一种多重pcr同时检测gstm1、gstt1、gstp1基因多态性的简易方法
【专利摘要】本发明涉及一种多重PCR同时检测GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多态性的简易方法，在GSTP1A313G多态性TP-ARMS-PCR的基础上，加入3个多态性位点的扩增引物，配成引物混合物后一起扩增，扩增后琼脂糖凝胶电泳即可对3个多态性位点进行分型。本发明中的有益效果为：对GSTP1A313G多态性的分型不需要内切酶，分型所需时间更短、成本更低，且同时对GSTM1、GSTT1缺失多态性进行了分型，进一步较低了成本，缩短了检测时间，不需要昂贵的设备，可以在普通实验室开展，具有较好的应用前景。
【专利说明】—种多重PCR同时检测GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多态性的
简易方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于遗传学领域，具体涉及一种多重PCR同时检测GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多态性的简易方法。
【背景技术】
[0002]GSTMl 'GSTTl缺失多态性和GSTPl A313G (Ilel05Val)多态性是3个在遗传学上研究得比较多的多态性位点。因为都是谷胱甘肽转移酶的功能性多态性位点，这3个多态性通常一起被研究。目前，对GSTMl,GSTTl缺失多态性的检测通常使用多重PCR的方法，而对GSTPl A313G多态性的检测通常使用酶切的方法，该方法需要昂贵的内切酶对PCR产物进行消化，然后再电泳分型，因此成本较高。有必要建立一种能在普通实验室开展的能同时对3个多态性位点同时进行检测的方法。
[0003]四引物扩增抗拒突变体系PCR (tetraprimer amplification refractorymutation system polymerase chain reaction, TP-ARMS-PCR)是在等位基因特异性扩增的基础上建立的I次PCR反应即可对SNP分型的技术。该技术用4条引物一次PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳就可以区分SNP的3种基因型，不需要内切酶，是一种可在单管中对SNP进行快速测定的高效廉价方法。如果在GSTPl A313G多态性TP-ARMS-PCR的基础上，加入GSTMl、GSTTl缺失多态性的引物一起扩增，从而可以实现I次PCR反应即可同时对3个多态性位点进行分型。因为该方法对A313G多态性的分型不需要内切酶，因此所需时间更短、成本更低，且同 时对6^#7、^777缺失多态性进行了分型，进一步较低了成本，缩短了检测时间，有较好的应用前景。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种多重PCR同时检测α7￥7、α777、α7Ρ7基因多态性的简易方法，该简易方法可以对缺失多态性和A313G多态性进行检测，从而降低成本，缩短检测时间。
[0005]本发明是这样实现的，其特征是:在GSTPl A313G多态性TP-ARMS-PCR的基础上，加入3个多态性位点的扩增引物，配成引物混合物后一起扩增，扩增后琼脂糖凝胶电泳即可对3个多态性位点进行分型。
[0006]本发明所述3个多态性位点的扩增引物共计8条，各引物的核苷酸序列及其在反应体系中的浓度、扩增产物长度见下表1:
表1 GSTPl A313G多态性和GSTMl、GSTTI缺失多态性多重PCR扩增引物
【权利要求】
1.一种多重PCR同时检测GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多态性的简易方法，其特征是:在GSTPl A313G多态性TP-ARMS-PCR的基础上，加入3个多态性位点的扩增引物，配成引物混合物后一起扩增，扩增后琼脂糖凝胶电泳即可对3个多态性位点进行分型。
2.根据权利要求1所述一种多重PCR同时检测GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多态性的简易方法，其特征在于:所述3个多态性位点的扩增引物共计8条，各引物的核苷酸序列及其在反应体系中的浓度、扩增产物长度见下表:
【文档编号】C12Q1/68GK103849685SQ201410054417
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年2月18日 优先权日:2014年2月18日
【发明者】朱伟锋, 邓燕, 罗达亚, 范瑞琦, 揭克敏, 万福生, 易敬林, 刘伟伟 申请人:南昌大学