本发明涉及多糖技术领域，尤其是涉及含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法。
背景技术：
对虾是世界上三大经济虾类之一，具有营养需求较低，生长快，抗病力强、广盐性、适应能力强的特性。随着对虾集约化防病养殖技术的发明与改进以及全人工苗种培育技术的突破，掀起了我国对虾养殖业的热潮。人工配合饲料是对虾健康养殖的物质基础，掌握对虾的营养需求，选用优质价廉的饲料直接关系到对虾养殖的经济效益。在对虾饲料中添加诱食剂能提高饲料适口性，增强动物食欲，提高动物采食量，增强饲料的消化和吸收，从而提高饲料效率，增加养殖产量。另外，配合饲料在生产和贮存过程中，或多或少失去了原有的色泽和风味，甚至还会有特殊的臭味，即使是营养全面的配合饲料，其养殖效果也会出现很大的差异。在饲料中添加一些诱发食欲、增加消化液分泌作用的调味诱食剂，能改善饲料的品质、提高饲料利用率，降低饲料成本，增加养殖收益。
诱食剂又称引诱剂，它对动物的饲料具有明显而积极的生物学作用，可改善饲料的诱食性和适口性，提高饲料转化率，进而全面提高动物的生产性能，如增加采食量、提高日增重、改善肉品质量等。一方面诱食剂可以通过特殊气味掩盖饲料中的不良气味，刺激动物的感觉器官，以达到促进动物摄食、加快动物生长的目的；另一方面，通过诱食剂诱导动物摄食，缩短了摄食时间，提高了饲料的利用率。目前市场上的诱食剂大部分为香味剂或甜味剂，功效较为单一，只能对动物的嗅觉或视觉或味觉等形成单一的刺激，且有些香味剂或甜味剂的组成成分来自于化学合成产品，易在动物体内产生药物残留，毒副作用明显。贻贝，属软体动物门贻贝，属软体动物门，瓣鳃纲，异柱目，贻贝科。俗称海虹，亦称为淡菜。贻贝多糖糖苷键主要为1-4糖苷键、1-6糖苷键、1-3糖苷键、1-2糖苷键，其中以1-4糖苷键为主。而起到抗肿瘤作用的主要是1-4糖苷键和1-6糖苷键。贻贝多糖具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等活性，且毒副作用小，因此，近年来贻贝多糖被广泛关注，且由大量贻贝配方食品和药品应用而生。
现有技术如授权公告号为cn103549147b的中国发明专利，公开了一种南美白对虾诱食剂，包括以下重量份的组分：甜菜碱10～15份、牛磺酸6～8份、核苷酸2～3份、丙氨酸10～15份、甘氨酸10～15份、乌梅3～5份、酸枣仁1～4份、薄荷2～6份、山奈3～6份。在南美白对虾配合饲料中添加其重量0.05～2%的诱食剂，可以掩盖配合饲料中的不良气味，同时刺激对虾的感觉器官，促进对虾摄食，从而加快生长，另一方面，通过诱食剂诱导对虾摄食，可以减少水体中饲料残饵，提高饲料利用率，减少过剩饲料对水体的二次污染，从而减少对虾的病害风险，提高对虾的成活率。但是该对虾诱食剂不能兼顾改善鱼类肉质的功效。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种制备方法简单可行，节约生产能耗和成本，提高有效成分含量和活性，制得的诱食剂诱食效果好、能提高对虾的免疫力、改善对虾肉质的含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：
含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法，其具体制备步骤为：按配方量取肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅，再加入吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖，低温连续干燥后初粉碎至40-80目，混合均匀，然后超微粉碎至500-700目，再加入贻贝多糖、甜菜碱、牛磺酸、核苷酸、丙氨酸、甘氨酸、柠檬酸、复合维生素，混合均匀，即得含有贻贝多糖对虾诱食剂，低温连续干燥工艺能够降低中草药中有效成分的挥发率，减少不必要的损失，经过初粉碎能够为超微粉碎提供一定细度的原料，使超微粉碎更加容易进行，提高超微粉碎的工作效率，降低能耗，节约生产能耗和成本，超微粉碎能够破坏中草药细胞壁，使细胞内有效的药物成分充分暴露出来，提高了药物的生物利用率、减少药物的用量，并且在一定程度上改善了颗粒的均匀性，使诱食剂更容易均匀分散在饲料中。
