用于提高身体素质和能量水平的膳食补充剂和组合物的制作方法

本发明涉及新的膳食草药补充剂，其选自单独的紫荆、芒果、木楠、决明子和金合欢的提取物和级分以及它们的组合物，作为用于增强身体素质、肌肉质量、肌肉力量，并用于治疗哺乳动物的肌肉减少症和肌肉萎缩的天然能量增强剂。本发明进一步涉及含有所述草药成分或其组合物的食品成分制品，例如饮料、膳食成分制剂，零食和能量饮料，用于起始和稳定维持能量、肌肉力量和精神警觉性，以及用于增强肌肉力量、身体活动、身体健康、精神警觉、能量水平、耐力水平、循环健康、血管健康，或用于更好的身心健康。发明背景能量的常见描述是系统执行工作的能力。人类生活的所有活动都需要能量的存在。需要能量来维持生命和生存的各个方面，如思考、感觉、行走、饮食、喝水、做梦、呼吸等。能量是通过身体的能量储备，而不是通过积累来感受和体验的。年龄、疲劳和压力使人感到精力不足。能量的这种拖累经常会损害身体的精神警觉性。通过适当地解决身体的能量需求，可以提高工作场所的效率和个人管理。除了能量，肌肉力量和肌肉耐力是提高人的身体敏捷性的重要因素。肌肉力量衡量一个人的肌肉可以施加多大的力，而耐力衡量肌肉重复特定力量的次数。肌肉减少症是与衰老过程相关的骨骼肌质量和力量的丧失(cruz-jentoft等，2010；fielding等，2011)。它影响平衡、步态和执行日常任务的整体能力。肌肉减少症的原因是多因素的，包括久坐的生活方式、改变的内分泌功能、慢性疾病、炎症、胰岛素抗性和营养缺乏。肌肉减少症的治疗选择尚不清楚且不断发展。延迟肌肉减少症进展和治疗的最合理方法是基于与膳食补充剂的使用相关的适当营养和定期锻炼计划的结合。膳食补充剂用于增加他们的身体素质、身体健康，改善他们的健康，或减少身体活动的潜在负面后果(如受伤和慢性疲劳)，或抑制免疫功能。目前市场上有许多含有蛋白质、氨基酸和维生素，以及许多其他药剂的能量饮料、补充剂和食品成分制品，但它们富含碳水化合物。因此，这些制品作用太快而不能提供即时能量，但是在一段时间内不能维持水平。许多这些制品倾向于急剧增加血糖水平，然后迅速消耗，这有时可能导致并发症。除了高糖含量之外的缺点包括高咖啡因含量、酒精含量和使用其他成分如氨基酸、牛磺酸、瓜拉那和人参，其量很少，没有有益的健康影响。能量饮料的其他缺点是它具有每日推荐的限制，以限制每日消费。鉴于上述情况，本领域仍然需要提供天然补品，其在没有任何健康并发症的情况下改善精力充沛、一般敏捷性、耐力和精神警觉的感觉。因此，本发明通过提供提取物和组合物以增强能量、耐力、肌肉力量、肌肉耐力和/或精神警觉来满足本领域的现有需要。因此，本发明提供天然提取物，级分和/或组合物，其能够在哺乳动物中长时间增加能量水平，以增强能量水平、肌肉力量、肌肉耐力和精神警觉性，从而解决这些需求。总状花羊蹄甲(bauhiniaracemosa)属于樟子松科科(caesalpiniaceae)。在传统的阿育吠陀中，总状花羊蹄甲树皮用于治疗疟疾、痢疾和腹泻、哮喘以及皮疹、丘疹、痤疮、脓肿和溃疡等皮肤病，并将叶子用作牛饲料。芒果(mangiferaindica)俗称芒果，属于漆树科(anacardiaceae)的芒果属(mangifera)。它已在阿育吠陀中使用了4000多年，是印度、巴基斯坦和菲律宾的国家水果。芒果树的大部分部分可用于治疗各种疾病，如中暑、伤口愈合、退行性疾病、糖尿病、腹泻、痢疾、贫血、哮喘、支气管炎、咳嗽、高血压、失眠、风湿病、牙痛、白带、出血和成堆等。果实可食用。树皮、叶子、茎、嫩茎和种子广泛用于其药用潜力。虾子花(woodfordiafruticosa)俗称虾子花(dhataki)，并且在斯里兰卡、南康坎(konkan)和北印度被发现。虾子花属于千屈菜科(lythraceae)。它被用作制备阿育吠陀中阿斯瓦(asava)和阿里沙(arishta)的发酵剂。它也已知治疗肠道问题、出血、月经过多和精液虚弱、发烧、头痛、疱疹。阿拉伯金合欢(acacianilotica)属于豆科(leguminosae/fabaceae-mimosodeae)的金合欢属(acacia)。它在埃及传统药物中被广泛用于治疗各种疾病，包括胃部不适和疼痛、坏血病，作为抗脓毒性，祛痰、结核、麻风病、天花、痢疾、咳嗽、眼炎、牙痛、皮肤癌，作为收敛剂，解痉和催情药。叶子、树皮、果实和种子通常用于健康益处。发明概述本发明提供获得自阿拉伯金合欢(acacianilotica)、总状花羊蹄甲(bauhiniaracemosa)、耳叶番泻(cassiaauriculata)、芒果(mangiferaindica)和虾子花(woodfordiafruticosa)的新型草药提取物和级分，用于增加能量水平，长时间增加耐力，改善肌肉发育、肌肉力量精神警觉和治疗肌肉减少症和肌肉萎缩。本发明提供新的草药提取物及其膳食补充剂组合物，所述组合物包含至少两种成分/组分，所述成分/组分选自获得自阿拉伯金合欢(acacianilotica)、总状花羊蹄甲(bauhiniaracemosa)、耳叶番泻(cassiaauriculata)、芒果(mangiferaindica)和虾子花(woodfordiafruticosa)的提取物或级分，其能够长时间提高能量水平，改善肌肉发育和力量以及精神警觉。在另一方面，本发明提供新的膳食补充剂组合物，其包含至少一种选自获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分的成分，以及至少一种具有已证实的治疗保健益处的选自活性化合物，提取物，植物化学物质，源自植物、动物或微生物的成分；药学上或饮食上可接受的稀释剂、赋形剂和载体；维生素、氨基酸和矿物质，其有助于提高能量水平，提高长时间的耐力，改善肌肉发育、肌肉力量、精神警觉和治疗肌肉减少症和肌肉萎缩。在另一方面，本发明提供膳食补充剂，食品成分制品，例如饮料、零食和能量饮料，其含有上述所述成分或其组合物，用于能量和精神警觉的开始和稳定维持。该制品可用于增强肌肉力量、身体活动、身体健康、精神警觉、肌肉质量、能量水平、耐力水平、循环健康、血管健康，或用于更好的身心健康以及治疗哺乳动物的肌肉减少症和肌肉萎缩。在另一方面，本发明提供获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的新提取物或级分，以及它们的组合物，用于在有需要的温血动物中能量、肌肉力量、精神警觉性开始和稳定维持，并用于增强肌肉力量、肌肉质量、身体活动、身体健康、精神警觉、能量水平、耐力水平、循环健康、血管健康或用于更好的心理健康。在另一方面，本发明提供一种增加能量、肌肉质量和耐力的方法，以提供能量、肌肉力量、肌肉耐力和精神警觉的开始和稳定维持，并且用于治疗哺乳动物的肌肉减少症和肌肉萎缩，其中所述方法包括用至少一种成分补充或治疗所述哺乳动物，所述成分选自获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分及它们的组合物。附图说明图1：代表性免疫印迹图描绘了ln16002(图a)、ln16008(图b)、ln16011(图c)、ln17090(图d)、组合物3(图e和f)超磷酸化mtor蛋白并增加肌肉特异性转录因子(如l6大鼠骨骼肌成肌细胞中的mtor、pgc1α、肌肉生长抑制素，myod和肌细胞生成素)的产生。gapdh蛋白的表达代表加载对照。图2：代表性条形图描绘了总状花羊蹄甲果实提取物(ln16002；a)、虾子花嫩茎提取物(ln16008；b)、阿拉伯金合欢果实提取物(ln16011；c)、耳叶番泻叶子乙醇提取物(ln17090；d)和组合物-3(e)的细胞色素c氧化酶1(cox1)的调节作用。图2f是表示提取物ln17090和组合物-3对20s蛋白酶体的抑制的条形图。图3：相对比图像表示在所示的不同处理浓度下，由ln16002(图a)、ln16008(图b)、ln16011(图c)、ln17090(图d)和组合物-3(图f)诱导的l6大鼠成肌细胞中的肌管形成。载体对照处理的培养物接受0.1％dmso。