本发明涉及能促进人乳寡糖(以下也称为“hmos”)的同化能力低的益生菌增殖的营养组合物。
背景技术：
双歧杆菌已知是包括人在内的哺乳类的肠道常驻菌，且具有抑制肠道中的病原性肠道细菌的增殖的作用。
通常，健康婴儿的肠道菌群(entericflora)中双歧杆菌占主导地位，但随着年龄增长而逐渐减少，由于大肠杆菌、梭菌属细菌等腐败菌增加，对宿主(人)的健康产生不良影响。因此，为了长期维持健康状态，维持双歧杆菌占主导地位的肠道菌群是尤为重要的。
母乳中包含10-20g/l的hmos，据说是130种以上的低聚糖的混合物。它们的结构是在13种核心结构上附加了岩藻糖、唾液酸的结构。母乳中经岩藻糖化的中性糖的比例高，代表性的是2’-岩藻糖基乳糖(以下也称为“2’-fl”)、乳糖-n-岩藻五糖i(以下也称为“lnfpi”)、乳糖-n-二岩藻六糖i(以下也称为“lndfpi”)和乳糖-n-四糖(以下也称为“lnt”)，仅这4种就占全部人乳寡糖的1/3～1/4。将包含乳糖-n-二糖的低聚糖称为i型、将包含n-乙酰葡糖胺(gal(β1-4)g1cnac)的低聚糖称为ii型，母乳中i型的lnt、lnfp1的含量高于ii型的乳糖-n-新四糖(以下也称为“lnnt”)、乳糖-n-岩藻五糖iii。i型和ii型的共存、以及i型的优先性是与其它种类奶粉低聚糖不同的人乳寡糖的显著特征(参照非专利文献1和2)。
已知母乳中包含的hmos即2’-fl和lnnt具有双歧杆菌增殖活性，通过选择性用于双歧杆菌而作为双歧杆菌的生长因子发挥作用，对于形成双歧杆菌占主导地位的肠道菌群是重要的。另外，能够合成hmos，且处于能够用于工业的状况(参照专利文献1)。
双歧杆菌利用双歧杆菌特异性gnb/lnb路径来代谢一部分hmos。该路径具有在婴儿中常见的许多种类，不具有在成人肠道中常见的双歧杆菌。能将hmos作为单独的碳源加以利用的菌种在婴儿中常见的双歧杆菌即长双歧杆菌长亚种、长双歧杆菌婴儿亚种、短双歧杆菌、两歧双歧杆菌这4种细菌当中报道了长双歧杆菌婴儿亚种和两歧双歧杆菌这2种细菌(参照非专利文献3)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：wo2014/086373
非专利文献
非专利文献1：japanesejournaloflacticacidbacteriavol.22,no.12011
非专利文献2：milksciencevol.56，no.42008
非专利文献3：milksciencevol.61，no.2.2012
非专利文献4：thejournalofbiologicalchemistryvol.286,no.40
技术实现要素：
发明要解决的问题
如前所述，在代谢hmos时，双歧杆菌中也存在不具有hmos的同化能力或同化能力低的菌，另一方面如长双歧杆菌婴儿亚种和两歧双歧杆菌那样，也存在对hmos具有同化性的菌。此外，在代谢hmos时，例如，长双歧杆菌婴儿亚种通过将hmos摄入菌体内加以利用，而两歧双歧杆菌通过用胞外酶将这些低聚糖降解而在菌体外暂时蓄积乳糖(参照非专利文献3和4)。
如此，细菌中也存在不具有hmos的同化能力或同化能力低的菌，但即使作为这样的菌，存在大量能用作有益菌的细菌。因此，即使作为没有人乳寡糖(以下也称为“hmos”)的同化能力或同化能力低的益生菌，只要在hmos的存在下能够增殖，作为营养组合物就是有用的。
因此，本发明中的主要目的在于提供在hmos存在下能够促进人乳寡糖(hmos)的同化能力低的益生菌增殖的技术。
用于解决问题的方案
为了解决前述课题，本发明人等着眼于两歧双歧杆菌通过用胞外酶将hmos降解而在菌体外暂时蓄积乳糖。此外，发现：通过将hmos的同化能力低的益生菌、两歧双歧杆菌和hmos一起进行培养而可促进hmos的同化能力低的益生菌的增殖。
即，本发明中，提供一种营养组合物，其含有：
属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌和人乳寡糖。
本发明的营养组合物中，作为前述人乳寡糖，可以使用2’-岩藻糖基乳糖和/或乳糖-n-新四糖。
本发明的营养组合物中，作为前述益生菌，可以使用双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)和/或乳酸菌。
在此情况下，作为前述双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)，可以使用选自长双歧杆菌长亚种、青春双歧杆菌、假小链双歧杆菌、动物双歧杆菌乳酸亚种、短双歧杆菌、假长双歧杆菌中的1种以上的细菌。
另外，作为乳酸菌，可以使用选自副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、加氏乳杆菌中的1种以上的细菌。
本发明的营养组合物中，作为前述属于两歧双歧杆菌的细菌，可以使用选自两歧双歧杆菌atcc29521、两歧双歧杆菌(nitebp-02429)、两歧双歧杆菌(nitebp-1252)、两歧双歧杆菌(nitebp-02431)、两歧双歧杆菌(nitebp-02648)、两歧双歧杆菌(nitebp-02432)、两歧双歧杆菌(nitebp-02433)、中的1种以上的细菌。
本发明的营养组合物能用于饮食品组合物、配方奶粉。
发明的效果
根据本发明，在hmos存在下能够促进人乳寡糖(hmos)的同化能力低的益生菌的增殖。需要说明的是，并不一定限定于此处记载的效果，还可以是记载于本发明中的任意的效果。
具体实施方式
以下对用于实施本发明的适宜的实施方式进行说明。需要说明的是，以下说明的实施方式是示出本公开的代表性实施方式的一个例子，因此不是用于狭窄地解释本发明的范围。需要说明的是，本说明书中，关于用“下限～上限”表述数值范围的情况，上限可以是“以下”或“低于”，下限可以是“以上”或“超过”。另外，本说明书中百分率只要没有特别声明就是基于质量的表示。
1.营养组合物
本发明的营养组合物至少含有：(1)属于两歧双歧杆菌的细菌、(2)人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌和(3)人乳寡糖。以下对各含有成分进行详细地说明。
(1)属于两歧双歧杆菌的细菌
作为能在本发明中使用的属于两歧双歧杆菌的细菌，只要不损害本发明的效果就可以任意选择1种或2种以上的公知或未知的属于两歧双歧杆菌的细菌。若进行具体列举，则可以列举出例如两歧双歧杆菌atcc29521、两歧双歧杆菌(nitebp-02429)、两歧双歧杆菌(nitebp-1252)、两歧双歧杆菌(nitebp-02431)、两歧双歧杆菌(nitebp-02648)、两歧双歧杆菌(nitebp-02432)、两歧双歧杆菌(nitebp-02433)、两歧双歧杆菌(fermbp-791)、两歧双歧杆菌(fermp-11788)、两歧双歧杆菌(fermp-11791)、两歧双歧杆菌(nitebp-31)、两歧双歧杆菌g9-1、两歧双歧杆菌bf-1、两歧双歧杆菌rosell-71、两歧双歧杆菌(ncdo1453)等。
