本发明涉及鱼类产品深加工技术领域，尤其是涉及一种金枪鱼鱼精素产品的加工方法。
背景技术：
金枪鱼属硬骨形目，鲭科动物，别名为吞拿鱼，活跃于上层大海洋。金枪鱼以生物学分类可分为旗科、箭科和鲭科等。它的品种之中，马苏、蓝鳍、黄鳍、輕鱼、长鳍等五种鱼属于商业利益较高的一类。它们一般洄游在盐度较高的外洋之中，主要分布在印度洋、大西洋和太平洋地带，属于大洋暖水洄游鱼类，其中蓝鳍、輕鱼、马苏等为远洋渔业的主要捕货对象。从二十世纪五十年代起，金枪鱼每年的产量一直处于上升的状态。目前，世界远洋渔业总产量中金枪鱼产量所占比重超过一半。金枪鱼属于营养价值比较髙的鱼类之一，金枪鱼肉所含的水分和蛋白质都较高，氨基酸含量颇为丰富，生物造价较高，牛磺酸、矿物质、微量元素和维生素含量也十分丰富。
鱼精蛋白素是一种多聚阳离子化，主要存在于鸟类、鱼类和哺乳动物的精巢组织中。它是一种碱性蛋白质，与dna结合在一起，核精蛋白的形式存在。鱼精蛋白素的分子量较小，分子量主要在5.5到13.0kda之间，由30-50个氨基酸组成，在精子发生后期的单倍体阶段取代组蛋白，被认为是精子凝集和dna稳定所必不可少的蛋白质。鱼精蛋白素具有很好的稳定性，加热不易凝固，等电点在12-13之间。鱼精素并不是单一的组分，一般是由几种彼此之间非常类似的成分组成的混合物，在氨基酸组成上存在很大差别。鱼精素的一个重要特点就是具有抑菌特性，所以其在食品中可以开发成一种天然防腐剂来应用。国外对鱼精素的研究比国内要早，其主要是从鲑鱼精巢中提取鱼精素，但在我国，除了东北黑龙江流域外，其他地方蛙科鱼类的产量比较少，在国内以鲑鱼精巢为原料生产鱼精素存在原料紧缺的问题。而金枪鱼肉所含蛋白质较高，氨基酸含量颇为丰富，因此可以考虑从金枪鱼中提取鱼精素。
现有技术如授权公告号为cn102796189b的中国发明专利，公开了一种硫酸鱼精蛋白的制备方法，采用3%硫酸提取、50-79℃温水提取、乙醇沉淀、以及低温处理四种生化技术，以鲑鱼的鱼精为原料，制得硫酸鱼精蛋白。该鱼精蛋白的比旋度能够达到-72.0°，工艺简单，成本低，过程温和，但是该法所得鱼精蛋白素含有一些杂蛋白或核酸等杂质，需要进一步分离、纯化。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种得率高、纯度高，抑菌效果好，防腐性能佳，工艺简单、可操作性强，适用于工业化生产的金枪鱼鱼精素产品的加工方法。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种金枪鱼鱼精素产品的加工方法，包括精巢组织中脱氧核糖核蛋白的提取，硫酸提取，乙醇沉淀，洗涤，具体操作步骤为：
精巢组织中脱氧核糖核蛋白的提取：取成熟的金枪鱼精巢组织，洗净，放入组织捣碎机中，加入0.1~0.2mol/l氯化钠溶液和苯甲基磺酰氟，氯化钠溶液与精巢组织的体积重量比为2~3:1，苯甲基磺酰氟的添加量为精巢组织重量的0.01~0.05%，充分匀浆后搅拌20~30min，静止10~20min，在3500~4500r/min的条件下离心10~15min，氯化钠与核糖核酸形成易溶于水的核糖核酸盐，倾倒上清液即可除去核糖核酸，并获得沉淀脱氧核糖核蛋白，而苯甲基磺酰氟是蛋白酶抑制剂，可保护鱼精蛋白；
硫酸提取：向沉淀物加入浓度为5~10%的硫酸溶液，硫酸溶液与沉淀物的体积重量比为3~5:1，在组织捣碎机中充分搅碎，然后再搅拌提取3~4h，在4000~5000r/min的条件下离心15~20min，弃去沉淀，收集上清液，该步骤中硫酸与鱼精蛋白形成易溶于水的硫酸鱼精蛋白，鱼精蛋白与脱氧核糖核苷酸之间的键断裂，沉淀物质是脱氧核糖核酸；
乙醇沉淀：向上清液中加入的无水乙醇，在冰浴条件下沉淀静置2~3h，3500~4500r/min的条件下离心10~15min，留下沉淀物，该步骤利用鱼精蛋白素呈碱性，能溶于水和稀酸，不易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，稳定性好的特点，利用乙醇除去杂质蛋白质；
