一种合生素的制作方法

本发明属于养殖技术领域，具体涉及一种合生素。

背景技术：

断奶是养猪生产的重要环节，在断奶过程中由于日粮由母乳转变为富含谷物原料的颗粒饲料，再加上外界环境的变化，以母乳为底物建立起的肠道菌群结构发生剧烈变化，引起仔猪肠道菌群紊乱，破坏了仔猪肠道微生物屏障，增加病原菌定植的风险，造成仔猪腹泻，严重影响仔猪的生长性能。合生素是将益生菌和益生元联合使用，共同发挥二者益生作用的复合微生态制剂。已有研究表明合生素具有提高仔猪生长性能，促进肠道发育，调节肠道菌群结构等功能。专利号cn200510038893.x的专利，披露了芽孢乳杆菌s1可以改善断奶猪仔的日增重量和降低腹泻率，但其日增重量低、腹泻率较高且作用机制尚不完善；将芽孢乳杆菌s1与其他菌种及辅料制成的合生素尚未有报道。因此，本发明通过研究丁酸梭菌、芽孢乳杆菌s1、菊粉和果寡糖制成的合生素对断奶仔猪肠道菌群及代谢的作用机制，探讨合生素缓解断奶应激造成的仔猪肠道菌群紊乱及断奶仔猪生长机制。同时，通过保育期全程使用合生素，研究其最佳使用时间段，为合生素在养殖生产上的应用提供理论依据。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种合生素，该合生素是由两种益生菌丁酸梭菌、芽孢乳杆菌s1和两种益生元菊粉、果寡糖按一定比例组成，缓解由断奶应激造成的仔猪肠道菌群紊乱，降低腹泻，保证仔猪肠道健康。同时，提升仔猪生长性能。

本发明采用的技术方案如下：

一种合生素，包括：丁酸梭菌、芽孢乳杆菌s1、菊粉和果寡糖。

优选地，所述合生素包括：芽孢乳杆菌s11×10¹⁰～1×10¹³cfu，丁酸梭菌3×10¹⁰～3×10¹³cfu，菊粉25～40g和果寡糖15～30g。

优选地，所述合生素包括：芽孢乳杆菌s11×10¹⁰～1×10¹¹cfu，丁酸梭菌3×10¹⁰～3×10¹¹cfu，菊粉25～30g和果寡糖20～30g。

优选地，所述合生素包括：芽孢乳杆菌s11×10¹⁰cfu，丁酸梭菌3×10¹⁰cfu，菊粉30g和果寡糖20g。

优选地，所述芽孢乳杆菌s1是从猪肠道分离的。

具体地，所述芽孢乳杆菌s1由南京农业大学消化道微生物实验室提供，菌种保藏号为cgmccno.1315。

优选地，所述合生素可以制成丸剂、片剂、颗粒和散剂。

优选地，所述合生素运用于养殖产业中。

具体地，本发明的合生素采用喂水的方式，缓解仔猪断奶应激。

采用上述技术方案，本发明的有益效果为：本发明的合生素中芽孢乳杆菌s1分离于生长性能优异的猪肠道中，安全可靠，可提高断奶仔猪生长性能，降低仔猪腹泻率。丁酸梭菌、菊粉和果寡糖可促进如双歧杆菌，乳酸杆菌等益生菌的增殖，调整肠道菌群结构，减少病原菌的定植，同时改善肠腔环境，达到保证肠道健康，提升仔猪生长性能。与现有技术相比，本发明将芽孢乳杆菌s1与丁酸梭菌、菊粉和果寡糖相结合形成的合生素既可以高效降低断奶仔猪腹泻率且猪仔日均采食量和日增重量显著增加；断奶猪仔的粪便乳酸含量及短链脂肪酸的含量增加，肠道ph减小，可以抑制病原菌的增殖，短链脂肪酸是有益的微生物代谢产物，有利于肠道健康；采用喂水的方式进行饲喂，简单方便。

附图说明

图1为合生素对保育猪粪便菌群属水平相对丰度的影响。

具体实施方式

本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。

实施例1

一种合生素：芽孢乳杆菌s11×10¹⁰，丁酸梭菌3×10¹⁰cfu，菊粉30g和果寡糖20g。

实施例2

一种合生素：芽孢乳杆菌s11×10¹³cfu，丁酸梭菌3×10¹²cfu，菊粉25g和果寡糖15g。

实施例3

一种合生素：芽孢乳杆菌s11×10¹¹cfu，丁酸梭菌3×10¹¹cfu，菊粉32g和果寡糖25g。

实施例4

一种合生素：芽孢乳杆菌s11×10¹²cfu，丁酸梭菌3×10¹⁰，菊粉40g和果寡糖15g。

实施例5

一种合生素：芽孢乳杆菌s11×10¹¹cfu，丁酸梭菌3×10¹²cfu，菊粉30g和果寡糖30g。

实施例6

一种合生素同实施例1，将其制备成丸剂、片剂、颗粒和散剂。

实施例7

一种合生素同实施例2，将其制备成丸剂、片剂、颗粒和散剂。

实施例8

一种合生素同实施例3，将其制备成丸剂、片剂、颗粒和散剂。

实施例9

一种合生素同实施例4，将其制备成丸剂、片剂、颗粒和散剂。

实施例10

一种合生素同实施例5，将其制备成丸剂、片剂、颗粒和散剂。

实施例11

在猪仔养殖产业中的应用：

一种合生素同实施例1，丁酸梭菌来自汉世伟公司；芽孢乳杆菌s1来自南京农业大学消化道微生物实验室；菊粉和果寡糖来自北京厚嘉生物技术有限公司，产地智利，纯度大于90％。