两歧双歧杆菌atcc29521可以从美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection：atcc)(地址：12301parklawndrive,rockville,maryland20852,unitedstatesofamerica)获得。
两歧双歧杆菌(nitebp-02429)、两歧双歧杆菌(nitebp-02431)、两歧双歧杆菌(nitebp-02432)、两歧双歧杆菌(nitebp-02433)于2017年2月21日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(npmd))(邮政编码：292-0818、地址：千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室)进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。(保藏编号为nitebp-02429、nitebp-02431、nitebp-02432、nitebp-02433)。
两歧双歧杆菌(nitebp-1252)于2012年2月23日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(npmd))(邮政编码：292-0818、地址：千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室)进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。(保藏编号为nitebp-1252)。
两歧双歧杆菌(nitebp-02648)于2018年2月26日在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(npmd))(邮政编码：292-0818、地址：千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室)进行了保藏。(保藏编号为nitebp-02648)。
需要说明的是，以上述示例的菌株名所特定的菌株中不限定于以该菌株名保藏、注册在规定的机关的菌株其本身(以下为了方便说明，也称为“保藏菌株”)，还包括与其实质上同等的菌株(也称为“派生菌株”或“衍生株”)。即，例如，“两歧双歧杆菌atcc29521”不限定于以两歧双歧杆菌atcc29521的保藏编号保藏在上述保藏机关的菌株其本身，还包括与其实质上同等的菌株。
与上述保藏菌株实质上同等的菌株例如还可以是将该保藏菌株作为亲本菌株的派生菌株。作为派生菌株，可列举出由保藏菌株经育种而得到的菌株、由保藏菌株经自然生长的菌株。
实质上相同的菌株、派生菌株可列举出下述那样的株。
(1)利用rapd(randomlyamplifiedpolymorphicdna，随机扩增多态性dna)法、pfge(pulsed-fieldgelelectrophoresis，脉冲场凝胶电泳)法被判定为相同的菌株的菌株(记载于probioticsinfood/healthandnutritionalpropertiesandguidelinesforevaluation85page43)
(2)仅具有源自该保藏菌株的基因且不具有源自外来的基因，dna的同一性为95％以上的菌株
(3)由该菌株经育种而得到的菌株(包括基因工程改性、突变、自然突变)、具有相同的性质的菌株
这些属于两歧双歧杆菌的细菌在进行hmos的代谢时，通过用胞外酶降解hmos，从而在菌体外暂时蓄积乳糖。通过使该蓄积的乳糖被后述的人乳寡糖的同化能力低的益生菌所利用，从而能使人乳寡糖的同化能力低的益生菌增殖。
(2)人乳寡糖的同化能力低的益生菌
作为能在本发明中使用的人乳寡糖的同化能力低的益生菌，只要不损害本发明的效果就可以从公知或未知的人乳寡糖的同化能力低的益生菌中自由选择使用1种或2种以上的菌体。
本发明中，“人乳寡糖的同化能力低”是指：在与用包含葡萄糖、乳糖等作为益生菌的双歧杆菌、乳酸菌通常所同化的糖类作为碳源的培养基进行培养时相比，用包含人乳寡糖作为碳源的培养基进行培养时，对糖进行同化的能力、代谢能力、增殖能力低的菌。
例如，人乳寡糖的同化能力可以通过以被摄入细胞中的人乳寡糖的摄入速度为指标来进行评价，可以通过测定在培养开始时的人乳寡糖是否经时减少来计算。或者通过用仅包含人乳寡糖作为碳源的培养基来确认微生物的浊度、比生长速率，由此可以确认。
微生物的比生长速率定义为每单位时间的细胞的增加，但“人乳寡糖的同化能力低”的情况，与将葡萄糖、乳糖作为碳源的培养基相比，将人乳寡糖作为碳源的情况下，比生长速率降低至80％以下、优选降低至70％以下、更优选降低至50％以下、进一步优选降低至10％以下。具体而言，例如，本发明中，作为人乳寡糖的同化能力低的益生菌，可列举出双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)和/或乳酸菌。
本发明中，还可以使用人乳寡糖非同化性的益生菌菌体。人乳寡糖非同化性的益生菌菌体是指：完全无法利用人乳寡糖的菌体或代谢路径部分缺损、不存在将经代谢的糖摄入体内的转运子的菌体。
更具体而言，作为双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)，可以列举出长双歧杆菌长亚种(bifidobacteriumlongumsubspecieslongum)、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)、假小链双歧杆菌(bifidobacteriumpseudocatenulatum)、动物双歧杆菌乳酸亚种(bifidobacteriumanimalissubspecieslactis)、短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)、假长双歧杆菌(bifidobacterium.pseudolongum)等。
更具体而言，可以列举出长双歧杆菌长亚种atcc15707、长双歧杆菌长亚种bb536、青春双歧杆菌atcc15703、假小链双歧杆菌atcc27919、动物双歧杆菌乳酸亚种dsm10140、动物双歧杆菌乳酸亚种mcc-525、短双歧杆菌atcc15700、假长双歧杆菌atcc25526、长双歧杆菌(fermp-10657)、动物双歧杆菌乳酸亚种bb-12dsm1595、动物双歧杆菌乳酸亚种gcl2505、动物双歧杆菌乳酸亚种cncmi-2494、动物双歧杆菌乳酸亚种laftib94、动物双歧杆菌乳酸亚种、长双歧杆菌rosell-175、动物双歧杆菌动物亚种、动物双歧杆菌乳酸亚种hn019等。
另外，作为乳酸菌，可以列举出副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)、加氏乳杆菌(lactobacillusgasseri)等。