图4：表示与载体对照组(g1)和疾病对照组(g2)相比，补充200mg的ln17090(g3)，400mg的ln17090(g4)，200mg的ln16011(g5)和350mg的hmb(g6)的治疗组的sd大鼠肌肉减少症模型中握力(a)、肌肉耐力(b)、腓肠肌纤维直径(c)和比目鱼肌纤维直径(d)的改善的条形图。数值表示为平均值±s.e.m；n＝每组6只动物。使用双向anova，然后进行bonferroni后测试，与载体对照组(g1)相比，###p<0.001，##p<0.01，与疾病对照组(g2)相比，***p<0.001**p<0.01且*p<0.05。发明详述现在将结合某些优选和任选的实施方案详细描述本发明，从而可以更全面地理解本发明的各个方面。然而，任何技术人员将理解在实践中可以推断出这些实施方案的程度。植物材料的来源：在印度收集本发明中使用的植物，即阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花。获得自阿拉伯金合欢干果、总状花羊蹄甲干果、耳叶番泻地上部分、芒果茎皮、虾子花嫩茎植物部分的原料和这些植物的一些其他植物部分用于证明本发明。其他植物部分和提取物部分也可以以类似的方式使用。进行no测定、atp测定和其他测定的基本原理能量的存在和维持是人类生活所有活动背后的基本要求和条件。因此，通过增强血液循环到工作肌肉来充足的供应营养和氧气是必不可少的，尤其是在身体活动和锻炼期间。血管内皮细胞产生的一氧化氮(no)已知为强效血管扩张剂，可使血管扩张，从而在锻炼期间为肌肉细胞提供更多的氧气和营养供应。因此，具有no增强特性的植物提取物和化合物可有助于延长运动和身体活动期间的耐力。由于no的寿命很短，因此在目前的研究中评估了亚硝酸盐水平。腺苷三磷酸或atp是dna后人体中第二重要的复杂分子。atp负责为许多细胞功能，包括细胞运输、生物分子的产生和大分子的功能提供化学能，这对细胞的存在和存活至关重要。它为心肌(用于血液循环)和骨骼肌(用于大体运动所需的肌肉收缩)提供能量。对于强烈的身体动作(例如跑步)的前5或6秒，肌肉活动取决于已经存在于肌肉细胞中的atp池。超过这个时间，新的atp主要通过厌氧过程(糖酵解)和有氧代谢(通过糖酵解的细胞呼吸，柠檬酸循环和电子传递/氧化磷酸化)产生。总体而言，atp能够激活支持更长和更有活力的身体活动所需的肌肉收缩。因此，必须在耐力运动期间或在更长和更强烈的身体活动期间增加细胞内能量来源或atp含量。蛋白质是肌肉、骨骼和软骨的主要组成部分，并且对于肌肉生长和修复至关重要。通过利用氨基酸的mrna的翻译过程在细胞中合成蛋白质。因此，肌肉蛋白质合成的刺激是增加肌肉质量的重要因素。mtor(雷帕霉素的哺乳动物靶标)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是蛋白质合成的中心调节剂。活化的mtor通过磷酸化mrna翻译和核糖体合成的关键调节因子来上调蛋白质合成。此外，mtor活化增加肌肉特异性转录因子如myod和肌细胞生成素的产生。因此，激活mtor信号传导的植物提取物或膳食补充剂可具有增强肌肉发育和耐力的潜力。线粒体是细胞中氧化能量产生的位点，并提供维持正常细胞功能和体内平衡所需的总atp的大部分。atp在骨骼肌功能中也起着关键作用，作为用于运动的力发生器。线粒体生物发生是通过预先存在的线粒体的增殖在细胞中形成新线粒体的过程。线粒体生物发生不仅伴随着数量的增加，还伴随着体积和质量的增加。线粒体生物发生受许多环境压力的影响，包括运动和其他身体活动。pgc-1α[ppar(过氧化物酶体增殖物激活受体)-γ共激活因子-1α]是线粒体生物发生的主要调节因子。此外，细胞色素c氧化酶1(cox1)是细胞色素c氧化酶(复合物iv)的关键亚基，细胞色素c氧化酶是位于线粒体内膜的线粒体蛋白和电子传递链中的关键酶。该呼吸酶的表达/活性是用于研究线粒体健康或线粒体生物发生的直接途径。复合物iv或细胞色素c氧化酶(cox-1)与复合物ii或琥珀酸脱氢酶(sdh-a)的水平之比将决定细胞中存在的活性线粒体的健康和数量。因此，cox-1/sdh-a比率的增加表明线粒体是健康的，并且它也是线粒体生物发生的间接量度。因此，通过激活pgc-1α和cox1可以诱导线粒体生物发生(增殖、大小和质量)的植物提取物有可能增强能量、耐力和肌肉构建。骨骼肌的主要功能是支持自愿和非自愿的身体运动。因此，适当的肌肉质量是持续身体活动或锻炼的重要因素。通过称为肌生成的过程从成肌细胞产生新的肌肉组织。成肌细胞是一种胚胎祖细胞，通过融合过程增殖和分化，形成称为肌管的多核纤维。这种分化过程受肌源性调节因子，包括myod和肌细胞生成素的调节。肌细胞生成素是肌肉特异性转录因子，参与骨骼肌发育或肌细胞生成和修复的协调。肌细胞生成素是分化过程中肌原性前体细胞与新的或先前存在的纤维融合所必需的。myod是其他重要的调节蛋白因子，在调节肌肉分化和肌肉发育中起主要作用。肌源性激活有利于肌肉发育和耐力。基于以上信息，我们假设草药提取物、级分或其组合物/制品可以增强内皮细胞中的一氧化氮合成；增加atp含量；激活蛋白质合成/mtor信号传导、线粒体生物合成和肌细胞生成(肌管形成)；并在骨骼肌细胞中激活myod和肌细胞生成素信号，这对于增加能量和耐力水平，以及身体表现者(如健美运动员、运动员等)的肌肉组织质量是理想的。因此，在基于细胞的研究中，对草药提取物、级分和他们的组合物进行彻底的筛选，以评估其增加内皮细胞中亚硝酸盐合成和增加骨骼肌细胞内细胞内atp和蛋白质的能力。在目前的筛选研究中，如表1所示，令人惊讶地发现，来自芒果树皮(ln16005)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物和来自耳叶番泻地上部分(li17090)的醇提取物有效的在ea.hy926人内皮细胞中增加亚硝酸盐的产生。这些提取物也增加了大鼠l6骨骼肌细胞中atp的产生，如表5所示。来自其他植物部分和使用其他溶剂介质进行提取的那些一氧化氮和atp数据也分别总结在表1和5中。总状花羊蹄甲水醇提取物(ln16002)和上述草药的一些其他溶剂提取物也增加了atp水平。类似地，如图1所示，暴露于上述测试化合物的l6大鼠肌肉骨骼肌成肌细胞增加了pgc-1α[ppar(过氧化物酶体增殖物激活受体)-γ共激活因子-1α]的表达，表明这些化合物可以上调线粒体生物发生。如图2所示，如在l6大鼠肌肉骨骼肌成肌细胞中过表达cyt.c氧化酶1(cox1)所示，上述化合物还显示出激活线粒体电子传递链(etc)的复合物iv的功效。已知过表达主调节剂pgc1α和活化复合物iv有助于增加线粒体生物发生。与这些观察结果一致，总状花羊蹄甲果实(ln16002)、耳叶番泻地上部分(li17090)、芒果树皮(ln16005)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的提取物表现出在大鼠骨骼肌成肌细胞中增加的线粒体生物发生。pgc1α表达和cox1活化的数据分别在图1和2中描述，并且线粒体生物发生的数据总结在表12中。总的来说，观察到提取物可以提供额外的细胞能量来源以增强能量和耐力，并且还可以增加肌肉质量、肌肉力量，防止衰老、肌肉减少症和肌肉萎缩。此外，总状花羊蹄甲果实(ln16002)、耳叶番泻地上部分(li17090)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的每一种提取物通过高磷酸化激活mtor并在l6大鼠骨骼肌成肌细胞中增加肌肉特异性转录因子，如myod和肌细胞生成素的表达/产生。这表明通过激活核糖体蛋白质合成机制和增强必需肌肉特异性肌原性生长因子增加了肌肉发育。上述提取物对所述肌肉特异性标志物的调节如图1所示。进一步的研究还表明，如图3所示，用总状花羊蹄甲果实(ln16002)、耳叶番泻地上部分(li17090)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)提取物处理l6大鼠骨骼肌成肌细胞通过增强的肌生成增加肌管形成。