一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片及其制备方法与流程

本发明属于复合生物
技术领域：
，具体涉及一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片及其制备方法。
背景技术：
：中医认为，肾主藏精，肾中精气为生命之源，是人体各种功能活动的物质基础，人体生长、发育、衰老以及免疫力、抗病力的强弱与肾中精气盛衰密切相关。肾在人体是一个储存能量的器官，无论哪个脏器生产的能量都会留存在肾中一部分，所以常说“肾藏精”。一旦身体其他地方出现能量不足的情况，肾就会调出自身储备的能量来支援，所以肾脏常常处于空虚不足的状态。《素问.阴阳应象大论》曰：“肾生骨髓，髓生肝”。肝藏血，肾藏精，精血可以互相资生，因此，肝和肾相互滋养，肝肾相生。《张氏医通》曰:“气不耗,归精于肾而为精，精不泄，归精于肝而为清血。”但是现代人生活压力大，工作时间过长导致作息、进食不规律，饮食给予人体的营养也不全面，容易造成肝肾脏器细胞受损，造成肝肾疲劳。目前市场上的产品和专利中的能够作为一种食源性的补充人体脏器缺少的分子营养，于肠道缓释经血液转运后直接有效作用于肝肾等脏器细胞的缓释咀嚼片。技术实现要素：本发明针对上述缺陷，提供一种能够在肠道内缓释，释放有活性的海参肽、牡蛎肽、酪蛋白磷酸肽辅以在胃内降解为小肽的浓缩乳清蛋白，一同进入肠道被肠道的小肽转运载体吸收，直接靶向为受损或缺乏营养的肝细胞、肾细胞进行供给营养或进行细胞修复的一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片及其制备方法。本发明提供如下技术方案：一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括以下成分：海参肽13mg～100mg、牡蛎肽13mg～100mg、酪蛋白磷酸肽5mg～70mg、浓缩乳清蛋白10mg～150mg、果蔬粉10mg～100mg，乳糖1mg～4mg、低聚木糖0.6mg～1mg、抗性糊精1mg～5mg、低聚果糖1mg～10mg、壳寡糖1mg～10mg、维生素c1mg～30mg、赤藓糖醇0.5mg～10mg、山梨糖醇0.5mg～15mg、柠檬酸0.05mg～1mg、dl-苹果酸0.05mg～1mg、硬脂酸镁0.5mg～1mg。进一步地，每1g咀嚼片中还包括靶向缓释生物相容微囊20mg～30mg，所述靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为180nm～250nm、厚度为15mm～30mm的聚碳酸酯薄膜15份～20份；α-乳清蛋白12份～18份；氨基酸12份～18份；κ-卡拉胶8份～12份；卵磷脂8份～12份；聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒25份～35份；n,n-二甲基甲酰胺0.05份～0.1份。进一步地，所述聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：聚(2-乙基-2-恶唑啉)2.5份～5份；琥珀酸酐0.2份～0.5份；3,3'-二硫代丙酸0.5份～1份；n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐1份～1.5份；4-(二甲氨基)吡啶2份～2.5份；葡聚糖3份～6份；所述聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：m1：将所述重量组分的聚(2-乙基-2-恶唑啉)和所述重量组分的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成7mmol/l～15mmol/浓度的聚(2-乙基-2-恶唑啉)有机溶液与25mmol/l～45mmol/l浓度琥珀酸酐有机溶液的混合溶液，向所述混合溶液中加入所述重量组分的4-(二甲氨基)吡啶，于75rpm～150rpm转速、25℃～28℃温度下搅拌反应12h～24h；m2：将所述m1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应10min～15min，于所述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物，将所述末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥18h～36h，得到所述末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末；m3：将所述重量组分的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于10mhz～20mhz条件下微波溶解3h～4h，然后加入所述m2步骤得到的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末、二分之一所述重量组分的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃～32℃下搅拌30min～60min后，加入所述重量组分的3,3'-二硫代丙酸、剩余二分之一所述重量组分的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃～32℃下搅拌30min～60min后，将所得到的混合物于3200da～3800da分子孔隙大小的透析膜下透析1h～2h，于-100℃下冻干，得到聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。