更具体而言，可以列举出副干酪乳杆菌atcc25302、植物乳杆菌atcc14917、嗜酸乳杆菌atcc4356、鼠李糖乳杆菌atcc7469、加氏乳杆菌atcc33323、加氏乳杆菌fermbp-10953、加氏乳杆菌fermbp-6999、加氏乳杆菌(nitebp-224r)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(fermp-17227)、鼠李糖乳杆菌atcc53103、罗伊氏乳杆菌dsm17938、凝结芽孢杆菌gbi-30、嗜酸乳杆菌、嗜酸乳杆菌laftil10、干酪乳杆菌lafti(注册商标)l26、干酪乳杆菌lafti(注册商标)l26、乳酸乳球菌乳酸亚种rosell-1058、副干酪乳杆菌ncc2461、约氏乳杆菌ncc533、鼠李糖乳杆菌rosell-11、嗜酸乳杆菌rosell-52、干酪乳杆菌代田株(lactobacilluscaseistrainshirota)等。
这些人乳寡糖的同化能力低的益生菌可以通过利用hmos被前述的属于两歧双歧杆菌的细菌代谢时所生成的乳糖而增殖。更优选：通过与属于两歧双歧杆菌的细菌一起进行培养，而使益生菌的比生长速率上升。例如，是指：与将葡萄糖、乳糖作为碳源的培养基相比，将人乳寡糖作为碳源的情况下，比生长速率上升至105％以上、优选上升至110％以上、更优选上升至120％以上。
需要说明的是，本发明中，“益生菌”是指对人体健康显示出有益作用的存活的细菌。
(3)人乳寡糖(hmos)
hmos是指：人乳中少量含有的乳糖除外的三糖以上的低聚糖的总称。哺乳动物的乳具有乳糖-n-四糖(lnt)、乳糖-n-新四糖(lnnt)、乳糖-n-六糖(lnh)、乳糖-n-新六糖(lnnh)等12个系列的核心骨架。通过在这些骨架中附加lewisa、b、x、α2-3/2-6n-乙酰神经氨酸，从而糖链中存在100种变异。
作为能在本发明中使用的hmos，若为属于两歧双歧杆菌的细菌能利用、且前述益生菌无法利用的低聚糖，只要不损害本发明的效果就可以任意选择使用1种或2种以上的公知或未知的hmos。具体而言，例如可列举出l-岩藻糖、乳糖-n-岩藻五糖i、乳糖-n-岩藻五糖ii、2’-岩藻糖基乳糖、3’-岩藻糖基乳糖、乳糖-n-岩藻五糖iii、3’-岩藻糖基乳糖-n-六糖、乳糖-n-二岩藻六糖i、乳糖-二岩藻四糖、乳糖-二岩藻六糖i、乳糖二岩藻六糖ii、乳糖-n-四糖、二岩藻糖基唾液乳糖-n-六糖、唾液乳糖-n-四糖、岩藻糖基唾液乳糖-n-六糖i、3’-岩藻糖基唾液酸乳糖-n-四糖(fuc1,2gal,fuc1,4galnac)、乳糖-n-新四糖、3’-唾液酸-3-岩藻糖基乳糖、二唾液酸单岩藻糖基乳糖-n-新六糖、单岩藻糖基单唾液酸乳糖-n-八糖、唾液酸乳糖-n-岩藻六糖ii、二唾液酸乳糖-n-岩藻五糖ii、单岩藻糖基二唾液酸乳糖-n-四糖、2’-唾液酸乳糖、2’-唾液酸乳糖胺、3’-唾液酸乳糖、3’-唾液酸乳糖胺、6’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖胺、唾液酸乳糖-n-新四糖、单唾液酸乳糖-n-六糖、二唾液酸乳糖-n-六糖i、单唾液酸乳糖-n-新六糖i、单唾液酸乳糖-n-新六糖ii、二唾液酸乳糖-n-新六糖、二唾液酸乳糖-n-四糖、二唾液酸乳糖-n-六糖ii、唾液酸乳糖-n-四糖a、二唾液酸乳糖-n-六糖i、唾液酸乳糖-n-四糖b、2’-岩藻糖基乳糖-n-六糖、3’-岩藻糖基乳糖-n-新六糖、2’-岩藻糖基-n-乙酰葡糖胺、乳糖-n-岩藻五糖v、乳糖-n-六糖、对乳糖-n-六糖、乳糖-n-新六糖、对乳糖-n-新六糖、单岩藻糖基乳糖-n-六糖ii、同分异构岩藻糖基化乳糖-n-六糖(1)、同分异构岩藻糖基化乳糖-n-六糖(3)、同分异构岩藻糖基化乳糖-n-六糖(2)、二岩藻糖基-对乳糖-n-新六糖、二岩藻糖基-对乳糖-n-六糖、2’3’-二岩藻糖基乳糖-n-六糖、乳糖-n-新八糖、对乳糖-n-八糖、异乳糖-n-八糖、乳糖-n-八糖、单岩藻糖基乳糖-新八糖、单岩藻糖基乳糖-n-八糖、二岩藻糖基乳糖-n-八糖i、二岩藻糖基乳糖-n-八糖ii、二岩藻糖基乳糖-n-新八糖ii、二岩藻糖基乳糖-n-新八糖i、乳糖-n-十糖、三岩藻糖基乳糖-n-新八糖、三岩藻糖基乳糖-n-八糖、三岩藻糖基-异乳糖-n-八糖、乳糖-n-二岩藻-六糖ii、唾液酸-乳糖-n-四糖a、唾液酸-乳糖-n-四糖b、唾液酸-乳糖-n-四糖c、唾液酸-岩藻基-乳糖-n-四糖i、唾液酸-岩藻基-乳糖-n-四糖ii、二唾液酸-乳糖-n-四糖、乳糖-n-新四糖等以及它们的组合。
其中，可以利用2’-岩藻糖基乳糖(以下也称为“2’-fl”)、乳糖-n-岩藻五糖i(以下也称为“lnfpi”)、乳糖-n-二岩藻六糖i(以下也称为“lndfpi”)和乳糖-n-新四糖(以下也称为“lnnt”)。
2.本发明的营养组合物的用途
通过给予本发明的营养组合物，从而可期待对有益菌发挥作用的益生菌的增殖促进效果。即通过使益生菌在肠道中增殖，从而可改善肠道微生物菌群。通过改善肠道微生物菌群，从而可改善或预防起因于肠道微生物菌群的疾病并能够进行治疗。
作为起因于肠道微生物菌群的疾病，可列举出炎症性肠炎、溃疡性肠炎、过敏性肠炎、大肠癌、糖尿病、动脉硬化等。
进而，通过给予本发明的营养组合物，从而可增进免疫功能。通过增进免疫功能，从而能预防或改善、治疗花粉症、哮喘、特应性皮炎等过敏症。
本发明的营养组合物能适宜地用于饮食品、药物、准药物、饲料等。
需要说明的是，本实施方式的用途可以是治疗目的使用，还可以是非治疗目的使用。
“非治疗目的”是指不包括医疗行为、即通过治疗对人体进行的处置行为的概念。例如可列举出健康增进、美容行为等。
“改善”是指疾病、症状或状态的好转；防止、延迟疾病、症状或状态的恶化；逆转、防止或延迟疾病或症状的加剧。
“预防”是指防止、延迟适用对象发生疾病或症状，或者降低适用对象的疾病或症状的危险性。
各种营养组合物中，益生菌优选以每给药量单位约103～约1012cfu/g给予但也可接受比其高的数值。益生菌组合物对成人(即，超过16岁的人)进行给药时，益生菌优选以至少106cfu/g、更优选以108cfu/g进行给予。益生菌组合物对小儿(即，低于16岁的人)进行给予时，益生菌优选以约106～约108cfu/g的范围进行给予。需要说明的是，cfu是指菌落形成单位(colonyformingunit)。
本发明的给予对象优选婴幼儿。
婴幼儿包括婴儿和幼儿，进一步详细而言，包括婴儿、幼儿和新生儿，进一步详细而言，包括婴儿、幼儿、新生儿、未成熟儿、早产儿和低出生体重儿。本发明中，婴幼儿的种类只要没有特别声明，则包括人。婴儿是指处于婴儿期的孩子，婴儿期是指以母乳等乳作为主要的营养源的时期，人的情况，通常小于1岁为婴儿期。幼儿通常是指处于学龄前为止的时期的孩子。新生儿是指处于新生儿期的孩子，新生儿期是指刚出生后不久的时期，人的情况，通常从出生后至4周以内为新生儿期。
进而本发明中，除了人乳寡糖之外，还可以组合使用益生元。益生元是指：通过选择性改变肠道的特定细菌的增殖和活性而对宿主产生有利的影响、改善宿主的健康的难消化性食品成分。
在与本细菌或其培养物一起摄取益生元时，只要能进一步发挥本发明的效果就没有特别限制，例如优选乳酮糖、棉子糖、低聚半乳糖、低聚果糖、大豆低聚糖、乳果低聚糖、低聚木糖、异麦芽寡糖、低聚咖啡豆甘露糖、葡萄糖酸、聚葡萄糖、菊糖等，其中，更优选乳酮糖、棉子糖、低聚半乳糖等，进一步优选乳酮糖、棉子糖和低聚半乳糖。
