一种国酒香茶叶的制作方法
【专利摘要】本发明属于食品【技术领域】，具体涉及一种国酒香茶叶，所述的国酒香茶叶由1-99.99重量份茶叶、0.01-10重量份茅台酒致香微生物组成。本发明提供了一种国酒香茶叶的制备方法，采用本发明方法得到茶叶成既具有醇厚酒香又包含茶叶中的茶多酚等生理活性物质的国酒香茶叶，该茶叶满足现代人对健康的追求，可以在饮茶的同时也满足对酒香的需要。
【专利说明】一种国酒香茶叶
【技术领域】
[0001]本发明属于食品【技术领域】，具体涉及一种国酒香茶叶。
【背景技术】
[0002]茶是世界三大饮料之一，是多数中国人的一种常用饮品，而且，随着人们健康消费观念的普及，茶正被越来越多的人接受、喜爱和追求。茶叶深加工产品开发也逐渐呈现多样化，功能型茶饮料消费需求进一步加大，为适应国际、国内的市场需求，急需开发出更有效、更方便的健康快速消费茶产品
[0003]同时我国也是酒类生产和消费的大国，特别是酱香酒，因其具有香气香而不艳、低而不淡、醇香幽雅、不浓不猛、回味悠长等特点而深受喜爱，但长期饮酒对身体的危害，于是应运而生了各种果露酒，奶酒，药酒等；但很少见将茶叶与酒品进行结合的产品，而如果能够将两者进行合理的结合制造一种具有酱香酒香的茶叶，则既可以满足人们对酒香的要求，又可以降低酒精对人体的损害。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是利用发酵技术提供一种国酒香茶叶及其制造方法。在本发明的工艺条件下，制成既具有回味悠长酒香又包含茶叶中的茶多酚等生理活性物质的国酒香茶叶。该茶叶满足现代人对健康的追求，可以在饮茶的同时也满足对酒香的需要。
[0005]本发明通过下述技术方案实现的。
[0006]一种国酒香茶叶，由1-99.99重量份茶叶、0.01-10重量份茅台酒致香微生物组成。
[0007]所述的茶叶为经萎凋处理的茶青或成品茶。
[0008]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、白毛霉菌、根霉菌、梨头霉菌、假酵母、拟内胞霉、汉逊酵母、乳酸菌、醋酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌中的一种或几种组成。
[0009]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0010]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲或堆积酒醅5-10重量份和发酵期酒醅5-10重量份，分别加入到45-90重量份的无菌蒸馏水中振荡培养0.1-15小时，从中取100-1000 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在有氧或厌氧条件下用平板划线分离或稀释涂平板法纯化后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基(g/L)为茶叶1-200、胰化蛋白胨1-50、酵母提取物1-50、氯化钠
1-50、琼脂1-50，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0011]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于10-70°C，l-300rpm恒温摇床振荡培养1-20天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基(g/L)为:葡萄糖0-10、胰化蛋白胨0.1-10、酵母提取物0.1-10、氯化钠0.1-10 ；[0012]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4 °C条件下，以3000-11000r/min离心3_25min,弃上清液得到湿菌体,保藏于4°C冰箱备用。
[0013]所述茅台酒致香微生物的制备方法中的步骤I中对菌株进行紫外线-氯化锂复合诱变。
[0014]所述茅台酒致香微生物的制备方法中的步骤3得到的湿菌体制成粉剂或冻干粉。
[0015]一种国酒香茶叶的制备方法:
[0016]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体、粉剂或冻干粉重悬后，按重悬菌液:茶叶的体积重量比1: (0.1?100)均匀喷洒到灭菌后的茶叶上，将处理后的茶叶置于10-120°c，相对湿度20-90%的无菌或开放条件下发酵1-90天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、
4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2- 丁酮、2，6- 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3- 丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮或其锌配合物的一种或几种和无菌去离子水组成；
[0017]步骤2:在无菌或开放条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸0.1-90小时，熏蒸后在20-220°C条件下烘焙或使用UV-B灯照射2秒-48小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱或橡木桶中，密闭放置1-300天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁和/或豆类酶解液中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6-二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3_丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮或其锌配合物、茅台酒、金樱子提取物中的一种或几种组成。
实施例
[0018]实施例1
[0019]一种国酒香茶叶，由IOg茅台酒致香微生物、50g成品茶叶组成。
[0020]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、汉逊酵母、乳酸菌、醋酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌组成。