作为优选，吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖的添加量分别为肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅总量的0.23-0.27‰和0.15-0.20‰，吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖的加入能够可防止肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅中大分子活性物质在超微粉碎时发生分子链断裂而产生单体，能够保持活性物质的活性，且吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖可增效肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅的气味和口感，能够更显著地刺激对虾的嗅觉和味觉，提高诱食剂的诱食效果。
作为优选，诱食剂的成分及其重量份为：贻贝多糖1-2份、甜菜碱15-20份、牛磺酸6-8份、核苷酸2.2-2.8份、丙氨酸2.2-2.8份、甘氨酸2.2-2.8份、柠檬酸2-3份、复合维生素2-4份、肉桂2-6份、山楂2-5份、酸枣仁5-10份、乌梅3-6份。上述诱食剂各成分配伍合理，能够发挥相互协同作用，该诱食剂在水体中能散发出一种独特的味道，诱导对虾对饲料的摄食，提对虾的摄食量和能量转化率，提高对虾生长速率，达到促进生长的目的；添加剂含有多种生物有效成分，能增强消化酶活性、调节肠道菌群结构，抑制有害菌群的繁殖，提高饲料营养成分的吸收率和转化率，从而有效提高对虾的生长性能；同时能增强机体对外界病原菌的免疫应答，增强对虾的免疫力和抗病力，有利于对虾的生长，减少养殖死亡率，此外该诱食剂还能提高对虾的肌肉嫩度和蛋白质含量，改善对虾肉质。
作为优选，贻贝多糖提取方法为：按料液比为1:25-35g/ml向脱脂贻贝粉中加水，然后加入脱脂贻贝粉重量0.01-0.014%的活性多肽，在提取温度为95-105℃的条件下热水提取1-2h，提取结束后，在4000-6000rpm下离心8-12min，上清液浓缩，喷雾干燥，即为贻贝多糖，该提取方法的原理是借助于热力作用导致细胞发生质膜分离，液泡中的多糖物质得以穿过细胞壁并扩散到外部水中去，提取方法简单可行、对于设备要求低、生产成本低、容易推广，得到的贻贝多糖一方面能够增强对虾抗应激反应的能力，降低应激因子对对虾的影响，提高对虾的健康，另一方面能够提高对虾的免疫力，增加了对虾对不良环境的适应能力，提高对虾集约化养殖的成活率。
进一步的，活性多肽的氨基酸序列为：tdhvcvncfcakcyngkdatatmdtggplshfyklnsygvagfytcis，该活性多肽的加入能够协同热水使得贻贝细胞发生质膜分离，从而使液泡中的物质穿过细胞壁，扩散到外部水中，且能降低多糖向热水中扩散的阻力，使溶出的多糖迅速溶于热水内，提高木多糖的提取速率，大大节约提取时间，同时能够彻底使贻贝多糖分离出来，不需要重复提取，节约能耗。
作为优选，复合维生素中含有0.3-0.4%左旋生育酚，该复合维生素具有保护机体组织结构完整、维持机体正常繁殖机能、增强对虾免疫力等功能，同时左旋生育酚的含有可提高对虾胃蛋白酶和长蛋白酶的活性，进而促进对虾的蛋白质合成，增快对虾的生长速度，改善对虾肉质和营养价值。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明诱食剂的制备方法简单可行，节约生产能耗和成本，提高有效成分含量和活性，能够提高药物的生物利用率、减少药物的用量，并且在一定程度上改善了颗粒的均匀性，使诱食剂更容易均匀分散在饲料中；2）该制备方法得到的诱食剂在水体中能散发出一种独特的味道，诱导对虾对饲料的摄食，增加摄食量，提高对虾生长速率，达到促进生长的目的，提高饲料营养成分的吸收率和转化率，从而有效提高对虾的生长性能；3）该诱食剂还能增强机体对外界病原菌的免疫应答，增强对虾的免疫力和抗病力，有利于对虾的生长，减少养殖死亡率，此外还能提高对虾的肌肉嫩度和蛋白质含量，改善对虾肉质；4）该贻贝多糖提取方法简单可行、对于设备要求低、生产成本低、提取速率快、不需要重复提取、节约能耗、容易推广，得到的贻贝多糖能够增强对虾抗应激反应的能力和免疫力，提高对虾集约化养殖的成活率。