＜饮食品＞
本发明的营养组合物可以添加在公知的饮食品中来制备，还可以混合在饮食品的原料中来制造新的饮食品。
使用本发明的营养组合物的饮食品无论液体、糊剂状、固体、粉末等的形态，除了压片糖、流质食品等之外，可列举出例如：小麦粉制品、速食品、农产加工品、水产加工品、畜产加工品、乳/乳制品、油脂类、基础调味剂、复合调味剂/食品类、冷冻食品、点心类、饮料、除此以外的市售品等。
作为前述小麦粉制品，可列举出例如：面包、通心粉、意大利细面条、面类、蛋糕混合料、油炸粉、面包粉等。
作为前述速食品类，可列举出例如：方便面、杯面、蒸煮/烹调食品、烹调罐头、微波用食品、速溶汤/日式炖菜、速溶大酱汤/吸入物、罐装浓汤、冻/干食物、其它速食品等。
作为前述农产加工品，可列举出例如：农作物罐头、水果罐头、果酱(jam)/橘子酱(marmalade)类、咸菜、煮豆类、农产品干物类、谷物(谷物加工品)等。
作为前述水产加工品，例如可列举出：水产罐头、鱼肉火腿/香肠、水产糜类制品、水产鱼贝类、佃煮类等。
作为前述畜产加工品，例如可列举出：畜产罐头/糊剂类、畜肉火腿/香肠等。
作为前述乳/乳制品，例如可列举出：发酵乳、加工乳、乳饮料、酸奶类、乳酸菌饮料类、乳酪、冰淇淋类、配方奶粉类、奶油、其它乳制品等。
作为前述油脂类，例如可列举出：黄油、人造奶油类、植物油等。
作为前述基础调味剂，可列举出例如：酱油、大酱、沙司(sauce)类、西红柿加工调味剂、味醂类、食醋类等；作为前述复合调味剂/食品类，可列举出：烹调混合料、咖喱的原料类、鱼露类、沙拉(dressing)类、面汤类、香辛料类、其它复合调味剂等。
作为前述冷冻食品，可列举出例如：原材料冷冻食品、半烹调冷冻食品、经烹调的冷冻食品等。
作为前述点心类，可列举出例如：焦糖、冰糖、口香糖、巧克力、曲奇(cookie)、饼干(biscuits)、蛋糕(cake)、馅饼(pie)、小吃(snack)、薄脆饼(cracker)、日本点心、米点心、豆点心、西式甜点、其它点心等。
作为前述饮料，例如可列举出：碳酸饮料、天然果汁、果汁饮料、带有果汁的清凉饮料、果肉饮料、带有果粒的果实饮料、蔬菜系饮料、豆奶、豆奶饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、运动饮料、营养饮料、酒精饮料、其它嗜好饮料等。
作为上述以外的市售食品，例如可列举出：婴儿食品、米饭伴侣、茶泡饭海带等。
本发明的饮食品中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于饮食品中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量，相对于饮食品的最终组合物，可以设定为103～1012cfu/ml或103～1012cfu/g。
本发明的饮食品中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于饮食品中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量，相对于饮食品的最终组合物，可以设定为103～1012cfu/ml或103～1012cfu/g。
本发明的饮食品中的hmos的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于饮食品中的hmos的含量，相对于饮食品的最终组合物，可以设定为0.3％～5.0％。
〔功能性标示饮食品〕
另外，本发明中定义的饮食品等也可以以标示了特定的用途(特别是保健用途)、功能的饮食品的形式来提供/销售。
“标示”行为中包括用于向需求者通知上述用途的全部行为，只要是能唤起/类推前述用途的表现，无论标示的目的、标示的内容、标示的对象物/介质等如何全部均属于本发明的“标示”行为。
另外，“标示”优选的是通过需求者能直接识别上述用途的表现来进行。具体而言，可列举出：为了转让、交付、用于转让或交付而展示在饮食品的商品或商品的包装上记载了前述用途的物品，在进口行为、涉及商品的广告、价格表或说明书类上将上述用途记载并展示、或进行发布，或在将这些作为内容的信息中记载上述用途并利用电磁(网络等)方法来提供的行为等。
另一方面，作为标示内容，优选为根据行政等许可的标示(例如基于行政规定的各种制度而获得许可，在基于这样的许可的状态下进行的标示等)。另外，优选将这样的标示内容附于包装、容器、目录、小册子、pop(购买点广告，pointofpurchaseadvertising)等销售现场的宣传材料、其它资料等上。
另外，“标示”还可列举出作为健康食品、功能性食品、患者用食品、经肠营养食品、特殊用途食品、保健功能食品、特定保健用食品、功能性标示食品、营养功能食品、药物用准药物等的标示。其中特别是被消费者厅许可的标示、例如可列举出通过特定保健用食品制度、功能性标示食品制度、与其相似的制度许可的标示等。更具体而言，可以列举出作为特定保健用食品的标示、作为带有条件的特定保健用食品的标示、作为功能性标示食品的标示、对身体的构造、功能产生影响内容的标示、疾病风险降低标示等。其中作为典型的例子，可列举出健康增进法实施规则(平成15年4月30日日本厚生劳动省第86号令)中所规定的作为特定保健用食品的标示(特别是保健用途的标示)、作为食品标示法(平成25年法律第70号)中所规定的作为功能性标示食品的标示和与其类似的标示。
〔配方奶粉〕
本发明的营养组合物可以适宜地用于饮食品中、特别是配方奶粉。作为配方奶粉，可列举出乳婴用配方奶粉、较大婴儿用配方奶粉、低出生体重儿用配方奶粉、小儿用配方奶粉、成人用配方奶粉、高龄者用配方奶粉、过敏症用配方奶粉、乳糖不耐症用配方奶粉、先天代谢异常用配方奶粉等。特别优选用于乳婴用配方奶粉、较大婴儿用配方奶粉、低出生体重儿用配方奶粉、小儿用配方奶粉。婴幼儿用配方奶粉是指以0～12个月的婴儿为对象的婴幼儿用配方奶粉、以6～9个月及以后的婴儿和幼儿(3岁为止)为对象的较大婴儿配方奶粉、以出生时的体重低于2500g的新生儿(低出生体重儿)为对象的低出生体重儿用配方奶粉、用于治疗具有牛乳过敏症、乳糖不耐症等疾病状态的孩子的各种治疗用奶粉等。进而，可以将该组合物用于保健功能食品、患者用食品。保健功能食品制度是鉴于内外动向、与一直以来的特定保健用食品制度的整合性、不仅以通常的食品还将制成片剂、胶囊等形状的食品作为对象而设计得到的，包括特定保健用食品(个别许可型)和营养功能食品(规格基准型)这2种类型。
通过给予本发明的营养组合物，从而在给药对象的肠道中使双歧杆菌属细菌和/或乳酸菌增殖。通过使这些益生菌在肠道中增殖，而使免疫力提高、进而改善肠道菌群。特别是婴幼儿中，通过给予本发明的营养组合物，从而使肠道的双歧杆菌有效地增加，调节肠道环境。进而通过与双歧杆菌一起摄入有害菌、条件致病菌而能够获得免疫力，所构建的肠道微生物菌群等肠道环境即便至成人也一直被保持、继承。
配方奶粉的制造方法只要不损害本发明的效果就可以自由地组合使用1种或2种以上的公知的制造方法。具体而言，例如可以通过在原料乳中混合本发明的营养组合物和各种添加物，经过均质化、杀菌、浓缩、干燥、造粒、筛选等工序来制造。
本发明的配方奶粉具体而言例如可以利用以下的方法来制造。
