红螯螯虾用抗应激中草药提取物饲料添加剂的制作方法

1.本发明属于中草药饲料添加剂技术领域，尤其涉及一种红螯螯虾用抗应激中草药提取物饲料添加剂。


背景技术：

2.红螯螯虾是一种对环境适应性较强的淡水虾类，它具有生产速度快，肉质肥美，回味无穷，营养丰富等优点，在世界各地的集贸市场上深受人们的喜爱。目前，国内红螯螯虾养殖业尚处于萌芽期，在养殖过程中仍存在许多问题亟待更好的解决。
3.红螯螯虾在养殖过程中很容易因为各种诱因出现应激反应，如水环境温差、盐度变化、池塘老化、水体溶氧不足、气候变化等。轻度应激会对虾类正常生长发育产生影响，严重的可导致其机体免疫力下降，处理不及就会对虾养殖业造成巨大损失。因此，如何减少或者消除应激因素是红螯螯虾养殖业必须重视的问题。除了向水体中泼洒抗应激药物的方式之外，还可以向日常饲料中添加一定量的饲料添加剂以提高红螯螯虾机体免疫力或抗应激能力。而中草药饲料添加剂副作用较小并且可以有效避免病原产生的耐药性，是一种可持续发展的饲料添加剂。


技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题是提供一种的红螯螯虾用抗应激中草药提取物饲料添加剂，该产品具有纯天然、易制备、低残留、低成本、低耐药的特点，能有效提高红螯螯虾的免疫力和抗应激能力。
5.为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
6.红螯螯虾用抗应激中草药提取物饲料添加剂，由淫羊藿经酶解辅助水提制得。
7.上述中草药提取物饲料添加剂的制备方法，将淫羊藿干粉采用酶解辅助水提法提取，经旋转蒸发浓缩后醇沉，即得。
8.上述中草药提取物饲料添加剂的制备方法，按以下步骤进行操作：称取淫羊藿，加入蒸馏水，再加入木瓜蛋白酶，充分混匀，水浴；过滤，滤液加热浓缩，加入95％食品级乙醇，醇沉过夜，取上清液，减压浓缩；加入蒸馏水置于托盘，冷冻过夜，将其冷冻干燥，即得淫羊藿干提取物，备用。
9.淫羊藿粉碎成80目干粉。
10.淫羊藿按照质量体积比1：10～1：20加入蒸馏水，按照淫羊藿质量的5％～7％加入木瓜蛋白酶。
11.水浴、过滤各两次；先50～60℃水浴2h，再100℃水浴2h～3h，4层100目纱网过滤，滤液备用，滤渣再次加入相同体积水溶液，按照淫羊藿初始质量的5％～7％加入木瓜蛋白酶，80℃～100℃水浴2h，4层100目纱网过滤，合并两次上滤液。
12.加热浓缩至1g/ml原药材，密度1.17～1.20g/ml；减压浓缩至1g/ml原药材，密度1.11～1.13g/ml。
13.95％食品级乙醇按浓缩液体积比1：5加入。
14.加入蒸馏水置于托盘使得液面高度小于1cm。
15.上述中草药提取物饲料添加剂的使用方法，将饲料添加剂按照1
‑
10g淫羊藿干提取物/kg饲料拌入基础饲料投喂。
16.针对红螯螯虾饲养缺乏安全有效药物的问题，发明人采用纯中草药淫羊藿经酶解辅助水提制得淫羊藿干提取物作为饲料添加剂。试验证明，该饲料添加剂可有效提高红螯螯虾的总抗应激能力，从而增强红螯螯虾机体免疫力，减少其死亡率。发明人进一步考察了不同添加量的淫羊藿提取物对红螯螯虾生长指标的影响以及对其血液生理、生化指标和肝胰腺中非特异性免疫指标的影响，探讨其量效关系，最终确定了临床最佳给药剂量。总之，本发明原料来源天然，具有易制备、低残留、低成本、低耐药的特点，能够有效增强红螯螯虾免疫力和抗应激能力等优点。
具体实施方式
17.一、红螯螯虾用抗应激中草药提取物饲料添加制备
18.实施例1
19.采用酶解辅助水提法提取，经旋转蒸发浓缩后醇沉，即得，具体如下：称取淫羊藿适量，粉成80目干粉，按照1：10加入蒸馏水，再按照淫羊藿质量的5％加入木瓜蛋白酶，充分混匀，50℃水浴2h，再100℃水浴2h；4层100目纱网过滤，滤液备用，滤渣再次加入相同体积水溶液，按照淫羊藿初始质量的5％～7％加入木瓜蛋白酶，80℃水浴2h，4层100目纱网过滤，合并两次上滤液，加热浓缩至1g/ml原药材，密度1.17～1.20g/ml，按照浓缩液体积比1：5加入95％食品级乙醇，醇沉过夜，取上清液，减压浓缩至1g/ml原药材，密度1.11～1.13g/ml，加入一倍体积蒸馏水，将溶液置于托盘并使液面高度小于1cm中，冷冻过夜，将其至于冷冻干燥机中冷冻干燥，得淫羊藿提取物，备用。
20.实施例2
21.采用酶解辅助水提法提取，经旋转蒸发浓缩后醇沉，即得，具体如下：称取淫羊藿适量，粉成80目干粉，按照1：15加入蒸馏水，再按照淫羊藿质量的6％加入木瓜蛋白酶，充分混匀，55℃水浴2h，再100℃水浴2h；4层100目纱网过滤，滤液备用，滤渣再次加入相同体积水溶液，80℃水浴2h，4层100目纱网过滤，合并两次上滤液，加热浓缩至1g/ml原药材，密度1.17～1.20g/ml，按照浓缩液体积比1：5加入95％食品级乙醇，醇沉过夜，取上清液，减压浓缩至1g/ml原药材，密度1.11～1.13g/ml，加入一倍体积蒸馏水，将溶液置于托盘并使液面高度小于1cm中，冷冻过夜，将其至于冷冻干燥机中冷冻干燥，得淫羊藿提取物，备用。
