本发明属于饲料添加剂技术领域，具体涉及一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法。
背景技术：
蛋鸡非特异性免疫是机体在长期的种系发育与进化过程中逐渐建立起来的天然防御功能，具有识别迅速(96h内)、广谱、有遗传性种间差异特点。
传统的方法，在蛋鸡日粮中添加黄秋葵叶粉可以提高蛋鸡生产性能、蛋品质,同时对蛋鸡盲肠微生物菌群及肠道组织结构可起到一定改善作用。秋葵中叶粉中有很多成分，不同的成分有不同的溶媒，比如多糖溶解在水中，需要特殊的工艺，多糖被提取出来后，干粉叶在蛋鸡的消化道中很难优势利用其中的多糖。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法中大豆分离蛋白具有乳化性、起泡性、凝胶性、热稳定性，主要起到保护新城疫lasota株核酸过胃的功能，灭活新城疫lasota株可以避免长期大量使用新城疫lasota株所造成的活疫苗毒力返强、免疫麻痹的风险，以及毒株转强的风险，灭活新城疫lasota株通过秋葵多糖有效包被，有效过胃，可以使蛋鸡血清中非特异性免疫干扰素-γ、白介素-6、溶菌酶含量显著提高，蛋鸡实际养殖过程中使用效果突出，另外，选用秋葵多糖能够避免饲料中加入过量的秋葵干叶影响饲料的基础营养，同时秋葵多糖还具有修复消化道黏膜，抗革兰氏阴性菌等优点，保持蛋鸡较高的抵抗力，达到预防疫病的效果。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法为：
s1、将秋葵中加入水a，加热至70℃，保温3h，进行第一次浸提，浸提后用滤布过滤，得到滤液a，向过滤后的秋葵残渣中加入水b再次加热至70℃，保温3h，进行第二次浸提，用滤布过滤，得到滤液b，将滤液a和滤液b混合后，得到总滤液，向总滤液中加入质量分数为95％的乙醇溶液，然后在温度为4℃的条件下静置12h后，在温度为4℃、转速为8000rpm的条件下离心10min～20min，将沉淀物在温度为-20℃的条件下冷冻干燥2h，得到秋葵多糖；
s2、将菌株含量≥4×108.0eid50/0.1ml的新城疫lasota株稀释10倍后，接种于9～10日龄鸡胚中，每胚的接种量为0.1ml，接种后用蜡烛密封针孔，然后在温度为37℃的条件下孵育48h后，收集得到鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；
s3、向s1中得到的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液中加入质量分数为38％～40％的甲醛溶液，至甲醛的质量分数为0.1％时止，在温度为4℃的条件下灭活处理72h，灭活期间振摇3次～4次，得到灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；
s4、将大豆分离蛋白加入至无菌水中，搅拌溶解后，在温度为60℃的条件下改性30min后，自然冷却至室温，然后加入海藻酸钠和丙三醇，搅拌混合10min后，再加入s1中得到的秋葵多糖和s3中得到的灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，搅拌混合5min，得到混合液a，向所述混合液a中滴加质量分数为1％的氯化钙溶液固定化30min，然后用无菌生理盐水洗涤3次后，在温度为-20℃的条件下预冻8h～12h，然后在温度为-50℃的条件下冷冻干燥10h，得到提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂。
优选地，s1中所述秋葵和水a的质量比以及过滤后的秋葵残渣和水b的质量比均为1：10。
优选地，s1中所述总滤液和质量分数为95％的乙醇溶液的体积比为1：3。
优选地，s4中所述混合液a中大豆分离蛋白、无菌水、海藻酸钠、丙三醇、秋葵多糖和灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液的用量比为4g：100ml：1g：6g：10ml：10mg。
优选地，s4中所述混合液a和质量分数为1％的氯化钙溶液的体积比为1：1。
优选地，s4中搅拌的速率为150r/min。
优选地，s4中滴加的速率为5滴/min～8滴/min。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
本发明中大豆分离蛋白大豆分离蛋白具有乳化性、起泡性、凝胶性、热稳定性，主要起到保护新城疫lasota株核酸过胃的功能，灭活新城疫lasota株可以避免长期大量使用新城疫lasota株所造成的活疫苗毒力返强、免疫麻痹的风险，以及毒株转强的风险，灭活新城疫lasota株通过秋葵多糖有效包被，有效过胃，可以使蛋鸡血清中非特异性免疫干扰素-γ、白介素-6、溶菌酶含量显著提高，蛋鸡实际养殖过程中使用效果突出，另外，选用秋葵多糖能够避免饲料中加入过量的秋葵干叶影响饲料的基础营养，同时秋葵多糖还具有修复消化道黏膜，抗革兰氏阴性菌等优点，保持蛋鸡较高的抵抗力，达到预防疫病的效果。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
具体实施方式
实施例1
本实施例的提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法为：
s1、将秋葵中加入水a，加热至70℃，保温3h，进行第一次浸提，浸提后用滤布过滤，得到滤液a，向过滤后的秋葵残渣中加入水b再次加热至70℃，保温3h，进行第二次浸提，用滤布过滤，得到滤液b，将滤液a和滤液b混合后，得到总滤液，向总滤液中加入质量分数为95％的乙醇溶液，然后在温度为4℃的条件下静置12h后，在温度为4℃、转速为8000rpm的条件下离心10min，将沉淀物在温度为-20℃的条件下冷冻干燥2h，得到秋葵多糖；所述秋葵和水a的质量比以及过滤后的秋葵残渣和水b的质量比均为1：10；所述总滤液和质量分数为95％的乙醇溶液的体积比为1：3；