这些研究表明，所述提取物具有增强肌肉组织质量和增加耐力水平的潜力。线粒体膜电位：线粒体是atp生成的主要来源。称为线粒体膜电位(δψm)的跨线粒体内膜的电压梯度是细胞健康和损伤/死亡的关键指标。在氧化应激条件下，膜电位差从其稳态水平降低，这称为线粒体去极化。线粒体去极化导致线粒体破坏，随后细胞死亡。使用facs(荧光激活细胞分选)分析仪和在流式细胞仪上的荧光探针jc-1(5,5'，6,6'-四氯-1,1'，3,3'-四乙基苯并咪唑基酞菁碘化物)评价本发明的一些提取物和组合物抑制线粒体去极化或将细胞/线粒体从去极化状态恢复到极化状态的功效。例如，如表14中所总结，来自芒果树皮(ln16005)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物和来自耳叶番泻地上部分(li17090)的醇提取物显示出在l6大鼠骨骼肌成肌细胞中从过氧化氢诱导的氧化应激引起的去极化到膜的显著恢复。20s蛋白酶体测定：泛素蛋白酶体途径(upp)是哺乳动物细胞质和细胞核中蛋白质分解代谢的主要机制。含有20s(分解代谢蛋白酶体)和19s(调节蛋白酶体)蛋白亚基的胞质26s蛋白酶体复合物影响多种细胞过程，并且系统中的缺陷可导致几种重要人类疾病，包括肌肉退化的发病机理。20s蛋白酶体是蛋白质降解的重要降解途径之一。如图2f所示，耳叶番泻的提取物(ln17090)显示出抑制l6大鼠成肌细胞中20s蛋白酶体途径的潜力，表明其通过抑制泛素蛋白酶体途径来减少肌肉萎缩。在该研究的扩展中，通过与赋形剂、载体和稀释剂组合将提取物转化为自由流动的粉末组合物。所述组合物(组合物-6至10)也显示出类似的生物活性。类似地，为了探索获得具有改善功效的新组合物的可行性，组合至少两种选自阿拉伯金合欢果实、总状花羊蹄甲果实、耳叶番泻地上部分、芒果树皮、芒果树叶和虾子花嫩茎，以及相同植物的一些其他植物部分的提取物或级分的成分以获得新的组合物(组合物-11至25和33至37)，还测试其增加一氧化氮/亚硝酸盐含量、atp和蛋白质合成。另外，为了进一步获得具有改善活性的产品，将至少一种选自获得自上述植物的提取物或级分的成分与至少一种选自获得自绒毛戴星草(sphaeranthusindicus)、茜草(rubiacordifolia)、石榴(punicagranatum)的提取物或级分的任选成分以不同比例组合，并测试如此获得的组合物(组合物-2至5和组合物-26至32)的一氧化氮和atp的调节。出乎意料的是，与它们相应的单独成分相比，这些组合物(组合物-2至5和组合物-11至37)在增加一氧化氮、atp和蛋白质合成方面显示出更好的效力，表明当与其它成分组合时提取物显示出协同作用的趋势。例如，用2.5ng/ml浓度的芒果提取物(ln16005)和7.5ng/ml浓度的绒毛戴星草提取物(ln16015)的水醇提取物处理的大鼠l6骨骼肌细胞分别显示出atp水平增加3.52％和6.28％。用含有1：3的比例的这两种提取物的组合物-2处理的细胞在10ng/ml时显示出atp水平增加22.2％，这显著优于相同浓度的相加效应(9.78％)。类似地，用含有1：2的比例的相同成分的组合物-3处理的大鼠l6骨骼肌细胞在1μg/ml浓度下显示亚硝酸盐产量增加60.25％，与之相比，芒果提取物(ln16005)和绒毛戴星草提取物(ln16015)分别在0.33μg/ml和0.66μg/ml显示增加5.71％和4.83％。因此，观察到组合物-3在1μg/ml浓度下诱导的亚硝酸盐产生的增加比单个成分显示的相应添加效应(10.74％)高得多(60.25％)。组合物-2至5和相应的两种单独成分的亚硝酸盐水平和atp升高的数据总结在表2和6中。数据表明，含有芒果和绒毛戴星草提取物的组合物在增加atp和亚硝酸盐水平方面具有协同效应。此外，组合物-3剂量依赖性地增加nadph氧化酶活性，ic50值为216ng/ml。它还剂量依赖性地增强l6大鼠骨骼肌成肌细胞中的蛋白质含量。组合物-3通过c2c12间充质成肌细胞中的肌管形成增加肌细胞生成(肌管形成)(图3f)，支持其在构建骨骼肌纤维中的潜力。如图1(e和f)所示，它通过激活骨骼肌细胞中的mtor信号传导和上调l6骨骼肌细胞中的肌肉特异性转录因子(myf6、myod和肌细胞生成素)来激活蛋白质合成。如图2f所示，组合物-3通过线粒体生物发生(表12)和上调线粒体氧化磷酸化(ox-phos)途径的关键酶蛋白cytc氧化酶-1(cox1)进一步改善线粒体功能。此外，如图2f所示，组合物-3显示出抑制l6大鼠成肌细胞中20s蛋白酶体途径的潜力，表明其具有防止肌肉萎缩的潜力。重要的是，如表14中总结的，组合物-3还显示出大鼠骨骼肌成肌细胞中由l6过氧化氢诱导的氧化应激引起的对膜的去极化的显著恢复。其他组合物(组合物-11至组合物-25)协同作用以提高亚硝酸盐水平的数据汇总于表3和表4中，且表7至11总结了增加atp水平的协同功效。类似地，表12、13和13a总结了组合物-26至31增加线粒体生物发生的协同功效。在动物研究中进一步评价了获得自总状花羊蹄甲果实、芒果树皮、虾子花和阿拉伯金合欢果实嫩茎的提取物或它们的组合物用于增加能量和耐力的功效。为了说明，用载体或200mgln16011或组合物-1(含有80％芒果树皮甲醇提取物(ln16014)和绒毛戴星草提取物(ln16015)口服处理瑞士白化小鼠21天。在第21天，处理后1小时，对小鼠进行强制游泳测试，并使用smart视频跟踪系统(panlabslu)监测活动。如表15所示，与对照处理的动物相比，用提取物ln16011或组合物-1处理的动物显示减少的休息时间和增加的缓慢移动时间、快速移动时间、总移动时间、游泳路径长度和平均速度。类似地，在处理21天后，通过使用握力计(ugobasile，italy)测量小鼠的握力。如表16所示，与用对照处理的动物相比，补充有组合物ln16011和组合物-1的动物显示出改善的抓握强度。在类似的实验中，评价含有选自芒果、阿拉伯金合欢和耳叶番泻的植物部分的提取物的两种成分的组合物-33至37的功效，以在类似模型中增加能量和耐力。这些测试或参比产品的口服补充21天显示出小鼠游泳参数和握力的明显改善。组合物-33、组合物-34、组合物-35、组合物-36、组合物-37和l-肉碱的补充导致游泳距离显著增加，游泳时间显著增加和休息时间明显减少。此外，补充有组合物-33、组合物-34、组合物-36、组合物-37和l-肉碱的小鼠也显示出与载体对照组相比统计学上显著(p<0.05)的握力增加。组合物-35还显示出握力的显著改善。结果汇总于表17和18中。该数据支持本发明的新组合物增加能量和肌肉强度的潜力。研究了耳叶番泻地上部分(ln17090)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的乙醇提取物在地塞米松诱导的spraguedawly(sd)大鼠肌肉减少症模型中改善握力、肌肉耐力和肌纤维直径大小的功效。如图4a至4d所示，与正常对照组(g1)相比，地塞米松补充肌肉减少症组(g2)的动物显示出握力、肌肉耐力和肌纤维直径的显著降低，表明成功诱导了肌肉减少症。与疾病对照组(g2)相比，补充200mgln17090(g3)和400mgln17090(g4)的治疗组显示出剂量依赖性和统计学上显著的握力改善。补充有ln16011(g5)和hmb(g6)的动物也显示出如图4中总结的握力的显著改善。类似地，补充有ln17090的大鼠(g3和g4)显示出与疾病对照组(g2)相比肌肉耐力的显著改善。在补充有ln16011的大鼠(g5)中也观察到肌肉耐力的明显改善。最后，当与疾病对照组(g2)相比时，补充有ln17090的大鼠(g3和g4)显示出剂量依赖性和腓肠肌和比目鱼肌纤维直径的统计学显著性改善。补充有ln16011和hmb的动物(g4和g5)也显示出肌纤维直径的显著改善。数据总结为图4。