进一步地，所述靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：a1：将所述重量组分的氨基酸和所述重量组分的α-乳清蛋白溶于蒸馏水中，于80rpm～100rpm下充分搅拌水合20min～30min，将得到的混合溶液于0.30μm～0.40μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清液，得到所述氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液；a2：将所述重量组分的κ-卡拉胶和所述重量组分的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为3mmol/l～7mmol/l的κ-卡拉胶溶液、3mmol//l～10mmol//l的卵磷脂溶液；a3：将所述重量组分的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.13m～0.15m的磷酸盐缓冲液中，将所述重量组分的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以9ml/h～11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，然后将所述a1步骤得到的氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液以9ml/h～11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min～5min；将所述a2步骤得到的κ-卡拉胶溶液以9ml/h～11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min～5min后，将所述a2步骤得到的卵磷脂溶液以9ml/h～11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，在所述卵磷脂溶液浸渍过程中5不断滴加所述重量组分的n,n-二甲基甲酰胺，浸渍结束后于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min～5min后，将产物于真空中干燥10min～15min，得到所述靶向缓释生物相容微囊。进一步地，所述果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉8％～15％、番茄粉5％～10％、黑莓粉10％～20％、南瓜粉3％～8％、胡萝卜粉5％～15％、蘑菇粉10％～20％，余量为甜橙粉。进一步地，所述海参肽的制备方法，包括以下步骤：1)按重量组分计，将300份～500份海参与30份～40份碱性蛋白酶、50份～60份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于40℃～55℃下保存3h～4h，保持溶液ph在7.5～8.5；2)所述步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温10min～15min使酶失活；3)将所述步骤2)得到的物质于0℃～4℃、7000rpm～8000rpm下离心25min～30min，获得可溶性蛋白水解物；4)将所述步骤3)得到的可溶性蛋白与20份～25份的碱性蛋白酶于35℃～45℃下进一步酶解30min～60min，采用amicon超离心过滤器于0℃～4℃温度、10000×g～12000×g转速下离心15min～20min，取上层糜状混合液为小分子海参肽；5)将所述步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。进一步地，所述步骤1)中的所述海参与所述磷酸盐缓冲溶液的重量体积比为(1:1)～(2:1)。进一步地，所述步骤4)得到的小分子海参肽的分子量为10kda～15kda。本发明还提供上述养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：s1：将所述重量组分的海参肽、所述重量组分的牡蛎肽、所述重量组分的酪蛋白磷酸肽溶于体积比为(1:2.5)～(3.5:5.5)的乙醇与浓度为0.15m的nacl溶液中，以80rpm～120rpm转速、15℃～20℃温度下搅拌30min～40min；s2：将所述重量组分的靶向缓释生物相容微囊加入至所述s1步骤得到的混合物中，以100rpm～200rpm转速、26℃～28℃温度下搅拌15min～30min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物；s3：将所述步骤s2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.03mpa～0.06mpa、-4℃～-2℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；s4：将所述重量组分的浓缩乳清蛋白与所述s3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为2:3～4:5的甘油与蒸馏水中，以200rpm～250rpm转速搅拌10min～15min后，加入所述重量组分的果蔬粉继续搅拌10min～15min，过5目～10目筛后，得到湿颗粒；s5：将所述重量组分的维生素c、所述重量组分的柠檬酸、所述重量组分的dl-苹果酸、所述重量组分的乳糖、所述重量组分的壳寡糖、所述重量组分的低聚果糖、所述重量组分的低聚木糖、所述重量组分的赤藓糖醇和所述重量组分的山梨糖醇溶于100ml～150ml蒸馏水中，以1.5ml/min～2.0ml/min的喷雾速率，雾化压力1.5mpa～2.0mpa均匀旋转喷雾于所述s4步骤得到的湿颗粒，混合均匀后，以5cm2/l～10cm2/l速率吹送氮气10min；s6：将所述重量组分的抗性糊精和所述重量组分的硬脂酸镁与所述s5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g所述养肝护肾抗疲劳分子肽咀嚼片。