[0021]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0022]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲5g和发酵期酒醅5g，分别加入到45g的无菌蒸馏水中振荡培养0.1小时，从中取1000 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在有氧条件下用平板划线分离后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基为茶叶lg/L、胰化蛋白胨50g/L、酵母提取物lg/L、氯化钠50g/L、琼脂lg/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；[0023]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于10°C，300rpm恒温摇床振荡培养20天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:胰化蛋白胨0.lg/L、酵母提取物10g/L、氯化钠0.lg/L ；
[0024]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以3000r/min离心25min，弃上清液得到湿菌体，保藏于4°C冰箱备用。
[0025]国酒香茶叶的制备方法:
[0026]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的茅台酒致香微生物的湿菌体重悬后，将50ml的重悬菌液均匀喷洒到50g灭菌后的成品茶叶上，将处理后的茶叶置于10°C，相对湿度90%的无菌条件下发酵90天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮和无菌去离子水组成；
[0027]步骤2:在无菌条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸0.1小时，熏蒸后在220°C条件下烘焙2秒，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱中，密闭放置300天后得到国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3_丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2- 二酮、茅台酒、金樱子提取物组成。
[0028]实施例2
[0029]—种国酒香茶叶，由0.0lg茅台酒致香微生物、Ig经萎凋处理的茶青组成。
[0030]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的根霉菌、梨头霉菌、假酵母、拟内胞霉、汉逊酵母、乳酸菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌组成。
[0031]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0032]步骤1:在无菌条件下取茅台酒堆积酒醅IOg和发酵期酒醅5g，分别加入到90g的无菌蒸馏水中振荡培养15小时，从中取100 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用稀释涂平板法纯化后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基为茶叶200g/L、胰化蛋白胨lg/L、酵母提取物50g/L、氯化钠lg/L、琼脂lg/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0033]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于70°C，Irpm恒温摇床振荡培养I天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖10g/L、胰化蛋白胨0.lg/L、酵母提取物0.lg/L、氯化钠0.lg/L ；
[0034]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以llOOOr/min离心3min，弃上清液得到湿菌体，保藏于4°C冰箱备用。
[0035]国酒香茶叶的制备方法:
[0036]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体重悬后，将Iml的重悬菌液均匀喷洒到Ig灭菌后的经萎凋处理的茶青上，将处理后的茶叶置于120°C，相对湿度20%的开放条件下发酵I天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮和无菌去离子水组成；
[0037]步骤2:在开放条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸90小时，熏蒸后在使用UV-B灯照射48小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木桶中，密闭放置I天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁和豆类酶解液中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2- 丁酮、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3- 丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、3-甲基环戊烷-1，2- 二酮锌配合物、茅台酒、金樱子提取物组成。
[0038]实施例3
[0039]一种国酒香茶叶，由Ig茅台酒致香微生物、IOg经萎凋处理的茶青组成。
[0040]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的白毛霉菌、根霉菌、梨头霉菌、假酵母、乳酸菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌组成。
[0041]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0042]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲IOg和发酵期酒醅10g，分别加入到80g的无菌蒸馏水中振荡培养I小时，从中取500 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用平板划线分离后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物，对菌株进行紫外线-氯化锂复合诱变；所述筛选培养基为茶叶100g/L、胰化蛋白胨10g/L、酵母提取物10g/L、氯化钠5g/L、琼脂40g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0043]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于60°C，IOOrpm恒温摇床振荡培养10天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖lg/L、胰化蛋白胨lg/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L ；