总体而言，数据表明，耳叶番泻叶(ln17090)和阿拉伯金合欢(ln16011)的提取物可以提供治疗肌肉减少症的有效补充剂。上述证明获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分及它们的组合物可以是有效的天然补品，以提供能量的起始、稳定维持，增加能量水平、肌肉生长、肌肉力量、身体耐力和精神警觉，并治疗人类和动物的肌肉减少症和肌肉萎缩。因此，在一种优选的实施方案中，本发明公开了单独的获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分或它们的组合物，可用于增加能量水平、耐力、肌肉质量、肌肉力量和精神警觉性，并用于有效治疗肌肉减少症和肌肉萎缩。在另一种实施方案中，本发明公开了获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分及它们的组合物用于能量、肌肉力量和精神警觉的开始和稳定维持，其中，提取物或级分及它们的组合物可用于增强哺乳动物的肌肉力量、身体活动、身体健康、精神警觉、能量水平、耐力水平、循环健康、血管健康或用于更好的身心健康。在另一种实施方案中，本发明公开了组合物，其包含获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分，组合至少一种选自植物提取物、级分或纯植物化学物质，矿物质，维生素的生物活性成分，其作为天然能量增强剂，在有需要的温血动物或哺乳动物中提供能量、肌肉力量和精神警觉的起始和稳定维持。在另一种实施方案中，本发明公开了组合物，其包含获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分，组合至少一种选自提取物、级分或纯植物化学物质的生物活性成分，该生物活性成分获得自至少一种植物品种，选自绒毛戴星草(sphaeranthusindicus)、茜草(rubiacordifolia)、石榴(punicagranatum)、芳香鞘蕊花(coleusaromaticus)、方茎青紫葛(cissusquadrangularis)、姜黄(curcumalonga)、山竹子(garciniamangostana)、西瓜(citruluslanatus)、(oscimunsanctum)、柴桂(cinnamomumtamala)、罗勒(ocimumbasilicum)、姜(zingiberofficinalis)、蒺藜(tribulusterrestris)、阿育魏实(trachyspermumammi)、田野薄荷(menthaarvensis)和茴香(foeniculumvulgare)，该组合物用于增加能量水平、耐力、肌肉质量、肌肉力量的精神警觉，并用于治疗肌肉减少症和肌肉萎缩。在另一种实施方案中，本发明公开了组合物，其包含获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分，组合至少一种选自提取物、级分或纯植物化学物质的生物活性成分，该生物活性成分获得自绒毛戴星草的至少一个植物部分，该组合物用于提高能量水平、耐力、肌肉质量、肌肉力量和精神警觉性。在另一种实施方案中，本发明公开了组合物，其包含获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分，组合至少一种选自赋形剂、载体、稀释剂、甜味剂、食用香料着色剂、维生素、蛋白质或氨基酸的成分，其作为一种天然能量增强剂，在哺乳动物中用于增强身体或精神表现，开始和稳定维持能量增强身体活动、身体健康、精神警觉、能量水平、耐力水平、循环健康、血管健康或用于更好的心理健康。在另一种实施方案中，本发明公开了获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分或它们的组合物，用于改善身体机能，包括增加的耐力和提高的速度、强度、力量、耐久性、柔韧性、敏捷、平衡、焦点协调、反应时间、疲劳恢复，以及性耐力的增加。改善心理表现的例子包括改善清晰度、注意力范围、精神警觉、认知功能、情绪提升，以及恢复或减少精神疲劳(例如，在高强度体育锻炼后)，用于治疗肌肉萎缩(肌肉减少症)和线粒体功能障碍。在另一种实施方案中，本发明的组合物包括膳食补充剂、食品成分制品，例如饮料、零食和含有上述成分或其组合物的能量饮料，用于在需要其的温血动物中增强肌肉力量、身体活动、身体健康、精神警觉性、能量水平、耐力水平、循环系统健康、血管健康或用于更好的心理健康。在另一种实施方案中，本发明提供在哺乳动物中增加自然能量以提供起始和稳定维持能量、精神警觉性、肌肉力量和增加肌肉质量的方法，其中该方法包括用至少一种选自获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分或它们的组合物的成分补充或治疗所述哺乳动物。在另一种实施方案中，本发明提供组合物，其包含至少两种选自获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的草药提取物或级分的成分，在需要其的温血动物中作为能量、肌肉量、肌肉力量和身体素质的天然增强剂。在另一种实施方案中，本发明提供组合物，其包含根据本发明所述的所述生物活性成分，以及一种或多种选自提取物、级分、活性化合物、植物化学物质；来自植物，动物或微生物的具有已证实的治疗健康益处的粉末；药学上或饮食上可接受的药剂、活性成分、维生素、氨基酸或矿物质的组分。在另一种示例性的实施方案中，本发明的组合物可以进一步任选的含有一种或多种非限制性组分，例如选自b族维生素的维生素，包括硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、生物素、氰钴胺、胆碱和/或叶酸(包括还原形式的叶酸，例如但不限于亚叶酸、亚叶酸钙和甲基四氢叶酸)。b族维生素也是水溶性维生素，有助于碳水化合物分解成葡萄糖，以为身体提供能量，脂肪和蛋白质的分解有助于神经系统的正常运作，以及胃和肠道的肌肉张力。组合物中特定形式的b族维生素可包括右旋泛酸钙、烟酰胺、盐酸吡哆醇和硫胺素单硝酸酯；或氨基酸。在另一种实施方案中，所述草药提取物或级分或它们的组合物可以例如用于表演运动员、从事耐力和多学科运动的人、老年人和病人，以增加精神警觉性、耐力水平、肌肉力量、身体健康和保持能量、肌肉力量的起始和稳定维持。本发明的成分和组合物可以配制成“健身补充剂”或“健身饮料”，其可以与早餐一起服用或以浓缩物的形式服用，可以定期使用这种饮料。组合物，其中组合物中获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的成分的单独的或共同的浓度为0.01％至99.99％。在另一种实施方案中，本发明提供改善选自atp、一氧化氮、enos、mtor、myod和肌细胞生成素的生物标志物的方法，和增强选自线粒体生物发生、肌生成、肌细胞增殖的生物学过程的方法，其中所述方法包括给予受试者或哺乳动物或温血动物治疗有效量的获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物或级分或它们的组合物，其任选地含有至少一种选自植物提取物或级分的生物活性成分。在本发明的另一种实施方案中，可用于制备提取物和级分或提取或分级草药阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的各种适宜溶剂包括但不限于c1-c5醇，像乙醇、甲醇；水及其混合物；c1-c7烃类如己烷；酯类如乙酸乙酯等，及其混合物。在本发明的另一种实施方案中，用于制备提取物的植物部分可选自叶、茎、嫩茎、地上部分、果实、果皮、种子、花头、根、树皮或整株植物或其混合物。在另一种实施方案中，本发明的提取物或级分或组合物可以配制成干燥形式、液体形式、食品、膳食补充剂或任何合适的形式，例如片剂、胶囊或软咀嚼物。在另一种实施方案中，提取物或级分或组合物可以通过包括纳米技术、微囊化、胶体载体系统和其他药物递送系统的技术，以控释片剂的形式递送，使用基于控释的聚合物基涂层。