即，本发明提供母乳成分增强用奶粉的制造方法，其中，通过将属于两歧双歧杆菌的细菌和包含1种以上人乳寡糖的同化能力低的的益生菌的菌体粉末、与人乳寡糖混合而得到母乳成分增强用的奶粉。
具体而言，提供包括下述工序(a)～(c)的母乳成分增强用奶粉的制造方法：
(a)用含有乳成分的培养基培养本发明的属于两歧双歧杆菌的细菌、人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌而得到培养物的工序；
(b)将前述培养物供于喷雾干燥和/或冷冻干燥而得到各自的菌体粉末的工序；
(c)将前述菌体粉末与人乳寡糖混合而得到配方奶粉的工序。
另外，本发明提供包括下述工序(a)的配方奶粉的制造方法：
(a)将人乳寡糖、本发明的属于两歧双歧杆菌的细菌、人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌和乳成分混合而得到奶粉的工序。
另外，本发明的食品组合物具体而言还可以是例如婴幼儿用营养强化剂。婴幼儿用营养强化剂例如可以利用以下的方法来制造。
即，本发明提供包括下述工序(a)和(b)的母乳成分增强用营养强化剂的制造方法：
(a)将人乳寡糖、属于两歧双歧杆菌的细菌、人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌和赋形剂混合而得到混合物的工序；
(b)将前述混合物压片的工序。
对于上述任意的制造方法，可以适宜组合使用除了上述工序中所提及的成分以外的成分。
本发明的营养组合物的添加方法只要不损害本发明的效果就没有特别限定，例如，将本发明的营养组合物在如上所述那样混合时以液态的方式进行添加，此外还可以在粉末化后添加并进行粉体混合来制造。
本发明的配方奶粉中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于配方奶粉中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量，相对于配方奶粉的最终组合物，可以设定为103～1012cfu/g。
本发明的配方奶粉中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别对于配方奶粉中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量，相对于配方奶粉的最终组合物，可以设定为103～1012cfu/g。
本发明的配方奶粉中的hmos的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于配方奶粉中的hmos的含量，相对于配方奶粉的最终组合物，可以设定为0.3％～5.0％。
＜药物、准药物＞
本发明的营养组合物可以添加在公知的药物或准药物(以下也称为“药物等”)来制备，还可以混合在药物等原料中来制造新的药物等。
将本发明的营养组合物配混于药物等中时，该药物等可以根据经口给药、非经口给药等给药方法而适宜制成期望的剂型。对于其剂型没有特别限定，经口给药的情况，例如可以制成散剂、颗粒剂、片剂、锭剂、胶囊剂等固体制剂；溶液剂、糖浆剂、悬浮剂、乳剂等液体制剂等。非经口给药的情况，例如可以制成栓剂、喷雾剂、吸入剂、软膏剂、贴剂、注射剂等。本发明中，优选制成经口给药的剂型。
需要说明的是，制剂化可以根据剂型适宜利用公知的方法来实施。
在进行制剂化时，可以适宜配混制剂载体等进行制剂化。另外，除了本发明的肽之外，可以使用通常制剂化中所使用的赋形剂、ph调节剂、着色剂、矫味剂等成分。进而，还可以根据适宜目的组合使用公知的或未来会发现的、具有疾病、症状的预防、改善和/或治疗的效果的成分。
作为前述制剂载体，可以根据剂型使用各种有机或无机的载体。作为固体制剂的情况的载体，例如可列举出赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味矫臭剂等。
作为前述赋形剂，例如可列举出乳糖、白糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇等糖衍生物；玉米淀粉、马铃薯淀粉、α-淀粉、糊精、羧甲基淀粉等淀粉衍生物；结晶纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙等纤维素衍生物；阿拉伯胶；葡聚糖；普鲁兰多糖；轻质无水硅酸、合成硅酸铝、偏硅酸铝酸镁等硅酸盐衍生物；磷酸钙等磷酸盐衍生物；碳酸钙等碳酸盐衍生物；硫酸钙等硫酸盐衍生物等。
作为前述结合剂，除了上述赋形剂之外可列举出例如：明胶；聚乙烯基吡咯烷酮；聚乙二醇等。
作为前述崩解剂，除了上述赋形剂之外可列举出例如：交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮等经化学修饰的淀粉或纤维素衍生物等。
作为前述润滑剂，可列举出例如：滑石；硬脂酸；硬脂酸钙、硬脂酸镁等硬脂酸金属盐；胶体二氧化硅；硅酸铝镁盐(veegum)、鲸蜡等蜡类；硼酸；二元醇；富马酸、己二酸等羧酸类；苯甲酸钠等羧酸钠盐；硫酸钠等硫酸盐类；亮氨酸；月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁等月桂基硫酸盐；硅酸酐、硅酸水合物等硅酸类；淀粉衍生物等。
作为前述稳定剂，可列举出例如：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等对羟基苯甲酸酯类；氯丁醇、苄醇、苯基乙醇等醇类；苯扎氯铵；乙酸酐；山梨酸等。
作为前述矫味矫臭剂，例如可列举出：甜味剂、酸味剂、香料等。
需要说明的是，作为用于经口给药用的液体制剂的情况下的载体，可列举出：水等溶剂、矫味矫臭剂等。
本发明的药物等中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于药物等中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量，相对于药物等最终组合物，可以设定为103～1012cfu/ml或g。
本发明的药物等中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于药物等中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量，相对于药物等最终组合物，可以设定为103～1012cfu/ml或g。
本发明的药物等中的hmos的含量只要不损害本发明的效果就可以自由地设定。本发明中，特别是对于药物等中的hmos的含量，相对于药物等最终组合物，可以设定为0.3％～5.0％。
＜饲料＞
本发明的营养组合物可以在公知的饲料中添加来制备，或还可以在饲料的原料中混合来制造新的饲料。
将本发明的营养组合物配混于饲料时，作为饲料的原料，例如可列举出：玉米、小麦、大麦、黑麦等谷类；麦麸、麦糠、米糠、脱脂米糠等糠类；玉米蛋白粗粉、玉米浆粗粉等制造糟粕类；脱脂奶粉、乳清、鱼粉、骨粉等的动物性饲料类；啤酒酵母等酵母类；磷酸钙、碳酸钙等矿物饲料；油脂类；氨基酸类；糖类等。另外，作为前述饲料的形态，例如可列举出：宠物动物用饲料(宠物食品等)、家畜饲料、养鱼饲料等。