[0044]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以5000r/min离心5min，弃上清液得到湿菌体，制成冻干粉，保藏于4°C冰箱备用。
[0045]国酒香茶叶的制备方法:
[0046]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的冻干粉重悬后，将5ml的重悬菌液均匀喷洒到IOg灭菌后的经萎凋处理的茶青上，将处理后的茶叶置于20°C，相对湿度40%的无菌条件下发酵10天；所述营养液为金樱子提取物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮锌配合物和无菌去离子水组成；
[0047]步骤2:在开放条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸20小时，熏蒸后在30°C条件下烘焙28小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱中，密闭放置150天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮锌配合物组成。
[0048]实施例4
[0049]一种国酒香茶叶，由4g茅台酒致香微生物、3g成品茶叶组成。
[0050]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、梨头霉菌、汉逊酵母、醋酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌组成。
[0051]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0052]步骤1:在无菌条件下取茅台酒堆积酒醅Sg和发酵期酒醅5g，分别加入到50g的无菌蒸馏水中振荡培养5小时，从中取800 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用稀释涂平板法纯化后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基为茶叶20g/L、胰化蛋白胨20g/L、酵母提取物30g/L、氯化钠3g/L、琼脂40g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0053]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于60°C，150rpm恒温摇床振荡培养15天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖3g/L、胰化蛋白胨0.5g/L、酵母提取物7g/L、氯化钠4g/L ；
[0054]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以lOOOOr/min离心15min，弃上清液得到湿菌体，制成冻干粉，保藏于4°C冰箱备用。
[0055]国酒香茶叶的制备方法:
[0056]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的冻干粉重悬后，将IOml的重悬菌液均匀喷洒到3g灭菌后的成品茶叶上，将处理后的茶叶置于100°C，相对湿度40%的开放条件下发酵30天；所述营养液为麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮和无菌去离子水组成；
[0057]步骤2:在无菌条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸9小时，熏蒸后使用UV-B灯照射8小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木桶中，密闭放置30天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物在豆类酶解液中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2- 丁酮、2，6- 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫组成。
[0058]实施例5
[0059]—种国酒香茶叶，由8g茅台酒致香微生物、99.99g经萎凋处理的茶青组成。
[0060]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌。[0061]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0062]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲6g和发酵期酒醅Sg，分别加入到70g的无菌蒸馏水中振荡培养12小时，从中取300 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用稀释涂平板法纯化后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基为茶叶50g/L、胰化蛋白胨25g/L、酵母提取物35g/L、氯化钠18g/L、琼脂9g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0063]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于30°C，ISOrpm恒温摇床振荡培养18天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖3g/L、胰化蛋白胨0.5g/L、酵母提取物7g/L、氯化钠3g/L ；
[0064]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以9000r/min离心12min，弃上清液得到湿菌体，保藏于4°C冰箱备用。
[0065]国酒香茶叶的制备方法:
[0066]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体重悬后，将IOml的重悬菌液均匀喷洒到99.99g经萎凋处理的茶青灭菌后的茶叶上，将处理后的茶叶置于20°C，相对湿度70%的开放条件下发酵9天；所述营养液为金樱子提取物、蛋白酶解液、酵母抽出物、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，
2-二酮和无菌去离子水组成；
[0067]步骤2:在无菌条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸10小时，熏蒸后在200°C条件下烘焙2小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱中，密闭放置100天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、茅台酒、金樱子提取物组成。
[0068]实施例6
[0069]一种国酒香茶叶，由0.1g茅台酒致香微生物、40g成品茶叶组成。
[0070]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、纳豆芽孢杆菌组成。
[0071]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0072]步骤1:在无菌条件下取茅台酒堆积酒醅9g和发酵期酒醅5.5g，分别加入到80g的无菌蒸馏水中振荡培养I小时，从中取20 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用平板划线分离后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基为茶叶180g/L、胰化蛋白胨30g/L、酵母提取物45g/L、氯化钠
1.5g/L、琼脂3g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0073]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于65°C，270rpm恒温摇床振荡培养9天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖10g/L、胰化蛋白胨0.6g/L、酵母提取物3g/L、氯化钠0.9g/L:[0074]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以9000r/min离心18min，弃上清液得到湿菌体，制成粉剂，保藏于4°C冰箱备用。
[0075]国酒香茶叶的制备方法:
[0076]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的粉剂重悬后，将0.8ml的重悬菌液均匀喷洒到40g灭菌后的成品茶叶上，将处理后的茶叶置于100°C，相对湿度70%的无菌条件下发酵65天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、
2-甲基-2- 丁烯酸、2，3- 丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮和无菌去离子水组成；
[0077]步骤2:在无菌条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸60小时，熏蒸后使用UV-B灯照射烘焙36小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱中，密闭放置200天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁和豆类酶解液中的发酵萃取物、3-甲基环戊烷-1，2-二酮锌配合物、茅台酒、金樱子提取物组成。
[0078]实施例7
[0079]一种国酒香茶叶，由0.5g茅台酒致香微生物、68g成品茶叶组成。
[0080]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、拟内胞霉、汉逊酵母、乳酸菌、醋酸菌、地衣芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌组成。
[0081]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0082]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲6g重量份和发酵期酒醅7g，分别加入到65g的无菌蒸馏水中振荡培养0.8小时，从中取900 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用平板划线分离后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物，对菌株进行紫外线-氯化锂复合诱变；所述筛选培养基为茶叶20g/L、胰化蛋白胨10g/L、酵母提取物13g/L、氯化钠43g/L、琼脂27g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0083]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于15°C，IOrpm恒温摇床振荡培养7天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖2g/L、胰化蛋白胨5g/L、酵母提取物8g/L、氯化钠0.5g/L ；
[0084]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以4000r/min离心7min，弃上清液得到湿菌体，保藏于4°C冰箱备用。
[0085]国酒香茶叶的制备方法:
[0086]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体重悬后，将3.5ml的重悬菌液均匀喷洒到68g灭菌后的成品茶叶上，将处理后的茶叶置于30°C，相对湿度55%的开放条件下发酵60天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、3-羟基-2- 丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、和无菌去离子水组成；
