一种包含刺梨汁的补血组合物及其应用的制作方法

本发明涉及食品保健领域，具体涉及一种包含刺梨汁的补血组合物及其应用。

背景技术：

刺梨为蔷薇科多年生落叶丛生灌木，我国野生刺梨主要在贵州、云南、广西等地。人们常说的刺梨指的是刺梨果实，刺梨果含有丰富的营养成分，其维生素c含量是所有水果之首，还富含超氧化物歧化酶(so天)、单宁以及矿物元素等成分。在传统历史上，刺梨被人们利用作为消暑解热、生津止渴、帮助消化的佳品。现代研究发现，由于刺梨中含丰富的维生素c、so天、多酚、黄酮等抗氧化成分而显现解毒、镇静、延缓衰老作用。此外，文献报道刺梨还有增强免疫、抗肿瘤、抗动脉硬化等作用。

银耳是一种常用的食用菌，具有悠久的食用历史。中医认为银耳“具有强精、补肾、润肠、补气、和血、补脑、美容、嫩肤”等功效。现代研究发现银耳多糖是其发挥作用的主要功效成分。

贫血是全球性的健康问题，我国2002全国第四次营养与健康调查数据显示我国贫血发病率为20.1％，贫血人口数超过2.6亿。中、晚期妊娠的孕妇铁缺乏的患病率在50％左右，2岁以内婴幼儿和60岁以上老年人贫血患病率也较高，分别为31.1％、29.1％，而男性为15.8％，女性为23.3％。因此，降低贫血发病率形势很严峻。以往针对贫血状况的解决方法主要有：食用传统中医认为具有补血作用的中药材，如当归、大枣、桂圆、阿胶、红糖等；或者服用含铁制剂，如利用焦磷酸铁复配人参等中药成分来改善营养性贫血的食品养血茶冲剂，以卟啉铁为主的红桃k生血剂等。但由于造成贫血的原因复杂多样、个体差异大，现有手段效果各有千秋。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种不同于现有技术的补血组合物，该补血组合物原材料来源广泛易得，长期食用安全无副作用。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种包含刺梨汁的补血组合物，包含以下重量份的组分：银耳多糖1～3份、刺梨汁20～50份。

进一步地，所述刺梨汁含维生素c≥400mg/100ml。

进一步地，所述银耳多糖的分子量范围为20万da～120万da。

上述补血组合物在制备改善贫血作用的保健食品、功能食品、特殊医学用途配方食品、老年食品或儿童食品中的应用。

进一步地，所述保健食品、功能食品、特殊医学用途配方食品、老年食品或儿童食品的剂型为胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液剂。

进一步地，所述保健食品、功能食品、特殊医学用途配方食品、老年食品或儿童食品为饮料、果冻、凝胶糖果或流质/半流质食品。

进一步地，所述饮料包括以下重量份的组分：银耳多糖2份、刺梨汁30份、胶原蛋白肽粉0.5份、苹果汁10份、果葡糖浆1份和柠檬酸0.05份。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明的包含刺梨汁的补血组合物，其中银耳多糖与刺梨汁的比例范围在1～3：20～50时，能增加小鼠外周血红细胞数量且提升血红蛋白含量，具有补血作用。另外，银耳和刺梨都是常用的食材，来源易得广泛，长期食用安全无副作用。

附图说明

图1为实施例一至四中银耳多糖的gpc图谱；

图2为高分子银耳多糖的gpc图谱；

图3为低分子银耳多糖的gpc图谱。

具体实施方式

此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例一：

包含刺梨汁的补血组合物由以下组分制成：银耳多糖1g、刺梨汁20g。其中，刺梨汁含维生素c400mg/100ml，银耳多糖的分子量范围为20万da～120万da。

实施例二：

包含刺梨汁的补血组合物由以下组分制成：银耳多糖2g、刺梨汁30g。其中，刺梨汁含维生素c1000mg/100ml，银耳多糖的分子量范围为20万da～120万da。

实施例三：

包含刺梨汁的补血组合物由以下组分制成：银耳多糖3g、刺梨汁50g。其中，刺梨汁含维生素c1500mg/100ml，银耳多糖的分子量范围为20万da～120万da。

实施例四：

包含刺梨汁的补血组合物由以下组分制成：银耳多糖3g、刺梨汁20g。其中，刺梨汁含维生素c2200mg/100ml，银耳多糖的分子量范围为20万da～120万da。