将这种合生素以喂水的方式来饲喂21日龄断奶的同批次健康断奶仔猪，具体方式如下：

试验选取240头体况相近(6.35±0.20kg)，21日龄断奶的同批次健康断奶仔猪，分为两组，对照组和处理组，以栏位为单位，每组分为三个平行样组，每个平行样组40头仔猪。对照组饲喂无合生素的水，处理组每个栏位每天通过饮水饲喂上述合生素，21-42日龄每天饲喂；42-70日龄隔天饲喂一次，一次剂量为21-42日龄每天饲喂量的一倍。

本试验在汉世伟蚌埠魏庄猪场进行，自由饮水，自由采食。免疫和消毒严格按照汉世伟公司的正常流程进行。

实施例12

对实施例11的饲养猪仔进行微生物菌群结构与短链脂肪酸含量测试，具体方法为：分别取仔猪21、28、42及70日龄采集对照组和试验组仔猪粪便，-20℃保存。

生长性能：分别于21(试验前)，42，70日龄对仔猪进行空腹称重，计算仔猪的平均日增重。记录仔猪每天的采食量，计算平均日采食量和料重比。准确记录每天腹泻仔猪头数，计算腹泻率。计算方法如下：平均日增重＝栏总增重/(栏仔猪数×饲养天数)；平均日采食量＝栏总采食量/(栏仔猪数×饲养天数)；料重比＝平均日采食量/平均日增重；腹泻率(％)＝腹泻头次/(供试猪总头数×饲养天数)×100％，其中每头仔猪腹泻1天记为1个腹泻头次。具体结果如表1示出：

表1合生素对保育猪生长性能和腹泻率的影响

由表1可知，与对照组相比，使用合生素显著增加了21-42日龄仔猪平均日采食量和平均日增重(p<0.05)；显著降低了仔猪腹泻率(p<0.05)；使用合生素显著增加了42-70日龄仔猪的平均日增重(p<0.05)，对平均日采食量，料重比和腹泻率没有显著影响。

本发明所述的合生素通过喂水方式饲喂，21～42日龄平均日增重量比对照组提高12.31％，腹泻率低至2.64±0.04％，优于单独喂水芽孢乳杆菌s1(21～42日龄平均日增重量比对照组提高10.22％，腹泻率低至2.9±0.01％)；42～70日龄平均日增重量比对照组提高20.36％，腹泻率低至1.54±0.49％，优于单独喂水芽孢乳杆菌s1(21～42日龄平均日增重量比对照组提高17.22％，腹泻率低至1.8±0.02％)。

粪便样品菌群结构分析：粪便菌群dna的提取：取0.3g粪便样品于灭菌后的2ml离心管中，加入1mlpbs缓冲液，涡旋振荡后，3000×g离心5min，吸取上层菌液转移到新的2ml离心管中，12000×g离心5min后，舍弃上清液，加入1mlctab溶液，混匀后转移到含有0.3g锆珠的无菌锆珠管中充分振荡混匀后，使用珠磨式组织研磨器破坏细胞壁，提取粪便中微生物的总dna。

使用细菌通用引物515f和806r对细菌16srrna基因v4区进行扩增，扩增产物在hiseq2500平台进行pe250双端测序(华大基因有限公司)。测序完成后首先去除长度小于400bp，大于500bp的序列，以及含n碱基的序列，然后对数据进行拼接并去除平均质量低于30的序列。过滤后的序列在qiime中进行otu聚类。在菌群otu水平上计算chao1指数，用以评估肠道菌群的丰富度，计算shannon和simpson指数，用以评估肠道菌群的多样性。

28、42、70天肠道菌群多样性与丰富度结果见表2，由表2可知，使用合生素对猪粪便菌群丰富度和多样性没有显著影响。属水平上进一步分析，如图1所示，使用合生素显著增加了28日龄仔猪粪便中乳酸杆菌属(lactobacillus)和未分类瘤胃球菌科(unclassifiedruminococcaceae)的相对丰度(p<0.05)；显著增加了42日龄猪粪便中拟杆菌属(bacteroides)和普氏菌属(prevolla)的相对丰度(p<0.05)；对70日龄菌属相对丰度没有显著影响(p>0.05)。

本发明的合生素水喂断奶猪仔后，猪仔肠道菌群多样，乳酸杆菌属、未分类瘤胃球菌科、拟杆菌属和普氏菌属相对丰度增加，有利于肠道健康。

表2合生素对保育猪粪便菌群多样性和丰富度的影响

粪便中短链脂肪酸含量的测定：取0.3g粪便样品加入2ml离心管中，加入1.5ml超纯水，充分震荡混匀，12,000×g离心5min，取上清液300μl，按照5:1的比例加入25％(w/v)的偏磷酸巴豆酸溶液，-20℃过夜，再以12,000×g离心10min后，吸取上清液，并使用0.22μm滤膜过滤上清液，乙醚萃取过滤后的上清液后，使用agilent7890a气相色谱仪检测短链脂肪酸的浓度，结果如表3示出：

由表3可知，使用合生素可显著增加保育期猪粪便中总短链脂肪酸与丁酸的浓度(p<0.05)；显著增加28与42日龄猪粪便中乙酸浓度(p<0.05)；对保育期猪粪便丙酸浓度没有显著影响(p>0.05)。

本发明的合生素水喂断奶猪仔后，猪粪中的总短链脂肪酸显著增加，而短链脂肪酸可以抑制病原菌的增殖，短链脂肪酸是有益的微生物代谢产物；猪粪便中总短链脂肪酸、丁酸和乙酸浓度增加，肠道ph下降，有利于肠道健康。

表3合生素对仔猪粪便短链脂肪酸含量的影响(μmol/g)

数据均采用spss20.0软件中的独立样本t检验进行分析，置信区间为95％。

本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。