本发明的有益效果为：1、咀嚼片在制作过程中，具有肽活性的小分子肽—酪蛋白磷酸肽、海参肽、牡蛎肽通过与靶向缓释生物相容微囊直接与聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖中的葡聚糖的骨架结合，也可以被包裹在葡聚糖疏水核心的胶束中，然后附着于聚碳酸酯薄膜表面后，外层再附着α-乳清蛋白/氨基酸包裹层，最外层再附着κ-卡拉胶-卵磷脂双层膜，能够通过κ-卡拉胶-卵磷脂对具有活性的小肽进行有效油脂包裹，且具有亲水亲油性，在进入胃内后，首先κ-卡拉胶-卵磷脂双层膜和浓缩乳清蛋白一并被胃蛋白酶等酶消化，κ-卡拉胶-卵磷脂之间结合的共价键被解开，剩下带有负电荷的κ-卡拉胶和α-乳清蛋白/氨基酸包裹层的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的聚碳酸酯薄膜与初步分解的浓缩乳清蛋白粉进入肠道，进入肠道后，κ-卡拉胶分子表面的3-连接-β-d-半乳吡喃糖和4-连接-3,6-脱水-α-d-半乳吡喃糖单元从胃内的强酸性环境进入肠道偏中性的ph环境内，使带有负电荷的κ-卡拉胶和α-乳清蛋白/氨基酸包裹层的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的聚碳酸酯薄膜周围的ph小于其本身的pka，进而使其网络结构间的离子静电斥力下降，导致其整体分解，释放α-乳清蛋白/氨基酸包裹层的小肽。2、α-乳清蛋白由123个氨基酸组成，分子量约为14kda，包含一个高度结构的α-螺旋结构域和β-片状结构域，具有4个二硫键、nh2-末端谷氨酸和cooh-末端亮氨酸，可以保证其内部包裹的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒上附着的活性小肽的活性和稳定性；α-乳清蛋白/氨基酸一部分能够在肠道内整体分解，与浓缩乳清蛋白的胃消化物被肠道吸收；3、由于α-乳清蛋白，等电点大约在ph4.6-4.9之间，这使得它在这个ph范围以上带负电，在中性ph下，氨基酸失去氢分子，从而产生带负电荷的侧链，另一部分α-乳清蛋白/氨基酸能够携带具有聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒包裹的酪蛋白磷酸肽、海参肽、牡蛎肽能够保证不会被在胃内消化，进入肠道内后才被释放出活性肽，因此和浓缩乳清蛋白的胃内消化物一起被肠道上的小肽转运载体吸收后，直接被靶向运送至受损和缺乏营养的肝细胞和肾细胞处，对细胞进行靶向修复和供给营养，起到了良好快速的营养供给和细胞修复的效果。4、本申请提供的靶向缓释生物相容微囊中采用4-(二甲氨基)吡啶和n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐作为偶联剂，通过聚(2-乙基-2-恶唑啉)上的羧基与葡聚糖上的羟基形成静电引力，将氨基化和羧基化后的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝到具有羟基的葡聚糖上，形成聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖壳结构的纳米颗粒，通过加入3,3'-二硫代丙酸后可以调整纳米颗粒的不同核填充量，进而保证不同药物加载量于其中，葡聚糖是一种亲水性物质，各种活性肽的混合物既可以直接与葡聚糖的骨架结合，也可以被包裹在葡聚糖疏水核心的胶束中。5、能够通过提供果均匀等比例添加的果蔬粉，增强胃肠道的蠕动性和咀嚼片的果味，提高了口感的同时不会因为咀嚼片的食用导致便秘，并且各种果蔬粉中含有各种纤维素、维生素和矿物质，可以有效补充人体因疾病所缺少的各种微量元素或某种营养物质的缺乏。6、本发明对取材天然、成份多样、浓缩轻巧、摄入方便，具有满足宏量营养素、常量元素、微量元素的本发明咀嚼片，以健康为中心思想的，满足青少年各类营养的需求，辅以具有生理功能的调节物质，以及“肽”对细胞的调控作用，打破现有产品的短板，提供一种使用方便、安全可靠、既能快速及时的将营养输送全身各个组织各个细胞，又能调控细胞生长、复制、繁衍、代谢的生理功能。附图说明在下文中将基于实施例并参考附图来对本发明进行更详细的描述。其中：图1为本效果例的对照组实验后小鼠肝脏外观的形态特征图；图2为本效果例敌草快处理组实验后小鼠肝脏外观的形态特征图；图3为本效果例服用实施例1咀嚼片水分散剂的小鼠肝脏外观的形态特征图；图4为本发明效果例2中采用实施例2制备的咀嚼片水分散剂进行的h2o2损伤了的肝脏细胞系wrl68的细胞存活率柱状图；图5为本发明效果例2中采用实施例2制备的咀嚼片水分散剂干预后的h2o2损伤了的肝脏细胞系wrl68的细胞100倍放大电镜图；图6为效果例2中采用实施例2制备的咀嚼片水分散剂干预后的h2o2损伤了的肝脏细胞系wrl68的细胞200倍放大电镜图；图7为本发明效果例3中的流式细胞仪检测ros探针荧光强度分布图；图8为本发明效果例3中的ros探针荧光强度柱形图。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本申请的低聚果糖来源于菊苣提取，其余原料均为市售。实施例1本实施例提供的一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括以下成分：海参肽13mg、牡蛎肽100mg、酪蛋白磷酸肽5mg、浓缩乳清蛋白10mg、果蔬粉100mg，乳糖1mg、低聚木糖1mg、抗性糊精1mg、低聚果糖1mg、壳寡糖10mg、维生素c1mg、赤藓糖醇0.5mg、山梨糖醇15mg、柠檬酸0.05mg、dl-苹果酸1mg、硬脂酸镁1mg；靶向缓释生物相容微囊20mg。