洗涤：向沉淀物中加入丙酮溶液反复洗涤，去除杂质蛋白质，提高鱼精素的纯度，干燥，即得鱼精素，该鱼精素具有良好的抑菌活性，能明显的抑制革兰氏阳性菌（g+）、霉菌、酵母的生长，对巨大芽孢杆菌、枯草杆菌等也有一定抑制作用，是一种无毒、无副作用、安全性高的天然食品防腐剂，可防止食品腐败变质，延长食品的货架期，还能够与许多种类的蛋白质相互结合从而形成不同的蛋白质复合物，具有很好的药用价值，含有丰富的精氨酸，其能够缓解疲劳，促进垂体释放性腺激素及强化肝功能等作用，对男性不育症有辅助的作用；
后处理：将50~60重量份的鱼精素、1~5重量份抗氧化多肽，抗氧化多肽的氨基酸序列为hsklcvcvncfccgaakcylcrvlhpgklcvcncsk，具有较好的抗氧化特性，能够抑制由金属离子、血红蛋白、脂酶和单线态氧、o2-、·oh、roo·催化的脂质过氧化反应，具有螯合金属离子的能力，可有效地抑制非金属离子催化脂质过氧化反应，激活机体本身内在的抗氧化防御系统，达到保健的效果。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明鱼精素得率高、纯度高，具有良好的抑菌活性，是一种无毒、无副作用、安全性高的天然食品防腐剂，可防止食品腐败变质，延长食品的货架期；2）鱼精素具有很好的药用价值，含有丰富的精氨酸，其能够缓解疲劳，促进垂体释放性腺激素及强化肝功能等作用，对男性不育症有辅助的作用；3）提高金枪鱼鱼精巢附加值，对有效利用鱼类资源，减少浪费和环境污染，变废为宝，提高经济效益等具有重大的意义，且加工方法工艺简单、可操作性强，稳定性好，有利于工业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种金枪鱼鱼精素产品的加工方法，包括精巢组织中脱氧核糖核蛋白的提取，硫酸提取，乙醇沉淀，洗涤，具体操作步骤为：
1）精巢组织中脱氧核糖核蛋白的提取：取成熟的金枪鱼精巢组织，洗净，放入组织捣碎机中，加入0.14mol/l氯化钠溶液和苯甲基磺酰氟，氯化钠溶液与精巢组织的体积重量比为2.5:1，苯甲基磺酰氟的添加量为精巢组织重量的0.02%，充分匀浆后搅拌25min，静止12min，在4000r/min的条件下离心12min，氯化钠与核糖核酸形成易溶于水的核糖核酸盐，倾倒上清液即可除去核糖核酸，并获得沉淀脱氧核糖核蛋白，而苯甲基磺酰氟是蛋白酶抑制剂，可保护鱼精蛋白；
2）硫酸提取：向沉淀物加入浓度为8%的硫酸溶液，硫酸溶液与沉淀物的体积重量比为5:1，在组织捣碎机中充分搅碎，然后再搅拌提取3.5h，在4500r/min的条件下离心18min，弃去沉淀，收集上清液，该步骤中硫酸与鱼精蛋白形成易溶于水的硫酸鱼精蛋白，鱼精蛋白与脱氧核糖核苷酸之间的键断裂，沉淀物质是脱氧核糖核酸；
3）乙醇沉淀：向上清液中加入的无水乙醇，在冰浴条件下沉淀静置2h，4000r/min的条件下离心15min，留下沉淀物，该步骤利用鱼精蛋白素呈碱性，能溶于水和稀酸，不易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，稳定性好的特点，利用乙醇除去杂质蛋白质；
4）洗涤：向沉淀物中加入丙酮溶液反复洗涤，去除杂质蛋白质，提高鱼精素的纯度，干燥，即得鱼精素，产品得率为7.98%，该鱼精素具有良好的抑菌活性，能明显的抑制革兰氏阳性菌（g+）、霉菌、酵母的生长，对巨大芽孢杆菌、枯草杆菌等也有一定抑制作用，是一种无毒、无副作用、安全性高的天然食品防腐剂，可防止食品腐败变质，延长食品的货架期，还能够与许多种类的蛋白质相互结合从而形成不同的蛋白质复合物，具有很好的药用价值，含有丰富的精氨酸，其能够缓解疲劳，促进垂体释放性腺激素及强化肝功能等作用，对男性不育症有辅助的作用；