在本发明的另一种实施方案中，提供作为营养/膳食补充剂的提取物或组分或组合物，其可以以健康食品的剂型或用于特定健康用途的食物或凝胶以及饮料等来预期/制造，所述用于特定健康用途的食物例如固体食物如巧克力或营养棒、半固体食物如奶油或果酱，所述凝胶以及饮料等如清凉饮料、乳酸菌饮料、滴剂、糖果、口香糖、橡皮糖、酸奶、冰淇淋、布丁、软小豆蓉、果冻、饼干、茶、软饮料、果汁、牛奶、咖啡、麦片、小吃店等。在其他实施方案中，本发明的提取物或级分或组合物可用于治疗人和动物的线粒体缺陷。它还可用于增强或保持身体或精神表现，在身体紧张的运动员或非运动员中减少强烈体育锻炼的感染。在另一种示例性的实施方案中，本发明的获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物和级分或它们的组合物可进一步任选地与一种或多种药学上或饮食上可接受的赋形剂、载体和稀释剂组合，所述赋形剂、载体和稀释剂包括但不限于葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、黄糊精、白糊精、氧相二氧化硅(aerosil)、微晶纤维素、硬脂酸钙、硬脂酸镁、山梨糖醇、甜菊糖、玉米糖浆、乳糖、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、l-抗坏血酸、dl-α-生育酚、甘油、丙二醇、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酯、阿拉伯胶、角叉菜胶、酪蛋白、明胶、果胶、琼脂、维生素b群、烟酰胺、泛酸钙、氨基酸、蛋白质、钙盐、色素、香精、防腐剂、蒸馏水、盐水、葡萄糖水溶液、酒精、丙二醇和聚乙二醇、各种动植物油、白色软石蜡、石蜡、食用香料、着色剂和蜡。在又一种实施方案中，本发明的特征在于一种在人和动物中增强身体或精神表现，稳定维持能量、身体耐力、肌肉量、肌肉力量和精神警觉性的方法，其中该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的获得自阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、耳叶番泻、芒果和虾子花的提取物和级分或它们的组合物，其中改善的身体机能的实例包括增加的耐力和改善的速度、强度、力量、耐力、柔韧性、敏捷性、平衡、焦点协调、反应时间、疲劳恢复，并增加性耐力。改善的精神表现的实例包括改善的清晰度、注意力范围、精神警觉性、认知功能、情绪提升，以及精神疲劳的恢复或减轻(例如，在高强度体育锻炼之后)。本领域普通技术人员将理解，在不脱离其广泛的发明构思的情况下，可以对上述实施方案进行改变。因此，应理解，本发明不限于所公开的特定实施方案或实施例，而是旨在覆盖在说明书中定义的本发明的目的和范围内的修改。所给出的实施例说明了本发明，但不应认为它们以任何方式限制本发明的范围。实施例：实施例1：总状花羊蹄甲果实、耳叶番泻地上部分、芒果茎皮、虾子花嫩茎和阿拉伯金合欢果实干燥原料的水提取物的制备：将总状花羊蹄甲果实、芒果树皮、虾子花嫩茎和阿拉伯金合欢果实各100g的原料粉碎，并在环境温度下在索氏提取装置中用水(600ml)连续渗滤单独提取的粉末1.5小时。从索氏提取装置中取出提取物，并在类似条件下用水(2×300ml)将用过的原料再提取两次。将来自各原料的合并的提取物精细过滤并在旋转蒸发器上浓缩，浓缩物在冷冻干燥器上进行最终干燥，得到总状花羊蹄甲果实(ln16001；5.15g)、耳叶番泻地上部分(ln17088；10.5g)、芒果茎皮(ln16004；9.9g)、虾子花嫩茎(ln16007；3.85g)和阿拉伯金合欢果实(ln16010；38.6g)的水提取物。实施例2：总状花羊蹄甲果实、耳叶番泻地上部分、芒果茎皮、芒果茎叶、虾子花嫩茎和阿拉伯金合欢果实干燥原料的水醇(含水乙醇)提取物的制备：将总状花羊蹄甲果实、耳叶番泻地上部分、芒果茎皮、芒果茎叶、虾子花嫩茎和阿拉伯金合欢果实各100g的原料粉碎，并在环境温度下在索氏提取装置中用50％乙醇(600ml)连续渗滤单独提取的粉末1.5小时。从索氏提取装置中取出提取物，并在类似条件下用50％乙醇(2×300ml)将用过的原料再提取两次。将来自各原料的合并的提取物精细过滤并在旋转蒸发器上浓缩，浓缩物在冷冻干燥器上进行最终干燥，得到总状花羊蹄甲果实(ln16002；6.70g)、耳叶番泻地上部分(ln17089；11.6g)、芒果茎皮(ln16005；17.3g)、芒果叶(ln17093；14.9g)、虾子花嫩茎(ln16008；6.0g)和阿拉伯金合欢果实(ln16011；44.0g)的水醇提取物。实施例3：总状花羊蹄甲果实、耳叶番泻地上部分、芒果茎皮、虾子花嫩茎和阿拉伯金合欢果实干燥原料的醇提取物的制备：将总状花羊蹄甲果实、耳叶番泻地上部分、芒果茎皮、虾子花嫩茎和阿拉伯金合欢果实各100g的原料粉碎，并在环境温度下在索氏提取装置中用乙醇(600ml)连续渗滤单独提取的粉末1.5小时。从索氏提取装置中取出提取物，并在类似条件下用乙醇(2×300ml)将用过的原料再提取两次。将来自各原料的合并的提取物精细过滤并在旋转蒸发器上浓缩，得到总状花羊蹄甲果实(ln16003；2.67g)、耳叶番泻地上部分((ln17090；8.4g)、芒果茎皮(ln16006；9.55g)、虾子花嫩茎(ln16009；6.3g)和阿拉伯金合欢果实(ln16012；24.9g)的乙醇提取物。实施例4：a)芒果树皮的80％甲醇提取物的制备：将芒果树皮(100g)粉碎，将粉末装入实验室提取器中，或用80％甲醇(500ml)在回流温度下提取2小时。过滤提取物，在相似条件下用80％甲醇将用过的原料再提取两次(2×400ml)。将合并的提取物精细过滤并真空浓缩，得到残留物(ln16014；12.5g)。b)芒果叶的80％甲醇提取物的制备：将芒果叶(100g)粉碎，将粉末装入实验室提取器中，或用80％甲醇(500ml)在回流温度下提取2小时。过滤提取物，在相似条件下用80％甲醇将用过的原料再提取两次(2×400ml)。将合并的提取物精细过滤并真空浓缩，得到残留物(ln17091；12.5g)。c)阿拉伯金合欢果实的80％甲醇提取物(ln17094)的制备：使用与上述相同的过程制备阿拉伯金合欢果实的80％甲醇提取物。d)从其他植物部分和其他溶剂提取介质制备代表性的提取物：使用上面公开的提取过程制备阿拉伯金合欢果实果皮水醇提取物(ln17095)、阿拉伯金合欢果实甲醇提取物(ln17096)、阿拉伯金合欢果实丙酮提取物(ln17097)、总状花羊蹄甲果实果皮水醇提取物(ln17109)、总状花羊蹄甲种子水醇提取物(ln17098)、耳叶番泻叶子水提取物(ln17099)、耳叶番泻叶子水醇提取物(ln17100)、耳叶番泻叶子丙酮提取物(ln17101)、耳叶番泻茎乙醇提取物(ln17106)、虾子花叶子乙醇提取物(ln17102)、虾子花叶子丙酮提取物(ln17103)、芒果叶子水醇提取物(ln17093)、芒果叶子甲醇提取物(ln17094)、芒果树皮丙酮提取物(ln17095)。实施例5：石榴干果皮的甲醇、水醇(60％甲醇)和水提取物的制备：将石榴干果皮(100g)粉碎，将粉末装入实验室提取器中，并用甲醇(400ml)在80℃提取2小时。过滤提取物，在相似条件下用甲醇将用过的原料再提取两次(2×300ml)。将合并的提取物精细过滤并真空浓缩，得到甲醇提取残留物(ln16048；25.6g)。采用类似方法，分别以60％甲醇和水为提取溶剂，得到水甲醇提取物(ln16047)和水提取物(ln16046；28.6g)。实施例6：茜草(rubiacordifolia)的水提取物：将茜草的干燥根(100g)粉碎成粗粉，用500ml水在70-80℃下提取1小时。使用300ml水重复提取过程两次。合并所有提取物，精细过滤合并的水提取物，并在50-60℃的爬升膜蒸发器上将澄清的提取物蒸发至干，得到残余物(10g)。