其中靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为180nm、厚度为30mm的聚碳酸酯薄膜15份；α-乳清蛋白12份；氨基酸18份；κ-卡拉胶8份；卵磷脂12份；聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒25份；n,n-二甲基甲酰胺0.05份。其中，聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：聚(2-乙基-2-恶唑啉)2.5份；琥珀酸酐0.2份；3,3'-二硫代丙酸0.5份；n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐1份；4-(二甲氨基)吡啶2份；葡聚糖3份。聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：m1：将2.5份的聚(2-乙基-2-恶唑啉)和0.2份的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成7mmol/l/浓度的聚(2-乙基-2-恶唑啉)有机溶液与25mmol/l浓度琥珀酸酐有机溶液的混合溶液，向所述混合溶液中加入2份的4-(二甲氨基)吡啶，于75rpm转速、25℃温度下搅拌反应12h；m2：将m1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应10min，于所述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物，将末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥18h，得到末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末；m3：将3份的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于10mhz条件下微波溶解3h，然后加入m2步骤得到的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末、0.5份的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃下搅拌60min后，加入0.5份的3,3'-二硫代丙酸、0.5份的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于28℃下搅拌60min后，将所得到的混合物于3200da分子孔隙大小的透析膜下透析1h，于-100℃下冻干，得到聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：a1：将18份的氨基酸和12份的α-乳清蛋白溶于蒸馏水中，于80rpm下充分搅拌水合30min，将得到的混合溶液于0.40μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清液，得到氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液；a2：将8份的κ-卡拉胶和12份的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为3mmol/l的κ-卡拉胶溶液、10mmol//l的卵磷脂溶液；a3：将15份的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.13m的磷酸盐缓冲液中，将25份的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以9ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，然后将a1步骤得到的氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液以9ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min；将所述a2步骤得到的κ-卡拉胶溶液以9ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min后，将所述a2步骤得到的卵磷脂溶液以9ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，在所述卵磷脂溶液浸渍过程中5不断滴加0.05份的n,n-二甲基甲酰胺，浸渍结束后于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min后，将产物于真空中干燥10min，得到所述靶向缓释生物相容微囊。果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉15％、番茄粉5％、黑莓粉10％、南瓜粉8％、胡萝卜粉5％、蘑菇粉20％，余量为甜橙粉。海参肽的制备方法，包括以下步骤：1)按重量组分计，将300份海参与30份碱性蛋白酶、50份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于40℃下保存4h，保持溶液ph在7.5，磷酸盐缓冲液的添加量按照海参与其的重量体积比为1:1的比例添加；2)步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温10min使酶失活；3)将步骤2)得到的物质于0℃、7000rpm下离心30min，获得可溶性蛋白水解物；4)将步骤3)得到的可溶性蛋白与20份的碱性蛋白酶于35℃下进一步酶解60min，采用amicon超离心过滤器于4℃温度、10000×g转速下离心20min，取上层糜状混合液为分子量为10kda的小分子海参肽；5)将步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。