[0087]步骤2:在开放条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸8小时，熏蒸后在100°C条件下烘焙26小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木桶中，密闭放置10天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁和豆类酶解液中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3- 丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮、茅台酒、金樱子提取物组成。
[0088]实施例8、
[0089]一种国酒香茶叶，由0.05g茅台酒致香微生物、20g经萎凋处理的茶青组成。
[0090]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、白毛霉菌、汉逊酵母、乳酸菌、醋酸菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌组成。
[0091]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0092]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲7.5g和发酵期酒醅9.4g，分别加入到50g的无菌蒸馏水中振荡培养3小时，从中取700 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在厌氧条件下用平板划线分离后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基:为茶叶80g/L、胰化蛋白胨10g/L、酵母提取物30g/L、氯化钠20g/L、琼脂45g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0093]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于30°C，130rpm恒温摇床振荡培养17天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖0.5g/L、胰化蛋白胨4g/L、酵母提取物7g/L、氯化钠0.3g/L ；
[0094]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以llOOOr/min离心5min，弃上清液得到湿菌体，保藏于4°C冰箱备用。
[0095]国酒香茶叶的制备方法:
[0096]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体重悬后，将200ml的重悬菌液均匀喷洒到20g灭菌后的经萎凋处理的茶青上，将处理后的茶叶置于110°C，相对湿度25%的开放条件下发酵I天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮锌配合物和无菌去离子水组成；
[0097]步骤2:在无菌条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸30小时，熏蒸后在180°C条件下烘焙36小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱中，密闭放置130天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、a -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3- 丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、金樱子提取物组成。
[0098]实施例9
[0099]一种国酒香茶叶，由3g茅台酒致香微生物、80g成品茶叶组成。
[0100]所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的白毛霉菌、梨头霉菌、假酵母、拟内胞霉、乳酸菌、醋酸菌、嗜热芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌组成。
[0101]所述茅台酒致香微生物由以下方法制备:
[0102]步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲9g和发酵期酒醅5g，分别加入到89g的无菌蒸馏水中振荡培养I小时，从中取900 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在有氧条件下用稀释涂平板法纯化后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物，对菌株进行紫外线-氯化锂复合诱变；所述筛选培养基:为茶叶190g/L、胰化蛋白胨14g/L、酵母提取物32g/L、氯化钠17g/L、琼脂6g/L，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基；
[0103]步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于，40°C，IOOrpm恒温摇床振荡培养15天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基为:葡萄糖10g/L、胰化蛋白胨3g/L、酵母提取物4g/L、氯化钠0.8g/L ；
[0104]步骤3:将步骤2所得到的茅台酒致香微生物发酵液在4 °C条件下，以3000-11000r/min离心3_25min,弃上清液得到湿菌体,保藏于4°C冰箱备用。
[0105]国酒香茶叶的制备方法:
[0106]步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体重悬后，将4ml的重悬菌液均匀喷洒到80g灭菌后的茶叶上，将处理后的茶叶置于20°C，相对湿度20-90%的开放条件下发酵70天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、a -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2- 丁烯酸、2，3- 丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫和无菌去离子水组成；
[0107]步骤2:在无菌条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸30小时，熏蒸后在25°C条件下烘焙24小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木桶中，密闭放置80天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、a -松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、茅台酒、金樱子提取物组成。