5）后处理：将60重量份的鱼精素、2重量份抗氧化多肽，抗氧化多肽的氨基酸序列为hsklcvcvncfccgaakcylcrvlhpgklcvcncsk，具有较好的抗氧化特性，能够抑制由金属离子、血红蛋白、脂酶和单线态氧、o2-、·oh、roo·催化的脂质过氧化反应，具有螯合金属离子的能力，可有效地抑制非金属离子催化脂质过氧化反应，激活机体本身内在的抗氧化防御系统，达到保健的效果。
实施例2：
一种金枪鱼鱼精素产品的加工方法，包括精巢组织中脱氧核糖核蛋白的提取，硫酸提取，乙醇沉淀，洗涤，具体操作步骤为：
1）精巢组织中脱氧核糖核蛋白的提取：取成熟的金枪鱼精巢组织，洗净，放入组织捣碎机中，加入0.1mol/l氯化钠溶液和苯甲基磺酰氟，氯化钠溶液与精巢组织的体积重量比为3:1，苯甲基磺酰氟的添加量为精巢组织重量的0.04%，充分匀浆后搅拌25min，静止15min，在4000r/min的条件下离心12min，氯化钠与核糖核酸形成易溶于水的核糖核酸盐，倾倒上清液即可除去核糖核酸，并获得沉淀脱氧核糖核蛋白，而苯甲基磺酰氟是蛋白酶抑制剂，可保护鱼精蛋白；
2）硫酸提取：向沉淀物加入浓度为8%的硫酸溶液，硫酸溶液与沉淀物的体积重量比为4:1，在组织捣碎机中充分搅碎，然后再搅拌提取4h，在5000r/min的条件下离心15min，弃去沉淀，收集上清液，该步骤中硫酸与鱼精蛋白形成易溶于水的硫酸鱼精蛋白，鱼精蛋白与脱氧核糖核苷酸之间的键断裂，沉淀物质是脱氧核糖核酸；
3）乙醇沉淀：向上清液中加入的无水乙醇，在冰浴条件下沉淀静置2.5h，4500r/min的条件下离心10min，留下沉淀物，该步骤利用鱼精蛋白素呈碱性，能溶于水和稀酸，不易溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，稳定性好的特点，利用乙醇除去杂质蛋白质；
4）洗涤：向沉淀物中加入丙酮溶液反复洗涤，去除杂质蛋白质，提高鱼精素的纯度，干燥，即得鱼精素，产品得率为6.87%，该鱼精素具有良好的抑菌活性，能明显的抑制革兰氏阳性菌（g+）、霉菌、酵母的生长，对巨大芽孢杆菌、枯草杆菌等也有一定抑制作用，是一种无毒、无副作用、安全性高的天然食品防腐剂，可防止食品腐败变质，延长食品的货架期，还能够与许多种类的蛋白质相互结合从而形成不同的蛋白质复合物，具有很好的药用价值，含有丰富的精氨酸，其能够缓解疲劳，促进垂体释放性腺激素及强化肝功能等作用，对男性不育症有辅助的作用。
5）后处理：将58重量份的鱼精素、3重量份抗氧化多肽，抗氧化多肽的氨基酸序列为hsklcvcvncfccgaakcylcrvlhpgklcvcncsk，具有较好的抗氧化特性，能够抑制由金属离子、血红蛋白、脂酶和单线态氧、o2-、·oh、roo·催化的脂质过氧化反应，具有螯合金属离子的能力，可有效地抑制非金属离子催化脂质过氧化反应，激活机体本身内在的抗氧化防御系统，达到保健的效果。
实施例3：
金枪鱼鱼精素对几种微生物的最低抑菌浓度（mic）的测定：
选用的菌种为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、枯草芽胞杆菌、青霉、酵母，测定结果如表2所示，从表中数据可知鱼精素对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的mic均小于5‰，抑菌效果较明显；柔鱼鱼精蛋白对另外4种菌的mic均为10‰，均有抑菌效果。
表2：金枪鱼鱼精素对几种微生物的最低抑菌浓度
注：上表中“+”表示培养基中有菌落生长，“-”表示培养基中无菌落生长。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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