本实施例还提供上述养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：s1：包括以下步骤：s1：将13mg的海参肽、100mg的牡蛎肽、5mg的酪蛋白磷酸肽溶于体积比为1:2.5的乙醇与浓度为0.15m的nacl溶液中，以80rpm转速、15℃温度下搅拌30min；s2：将20mg的靶向缓释生物相容微囊加入至所述s1步骤得到的混合物中，以100rpm转速、26℃温度下搅拌15min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物；s3：将所述步骤s2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.03mpa、-4℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；s4：将10mg的浓缩乳清蛋白与所述s3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为2:3的甘油与蒸馏水中，以200rpm转速搅拌10min后，加入100mg的果蔬粉继续搅拌10min，过5目筛后，得到湿颗粒；s5：将1mg的维生素c、0.05mg的柠檬酸、1mg的dl-苹果酸、1mg的乳糖、10mg的壳寡糖、1mg的低聚果糖、1mg的低聚木糖、0.5mg的赤藓糖醇和15mg的山梨糖醇溶于100ml蒸馏水中，以1.5ml/min的喷雾速率，雾化压力1.5mpa均匀旋转喷雾于所述s4步骤得到的湿颗粒，混合均匀后，以5cm2/l速率吹送氮气10min；s6：将1mg的抗性糊精和1mg的硬脂酸镁与s5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到1g养肝护肾抗疲劳分子肽咀嚼片。实施例2本实施例提供的一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括以下成分：海参肽100mg、牡蛎肽13mg、酪蛋白磷酸肽70mg、浓缩乳清蛋白150mg、果蔬粉10mg，乳糖4mg、低聚木糖0.6mg、抗性糊精5mg、低聚果糖10mg、壳寡糖1mg、维生素c30mg、赤藓糖醇10mg、山梨糖醇0.5mg、柠檬酸1mg、dl-苹果酸0.05mg、硬脂酸镁1mg；靶向缓释生物相容微囊30mg；靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为250nm、厚度为15mm的聚碳酸酯薄膜20份；α-乳清蛋白18份；氨基酸12份；κ-卡拉胶12份；卵磷脂8份；聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒35份；n,n-二甲基甲酰胺0.1份。聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：聚(2-乙基-2-恶唑啉)5份；琥珀酸酐0.5份；3,3'-二硫代丙酸1份；n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐1.5份；4-(二甲氨基)吡啶2.5份；葡聚糖6份；聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：m1：将5份的聚(2-乙基-2-恶唑啉)和0.5份的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成15mmol/浓度的聚(2-乙基-2-恶唑啉)有机溶液与45mmol/l浓度琥珀酸酐有机溶液的混合溶液，向所述混合溶液中加入所述重量组分的4-(二甲氨基)吡啶，于150rpm转速、28℃温度下搅拌反应24h；m2：将m1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应15min，于所述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物，将末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥36h，得到所述末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末；m3：将6份的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于20mhz条件下微波溶解4h，然后加入m2步骤得到的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末、0.75份的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于32℃下搅拌30min后，加入1份的3,3'-二硫代丙酸、0.75份的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于32℃下搅拌30min后，将所得到的混合物于3800da分子孔隙大小的透析膜下透析2h，于-100℃下冻干，得到聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：a1：将12份的氨基酸和所述重量组分的α-乳清蛋白溶于蒸馏水中，于100rpm下充分搅拌水合20min，将得到的混合溶液于0.30μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清液，得到所述氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液；a2：将12份的κ-卡拉胶和8份的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