼碱的百分比。BC5F3后代株系#3被鉴定为具有优越的产量、高等级和所需的生物碱含量，并被命名为“NC EX90”。
[0178]NC EX90 的分析
[0179]气相色谱生物碱分析的结果显示在表1中。
[0180]使用SAS的PROC GLM功能，进行使用单自由度CONTRAST语句的分析。该株系与TN90LC的商业种批相比表现出明显更低的去甲烟碱水平(P〈0.0001)和烟碱转化率(P=0.0002)(表1)。NC EX90与TN90LC相比，次生生物碱与总生物碱的比率明显更低(P=0.0071)。对于烟碱、新烟草碱、假木贼碱、产量或干烟叶质量来说，两个株系没有显著差
巳
[0181]`
【权利要求】
1.一种烟草产品，其由从烟草栽培品种NCBEX1F的种子生长的烟草植物或其部分制备，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
2.权利要求1的烟草产品，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟、烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
3.权利要求2的烟草产品，其中所述产品含有降低量的去甲烟碱。
4.一种烟草产品，其由从烟草栽培品种NCBEX1MS的种子生长的烟草植物或其部分制备，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
5.权利要求4的烟草产品，其中所述产品选自小雪茄、不通气隐藏式过滤嘴香烟、通气隐藏式过滤嘴香烟、雪茄、鼻烟、烟斗烟丝、雪茄烟叶、卷烟烟叶、嚼烟、整烟叶、切碎烟叶和生切烟丝。
6.权利要求5的烟草产品，其中所述产品含有降低量的去甲烟碱。
7.一种烟草栽培品种NCBEX1F的种子，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718 保藏于 ATCC。
8.一种烟草植物或其部分，其通过栽培权利要求7的种子来生产。
9.权利要求8的烟草植物或其部分的采收烟叶。
10.权利要求9的采收烟叶，其中所述烟叶含有降低量的去甲烟碱。
11.权利要求10的采收烟叶，其中所述降低量的去甲烟碱是在燃烧所述烟叶产生的烟气流中降低的。`
12.—种烟草栽培品种NCBEX1MS的种子，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号 PTA-11719 保藏于 ATCC。
13.一种烟草植物或其部分，其通过栽培权利要求12的种子来生产。
14.权利要求13的烟草植物或其部分的采收烟叶。
15.权利要求14的采收烟叶，其中所述烟叶含有降低量的去甲烟碱。
16.权利要求15的采收烟叶，其中所述降低量的去甲烟碱是在燃烧所述烟叶产生的烟气流中降低的。
17.烟草栽培品种NCBEX1F的F2后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11718保藏于ATCC。
18.烟草栽培品种NCBEX1MS的F2后代植物，所述栽培品种的代表性样品种子以ATCC保藏号PTA-11719保藏于ATCC。
19.权利要求17的F2后代植物，其中所述F2后代植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
20.权利要求18的F2后代植物，其中所述F2后代植物是细胞质雄性不育(CMS)的。
【文档编号】C12N15/82GK103687480SQ201280019633
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年2月28日 优先权日:2011年2月28日
【发明者】R·S·刘易斯, R·E·杜威 申请人:北卡罗莱纳州立大学