本发明的饲料中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量只要不损害本发明的效果就可以根据体重等进行自由地设定。本发明中，特别是对于饲料中的属于两歧双歧杆菌的细菌的含量，相对于饲料的最终组合物，可以设定为103～1012cfu/ml或g。
本发明的饲料中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量只要不损害本发明的效果就可以根据体重等进行自由地设定。本发明中，特别是对于饲料中的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的含量，相对于饲料的最终组合物，可以设定为103～1012cfu/ml或g。
本发明的饲料中的hmos的含量只要不损害本发明的效果就可以根据体重等进行自由地设定。本发明中，特别是对于饲料中的hmos的含量，相对于饲料的最终组合物，可以设定为0.3％～5.0％。
需要说明的是，本发明还可以采用以下的构成。
[1]一种营养组合物，其含有：
属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖。
[2]一种饮食品组合物，其含有：
属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖。
[3]一种配方奶粉，其含有：
属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖。
[4]一种药物或准药物组合物，其含有：
属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖。
[5]一种饲料组合物，其含有：
属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖。
[6]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在营养组合物中的应用。
[7]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在饮食品组合物中的应用。
[8]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在配方奶粉中的应用。
[9]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在药物或准药物组合物中的应用。
[10]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在饲料组合物中的应用。
[11]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在制造营养组合物中的应用。
[12]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在制造饮食品组合物中的应用。
[13]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在制造配方奶粉中的应用。
[14]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在制造药物或准药物组合物中的应用。
[15]属于两歧双歧杆菌的细菌、
人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌、和人乳寡糖在制造饲料组合物中的应用。
[16][1]～[15]中，前述人乳寡糖为2’-岩藻糖基乳糖和/或乳糖-n-新四糖。
[17][1]～[16]中，前述益生菌为双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)和/或乳酸菌。
[18][17]中，前述双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)为选自长双歧杆菌长亚种、青春双歧杆菌、假小链双歧杆菌、动物双歧杆菌乳酸亚种、短双歧杆菌、假长双歧杆菌中的1种以上的细菌。
[19][17]中，前述乳酸菌为选自副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、加氏乳杆菌中的1种以上的细菌。
[20][1]～[19]中，前述属于两歧双歧杆菌的细菌为选自两歧双歧杆菌atcc29521、两歧双歧杆菌(nitebp-02429)、两歧双歧杆菌(nitebp-1252)、两歧双歧杆菌(nitebp-02431)、两歧双歧杆菌(nitebp-02648)、两歧双歧杆菌(nitebp-02432)、两歧双歧杆菌(nitebp-02433)中的1种以上的细菌。
[21]一种配方奶粉的制造方法，其包括下述工序(a)～(c)：
(a)用含有乳成分的培养基培养属于两歧双歧杆菌的细菌、人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌而得到培养物的工序；
(b)将前述培养物供于喷雾干燥和/或冷冻干燥而得到各自的菌体粉末的工序；
(c)将前述菌体粉末与人乳寡糖混合而得到配方奶粉的工序。
[22]一种配方奶粉的制造方法，其包括下述工序(a)：
(a)将人乳寡糖、属于两歧双歧杆菌的细菌、人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌和乳成分混合而得到奶粉的工序。
[23]一种母乳成分增强用营养强化剂的制造方法，其包括下述工序(a)和(b)：
(a)将人乳寡糖、属于两歧双歧杆菌的细菌、人乳寡糖的同化能力低的1种以上的益生菌和赋形剂混合而得到混合物的工序；
(b)将前述混合物压片的工序。
[24]根据[21]或[22]所述的方法，其中，前述乳成分为乳蛋白。
[25]根据[24]所述的方法，其中，前述乳蛋白为选自由乳清、乳清水解物、酪蛋白组成的组中的至少1种成分。
[26]一种营养强化剂的制造方法，其包括下述工序(a)和(b)：
(a)将双歧杆菌(bifidobacterium)属细菌和赋形剂混合而得到混合物的工序；
(b)将前述混合物压片的工序。
[27][21]～[26]中，前述人乳寡糖为2’-岩藻糖基乳糖和/或乳糖-n-新四糖。
[28][21]～[27]中，前述益生菌为双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)和/或乳酸菌。
[29][28]中，前述双歧杆菌属细菌(属于两歧双歧杆菌的细菌除外)为选自长双歧杆菌长亚种、青春双歧杆菌、假小链双歧杆菌、动物双歧杆菌乳酸亚种、短双歧杆菌、假长双歧杆菌中的1种以上的细菌。
[30][28]中，前述乳酸菌为选自副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、加氏乳杆菌中的1种以上的细菌。