为7mmol/l的κ-卡拉胶溶液、3mmol//l的卵磷脂溶液；a3：将20份的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.15m的磷酸盐缓冲液中，将35份的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，然后将所述a1步骤得到的氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液以11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置5min；将所述a2步骤得到的κ-卡拉胶溶液以11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置5min后，将所述a2步骤得到的卵磷脂溶液以11ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，在所述卵磷脂溶液浸渍过程中5不断滴加0.1份的n,n-二甲基甲酰胺，浸渍结束后于5cm2/l吹速的氮气气流下静置5min后，将产物于真空中干燥15min，得到所述靶向缓释生物相容微囊。果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉8％、番茄粉10％、黑莓粉10％、南瓜粉8％、胡萝卜粉5％、蘑菇粉20％，余量为甜橙粉。海参肽的制备方法，包括以下步骤：1)按重量组分计，将500份海参与40份碱性蛋白酶、60份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于55℃下保存3h，保持溶液ph在8.5，磷酸盐缓冲液的添加量按照海参与其的重量体积比为1.5:1的比例添加；2)步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温15min使酶失活；3)将步骤2)得到的物质于4℃、8000rpm下离心25min，获得可溶性蛋白水解物；4)将步骤3)得到的可溶性蛋白与25份的碱性蛋白酶于45℃下进一步酶解30min，采用amicon超离心过滤器于0℃温度、12000×g转速下离心15min，取上层糜状混合液为分子量为12kda小分子海参肽；5)将所述步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。本实施例还提供上述养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：s1：将100mg的海参肽、13mg的牡蛎肽、70mg的酪蛋白磷酸肽溶于体积比为3.5:5.5的乙醇与浓度为0.15m的nacl溶液中，以120rpm转速、20℃温度下搅拌40min；s2：将30mg的靶向缓释生物相容微囊加入至所述s1步骤得到的混合物中，以200rpm转速、28℃温度下搅拌30min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物；s3：将所述步骤s2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.06mpa、-2℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；s4：将150mg的浓缩乳清蛋白与所述s3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为4:5的甘油与蒸馏水中，以250rpm转速搅拌15min后，加入10mg的果蔬粉继续搅拌15min，过10目筛后，得到湿颗粒；s5：将30mg的维生素c、1mg的柠檬酸、0.05mg的dl-苹果酸、4mg的乳糖、1mg的壳寡糖、10mg的低聚果糖、0.6mg的低聚木糖、10mg的赤藓糖醇和0.5mg的山梨糖醇溶于150ml蒸馏水中，以2.0ml/min的喷雾速率，雾化压力2.0mpa均匀旋转喷雾于所述s4步骤得到的湿颗粒，混合均匀后，以10cm2/l速率吹送氮气10min；s6：将5mg的抗性糊精和1mg的硬脂酸镁与所述s5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到所述养肝护肾抗疲劳分子肽咀嚼片。实施例3本实施例提供的一种养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片，每1g咀嚼片中包括以下成分：海参肽55mg、牡蛎肽56mg、酪蛋白磷酸肽37.5mg、浓缩乳清蛋白80mg、果蔬粉55mg，乳糖2.5mg、低聚木糖0.8mg、抗性糊精3mg、低聚果糖5.5mg、壳寡糖5.5mg、维生素c15.5mg、赤藓糖醇5.25mg、山梨糖醇7.75mg、柠檬酸5mg、dl-苹果酸5.1mg、硬脂酸镁0.75mg；靶向缓释生物相容微囊25mg；靶向缓释生物相容微囊，按重量组分计，包括以下组分：孔径为200nm、厚度为23mm的聚碳酸酯薄膜18份；α-乳清蛋白15份；氨基酸15份；κ-卡拉胶10份；卵磷脂10份；聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒20份；n,n-二甲基甲酰胺0.5份。聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒，按重量组分计，包括以下成分：聚(2-乙基-2-恶唑啉)3.75份；琥珀酸酐0.35份；3,3'-二硫代丙酸0.75份；n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐1.25份；4-(二甲氨基)吡啶2.25份；葡聚糖4.5份；聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：m1：将3.75的聚(2-乙基-2-恶唑啉)和0.35份的琥珀酸酐溶于二氯甲烷中，形成11mmol/浓度的聚(2-乙基-2-恶唑啉)有机溶液与35mmol/l浓度琥珀酸酐有机溶液的混合溶液，向所述混合溶液中加入2.25的4-(二甲氨基)吡啶，于100rpm转速、27℃温度下搅拌反应18h；m2：将m1步骤得到的混合物与乙醚以重量体积比为1:8混合反应12min，于所述乙醚中沉淀，得到末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物，将末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物于真空条件下干燥24h，得到末端氨基化和羧基化的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末；m3：将4.5份的葡聚糖溶于二甲亚砜中，于15mhz条件下微波溶解3.5h，然后加入m2步骤得到的聚(2-乙基-2-恶唑啉)粗产物粉末、0.625份的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于30℃下搅拌45min后，加入0.75份的3,3'-二硫代丙酸、0.625份的n-(3-(二甲氨基)丙基)-n-乙基碳化二亚胺盐酸盐，于30℃下搅拌45min后，将所得到的混合物于3600da分子孔隙大小的透析膜下透析1.5h，于-100℃下冻干，得到聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒。靶向缓释生物相容微囊的制备方法，包括以下步骤：a1：将15份的氨基酸和15的α-乳清蛋白溶于蒸馏水中，于90rpm下充分搅拌水合25min，将得到的混合溶液于0.35μm聚偏氟乙烯过滤器下过滤，取过滤后的上清液，得到氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液；a2：将10的κ-卡拉胶和10份的卵磷脂溶于蒸馏水中，形成浓度为5mmol/l的κ-卡拉胶溶液、6.5mmol//l的卵磷脂溶液；a3：将18的聚碳酸酯薄膜溶于含有氯化钠浓度为0.14m的磷酸盐缓冲液中，将20份的聚(2-乙基-2-恶唑啉)接枝葡聚糖纳米颗粒以10ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，然后将a1步骤得到的氨基酸-α-乳清蛋白混合上清液以10ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置3min～5min；将所述a2步骤得到的κ-卡拉胶溶液以10ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，于5cm2/l吹速的氮气气流下静置4min后，将所述a2步骤得到的卵磷脂溶液以10ml/h的速率浸渍透过所述聚碳酸酯薄膜，在卵磷脂溶液浸渍过程中5不断滴加0.5份的n,n-二甲基甲酰胺，浸渍结束后于5cm2/l吹速的氮气气流下静置45min后，将产物于真空中干燥13min，得到所述靶向缓释生物相容微囊。果蔬粉中各种果蔬粉末按质量分数计，包括以下成分：猕猴桃粉11.5％、番茄粉7.5％、黑莓粉15％、南瓜粉5.5％、胡萝卜粉10％、蘑菇粉15％，余量为甜橙粉。海参肽的制备方法，包括以下步骤：1)按重量组分计，将400份海参与35份碱性蛋白酶、55份枯草杆菌蛋白酶加入至磷酸盐缓冲溶液中，于47.5℃下保存3.5h，保持溶液ph在8，磷酸盐缓冲液的添加量按照海参与其的重量体积比为2:1的比例添加；2)步骤1)的水解完成后，通过将温度升高至95℃保温13min使酶失活；3)将步骤2)得到的物质于2℃、7500rpm下离心28min，获得可溶性蛋白水解物；4)将步骤3)得到的可溶性蛋白与23份的碱性蛋白酶于40℃下进一步酶解45min，采用amicon超离心过滤器于2℃温度、11000×g转速下离心18min，取上层糜状混合液为分子量为15kda小分子海参肽；5)将步骤4)得到的小分子海参肽冷冻真空干燥，得到海参肽粉末。本实施例还提供上述养肝护肾抗疲劳的海参牡蛎肽咀嚼片的制备方法，包括以下步骤：s1：将55mg的海参肽、56mg的牡蛎肽、37.5的酪蛋白磷酸肽溶于体积比为3:5的乙醇与浓度为0.15m的nacl溶液中，以100rpm转速、17℃温度下搅拌35min；s2：将25mg的靶向缓释生物相容微囊加入至所述s1步骤得到的混合物中，以150rpm转速、27℃温度下搅拌17min，搅拌过程中不断滴加乙醇溶液，得到靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物；s3：将所述步骤s2得到的靶向缓释生物相容微囊封装的肽组合物于真空度为0.045mpa、-3℃下真空冷冻干燥，得到缓释肽组合物冻干粉；s4：将80mg的浓缩乳清蛋白与所述s3步骤得到的缓释肽组合物冻干粉溶于体积比为7:10的甘油与蒸馏水中，以225rpm转速搅拌12min后，加入55mg的果蔬粉继续搅拌13min，过7目筛后，得到湿颗粒；s5：将15.5mg的维生素c、5mg的柠檬酸、5.1mg的dl-苹果酸、2.5mg的乳糖、5.5mg的壳寡糖、5.5mg的低聚果糖、0.8mg的的低聚木糖、5.25mg的赤藓糖醇和7.75mg的山梨糖醇溶于125ml蒸馏水中，以1.8ml/min的喷雾速率，雾化压力1.75mpa均匀旋转喷雾于所述s4步骤得到的湿颗粒，混合均匀后，以7.5cm2/l速率吹送氮气10min；s6：将3mg的抗性糊精和0.75mg的硬脂酸镁与所述s5步骤得到的颗粒搅拌均匀后，压片，得到所述养肝护肾抗疲劳分子肽咀嚼片。效果例1采用市售敌草快饲喂小鼠，进行细胞氧化应激处理组，将本发明实施例1得到的1g咀嚼片于100ml蒸馏水中分散，饲喂作为实验组，将27只spf级雄性小鼠随机分成3组，分别是对照组、敌草快处理组、复合多肽组，每组三笼，每笼三只小鼠。