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法，其具体制备步骤为：按配方量取肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅，再加入吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖，低温连续干燥后初粉碎至80目，混合均匀，然后超微粉碎至500目，再加入贻贝多糖、甜菜碱、牛磺酸、核苷酸、丙氨酸、甘氨酸、柠檬酸、复合维生素，混合均匀，即得含有贻贝多糖对虾诱食剂，低温连续干燥工艺能够降低中草药中有效成分的挥发率，减少不必要的损失，经过初粉碎能够为超微粉碎提供一定细度的原料，使超微粉碎更加容易进行，提高超微粉碎的工作效率，降低能耗，节约生产能耗和成本，超微粉碎能够破坏中草药细胞壁，使细胞内有效的药物成分充分暴露出来，提高了药物的生物利用率、减少药物的用量，并且在一定程度上改善了颗粒的均匀性，使诱食剂更容易均匀分散在饲料中。
上述吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖的添加量分别为肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅总量的0.27‰和0.15‰，吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖的加入能够可防止肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅中大分子活性物质在超微粉碎时发生分子链断裂而产生单体，能够保持活性物质的活性，且吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖可增效肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅的气味和口感，能够更显著地刺激对虾的嗅觉和味觉，提高诱食剂的诱食效果。
上述诱食剂的成分及其重量份为：贻贝多糖2份、甜菜碱15份、牛磺酸8份、核苷酸2.2份、丙氨酸2.8份、甘氨酸2.2份、柠檬酸3份、复合维生素2份、肉桂6份、山楂2份、酸枣仁10份、乌梅3份。上述诱食剂各成分配伍合理，能够发挥相互协同作用，该诱食剂在水体中能散发出一种独特的味道，诱导对虾对饲料的摄食，提对虾的摄食量和能量转化率，提高对虾生长速率，达到促进生长的目的；添加剂含有多种生物有效成分，能增强消化酶活性、调节肠道菌群结构，抑制有害菌群的繁殖，提高饲料营养成分的吸收率和转化率，从而有效提高对虾的生长性能；同时能增强机体对外界病原菌的免疫应答，增强对虾的免疫力和抗病力，有利于对虾的生长，减少养殖死亡率，此外该诱食剂还能提高对虾的肌肉嫩度和蛋白质含量，改善对虾肉质。
上述贻贝多糖提取方法为：按料液比为1:35g/ml向脱脂贻贝粉中加水，然后加入脱脂贻贝粉重量0.01%的活性多肽，在提取温度为95-105℃的条件下热水提取2h，提取结束后，在4000rpm下离心12min，上清液浓缩，喷雾干燥，即为贻贝多糖，该提取方法的原理是借助于热力作用导致细胞发生质膜分离，液泡中的多糖物质得以穿过细胞壁并扩散到外部水中去，提取方法简单可行、对于设备要求低、生产成本低、容易推广，得到的贻贝多糖一方面能够增强对虾抗应激反应的能力，降低应激因子对对虾的影响，提高对虾的健康，另一方面能够提高对虾的免疫力，增加了对虾对不良环境的适应能力，提高对虾集约化养殖的成活率。
上述活性多肽的氨基酸序列为：tdhvcvncfcakcyngkdatatmdtggplshfyklnsygvagfytcis，该活性多肽的加入能够协同热水使得贻贝细胞发生质膜分离，从而使液泡中的物质穿过细胞壁，扩散到外部水中，且能降低多糖向热水中扩散的阻力，使溶出的多糖迅速溶于热水内，提高木多糖的提取速率，大大节约提取时间，同时能够彻底使贻贝多糖分离出来，不需要重复提取，节约能耗。