实施例7：绒毛戴星草提取物的制备。将绒毛戴星草花头(100g)原料(rm)粉碎，并使用渗滤技术在环境温度下将粉末用乙醇(700ml)提取。每次用500ml乙醇重复提取过程两次。合并提取物，精细过滤合并的提取物，并在45-50℃真空浓缩。将残留物在水和乙酸乙酯之间分配，分别浓缩各层，得到乙酸乙酯部分和水部分。将如此获得的乙酸乙酯部分和水部分以3：1的比例合并，以获得绒毛戴星草提取物(ln16015)。然而，也可以使用任何有机溶剂提取物/级分或含有任何其他比例的提取物/级分的混合物。上述提取过程仅用于说明目的。其他植物部分也可以使用类似的过程提取。也可以使用提取技术和其他提取溶剂。诸如温度、压力和溶剂比的提取参数也可以变化。实施例8：含有阿拉伯金合欢、总状花羊蹄甲、芒果、虾子花和绒毛戴星草提取物的选择组合物的制备组合物-1：通过组合22g的芒果的80％醇提取物和44g的绒毛戴星草提取物(ln16015)，28g的微晶纤维素粉末(mccp)和2g的syloid来制备组合物-1。组合物-2：通过将芒果的水醇提取物(ln16005)和绒毛戴星草提取物(ln16015)以1：3的比例组合来制备组合物-3。组合物-3：通过将芒果树皮的水醇提取物(ln16005)与绒毛戴星草花头的提取物(ln16015)以1：2的比例组合来制备组合物-2。组合物-4：通过将芒果的水醇提取物(ln16005)与绒毛戴星草的提取物(ln16015)以1：1的比例组合来制备组合物-4。组合物-5：通过将芒果的水醇提取物(ln16005)与绒毛戴星草的提取物(ln16015)以2：1的比例组合来制备组合物-5。组合物-6：通过将芒果树皮的水醇提取物(ln16005)与微晶纤维素粉末以3：1的比例组合来制备组合物-6。组合物-7：通过将芒果叶的80％甲醇提取物(ln17091)与微晶纤维素粉末以3：1的比例组合来制备组合物-7。组合物-8：通过将阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)与微晶纤维素粉末以3：1的比例组合来制备组合物-8。组合物-9：通过将虾子花茎的水醇提取物(li16008)与微晶纤维素粉末以3：1的比例组合来制备组合物-9。组合物-10：通过将耳叶番泻的醇提取物(ln17090)与微晶纤维素粉末以3：1的比例组合来制备组合物-10。含有芒果树皮的水醇提取物(ln16005)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)的组合物-11、12和13。通过将芒果的水醇提取物(ln16005)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)分别以1：2、1：1和2：1的比例组合来制备组合物-11、12和13。含有芒果叶的80％甲醇提取物(ln17091)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)的组合物-14、15和16。通过将芒果叶的80％甲醇提取物(ln17091)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)分别以1：2、1：1和2：1的比例组合来制备组合物-14、15和16。含有芒果树皮的水醇提取物(ln16005)和耳叶番泻的醇提取物(ln17090)的组合物-17、18和19。通过将芒果的水醇提取物(ln16005)和耳叶番泻的醇提取物(ln17090)分别以1：2、1：1和2：1的比例组合来制备组合物-17、18和19。含有芒果叶的80％甲醇提取物(ln17091)和耳叶番泻的醇提取物(ln17090)的组合物-20、21和22。通过将芒果叶的80％甲醇提取物(ln17091)和耳叶番泻的醇提取物(ln17090)分别以2：1、1：1和1：2的比例组合来制备组合物-20、21和22。含有耳叶番泻的醇提取物(ln17090)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)的组合物-23、24和25。通过将耳叶番泻的醇提取物(ln17090)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)分别以2：1、1：1和1：2的比例组合来制备组合物-23、24和25。含有耳叶番泻的醇提取物(ln17090)和石榴果实的甲醇提取物(ln16048)的组合物-26、27、28和29。通过将耳叶番泻的醇提取物(ln17090)和石榴果实的甲醇提取物(ln16048)分别以2：1、1：1、1：2和1：3的比例组合来制备组合物-26、27、28和29。含有耳叶番泻的醇提取物(ln17090)和茜草根的水提取物(ln17092)的组合物-30、31和32。通过将耳叶番泻的醇提取物(ln17090)和茜草根的水提取物(ln17092)分别以3：1、1：1和1：2的比例组合来制备组合物-30、31和32。组合物-33：通过将芒果树皮的80％甲醇提取物(ln16014)和阿拉伯金合欢的水醇提取物(ln16011)以1：1的比例组合来制备组合物-33。组合物-34：通过将芒果叶的50％乙醇提取物(ln17093)和阿拉伯金合欢的80％甲醇提取物(ln17094)以1：1的比例组合来制备组合物-34。组合物-35：通过将芒果叶的50％乙醇提取物(ln17093)和耳叶番泻的50％乙醇提取物(ln17089)以1：2的比例组合来制备组合物-35。组合物-36：通过将芒果树皮的80％甲醇提取物(ln16014)和耳叶番泻的50％乙醇提取物(ln17089)以1：2的比例组合来制备组合物-36。组合物-37：通过将耳叶番泻的水醇提取物(ln17089)和阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(li16011)以1：1的比例组合来制备组合物-37。实施例9：总状花羊蹄甲果实(ln16002)、芒果树皮(ln16005和ln16014)、虾子花嫩茎(ln16008)、阿拉伯金合欢果实(ln16011和ln16012)的提取物和绒毛戴星草提取物(ln16015)诱导亚硝酸盐的评价：为了评价测试样品是否能诱导人内皮细胞产生一氧化氮，我们在ea.hy926人内皮细胞(atcc，manassas，va)的细胞培养上清液中测试了亚硝酸盐浓度。简而言之，将相同数量的ea.hy926人内皮细胞(1.5×105)接种在35mm培养皿中。附着细胞后，用磷酸盐缓冲盐水洗涤培养皿两次，并用不同浓度的测试样品ln16002、ln16005、ln16008、ln16011、16012、ln16014和ln16015处理洗涤的细胞4小时。载体对照培养物接受0.2％dmso。收集无细胞培养物上清液并使用griess测定法估计亚硝酸盐含量。将50微升培养物上清液与等体积的griess试剂(在5％磷酸中含有1：1比例的0.2％亚萘基二胺盐酸盐和2％磺胺酰胺的混合物)在微量滴定板的每个孔中混合并进一步室温下孵育10分钟。在microplate读数器(spectramaxm5，moleculardevices，sunnyvale，ca)中在550nm处测量显色。用已知浓度的亚硝酸钠构建标准曲线。计算亚硝酸盐浓度的增加百分比，并将数据总结为表1。对于来自其他植物部分的提取物和使用其他溶剂介质提取的提取物获得的亚硝酸盐数据也分别总结在表1中。表1实施例10：用于诱导ea.hy926人内皮细胞中亚硝酸盐的组合物-2至32的评价：使用上述实施例9中描述的过程进行研究。计算不同组合物的亚硝酸盐浓度增加百分比，数据总结于表2至4中。表2亚硝酸盐测定(1μ/ml)表3亚硝酸盐测定(5μg/ml)表4亚硝酸盐测定(2.5μg/ml)实施例11：atp测定：总状花羊蹄甲果实(ln16002)、芒果茎皮(ln16005和ln16014)、虾子花嫩茎(ln16008)、阿拉伯金合欢果实(ln16011)和绒毛戴星草花头(ln16015)的水醇提取物的atp增强效力的评价。