[0108]试验例
[0109]茶多酚检测方法:
[0110]①试剂配制:酒石酸亚铁溶液:称取1.0g硫酸亚铁(FeSO4.7H20)和5.0g酒石酸钾钠(C14H4O6KNa.4H20)，用水溶解并定容至IL (低温保存有效期10天)。pH7.5磷酸盐缓冲液:l/15mol/L磷酸氢二钠:称取23.9g十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H20)，加水溶解后定容至IL ;l/15mol/L磷酸二氢钾:称取经110°C烘干2小时的磷酸二氢钾(KH2PO4) 9.08g,加水溶解后定容至IL ;取l/15mol/L的磷酸氢二钠溶液85mL和l/15mol/L的磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。
[0111]②具体操作:
[0112]准确吸取试液(换算成相同茶叶量)(普通茶叶用开水浸泡3次，合并茶水，检测时取相同茶叶量的茶水)，注入25mL的容量瓶中，加水4mL和酒石酸亚铁溶液5mL，充分混合，再加ρΗ7.5磷酸盐缓冲液至刻度，用IOmm比色杯，在波长540nm处，测定吸光度(A)，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度A2。量取25ml充分混匀的样液于50ml容量瓶中，加入15111195%乙醇,充分摇匀,放置15min,用水定容,滤纸过滤。
[0113]公式:茶多酚(mg/1)= (A-A2) XL 975X2XKX 1000/V ；
[0114]K:稀释倍数；
[0115]II1、总酸总酯检测方法参照GB/T10345-2007，结果为总酸以乙酸达3.0g/Ι、总酯以乙酸乙酯达2.60g/l (取相同茶叶量的液体)。
[0116]按上述方法检测实施例1-9的茶多酚及总酸总酯含量结果如下:
[0117]
【权利要求】
1.一种国酒香茶叶，其特征在于由1-99.99重量份茶叶、0.01-10重量份茅台酒致香微生物组成。
2.根据权利要求1所述的一种国酒香茶叶，其特征在于所述的茶叶为经萎凋处理的茶青或成品茶。
3.根据权利要求1所述的一种国酒香茶叶，其特征在于所述的茅台酒致香微生物为从茅台酒生产用大曲中分离纯化得到的曲霉菌、白毛霉菌、根霉菌、梨头霉菌、假酵母、拟内胞霉、汉逊酵母、乳酸菌、醋酸菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、腊状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌中的一种或几种组成。
4.根据权利要求1所述的一种国酒香茶叶，其特征在于所述茅台酒致香微生物由以下方法制备: 步骤1:在无菌条件下取茅台酒生产制曲或堆积酒醅5-10重量份和发酵期酒醅5-10重量份，分别加入到45-90重量份无菌蒸馏水中振荡培养0.1-15小时，从中取100-1000 μ L液体滴加到筛选培养基上均匀涂开，在有氧或厌氧条件下用平板划线分离或稀释涂平板法纯化后，经液体筛选培养基发酵试验得到的产香优势菌株即为茅台酒致香微生物；所述筛选培养基(g/U为茶叶1-200、胰化蛋白胨1-50、酵母提取物1-50、氯化钠1_50、琼脂1_50，121°C灭菌20min，去掉琼脂得液体筛选培养基； 步骤2:将步骤I所得的茅台酒致香微生物活化后接种至液体培养基中，于10-70°C，l-300rpm恒温摇床振荡培养1_20天，得到茅台酒致香微生物发酵液；其中液体培养基(g/L)为:葡萄糖0-10、胰化蛋白胨0.1-10、酵母提取物0.1-10、氯化钠0.1-10 ； 步骤3:将步骤2所得 到的茅台酒致香微生物发酵液在4°C条件下，以3000-110001./min离心3-25min,弃上清液得到湿菌体,保藏于4°C冰箱备用。
5.根据权利要求4所述的一种国酒香茶叶，其特征在于所述步骤I中对菌株进行紫外线-氯化锂复合诱变。
6.根据权利要求4所述的一种国酒香茶叶，其特征在于所述步骤3得到的湿菌体制成粉剂或冻干粉。
7.根据权利要求1所述的一种国酒香茶叶，其特征在于由以下方法制备: 步骤1:用营养液将茅台酒致香微生物的湿菌体、粉剂或冻干粉重悬后，按重悬菌液:茶叶的体积重量比1: (0.1~100)均匀喷洒到灭菌后的茶叶上，将处理后的茶叶置于10-120°c，相对湿度20-90%的无菌或开放条件下发酵1-90天；所述营养液为金樱子提取物、麦芽浸出汁、蛋白酶解液、酵母抽出物、复合氨基酸、维生素、微量元素、葡萄糖、木糖、果糖、氯化钠、蛋氨酸、缬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、阿魏酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、磷酸氢二铵、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋哺扭尔、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3-丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮或其锌配合物的一种或几种和无菌去离子水组成； 步骤2:在无菌或开放条件下使用致香液对步骤I所得的茶叶进行熏蒸0.1-90小时，熏蒸后在20-220°C条件下烘焙或使用UV-B灯照射2秒-48小时，烘焙后将茶叶趁热装入中间设置有致香液发生器的橡木箱或橡木桶中，密闭放置1-300天后得到一种国酒香茶叶；所述致香液为茅台酒致香微生物代谢产物、茅台酒致香微生物在麸皮浸出汁和/或豆类酶解液中的发酵萃取物、茅台酒致香微生物在氨基酸和还原糖中的发酵萃取物、5-羟基麦芽酚、长叶烯、α-松油醇、长叶环烯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、己酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、3-羟基-2-丁酮、2，6_ 二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪、呋喃扭尔、异戊酸、2-甲基-2-丁烯酸、2，3_丁二醇、苯乙酸、1-丙醇、2-苯乙醇、3-甲基丁醇、糠醛、二甲基三硫、3-甲基环戊烷-1，2-二酮或其锌配合物、茅台酒、金樱子提取物中的一种或几种组成。`
【文档编号】A23F3/06GK103815069SQ201410105016
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年3月21日 优先权日:2014年3月21日
【发明者】郭景龙 申请人:郭景龙