22.实施例3
23.采用酶解辅助水提法提取，经旋转蒸发浓缩后醇沉，即得，具体如下：称取淫羊藿适量，粉成80目干粉，按照1：20加入蒸馏水，再按照淫羊藿质量的7％加入木瓜蛋白酶，充分混匀，60℃水浴2h，再100℃水浴2h；4层100目纱网过滤，滤液备用，滤渣再次加入相同体积水溶液，80℃水浴2h，4层100目纱网过滤，合并两次上滤液，加热浓缩至1g/ml原药材，密度1.17～1.20g/ml，按照浓缩液体积比1：5加入95％食品级乙醇，醇沉过夜，取上清液，减压浓缩至1g/ml原药材，密度1.11～1.13g/ml，加入一倍体积蒸馏水，将溶液置于托盘并使液面高度小于1cm中，冷冻过夜，将其至于冷冻干燥机中冷冻干燥，得淫羊藿提取物，备用。
24.使用方法：将淫羊藿提取物按照药物饲料比1g/kg、2g/kg、4g/kg，在药物中加入0.2％的饲料粘合剂，混合均匀，加水调成糊状，与饲料混合，充分搅拌，晾干备用。将饲料添加剂饲料每日按螯虾体重的0.8％投料，每天分2次投喂，试验期为7d，期间水温保持22℃。
25.二、中草药提取物饲料添加剂对红螯螯虾抗应激影响效果的研究
26.方法：将150尾健康且体重均匀的红螯螯虾，随机分为5个试验组，实施例制得的淫羊藿提取物低剂量组(饲料添加0.1％)、中剂量组(饲料添加0.2％)和高剂量组(饲料添加0.4％)、药物对照组(维生素e组)和空白对照组。每组设3个平行，每个平行10尾，分箱饲养，通过混饲给药7天后，进行形态学参数、血液常规、生化指标、脏器指数及免疫指标的测定。
27.结果(见表1至表5)：淫羊藿提取物组相对于空白对照组能极显著升高红螯螯虾血细胞数量(p<0.01)，但对大颗粒细胞、小颗粒细胞、透明细胞在血细胞中的比例无显著差异(p>0.05)；淫羊藿提取物组相对于空白对照组能极显著降低红螯螯虾血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性(p<0.01)，显著升高血清总蛋白水平(p<0.05)，对其他生化指标无显著差异(p>0.05)；淫羊藿提取物组相对于空白对照组，对红螯螯虾生长性能、肝胰腺指数及卵巢指数无明显影响(p>0.05)；淫羊藿提取物组相对于空白对照组能显著提高红螯螯虾肝胰腺酚氧化酶活性、超氧化物歧化酶活性和还原型谷胱甘肽水平、提高溶菌酶活性和总抗氧化能力(p<0.05)。其中低剂量组(1g/kg)红螯螯虾的免疫指标明显高于其他组。淫羊藿中的主要有效活性成分为淫羊藿苷，它具有明显的免疫调节活性，对机体代谢和各种器官功能有改善作用，能消除应激所产生的活性氧自由基。
28.结论：根据试验结果，淫羊藿提取物用于红螯螯虾的临床推荐用法用量为：混饲，红螯螯虾，每公斤饲料1克(0.1％)，连用7天。
29.综上，本发明的饲料添加剂能有效提高红螯螯虾的免疫力和抗应激能力，值得进一步开发利用。在红螯螯虾养殖过程中日常推广使用，可增强其抗应激能力和免疫力，当养殖环境在一定范围内发生改变时，能够有效减少其应激反应，减少其死亡率。
30.表1淫羊藿提取物对红螯螯虾生长性能的影响(m
±
sd,)
[0031][0032]
注：同一列数字肩标的大小写字母均有相同者表示差异不显著(p>0.05)，大写字母相同而小写字母各异者为差异显著(p<0.05)，大写字母完全不同者为差异极显著(p<0.01)。
[0033]
表2淫羊藿提取物对红螯螯虾血液生理指标的影响(m
±
sd,)
[0034][0035]
注：同一列数字肩标的大小写字母均有相同者表示差异不显著(p>0.05)，大写字母相同而小写字母各异者为差异显著(p<0.05)，大写字母完全不同者为差异极显著(p<0.01)。
[0036]
表3淫羊藿提取物对红螯螯虾血液生化指标的影响(m
±
sd,)
[0037][0038]
注：同一行数字肩标的大小写字母均有相同者表示差异不显著(p>0.05)，大写字母相同而小写字母各异者为差异显著(p<0.05)，大写字母完全不同者为差异极显著(p<0.01)。
[0039]
表4淫羊藿提取物对红螯螯虾肝胰腺指数和卵巢指数的影响(m
±
sd,)
[0040][0041]
注：同一列数字肩标的大小写字母均有相同者表示差异不显著(p>0.05)，大写字
母相同而小写字母各异者为差异显著(p<0.05)，大写字母完全不同者为差异极显著(p<0.01)。
[0042]
表5淫羊藿提取物对红螯螯虾免疫指标的影响(m
±
sd)
[0043][0044]
注：同一列数字肩标的大小写字母均有相同者表示差异不显著(p>0.05)，大写字母相同而小写字母各异者为差异显著(p<0.05)，大写字母完全不同者为差异极显著(p<0.01)。