实施例一至实施例四中的分子量范围在20万da～120万da的银耳多糖是由高分子银耳多糖通过超声降解获得。高分子银耳多糖是参照文献吴琴，陶瑞霄，迟原龙，etal.银耳粗多糖的理化特性研究[j].食品科技，2016(12):149-153中的方法提取获得。

对比例1：高分子银耳多糖

根据文献报道的方法(吴琴，陶瑞霄，迟原龙，etal.银耳粗多糖的理化特性研究[j].食品科技，2016(12):149-153)，得到常压提取的高分子银耳多糖(分子量>100万da)。

对比例2：低分子银耳多糖

根据文献报道的方法(陈丽娟，杨继国，宁正祥.银耳多糖湿法打浆快速提取工艺的研究[j].中国食品添加剂，2017(1):156-160.)，利用湿法打浆快速提取法提取获得低分子量的银耳多糖(分子量<20万da)。

各样品银耳多糖分子量的检测：

采用凝胶渗透色谱仪tsk-gelg-5000pwxl与tsk-gelg-3000pwxl串联；流动相0.02mol/lkh2po4溶液，ph6.0；流速0.6ml/min；柱温35℃。检测器为2414型示差折光检测器。将葡聚糖标准品系列分别用流动相配成浓度为1.0mg/ml的标准溶液，进样量为20μl，采集gpc色谱图。以标准葡聚糖分子量的对数logmw为纵坐标，洗脱体积v为横坐标，绘制“logmw-v”曲线，用breezegpc系统软件对曲线进行回归拟合，选出与曲线相关度较好的葡聚糖分子量gpc校正曲线方程。样品处理：银耳多糖用流动相配成浓度为0.5mg/ml的样液，过0.45μm水相微孔滤膜后按照上述色谱条件，进样量为20μl，采集gpc色谱图。根据葡聚糖gpc校正曲线方程，由多糖的流出时间计算出多糖的分子量范围。图1为实施例一至四中银耳多糖的gpc图谱，由图1根据流出时间可得出分子量范围为20万da～120万da。图2为高分子银耳多糖的gpc图谱，由图2根据流出时间可得出分子量>120万da。图3为低分子银耳多糖的gpc图谱，由图3根据流出时间可得出分子量＜20万da。

为证明本发明的补血组合物的补血功效及补血机理，以spf级小鼠开展动物实验，具体实验方法与实验结果如下：

1、试验样品及分组：

实验组一至四：按照上述实施例一至四组方及质量要求制备所得的组合物，分别命名为s1、s2、s3、s4；

对照组d1：100％刺梨原汁(维生素c500mg/100ml)；

对照组d2：银耳多糖(分子量范围在20万da～120万da)；

对照组d3：高分子银耳多糖2g(分子量>100万da)，刺梨汁(维生素c1000mg/100ml)30g配制得到；

对照组d4：低分子银耳多糖2g(分子量<20万da)，刺梨汁(维生素c1000mg/100ml)30g配制得到；

空白组：蒸馏水。

实验组s1至s4、对照组d1、d2、d3、d4样品经溶解均匀后用蒸馏水稀释到与空白组、模型组灌胃等体积(0.1ml/20g)。

2、实验动物：spf级小鼠，体重18～22g，购于广东省医学实验动物中心。

3、实验设备：exfa6030型全自动动物血液细胞分析仪、tg16-w型微量高速离心机、天j-5000c型电子天平等。

4、试验方法：

spf级小鼠适应两周，然后按体重将小鼠随机分为9组，每组10只，各给药组小鼠于造模前7天给相应样品。自造模之日开始，隔日由眼底后静脉丛放血0.3ml，同时改变其正常饮食量，饲料控制在每日65g/kg体重，自由饮水，连续7天；随后每日1次，连续灌胃至造模第14天(即给药第21天)；

在造模第0天及给药第21天，每只小鼠尾静脉取血30μl，检测外周血血红细胞计数(rbc)和血红蛋白(hb)浓度。

5、剂量设计

表1：给药剂量设计

6、试验结果

在造模第0天和造模第14天时各组外周血血红细胞计数(rbc)数据见表2，各组血红蛋白hb含量的数据见表3。

表2各样品对失血性小鼠外周血rbc的影响(天，n＝10)