[31][21]～[30]中，前述属于两歧双歧杆菌的细菌为选自两歧双歧杆菌atcc29521、两歧双歧杆菌(nitebp-2429)、两歧双歧杆菌(nitebp-1252)、两歧双歧杆菌(nitebp-2431)、两歧双歧杆菌(nitebp-02648)、两歧双歧杆菌(nitebp-02432)、两歧双歧杆菌(nitebp-02433)中的1种以上的细菌。
实施例
以下基于实施例对本发明进行进一步详细地说明。需要说明的是，以下说明的实施例是示出本发明的代表性实施例的一个例子，并非用于狭窄地解释本发明的范围。
＜实验方法＞
(1)糖溶液的制备
作为葡萄糖(nacalaitesque,inc.制)、hmos的一个例子，将2’-fl(可以从(≥95％)funakoshico.,ltd.、sigmacorporation获得)、lnnt(elicityl公司制)用离子交换水制备10％溶液，使用millex-gv(slgv033rs)进行无菌过滤。
(2)双歧杆菌属细菌和乳酸菌的菌液制备
在下述表1(属于两歧双歧杆菌的细菌)和下述表2的菌株中添加乳酸杆菌mrs肉汤(bd)(双歧杆菌属细菌中0.05％l-半胱氨酸盐酸盐)，在灭菌处理后接种3％菌液，在37℃下厌氧下培养16小时(预培养)。
第二天，在表3所示的改良bl寒天培养基(光岡知足著《双歧杆菌的研究》(「ビフィズス菌の研究」)p.306，(财)双歧杆菌中心，1994年发行)中加入1％葡萄糖进行制备，在灭菌处理后接种3％预培养菌液，在37℃下厌氧下进行12小时前培养(前培养)。
将前培养结束后的菌液集菌，用灭菌生理盐水清洗1次后，用表3所示的改良bl寒天培养基(光岡知足著《双歧杆菌的研究》(「ビフィズス菌の研究」)p.306,(财)双歧杆菌中心，1994年发行)定容至等量，制备悬浮的菌液。
(3)双歧杆菌属细菌和乳酸菌的增殖菌数解析用培养基的制备
将表3所示的改良bl寒天培养基(光岡知足著《双歧杆菌的研究》(「ビフィズス菌の研究」)p.306,(财)双歧杆菌中心，1994年发行)以60％的容量进行制备，进行高压釜灭菌处理后，无菌地添加40％(1)中制备的各糖溶液，制备糖浓度为4％的培养基。
(4)下述表1和下述表2的菌株的单菌培养
向96孔的孔板中分注作为所培养的容量的一半容量的前述(3)中制备的培养基，向剩余的一半容量中以菌液为6％的方式分注前述(2)中制备的菌液，使最终糖浓度为2％。将分注有菌液的孔板在37℃下厌氧地培养8小时。
(5)属于两歧双歧杆菌的细菌与人乳寡糖的同化能力低的益生菌的混合培养
向96孔的孔板中无菌地分注所培养的作为容量的一半容量的前述(3)中制备的培养基，向作为剩余的4分之1容量的前述(3)中制备的培养基中以菌液为12％的方式分别分注前述(2)中制备的表1的属于两歧双歧杆菌的细菌和表2的人乳寡糖的同化能力低的益生菌的菌株的菌液，使最终糖浓度为2％。将分注有菌液的孔板在37℃下厌氧地培养8小时。
(6)双歧杆菌属细菌和乳酸菌的增殖菌数的解析方法
由前述(4)和前述(5)的孔板的各孔，在培养前(0小时)和培养后(8小时)用microplatereadersh-9000(coronaelectric公司制)测定od650。在浊度测定后回收菌体，进行了dna提取。dna提取后，使用表4所示的菌种特异性引物，利用定量pcr法对双歧杆菌/乳酸菌的增殖菌数进行解析(参照渡边幸一著《肠道菌群的结构解析》(「腸内フローラの構造解析」)―使用定量性pcr的人粪便中的菌群解析―肠道细菌学杂志、20：35-42，2006)。
[表1]
[表1]属于两歧双歧杆菌的细菌
[表2]
[表2]除两歧双歧杆菌的细菌以外的实施例中使用的菌株
[表3]
[表3]改良bl琼脂培养基
[表4]
＜测定/结果＞
(1)属于两歧双歧杆菌的细菌的hmos的利用性
对于表1的属于两歧双歧杆菌的细菌，将作为hmos的2’-fl或lnnt作为糖源，以单菌对各菌株进行培养，测定od650。将结果示于下述表5。表5示出将2’-fl或lnnt作为糖源将表1的属于两歧双歧杆菌的7种菌株的培养8小时后的od650增加值。
[表5]
[表5]od650增加值
如表5所示，表1的属于两歧双歧杆菌的细菌全部具有作为hmos的2’-fl或lnnt同化性。
(2)人乳寡糖的同化能力低的益生菌的hmos的利用性
对于表2的菌株，将作为hmos的2’-fl或lnnt作为糖源，以单菌对各菌株进行培养，测定od650。下述表6示出2’-fl的结果，下述表7示出lnnt的结果。
[表6]
[表7]
[表7]od650增加值
pc：阳性对照
如表6和7所示，表2的菌株当中，除了被认为具有利用性的婴儿双歧杆菌以外的菌株全部对于作为hmos的2’-fl或lnnt不具有同化性或同化性低。
(3)以hmos作为糖源的、属于两歧双歧杆菌的细菌与人乳寡糖的同化能力低的益生菌的混合培养
〔两歧双歧杆菌(nitebp-02429)+人乳寡糖的同化能力低的益生菌〕
将前述中观察到2’-fl或lnnt的利用性的两歧双歧杆菌(nitebp-02429)与无法利用2’-fl或lnnt的表2的菌株组合培养。将2’-fl或lnnt作为糖源对两歧双歧杆菌(nitebp-02429)和无法利用2’-fl或lnnt的表2的菌株进行混合培养，使用表2的菌株的表4所示的各菌株特异性寡核苷酸引物并利用定量pcr法测定了培养8小时后的各菌株的菌数的增殖比例(增殖比例＝8小时混合培养后的菌数/单菌培养后的菌数)。将结果示于表8。
[表8]
如表8所示，可知：前述表6或7中，即使作为对人乳寡糖不具有同化性的菌株，通过与两歧双歧杆菌(nitebp-02429)进行混合培养也得以增殖。
〔属于两歧双歧杆菌的细菌+长双歧杆菌长亚种bb536〕
将2’-fl或lnnt作为糖源，将表1的两歧双歧杆菌7株和无法利用2’-fl或lnnt的长双歧杆菌长亚种bb536进行混合培养，使用表4所示的长双歧杆菌长亚种特异性寡核苷酸引物并利用定量pcr法测定培养8小时后的长双歧杆菌长亚种bb536的菌数和单菌培养8小时后的菌数，对增殖比例(增殖比例＝8小时后的混合培养菌数/8小时单菌培养菌数)进行了比较。将结果示于表9。
[表9]
[表9]增殖比例
如表9所示，可知：对2’-fl不具有同化性的长双歧杆菌长亚种bb536通过与属于两歧双歧杆菌的细菌进行混合培养而得到增殖。另外，可知：对lnnt不具有同化性的长双歧杆菌长亚种bb536通过与属于两歧双歧杆菌的细菌进行混合培养而得到增殖。
〔属于两歧双歧杆菌的细菌+动物双歧杆菌乳酸亚种mcc-525〕
将2’-fl或lnnt作为糖源，将表1的两歧双歧杆菌7株和无法利用2’-fl或lnnt的动物双歧杆菌乳酸亚种mcc-525进行混合培养，使用表4的动物双歧杆菌乳酸亚种特异性寡核苷酸引物并利用定量pcr法测定培养8小时后的动物双歧杆菌乳酸亚种mcc-525的菌数和单菌培养8小时后的菌数，对增殖比例(增殖比例＝8小时后的混合培养菌数/8小时单菌培养菌数)进行比较。将结果示于表10。
[表10]
[表10]增殖比例
将2’-fl或lnnt作为糖源与两歧双歧杆菌7株进行组合培养时，全部的用与两歧双歧杆菌的组合跟以单菌培养动物双歧杆菌乳酸亚种mcc-525时相比，可观察到促进动物双歧杆菌乳酸亚种mcc-525的菌数增殖。其中，将lnnt作为糖源时，通过与两歧双歧杆菌(nitebp-1252)的组合而使菌数增殖促进效果显著提高。