每次按鼠笼顺序先称鼠重再灌胃，对照组和敌草快处理组灌胃20ml/kg*d的生理盐水，实验组灌胃实施例1的咀嚼片水分散剂。连续饲喂小鼠三周后，在第22天，除对照组外，其它2组用敌草快攻毒(腹腔注射)六小时，然后采集小鼠肝脏样品。观察并拍照记录服用实施例1咀嚼片水分散剂，未服用实施例1咀嚼片水分散剂的小鼠肝脏外观的形态特征，结果如图1-3所示，图1为本效果例的对照组实验后小鼠肝脏外观的形态特征，图2为本效果例敌草快处理组实验后小鼠肝脏外观的形态特征，图3为本效果例服用实施例1咀嚼片水分散剂的小鼠肝脏外观的形态特征。由图可以看出，对照组：肝脏颜色较浅，质地较硬，边缘锐利；敌草快处理组：肝脏颜色变深，呈紫红色，质地变软，不易夹起，边缘变钝；实施例1咀嚼片水分散剂组：肝脏颜色与敌草快处理组相比较浅，质地较软，边缘较钝。证明本发明提供的咀嚼片可以有效对肝细胞靶向供给营养和修复。效果例2采用过氧化氢处理wrl68细胞，并检测其细胞活性，效果实验步骤如下：将wrl68细胞以6000/孔的数量接种于96孔板中；第二天待细胞贴壁后，吸弃完全培养基，除对照组外，每孔加入h2o2终浓度为500um的完全培养基，对照组用pbs代替h2o2，37℃二氧化碳培养箱中孵育6h；孵育完成后，吸弃含h2o2的完全培养基，按不同分组添加相应的培养基(每组检测6个复孔)：孵育完成后，每孔加入20ulmtt溶液(5mg/ml，即0.5％mtt)，继续培养4h；终止培养，小心吸去孔内培养液；每孔加入150uldmso，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪od490nm处测量各孔的吸光值。实验分组如下：对照组：mem+10％fbs；双氧水损伤组：mem+10％fbs；损伤+咀嚼片水分散剂-低：mem+10％fbs+100ng/ml本发明实施例2咀嚼片水分散剂；损伤+咀嚼片水分散剂-中：mem+10％fbs+1ug/ml本发明实施例2咀嚼片水分散剂；损伤+咀嚼片水分散剂-高：mem+10％fbs+10ug/ml本发明实施例2咀嚼片水分散剂；4.加入对应的培养基后，37℃二氧化碳培养箱中培养24h。实验结果见表1-表2，图4-图6，图4为表2中的数据的柱状图体现图。表1酶联免疫检测隔空吸光值wrl68od1od2od3od4od5od6空白组0.04230.04210.04130.04450.04580.045对照组2.14522.2892.18742.19142.3922.3009双氧水损伤组1.07151.04061.03280.96061.07081.0727损伤+咀嚼片分散剂-低1.3461.48141.40051.40181.41861.3464损伤+咀嚼片分散剂-中1.62411.58951.61861.57541.65641.6105损伤+咀嚼片分散剂-高1.91991.89731.831.86051.94811.9253表2各组细胞存活率wrl68细胞活率(％)sd值1对照组100.001.0002双氧水损伤组49.150.4583损伤+咀嚼片分散剂-低65.350.5384损伤+咀嚼片分散剂-中71.070.2935损伤+咀嚼片分散剂-高83.960.468从结果来看，低、中、高浓度的本发明实施例2的咀嚼片分散剂能够修复h2o2造成的wrl68的损伤，并且修复效果随药物浓度增加，在高浓度(10ug/ml)的情况下有较好的修复效果。效果例3采用本发明实施例3中得到的咀嚼片进行流式细胞仪检测活性多肽对h2o2损伤了的肝脏细胞系wrl68的细胞内活性氧(ros)的干预情况效果实验。实验步骤如下：1.将wrl68细胞以150000/孔的数量接种于6孔板中。2.第二天待细胞贴壁后，吸弃完全培养基，除对照组外，每孔加入h2o2终浓度为500um的完全培养基，对照组用pbs代替h2o2，37℃二氧化碳培养箱中孵育6h。3.孵育完成后，吸弃含h2o2的完全培养基，按不同分组添加相应的培养基：4.加入对应的培养基后，37℃二氧化碳培养箱中培养24h。5.孵育完成后，用0.25％胰蛋白酶将细胞从孔板中消化下来。6.离心沉淀细胞后，加入300ul的含10umdcfh-da的无血清培养基重悬沉淀的细胞，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。7.孵育完成后，用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。8.清洗完成后上流式细胞仪检测ros探针荧光强度。实验分组如下：对照组：mem+10％fbs；双氧水损伤组：mem+10％fbs；损伤+咀嚼片水分散剂-低：mem+10％fbs+100ng/ml实施例3咀嚼片水分散剂；损伤+咀嚼片水分散剂-中：mem+10％fbs+1ug/ml实施例3咀嚼片水分散剂；损伤+咀嚼片水分散剂-高：mem+10％fbs+10ug/ml实施例3咀嚼片水分散剂。实验结果见表3，图7-8.表3各组的ros探针的荧光强度的几何平均数wrl68geometricmean:fitc1对照组4522双氧水损伤组6573损伤+咀嚼片水分散剂-低5924损伤+咀嚼片水分散剂-中5355损伤+咀嚼片水分散剂-高489ros探针的荧光强度和细胞内的ros量成正比，而ros的量和细胞损伤的情况成正比。从结果可以看出本发明提供的咀嚼片分散剂可以有效的降低h2o2损伤造成的细胞内ros的增高，并且降低效果随药物浓度增加。虽然已经参考优选实施例对本发明进行了描述，但在不脱离本发明的范围的情况下，可以对其进行各种改进并且可以用等效物替换其中的成分。上述的对实施例的描述是为便于该
技术领域：
的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。本发明并不局限于文中公开的特定实施例，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。当前第1页12