注：空白组第14天与第0天比较，#p<0.05；与同期空白组比较*p<0.05。

由表2可知，在第0天时，各组间外周血rbc没有显著性差异。空白组第14天与0天相比，外周血rbc显著下降(p<0.05)，说明失血性模型造模成功。而实验组s1至s4的第14天与0天相比，虽然外周血rbc也有所下降，说明正在恢复当中，但是外周血rbc显然明显高于同期空白组的外周血rbc，说明补充样品加快恢复了由于放血丢失的外周血rbc。因此得出本发明的实施例配方s1、s2、s3、s4的刺梨汁和银耳多糖混合物具有补血作用。然而，单纯补充刺梨汁(d1)和银耳多糖(d2)对补血没有作用(与空白组数据相比，没有统计学差异p>0.05)。此外，当对银耳多糖的分子量进行调整的时候，我们发现仅改变银耳多糖的分子量，在与刺梨汁进行搭配的时候，其补血的作用也消失了(d3、d4与空白组相比没有显著性差异)，进一步说明刺梨汁和银耳多糖组合后，促进外周血rbc的恢复具有协同增效作用，并且银耳多糖的分子量也具有非常关键的作用。

表3各样品对失血性小鼠外周血红蛋白hb含量的影响(天，n＝10)

注：空白组第14天与第0天比较，#p<0.05；与同期空白组比较*p<0.05。

由表3可知，在第0天时，各组间hb含量没有差别。空白组第14天与0天相比，外周血红蛋白hb显著下降，说明失血性模型造模成功。而实验组s1、s2、s3、s4第14天与0天相比，虽然外周血红蛋白hb也有所下降，但是外周血红蛋白hb显然明显高于空白组的外周血红蛋白hb，因此说明本发明的刺梨汁和银耳多糖混合物能有效促进失血后外周血hb的合成。对照组d1、d2第14天与空白组相比，外周血红蛋白hb的上升没有显著性差异，说明单一的刺梨汁、银耳多糖补充没有对外周血中hb的合成有促进作用。由此也说明刺梨汁与银耳多糖在促进失血后的外周血hb合成两者之间具有协同增效作用。对d3、d4组结果的进一步分析表明，银耳多糖的分子量对促进外周血hb合成具有非常重要的作用。众所周知，多糖的活性与分子量有极大的关系，过低、过高的分子量都不利于多糖维持高活性的空间构象，从本试验中可以发现，对于银耳多糖而言，其分子量在20万da～120万da范围内时能产生并维持良好的活性构象。

为了说明补血机理，检测小鼠小肠组织铁转运蛋白基因表达，具体实验过程如下：

从4个实验组选择s1组和对比例中d3组的小鼠小肠组织，用rt-pcr检测二价金属离子转运蛋白(dmt1)和膜铁转运蛋白(fpn1)的基因表达变化。采用经典δδct法进行基因表达差异数据分析，δδct＝(ct实验样本—ct实验参比)—(ct对照样本—ct对照参比)。基因表达差异＝实验样本的目标基因表达/对照样本的目标基因表达，表达差异倍数≥2认为表达有显著性差异，p<0.05为组间显著性差异。检测结构结果见表4。由表4结果表明，刺梨汁银耳多糖组合物可能是通过上调小肠转运金属离子相关蛋白来发挥补血作用。

表4刺梨汁银耳多糖组合物对小肠相关蛋白表达的影响(n＝10)

注：表达倍数差异是与空白组比较；*代表与d3组相比p<0.05。

应用实施例：

将银耳多糖200g(分子量20万da～120万da)加入到刺梨汁(维生素c1000mg/100ml)3000g中，高速搅拌30分钟，然后加入胶原蛋白肽粉50g、苹果汁1000g、果葡糖浆100g、柠檬酸5g，再加入适量纯化水补足10l，罐装入玻璃瓶中经121℃12分钟高温杀菌，冷却后得具有补血补胶原作用的刺梨银耳多糖饮品。

本发明的补血组合物还可以用于制备改善贫血作用的保健食品、功能食品、特殊医学用途配方食品、老年食品或儿童食品，在此不一一列举。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式，本发明并不局限于上述实施方式，在实施过程中可能存在局部微小的结构改动，如果对本发明的各种改动或变型不脱离本发明的精神和范围，且属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型。