以作物秸秆沤浸液培养盔形舟形藻的培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种作物秸秆沤浸液制备方法及其在水产养殖业上的应用技术，属水产养殖领域。盔形舟形藻是底栖海洋动物刺参、鲍鱼重要饵料，传统上采用湛江水产学院硅藻培养液配方且采用敞口开放水泥池粗放培养，培养液成分单调，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，现采用封闭式水泥池充气培养，以作物秸秆沤浸液为主要氮源并在培养基中添加了适量硝酸铵，磷酸二氢钠，丙酮酸盐，柠檬酸钾，甘氨酸甜菜碱等营养成分，不仅可废物利用，还可获得有重要饵料价值的微藻。有机肥和无机肥混合使用，营养更全面、均衡，操作方便，灵活掌握，可实现工厂化、规模化生产，成本低，藻产量提高340％。
【专利说明】以作物秸秆沤浸液培养盔形舟形藻的培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种以沼气池废液为原料培养直舟形藻的培养基及培养方法。
【背景技术】
[0002]我国是粮食生产大国，也是秸杆生产大国。据统计，我国每年可生成7亿多吨秸杆。作物光合产物一半在果实中，一半在秸杆里，秸杆中蕴藏着丰富的能量。然而，人们常重视果实而忽视秸杆，每年夏秋冬之际，总有大量小麦、玉米秸杆在田间焚烧，产生浓重烟雾，严重污染农村环境，甚至殃及城市。
[0003]秸杆是成熟作物茎叶部分总称，包括小麦、水稻、玉米、薯类、油料、棉花、甘蔗和其它作物收获籽实后的剩余部分，富含氮、磷、钾、钙、镁和有机质，是一种多用途可再生生物资源，也是一种粗饲料。特点是粗纤维含量高(30-40%)并含有木质素，木质素虽不能为猪、鸡所利用，但可被反刍动物牛、羊消化吸收。
[0004]我国开发利用作物秸杆历史悠久，但以前农业生产水平低，秸杆数量少，除少量用于垫圈、喂养牲畜、部分用于堆怄肥外，大部分用作燃料。随着现代农业发展，我国粮食产量大幅提高，秸杆数量增多，加之省柴节煤技术推广，烧煤和液化气普及，农村富余秸杆大量堆积。随农业机械化水平提高，秸杆利用由原来的堆怄肥转变为直接还田，秸杆还田有堆怄还田、过腹还田、直接还田等多种方式。过腹还田是秸杆经饲喂后变为粪肥还田，堆怄还田是秸杆与粪肥的堆怄。
[0005]现在全国年秸杆还田量超过一亿吨，约占秸杆总量20%。秸杆直接还田方式有秸杆粉碎还田、覆盖还田和高留茬还田。目前推广面积最大的高留茬还田，约占秸杆直接还田总面积60%，机械粉碎翻压和覆盖还田分别占22%和18%。秸杆还田已经成为我国沃土工程和丰收计划的重要内容。除了还田施肥，秸杆还可作粗饲料喂牛、羊，也可以用作蘑菇等食用菌培养基，还可以发酵用以生产燃气，沼渣能做有机肥。在众多利用方式中，利用秸杆培育食用菌和作为生物质能源近来最受业内关注。但农业部调查显示，我国农作物秸杆废弃及焚烧量约为2.15亿吨，占秸杆资源总量31% ;而作为食用菌基料仅占1500万吨，为总量 2.14%。
[0006]尽管各地秸杆综合利用取得了一定成效，但秸杆能源化总体利用水平较低，秸杆开发企业规模小，产业化水平不高，市场竞争力不强。究其原因，秸杆遍布广大农村，来源分散，自身密度小，易腐烂，收集、运输和储存困难，产品附加值低，技术不成熟，效益低，操作麻烦，费时费力，不能充分发挥秸杆开发潜力。为了克服这些缺点，我发明了一种利用作物秸杆怄浸液培养盔形舟形藻的方法，实验证明，用该法培养盔形舟形藻，藻生长快，产量高，品质优良，不易污染，操作方便，效益高，原料充沛，废物利用，为秸杆应用开辟了新途径，秸杆能发挥出更大经济价值。
[0007]盔形舟形藻是底栖硅藻的一种，是底栖性海洋经济动物重要饵料。目前，刺参、鲍鱼的育苗、保育对盔形舟形藻等底栖硅藻有很大的依赖性，藻的产量常常直接影响刺参、鲍鱼等海珍品的生产。与某刺参专用配合饲料相比，以新鲜盔形舟形藻为饵的刺参平均日生长率为4.3%，成活率高达99.57%，且免疫细胞吞噬活动活跃性明显高于配合饲料组，刺参体态健康，摄食活动明显，排便量多，运动活跃。以配合饲料为馆的刺参成活率仅有83.83%，此组刺参摄食率低，排便量小，活动较少。总之，盔形舟形藻作为刺参饵料效果优于配合饲料。盔形舟形藻细胞两侧对称，壳面椭圆形，末端头状、钝圆，中央轴区狭窄，壳逢发达，具中央结节和端结节，壳面具线纹或布纹，色素体片状，2个。淡水、海水、半咸水中均有。
[0008]盔形舟形藻传统上采用湛江水产学院硅藻培养液配方且采用敞口的开放水泥池粗放培养，培养液成分单调，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用封闭式水泥池充气培养，以作物秸杆怄浸液为主要氮源并在培养基中添加了适量硝酸铵，磷酸二氢钠，脯氨酸，丙酮酸盐，柠檬酸钾，甘氨酸甜菜碱，谷氨酸钠，乙酸钠，甘露醇，葡萄糖酸盐，SLA溶液，VA溶液，920植物生长刺激素，人尿等营养成分，不仅废物利用，变废为宝，而且可获得有重要饵料价值的微藻。有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，操作方便，灵活掌握，可实现微藻养殖自动化、工厂化、程序化、规模化生产，成本低，效益高，盔形舟形藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高340%。
【发明内容】
[0009]为了克服盔形舟形藻传统培养方法的缺点，本发明提供了一种作物秸杆怄浸液制备方法，具体方法如下:建一水泥池，长10米，宽5米，深1.3米，混砖结构，东西走向，以接受更多阳光。底部与地面齐平，在底部一角安装一个水龙头。加注池塘水至水深100厘米，先将玉米秸、稻草、麦秸、麦穰、地瓜秧、花生秧、豆秸、棉花秸等用铡刀铡成4-6厘米长，按每一吨水加入100斤秸杆的量加入3种不同作物秸杆(三种作物秸杆重量比是1:1: 1)，再按每一吨水加入5公斤牛粪、3公斤猪粪、0.5公斤生石灰、0.4公斤新鲜酒糟的量依次加入牛粪、猪粪、生石灰和酒糟，搅拌均匀，自然怄浸和发酵，每隔3天用耙子搅拌一次。到第30天，加注部分池塘水至原来的水深，以弥补水分的挥发，继续浸泡。到第45天，从底部的水龙头将浸泡液放出，静置、沉淀24小时后,弃沉洛,取上清液100目筛絹过滤,取清液加热煮沸30分钟，以杀死其中的细菌、病毒等微生物，冷却、沉淀、静置24小时，取上清液，即为秸杆怄浸液，装入磨口塞试剂瓶或黑色塑料桶，密封，置于4°C冰箱或冷库保存，备用。
[0010]一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的培养基，配方如下:
[0011 ] 秸杆怄浸液95毫升，硝酸铵4毫克，磷酸二氢钠7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸盐5毫克，柠檬酸钾2毫克，甘氨酸甜菜碱12毫克，谷氨酸钠4毫克，乙酸钠4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸盐9毫克，SLA溶液I毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生长刺激素10国际单位，人尿1.5毫升，次氯酸钠消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方:FeC12.4H201800毫克，CoC12.6H20250 毫克，NiC12.6H2010 毫克，CuCl2.2H2010 毫克，MnCl2.4H2070 毫克，ZnC12100毫克，H3B03500毫克，Na2Mo04.2H2030毫克，蒸馏水1000毫升，VA溶液配方:生物素10毫克，盐酸硫胺素30毫克，盐酸吡哆醇10毫克，维生素B12 5毫克，烟酸35毫克，对氨基苯甲酸20毫克，泛酸钙10毫克，蒸馏水100毫升。
[0012]一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，具体步骤如下:
[0013]建一水泥池，长200厘米，宽100厘米，深65厘米，混砖结构，东西走向，以接受更多阳光，有利于藻光合作用，底部与地面齐平，在底部一角安一个地漏，下面连接一个水龙头，池上面安置一块玻璃，将水泥池盖住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4个孔，其中2个孔穿入2根电源导线，导线末端各连接一个40瓦三基色灯，还有2个孔，分别穿入充气管和排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径8毫米，将水泥池先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟，然后用冷开海水冲洗3遍，装入权利要求1所述的培养基至水深30厘米，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的盔形舟形藻接种，接种密度6 X 14Cell/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，40厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:氨气=92%: 7%: 1%,白天连续充气，夜间行间隔充气，即充气30分钟，停止30分钟，如此反复，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，最佳温度25±2°C，最佳光照强度4000-12000LUX，夜间打开三基色灯进行照明，培养的前6天，水泥池上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-7000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第9天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基25升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第12天舟形藻密度增加至350 X 14ceIΙ/mL，停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将水泥池用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；
[0014]所述消毒液由以下重量比的物质组成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0015]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
[0016]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
[0017]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
[0018]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0019]有益结果
[0020]盔形舟形藻传统上采用湛江水产学院硅藻培养液配方且采用敞口的开放水泥池粗放培养，培养液成分单调，生长慢，易污染，成本高，效益低，操作费力，工作量大，现在我采用封闭式水泥池充气培养，以作物秸杆怄浸液为主要氮源并在培养基中添加了适量硝酸铵，磷酸二氢钠，脯氨酸，丙酮酸盐，柠檬酸钾，甘氨酸甜菜碱，谷氨酸钠，乙酸钠，甘露醇，葡萄糖酸盐，SLA溶液，VA溶液，920植物生长刺激素，人尿等营养成分，不仅可以废物利用，变废为宝，而且可获得有重要饵料价值的微藻，一举多得。有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，操作方便，灵活掌握，可实现自动化、工厂化、程序化、规模化生产，成本低，效益高，盔形舟形藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高340 %。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1为盔形舟形藻形态结构图；
[0022]其中附图标记为:1中央结节，2端结节，3壳缝，4细胞壁；
[0023]图2为利用封闭式水泥池充气培养盔形舟形藻方法图；
[0024]其中附图标记为:5排气管，6散气石，7水龙头，8藻液，9三基色灯，10充气管。
【具体实施方式】
[0025]一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的培养基，配方如下:
[0026]秸杆怄浸液95毫升，硝酸铵4毫克，磷酸二氢钠7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸盐5毫克，柠檬酸钾2毫克，甘氨酸甜菜碱12毫克，谷氨酸钠4毫克，乙酸钠4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸盐9毫克，SLA溶液I毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生长刺激素10国际单位，人尿1.5毫升，次氯酸钠消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方:FeC12.4H201800毫克，CoC12.6H20250 毫克，NiC12.6H2010 毫克，CuCl2.2H2010 毫克，MnCl2.4H2070 毫克，ZnC12 100毫克，H3B03 500毫克，Na2Mo04.2H2030毫克，蒸馏水1000毫升，VA溶液配方:生物素10毫克，盐酸硫胺素30毫克，盐酸吡哆醇10毫克，维生素B12 5毫克，烟酸35毫克，对氨基苯甲酸20毫克，泛酸钙10毫克，蒸馏水100毫升。
[0027]—种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，具体步骤如下:
[0028]建一水泥池，长200厘米，宽100厘米，深65厘米，混砖结构，东西走向，以接受更多阳光，有利于藻光合作用，底部与地面齐平，在底部一角安一个地漏，下面连接一个水龙头，池上面安置一块玻璃，将水泥池盖住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4个孔，其中2个孔穿入2根电源导线，导线末端各连接一个40瓦三基色灯，还有2个孔，分别穿入充气管和排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径8毫米，将水泥池先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟，然后用冷开海水冲洗3遍，装入权利要求1所述的培养基至水深30厘米，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的盔形舟形藻接种，接种密度6 X 14Cell/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，40厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:氨气=92%: 7%: 1%,白天连续充气，夜间行间隔充气，即充气30分钟，停止30分钟，如此反复，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，最佳温度25±2°C，最佳光照强度4000-12000LUX，夜间打开三基色灯进行照明，培养的前6天，水泥池上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-7000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第9天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基25升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第12天舟形藻密度增加至350 X 14ceIΙ/mL，停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将水泥池用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；
[0029]所述消毒液由以下重量比的物质组成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
[0030]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
[0031]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
[0032]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
[0033]优选地，对所述水泥池，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
[0034]作物秸杆怄浸液制备方法:建一水泥池，长10米，宽5米，深1.3米，混砖结构，东西走向，以接受更多阳光。底部与地面齐平，在底部一角安装一个水龙头。加注池塘水至水深100厘米，先将玉米秸、稻草、麦秸、麦穰、地瓜秧、花生秧、豆秸、棉花秸等用铡刀铡成4-6厘米长，按每一吨水加入100斤秸杆的量加入3种不同作物秸杆(三种作物秸杆重量比是1:1:1)，再按每一吨水加入5公斤牛粪、3公斤猪粪、0.5公斤生石灰、0.4公斤新鲜酒糟的量依次加入牛粪、猪粪、生石灰和酒糟，搅拌均匀，自然怄浸和发酵，每隔3天用耙子搅拌一次。到第30天，加注部分池塘水至原来的水深，以弥补水分的挥发，继续浸泡。到第45天，从底部的水龙头将浸泡液放出，静置、沉淀24小时后，弃沉渣，取上清液100目筛絹过滤，取清液加热煮沸30分钟，以杀死其中的细菌、病毒等微生物，冷却、沉淀、静置24小时，取上清液，即为秸杆怄浸液，装入磨口塞试剂瓶或黑色塑料桶，密封，置于4°C冰箱或冷库保存，备用。
[0035]920植物生长刺激素为白色结晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小时)，再加5倍体积的蒸馏水稀释。
[0036]次氯酸钠消毒海水方法:取海水，脱脂棉过滤，按I立方米海水中加入漂白粉75克的量加入漂白粉，使海水中有效氯含量达到20mg/L，用空气压缩机强力充气12小时后，用硫代硫酸钠中和余氯。硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定，直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止。
[0037]接种用的盔形舟形藻预先进行提纯(本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如凯氏提取法)，以确保接种时藻种处于生长旺盛的指数生长期。
[0038]各种无机营养盐和维生素需预先配成母液且置于4°C冰箱或冷库冷藏保存备用，放置时间不要超过30天。