s2、将菌株含量≥4×108.0eid50/0.1ml的新城疫lasota株稀释10倍后，接种于9～10日龄鸡胚中，每胚的接种量为0.1ml，接种后用蜡烛密封针孔，然后在温度为37℃的条件下孵育48h后，收集得到鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；所述新城疫lasota株市购，购于齐鲁动物保健品有限公司，批准文号:兽药生字150253007；
s3、向s1中得到的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液中加入质量分数为38％的甲醛溶液，至甲醛的质量分数为0.1％时止，在温度为4℃的条件下灭活处理72h，灭活期间振摇3次，得到灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；
s4、将4g的大豆分离蛋白加入至100ml的无菌水中，搅拌溶解后，在温度为60℃的条件下改性30min后，自然冷却至室温，然后加入1g的海藻酸钠和6g的丙三醇，以速率为150r/min搅拌混合10min后，再加入10ml的s1中得到的秋葵多糖和10mg的s3中得到的灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，以速率为150r/min搅拌混合5min，得到混合液a，以5滴/min的滴加速率向所述混合液a中滴加质量分数为1％的氯化钙溶液固定化30min，然后用无菌生理盐水洗涤3次后，在温度为-20℃的条件下预冻8h，然后在温度为-50℃的条件下冷冻干燥10h，得到提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂。
海兰蛋鸡25周龄成年产蛋鸡12只，分成4组(a-d组)，每组1只，每组3个重复。a组-c组分别饲喂本实施例制备的提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂4毫克、2毫克、1毫克，d组为空白对照。分别测定，饲喂0h、24h、48h、72h、96h蛋鸡血液中非特异性免疫的干扰素-γ、白介素-6、溶菌酶的含量，测定结果如表1所示：
表1蛋鸡血液中非特异性免疫干扰素-γ、白介素-6、溶菌酶的含量
由表1可知，海兰蛋鸡食用本实施例制备的提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂可以提高蛋鸡非特异免疫，a-c各组均比对照组d组的干扰素-γ，白介素和溶菌酶含量有提高，其中a组比对照组d组在饲喂后96h干扰素-γ提升2.7倍，白介素-6提升2.8倍，溶菌酶提升1.6倍，由此证明本实施例制备提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂可以提升蛋鸡非特异免疫。
实施例2
本实施例的提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂的制备方法，该方法为：
s1、将秋葵中加入水a，加热至70℃，保温3h，进行第一次浸提，浸提后用滤布过滤，得到滤液a，向过滤后的秋葵残渣中加入水b再次加热至70℃，保温3h，进行第二次浸提，用滤布过滤，得到滤液b，将滤液a和滤液b混合后，得到总滤液，向总滤液中加入质量分数为95％的乙醇溶液，然后在温度为4℃的条件下静置12h后，在温度为4℃、转速为8000rpm的条件下离心20min，将沉淀物在温度为-20℃的条件下冷冻干燥2h，得到秋葵多糖；所述秋葵和水a的质量比以及过滤后的秋葵残渣和水b的质量比均为1：10；所述总滤液和质量分数为95％的乙醇溶液的体积比为1：3；
s2、将菌株含量≥4×108.0eid50/0.1ml的新城疫lasota株稀释10倍后，接种于9～10日龄鸡胚中，每胚的接种量为0.1ml，接种后用蜡烛密封针孔，然后在温度为37℃的条件下孵育48h后，收集得到鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；所述新城疫lasota株市购，购于齐鲁动物保健品有限公司，批准文号:兽药生字150253007；
s3、向s1中得到的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液中加入质量分数为40％的甲醛溶液，至甲醛的质量分数为0.1％时止，在温度为4℃的条件下灭活处理72h，灭活期间振摇4次，得到灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液；
s4、将4g的大豆分离蛋白加入至100ml的无菌水中，搅拌溶解后，在温度为60℃的条件下改性30min后，自然冷却至室温，然后加入1g的海藻酸钠和6g的丙三醇，以速率为150r/min搅拌混合10min后，再加入10ml的s1中得到的秋葵多糖和10mg的s3中得到的灭活的鸡新城疫苗鸡胚尿囊液，以速率为150r/min搅拌混合5min，得到混合液a，以8滴/min的滴加速率向所述混合液a中滴加质量分数为1％的氯化钙溶液固定化30min，然后用无菌生理盐水洗涤3次后，在温度为-20℃的条件下预冻12h，然后在温度为-50℃的条件下冷冻干燥10h，得到提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂。
采用本实施例制备的提高蛋鸡非特异性免疫的添加剂用于添加25周龄海兰蛋鸡的基础饲料中饲喂50只蛋鸡，经检测，每只蛋鸡的非特异性免疫性能都得到提高，在饲喂过程中，蛋鸡的生病率显著下降。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。