〔属于两歧双歧杆菌的细菌+加氏乳杆菌atcc33323〕
将2’-fl作为糖源，将表1的两歧双歧杆菌7株与无法利用2’-fl的加氏乳杆菌atcc33323t进行混合培养，使用表4的加氏乳杆菌特异性寡核苷酸引物并利用定量pcr法测定8小时后的加氏乳杆菌atcc33323t的菌数和单菌培养8小时后的菌数，对增殖比例(增殖比例＝8小时后的混合培养菌数/8小时单菌培养菌数)进行比较。将结果示于表11。
[表11]
[表11]增殖比例
将2’-fl作为糖源对两歧双歧杆菌7株进行组合培养时，全部组合与以单菌培养加氏乳杆菌atcc33323t时的菌数相比，观察到促进加氏乳杆菌atcc33323t的菌数增殖。两歧双歧杆菌的7个菌株当中，其它6株比两歧双歧杆菌atcc29521t的增殖效果高。
〔属于两歧双歧杆菌的细菌+副干酪乳杆菌atcc25302t〕
将2’-fl或lnnt作为糖源，将表1的两歧双歧杆菌7株与无法利用2’-fl或lnnt的副干酪乳杆菌atcc25302t进行混合培养，利用定量pcr法测定8小时后的副干酪乳杆菌atcc25302t的菌数和单菌培养后的菌数的增殖比例(增殖比例＝8小时后的混合培养菌数/8小时单菌培养菌数)。将结果示于表12。
[表12]
[表12]增殖比例
将2’-fl或lnnt作为糖源与两歧双歧杆菌7株进行组合培养时，用全部的组合与以单菌培养副干酪乳杆菌atcc25302t时相比，观察到促进副干酪乳杆菌atcc25302t的菌数增殖。
[制造例]
下述示出营养组合物、药物组合物和食品组合物的制造例。
＜制造例1＞
将两歧双歧杆菌添加至mrs液体培养基3ml中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将包含两歧双歧杆菌的菌末与益生菌/人乳寡糖(可以从funakoshico.,ltd.获得)/乳清蛋白浓缩物(wheyproteinconcentrate；wpc)与益生元(乳酮糖、棉子糖和低聚半乳糖)均匀地混合而得到组合物。将该组合物20g溶解于200g的水中，得到营养组合物。
＜制造例2＞
将两歧双歧杆菌添加至mrs液体培养基3ml中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。将菌末与益生菌/人乳寡糖(可以从funakoshico.,ltd.获得)/乳蛋白浓缩物的干燥粉末(mpc480、fonterra公司制、蛋白质含量80质量％、酪蛋白：乳清蛋白＝约8：2)与益生元(乳酮糖、棉子糖和低聚半乳糖)均匀地混合，将该组合物20g溶解于200g的水中，得到营养组合物。
＜制造例3＞
将两歧双歧杆菌添加至mrs液体培养基3ml中，在37℃下进行16小时厌氧培养后，将培养液浓缩，进行冷冻干燥，得到细菌的冷冻干燥粉末(菌末)。接着，将包含两歧双歧杆菌的菌末与益生菌/人乳寡糖(可以从funakoshico.,ltd.获得)/益生元(乳酮糖、棉子糖和低聚半乳糖)、结晶纤维素投入至搅拌造粒机进行混合。然后，加入精制水并进行造粒、造粒物干燥，得到含有细菌的提取成分和益生元、益生菌、且含有赋形剂而成的造粒物(药物组合物)。
＜制造例4＞
下述示出添加了两歧双歧杆菌的发酵乳的制造法。
首先，将乳原料和根据需要的水、其它成分等混合，优选进行均质化处理，并进行加热灭菌处理。均质化处理和加热灭菌处理可以利用常规方法进行。在经加热灭菌的灭菌乳制剂中添加(接种)乳酸菌起子，保持在规定的发酵温度使其发酵，得到发酵物。通过发酵而形成凝乳。
作为乳酸菌起子，例如可以使用保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus)、乳酸乳球菌(lactococcuslactis)、嗜热链球菌(streptococcusthermophilus)等在制造酸奶时通常使用的乳酸菌。若ph达到目标值，通过搅拌将所形成的凝乳破碎，冷却至10℃以下而得到发酵物。通过冷却至10℃以下，从而能够降低乳酸菌的活性而抑制酸的生成。
接着，对发酵工序中得到的发酵物进行加热处理而得到加热后发酵物(加热处理后的发酵物)。通过对发酵物进行适度地加热，从而能够抑制由加热后发酵物中的乳酸菌所致的酸的生成。由此，能够抑制在之后的制造工序中和/或含有双歧杆菌的浓缩发酵乳在保存时的ph的降低，其结果，能够提高双歧杆菌的存活率。
接着，在加热处理工序中得到的加热后发酵物中添加两歧双歧杆菌和人乳寡糖(可以从funakoshico.,ltd.获得)。短双歧杆菌mcc1274(fermbp-11175)的添加量相对于加热后发酵物优选1×107～1×1011cfu/ml，更优选1×108～1×1010cfu/ml。两歧双歧杆菌为死菌时，cfu/ml可以替换为个细胞/ml。
在加热后发酵物中添加两歧双歧杆菌和人乳寡糖后，进行浓缩。浓缩工序可以适宜使用公知的浓缩方法来进行。离心分离法中，被浓缩物(添加了双歧杆菌和益生元的加热后发酵物)中的乳清被去除而可以得到固体成分浓度得到提高的两歧双歧杆菌的浓缩发酵乳。通过摄取得到的发酵乳而能够改善肠道菌群。
＜制造例5＞
下述示出添加了两歧双歧杆菌的配方奶粉的制造法。
将脱盐牛乳乳清蛋白质粉末(futureinc.制)10kg、牛乳酪蛋白粉末(fonterra公司制)6kg、乳糖(futureinc.制)48kg、矿物质混合物(富田制药株式会社制)920g、和维生素混合物(田边制药株式会社制)32g、人乳寡糖、乳酮糖(森永乳业株式会社制)500g、棉子糖(日本甜菜制糖株式会社制)500g和低聚半乳糖液糖(yakultpharmaceuticalindustryco.,ltd.制)900g溶解于温水300kg中，进而在90℃下进行10分钟加热溶解，添加调制脂肪(太阳油脂株式会社制)28kg并进行均质化。然后，进行灭菌、浓缩的工序并进行喷雾干燥，制备配方奶粉约95kg。在其中加入在淀粉中冲淡的两歧双歧杆菌的菌体粉末100g和乳酸菌/双歧杆菌的菌体粉末100g而得到两歧双歧杆菌/人乳寡糖(可以从funakoshico.,ltd.获得)配混制备配方奶粉约95kg。将得到的配方奶粉溶解于水中，在制成作为标准配方乳浓度的总固体成分浓度14％(w/v)的乳制剂时，乳制剂中的两歧双歧杆菌的菌数为2.7×109cfu/100ml。通过给予如上所述得到的配方奶粉而能够在肠道中促进益生菌增殖。
通过给予上述的制造例1-5中制造的营养组合物，从而能使益生菌能够利用hmos，通过在肠道中增殖而使肠道菌群得到改善。
序列表
<110>森永乳业株式会社（morinagamilkindustryco.,ltd.）
<120>营养组合物以及使用了该营养组合物的饮食品组合物和配方奶粉
<130>fpct729
<150>jp2018-065647
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<223>加氏乳杆菌正向引物
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<223>加氏乳杆菌反向引物
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pct/ro/134表