通过基于发光的atp检测测定系统atplite(perkinelmerinc.，waltham，ma)测量细胞内atp水平。简而言之，l6大鼠骨骼肌细胞在补充有10％fbs和50μg/ml青霉素-链霉素的rpmi中，在37℃，有5％co2的96孔板中生长。16小时后，用含有独立不同浓度的测试样品ln16002，ln16005、ln16008、ln16011、16012、ln16014和ln16015的新鲜培养基替换培养基，并孵育4小时。载体对照培养物仅接受0.2％dmso(v/v)。最后，向每个孔中加入50μl底物溶液，并在平板振荡器上在室温下孵育5分钟。在暗适应10分钟后，在发光计(modulusmultimodereader，turnerbiosystemsinc.，sunnyvale，ca)中读取发光。将1x10-5m至空白的atp标准溶液的系列稀释液应用于测定板。从用发光单位对已知atp浓度绘制的标准曲线定量估计细胞内atp水平。通过比较处理的样品中的atp含量与载体对照培养物中的atp含量来计算处理的培养物中的细胞atp指数。载体对照培养物中的atp含量被认为是100％。每个样品的所有处理浓度在一式四份孔中处理。总状花羊蹄甲果实(ln16002)、芒果茎皮(ln16005)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物有效地增加了细胞内atp浓度。细胞内atp指数(％)数据总结在表5中。类似地，芒果茎皮的80％甲醇提取物(ln16014)在5、25和125ng/ml剂量下分别显示atp浓度29.2％、38.7％和44.3％的增加，超过未处理的对照细胞所示。对于来自其他植物部分的提取物获得的atp数据和使用其他用于提取的溶剂介质得到的atp数据也分别总结在表-5中。表5实施例12：评价组合物-1至5和组合物-11至32的atp增强功效：使用上述实施例11中公开的测试过程，评价新组合物组合物-1至5和组合物-11至32增加l6大鼠骨骼肌细胞中atp水平的功效。数据总结在表6至11中。表6atp分析(10ng/ml)表7atp分析(1ng/ml)表8atp分析(5ng/ml)表9atp分析(5ng/ml)表10atp分析(25ng/ml)表11atp分析(1ng/ml)实施例13：免疫印迹试验：评价总状花羊蹄甲果实(ln16002)、芒果茎皮(ln16005)、虾子花嫩茎(ln16008)和阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物，耳叶番泻叶醇提物(ln17090)和组合物-3在调节肌肉标志物蛋白质磷酸化mtor(ser2448)、m-tor、pgc-1α、肌细胞生成素和myod中的功效。使用免疫印迹试验分析测试样品对l6大鼠骨骼肌细胞中肌肉特异性标记蛋白的影响。简而言之，如所示，在不同的时间段用测试样品(ln16002、ln16005、ln16008和ln16011)处理l6细胞。此后，用冷冻的pbs洗涤细胞三次，在含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解缓冲液(10mmtris-hcl，ph7.4,150mmnacl，1mmedta，1％tritonx-100)中制备细胞裂解物。将细胞裂解物在4℃以14,000g澄清20分钟。通过bradford试剂估计蛋白质浓度。在sds-page中分离等量的蛋白质。sds-page后，电印迹硝酸纤维素膜在4℃下与各种抗体(特异于磷酸化mtor(ser2448)、m-tor，pgc-1α、肌细胞生成素、myod)反应过夜。将相同的膜与抗gapdh抗体再孵育。用增强的化学发光(thermoscientific，usa)检测特异性信号，并通过geldoctmxr+成像系统捕获信号强度，并使用imagelabtm2.0软件(biorad，hercules，ca)分析。如图1所示，测试化合物ln16002、ln16005、ln16008、ln16011、ln17090和组合物-3有效地改善了肌肉特异性标记蛋白磷酸化tor(ser2448)、m-tor、pgc-1α、肌细胞生成素、myod、myf6。实施例14：线粒体生物测定法：评价总状花羊蹄甲果实(ln16002)、虾子花嫩茎(ln16008)、阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物，耳叶番泻叶的醇提取物(ln17090)，组合物-3和组合物26-31的线粒体生物发生增强潜力。使用mitobiogenesistmin-cellelisa试剂盒(abcam，cambridge，uk)测量线粒体生物发生。该测定基于测量复合物iv的亚基i(cox-1)、线粒体dna(mtdna)内切蛋白和琥珀酸脱氢酶复合物-亚基a(sdh-a)、核dna(ndna)编码蛋白质之间的比例。简而言之，将相同数量的l6大鼠骨骼肌成肌细胞接种在聚l-赖氨酸包被的96孔板的每个孔中，并在37℃下在co2培养箱中孵育过夜。用ln16002或ln16008或ln16011以不同浓度处理细胞连续三天。接受0.2％dmso的载体培养孔被认为是载体对照。将细胞用4％多聚甲醛在室温下固定20分钟。然后将洗过的细胞与0.5％乙酸一起孵育5分钟以阻断内源性碱性磷酸酶活性。此后，用透化缓冲液透化细胞，并在4℃下与一抗溶液一起孵育过夜。将洗过的细胞进一步与ap/hrp标记的二抗溶液一起孵育。最后，根据方案，开发了碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶反应，分别用于检测sdh-a和cox-1。在酶标仪(spectramaxm5，moleculardevices，sunnyvale，ca)中分别在405和600nm处读取针对sdh-a和cox-1开发的颜色反应。与对照相比，计算线粒体生物发生的百分比增加，并且数据总结在下表12、13和13a中。总状花羊蹄甲果实(ln16002)、虾子花嫩茎(ln16008)、阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物，耳叶番泻叶的醇提取物(ln17090)和组合物-3对细胞色素c氧化酶1(cox1)的调节总结于图2。表12表13与载体对照相比，线粒体生物发生的增加％表13a与载体对照相比，线粒体生物发生的增加％实施例15：肌管试验：评价总状花羊蹄甲果实(ln16002)、虾子花嫩茎(ln16008)、阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物和耳叶番泻叶(ln17090)和组合物-3的肌管(肌纤维)形成功效。将等数量的c2c12小鼠成肌细胞接种在24孔细胞培养板中，并在37℃下在co2培养箱中孵育过夜。第二天，用多种浓度的测试样品ln16002、ln16005、ln16008、ln16011和16012(在补充有10％fbs的dmem中制备)处理细胞。载体对照培养孔接受仅含有0.1％dmso的细胞培养基。每48小时更新细胞培养基以及处理，并且每天监测平板以获得最佳分化。处理4天后，形成肌管并终止培养。此后，用2％对甲醛固定细胞，并在明视场下在20x放大率下观察形成的肌管，并在显微镜(axioobserverz1,carlzeiss)下捕获相差图像。当与对照处理的细胞相比时，总状花羊蹄甲果实(ln16002)、虾子花嫩茎(ln16008)、阿拉伯金合欢果实(ln16011)的水醇提取物和耳叶番泻叶(ln17090)和组合物-3处理的细胞显示肌管形成的剂量依赖性改善。数据如图3所示。实施例16：评价耳叶番泻叶的醇提取物(ln17090)和组合物-3在大鼠骨骼肌成肌细胞中的20s蛋白酶体抑制活性：使用cayman的20s蛋白酶体测定试剂盒(annarbor，mi，cat#10008041)，根据制造商的约定进行蛋白酶体活性测定。