上述复合维生素中含有0.4%左旋生育酚，该复合维生素具有保护机体组织结构完整、维持机体正常繁殖机能、增强对虾免疫力等功能，同时左旋生育酚的含有可提高对虾胃蛋白酶和长蛋白酶的活性，进而促进对虾的蛋白质合成，增快对虾的生长速度，改善对虾肉质和营养价值。
实施例2：
含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法，其具体制备步骤为：按配方量取肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅，再加入吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖，低温连续干燥后初粉碎至40目，混合均匀，然后超微粉碎至700目，再加入贻贝多糖、甜菜碱、牛磺酸、核苷酸、丙氨酸、甘氨酸、柠檬酸、复合维生素，混合均匀，即得含有贻贝多糖对虾诱食剂，上述吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖的添加量分别为肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅总量的0.23‰和0.20‰。
上述诱食剂的成分及其重量份为：贻贝多糖1份、甜菜碱20份、牛磺酸6份、核苷酸2.8份、丙氨酸2.2份、甘氨酸2.8份、柠檬酸2份、复合维生素4份、肉桂2份、山楂5份、酸枣仁5份、乌梅6份，上述复合维生素中含有0.3%左旋生育酚。
上述贻贝多糖提取方法为：按料液比为1:35g/ml向脱脂贻贝粉中加水，然后加入脱脂贻贝粉重量0.01%的活性多肽，在提取温度为105℃的条件下热水提取1h，提取结束后，在6000rpm下离心8min，上清液浓缩，喷雾干燥，即为贻贝多糖，上述活性多肽的氨基酸序列为：tdhvcvncfcakcyngkdatatmdtggplshfyklnsygvagfytcis。
实施例3：
含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法，其具体制备步骤为：按配方量取肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅，再加入吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖，低温连续干燥后初粉碎至60目，混合均匀，然后超微粉碎至600目，再加入贻贝多糖、甜菜碱、牛磺酸、核苷酸、丙氨酸、甘氨酸、柠檬酸、复合维生素，混合均匀，即得含有贻贝多糖对虾诱食剂，上述吡喃葡萄糖和吡喃半乳糖的添加量分别为肉桂、山楂、酸枣仁、乌梅总量的0.25‰和0.17‰。
上述诱食剂的成分及其重量份为：贻贝多糖1.5份、甜菜碱18份、牛磺酸7份、核苷酸2.5份、丙氨酸2.5份、甘氨酸2.5份、柠檬酸2.5份、复合维生素3份、肉桂5份、山楂3份、酸枣仁8份、乌梅5份，上述复合维生素中含有0.35%左旋生育酚。
上述贻贝多糖提取方法为：按料液比为1:30g/ml向脱脂贻贝粉中加水，然后加入脱脂贻贝粉重量0.012%的活性多肽，在提取温度为100℃的条件下热水提取1.5h，提取结束后，在5000rpm下离心10min，上清液浓缩，喷雾干燥，即为贻贝多糖，上述活性多肽的氨基酸序列为：tdhvcvncfcakcyngkdatatmdtggplshfyklnsygvagfytcis。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110>磐安县派普特生物科技有限公司
<120>含有贻贝多糖对虾诱食剂的制备方法
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>48
<212>prt
<213>厚壳贻贝(mytiluscoruscus)
<400>1
thrasphisvalcysvalasncysphecysalalyscystyrasngly
151015
lysaspalathralathrmetaspthrglyglyproleuserhisphe
202530
tyrlysleuasnsertyrglyvalalaglyphetyrthrcysileser
354045