[0039]人尿制备方法:取人尿1000毫升，烧瓶煮沸15分钟后，冷却、沉淀24小时，弃沉渣，取上清液，装入棕色磨口塞试剂瓶，密封，置于4°C冰箱保存，备用。
[0040]各种营养盐要按配方中提供的顺序依次加入，同时不断搅拌，以免发生化学反应。
[0041]所用化学药品纯度均需化学纯级别。
[0042]最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
【权利要求】
1.一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的培养基，其特征在于配方如下: 稻杆怄浸液95晕升,硝酸铵4晕克,磷酸二氢钠7晕克,脯氨酸2晕克,丙酮酸盐5晕克，柠檬酸钾2毫克，甘氨酸甜菜碱12毫克，谷氨酸钠4毫克，乙酸钠4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸盐9毫克，SLA溶液I毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生长刺激素10国际单位，人尿1.5毫升，次氯酸钠消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方:FeC12.4H20 1800毫克，CoC12.6H20 250 毫克，NiC12.6H20 10 毫克，CuC12.2H20 10 毫克，MnC12.4H2070毫克，ZnC12 100毫克，H3B03 500毫克，Na2Mo04.2H20 30毫克，蒸馏水1000毫升，VA溶液配方:生物素10毫克，盐酸硫胺素30毫克，盐酸吡哆醇10毫克，维生素B12 5毫克，烟酸35毫克，对氨基苯甲酸20毫克，泛酸钙10毫克，蒸馏水100毫升。
2.一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，其特征在于具体步骤如下: 建一水泥池，长200厘米，宽100厘米，深65厘米，混砖结构，东西走向，以接受更多阳光，有利于藻光合作用，底部与地面齐平，在底部一角安一个地漏，下面连接一个水龙头，池上面安置一块玻璃，将水泥池盖住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4个孔，其中2个孔穿入2根电源导线，导线末端各连接一个40瓦三基色灯，还有2个孔，分别穿入充气管和排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径8毫米，将水泥池先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟，然后用冷开海水冲洗3遍，装入权利要求1所述的培养基至水深30厘米，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的盔形舟形藻接种，接种密度6X 14Cell/mL ;盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，40厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:纯二氧化碳:氨气=92%: 7%: 1%,白天连续充气，夜间行间隔充气，即充气30分钟，停止30分钟，如此反复，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，最佳温度25±2°C，最佳光照强度4000-12000LUX，夜间打开三基色灯进行照明，培养的前6天，水泥池上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-7000LUX，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第9天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基25升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第12天舟形藻密度增加至350 X 14ceIΙ/mL，停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将水泥池用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养； 所述消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料:土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份、辅料3-5份；消毒液制作方法:将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30?50份、杠板归15?25份、黄柏15?25份、苦参5?15份、艾叶5?15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小时,200筛絹过滤,将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2: I: I ;将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。
3.根据权利要求2所述的一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
4.根据权利要求2所述的一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。
5.根据权利要求2所述的一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，其特征在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。
6.根据权利要求2所述的一种以作物秸杆怄浸液为主要氮源培养盔形舟形藻的方法，其特征在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。
【文档编号】C12N1/12GK104388313SQ201410563143
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月22日 优先权日:2014年10月22日
【发明者】王培磊 申请人:临沂大学