它使用特定的20s底物suc-llvy-amc，其在被活性酶切割后产生具有480nm发射波长的高荧光产物。对于该测定，将约1×105至1×106个l6细胞(atcc，manassas，va；cat#crl-1458)接种在t-75烧瓶中，并在37℃下在co2培养箱中孵育。两天后，用1xpbs洗涤细胞三次，并向烧瓶中加入3ml测定缓冲液。除去测定缓冲液并加入2ml裂解缓冲液(由试剂盒提供)。废弃细胞，得到的裂解物含有蛋白质。使用piercebca蛋白质测定试剂盒(thermoscientific，waltham，ma；cat#23225)估计裂解物中的蛋白质含量。向每个孔中加入10微升所需浓度的样品和约0.4mg/ml蛋白质。加入10微升底物并在37℃下孵育1小时。孵育期后，在spectramax5e多模式读数器(moleculardevices，sunnyvale，ca)中用ex：360nm/em：480nm测量每个孔的荧光强度。将测试化合物的强度与对照孔的强度进行比较，以获得20s蛋白酶体活性的抑制百分比。ln17090和组合物-3的数据总结在图2中。实施例17：ln17090和组合物-3在h2o2诱导的l6大鼠骨骼肌成肌细胞中从去极化的线粒体膜电位中恢复的功效，线粒体膜电位测定：使用细胞荧光，亲脂性阳离子染料，5,5',6,6'-四氯-1,1'，3,3'-四乙基苯并咪唑基羰基-花青碘化物(jc-1，thermofisherscientific；目录号t3168)测量线粒体膜电位(δψm)。简而言之，从培养瓶中收获l-6(atcc，manassaas，va；cat#crl-1458)大鼠骨骼肌成肌细胞，并将1×pbs中的0.1×106细胞/ml置于facs管中。在1xpbs中制备所需浓度的样品，将其加入各管中并在37℃下在co2培养箱中孵育30分钟。将h2o2(5mm终浓度)加入除对照和jc-1管外的所有管中，并在37℃下在co2培养箱中孵育15分钟。将jc-1(0.5μg/ml)加入除对照管外的所有管中，并在37℃下在co2培养箱中孵育30分钟。将所有管以1300rpm离心5分钟。弃去上清液，将细胞重悬于1ml温热的1xpbs中，以1300rpm离心5分钟。将细胞重悬浮于200μl的1xpbs中，并在bdfacsverse流式细胞仪中获得，并通过facssuite软件分析，以获得对照、h2o2处理的细胞和用测试化合物处理的细胞的去极化细胞的百分比。数据总结在表14中。表14实施例18：评价阿拉伯金合欢果实的水醇提取物(ln16011)和含有芒果树皮的80％甲醇提取物(ln16014)、绒毛戴星草提取物(ln16015)和赋形剂的组合物-1的能量、耐力和肌肉强度增强潜力。在开始研究之前，使瑞士白化小鼠适应环境5天。选择健康的瑞士白化小鼠并随机分组(n＝6)到不同的治疗组。瑞士白化病小鼠的g1至g3组分别口服给予载体、组合物-1(150mg/kg)和ln16011(200mg/kg)21天，以评价这些化合物的能量耐受性和肌肉强度潜力。在第21天，治疗后1小时，小鼠被迫以恒定负载(其体重的10％附着于其尾部)在充满水的丙烯酸圆筒中游泳。使用smart视频跟踪系统(panlabs.l.u)监测该测试10分钟。通过智能软件记录和分析各种游泳参数。测量的游泳参数包括休息时间、慢速移动时间、快速移动时间、总移动时间、游泳路径长度和平均速度。结果表示为平均值±sem，并与对照组比较以测量功效，结果总结在表15中。表15值表示为平均值±sem；n＝6只动物/组补充有测试项目组合物-1和ln16011的动物组在研究的第21天显示休息时间(秒)减少和行进距离(mm)、慢速游泳时间(秒)、快速游泳时间(秒)增加。上述观察结果表明用组合物-1和ln16011处理的动物在10分钟的强迫游泳期间更活跃和更有活力，并且与对照组相比，在大多数时间可以倾向于缓慢或快速游泳而不是休息。在第21天，组中快速游泳百分比和游泳速度的增加表明，与对照组相比，在口服给予组合物-1和ln16011后，治疗的动物在最短的时间内倾向于快速游泳并覆盖更长的距离。因此，用这些组合物组合物-1和提取物ln16011处理的动物更有活力。此外，改善的能量、行进距离的增加和减少的休息时间表明组合物组合物-1和提取物ln16011具有比对照更高的耐久性。处理21天后，通过使用握力计(ugobasile，italy)测量小鼠的握力。在握力测量之前，训练动物并习惯于实验环境和条件5天。使每只小鼠抓住抓握杆，并在逐渐增加的力的作用下通过尾部在水平面上轻轻地拉回，直到拉力克服动物的抓握力。在小鼠将其抓握在抓握杆上时施加的力记录为以克为单位的握力。对每只动物进行三次试验，计算平均握力。结果表示为平均值±sem并与对照组比较，并总结在表16中。表16值表示为平均值±sem；n＝6只动物/组基于该数据，显然，与对照相比，用组合物-1和ln16011处理21天的组中的动物表现出相对更好的握力。因此，可以得出结论，这些化合物增加了肌肉力量。实施例19：组合物-33、组合物-34、组合物-35、组合物-36和组合物-37对瑞士白化病小鼠的肌肉力量和能量耐力潜力的功效：在登记进入研究之前使动物适应3天的时间。检查一组60只7-9周龄组的，体重23.0-42.0g的瑞士白化雄性小鼠，选择54只健康小鼠进行实验，随机分成9组。每组由6只动物组成，每组具有载体对照、测试项目和阳性对照左旋肉碱。测试项目组合物-33-37以200mpk口服给药。左旋肉碱以150mpk口服给药21天。在第21天，评估动物的握力和强迫游泳测试。通过让小鼠用前肢抓住杆来进行握力；对于所有个体动物，一式三份地记录尾部轻轻拉动小鼠的lbs握力。在填充至27cm的丙烯酸罐中短暂进行强制游泳，小鼠被迫游泳，其中5％体重的重量负荷至小鼠尾部。最初进行测试项目施用1小时后的握力测试；然后强迫游泳测试10分钟。在强迫游泳测试中，使用smart视频跟踪软件记录动物游泳参数，例如缓慢游泳、休息、快速游泳和所覆盖的总距离(长度)。在规定的游泳时间10分钟后，立即使用过量的co2处死动物；快速冷冻腓肠肌以分析生物标志物mtor。表17：第21天游泳参数总结值表示为平均值±s.e.m，n＝6只动物/组表18：握力总结(lbs)组第21天g1-fst+载体对照0.21±0.01g2-fst+组合物-330.28±0.01g4-fst+组合物-340.28±0.02g5-fst+组合物-350.21±0.02g6-fst+组合物-360.30±0.02g8-fst+组合物-370.27±0.01g9-fst+l-盐酸肉碱0.32±0.01值表示为平均值±s.e.m，n＝6只动物/组实施例20：ln16011和ln17090在改善地塞米松诱导的spraguedawly(sd)大鼠的肌肉减少症模型中的握力、肌肉耐力和肌纤维直径大小方面的功效：在登记进入研究之前使动物适应3天的时间。检查一组40只6-12周龄组的，体重170至320g的大鼠，选择36只健康大鼠进行实验，随机分为6组。所有组均由6只动物组成，每组具有载体对照(g1)、地塞米松诱导的疾病对照(g2)、200mg/kgln17090补充组(g3)、400mg/kgln17090补充组(g4)、200mg/kgln16011补充组(g5)和350mg/kghmb(β-羟基β-丁酸甲酯)补充阳性对照组(g6)。在第1天开始补充测试项目和标准品，并在整个研究期间持续至第21天。通过在第8天至第14天以4mpk给予动物地塞米松在动物中诱导肌肉减少症。在第21天，评估动物腓肠肌和比目鱼肌组织中的握力、肌肉耐力、肌纤维直径。通过让小鼠用前肢抓住杆来进行握力；用尾巴轻轻拉动小鼠并且对于所有个体动物一式三份地记录lbs握力。通过将动物倒置在钢格栅上来评估肌肉耐力，并且以秒为单位的下降时间被记录为耐力。在研究结束时，对动物实施安乐死，并将比目鱼肌和腓肠肌进行组织形态学测定。对肌肉组织进行处理、切片、染色，在显微镜下检查，并在随机选择的纤维中测量肌肉纤维直径。所有参数的数据总结在图4中。当前第1页12