一种可改善酒精中毒的溶栓酶制品及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及改善酒精中毒产品技术领域，具体涉及一种可改善酒精中毒的溶栓酶制品及其制备方法和应用。


背景技术：

2.肝脏是人体糖类代谢、脂质代谢和蛋白质代谢的中心枢纽，具有排毒解毒、分泌胆汁等重要功能。人体饮酒后酒精主要通过十二指肠吸收，约90％的酒精在肝脏内代谢。酒精中毒俗称醉酒，是指大量饮酒后发生的机体机能异常状态，其主要对神经系统和肝脏及胃伤害，因此饮酒前或者饮酒后，服用护肝药物，对解酒具有一定效果。
3.申请号为200410060450.6的专利提供一种解酒冲剂，由万寿果、万寿叶、小豆花、橙子皮、罗汉果花、红枣组成，其主要缺点是无止呕、护肝、醒脑作用，促进乙醇分解代谢作用差，加之没有集中一个靶点——解酒及缓解醉酒症状，故效果较差。
4.申请号为200510045004.2的专利提供一种解酒的中药，由葛花、枳椇子、葛根、枣槟榔、红豆蔻、橘红、砂仁、草豆蔻、石斛、女贞子、甘草组成，用于预防醉酒和缓解醉酒症状，保护人体健康，其主要缺点是处方中辛香走窜之药如枣槟榔、红豆蔻、橘红、砂仁、草豆蔻较多，容易耗气伤阴，使人咽干舌燥，处方中存在滋阴的药物石斛、女贞子，同气相求，易与酒湿胶着，影响醇分解代谢，不利于解酒，故效果较差。
5.申请号为200510017503.0的专利提供一种解酒胶囊的制作方法，由甘草15
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25g、葛花15
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25g、葛根15
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25g、砂仁15
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25g、高良姜15
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25g、白芍10
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20g、薄荷10
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20g、决明子10
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20g组成，先按中药的煎煮方法制成药液后备用，将药液合并置于三效真空高能蒸发浓缩器内，减压、加热至80℃浓缩成稠液或膏状后置于干燥箱中，加热至60℃，恒温条件下干燥4h，粉碎、过筛、填充入胶囊，灭菌、制成成品，其主要缺点是工艺上没有提取砂仁、高良姜、薄荷等药物中的挥发油，使其有效成分损失严重，另外决明子中含有蒽醌苷，可导致腹泻等不良反应，女性长期饮用决明子轻则引发月经不规律，重则使子宫内膜不正常。
6.申请号为200610047699.2的专利提供一种解酒护肝药剂，由枳椇子、葛花、l
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半胱氨酸、葡萄糖酸钙、泛酸钙、牛磺酸、蜂蜜等为原料经提取配制而成，该药剂口感好，解酒效果十分明显，但其主要缺点是处方组成中医方剂配伍理论指导，护肝、醒脑、止呕、加快乙醇分解代谢作用差，不利于解酒，不能消除醉酒的症状。


技术实现要素：

7.本发明的目的在于提出一种可改善酒精中毒的溶栓酶制品及其制备方法和应用，可改善酒精中毒的溶栓酶制品中含有丰富的尿激酶，具有溶解血栓、改善微循环功能，辅以能促进血糖升高，加快血液中酒精代谢的葡萄糖和蜂蜜，以及对肠胃起保护的维生素b族群，另外，葛根、茯苓保肝护肝，通过各组分协同复配，可以起到有效缓解酒精中毒的症状，起到解酒护肝的效果。
8.本发明的技术方案是这样实现的：
9.本发明提供一种可改善酒精中毒的溶栓酶制品，由以下原料按重量份制备而成：溶栓酶粉20
‑
30份，葡萄糖粉5
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10份，葛根10
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20份，维生素b15
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15份，维生素b20.5
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1份，维生素b30.1
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0.5份，丹参10
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20份，茯苓10
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20份，蜂蜜5
‑
10份；所述溶栓酶粉为菌种subtilisin
‑
qk接种在培养基中，在25
‑
35℃下发酵12
‑
24h后，将发酵液离心，取上清液，纯化，冷冻干燥，粉碎，得到。
10.作为本发明的进一步改进，由以下原料按重量份制备而成：溶栓酶粉22
‑
27份，葡萄糖粉7
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9份，葛根12
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18份，维生素b17
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12份，维生素b20.6
‑
0.8份，维生素b30.2
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0.4份，丹参12
‑
17份，茯苓12
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15份，蜂蜜6
‑
9份。
11.作为本发明的进一步改进，所述发酵液中菌种subtilisin
‑
qk的接种量为1
‑
5％，优选地为3
‑
5％。
12.作为本发明的进一步改进，所述溶栓酶粉中有效成分为尿激酶，含量为90
‑
95wt％，优选地为92
‑
95wt％。
13.作为本发明的进一步改进，所述培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨10
‑
20g，牛肉浸粉5
‑
12g，黄豆酶解物5
‑
10g，植物蛋白胨2
‑
8g，氯化钠3
‑
7g，加水至1000ml，ph调至7.0
‑
7.5，110
‑
125℃灭菌10
‑
20min，制得，备用。
14.作为本发明的进一步改进，所述黄豆酶解物由以下方法制备而成：
15.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
16.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入2
‑
4wt％菠萝蛋白酶和1
‑
3wt％木瓜蛋白酶进行酶解，35
‑
40℃反应3
‑
5h后，110
‑
120℃灭酶5
‑
10min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
17.作为本发明的进一步改进，所述纯化方法为：将发酵液的上清液用浓度不低于4mol/l硫酸铵溶液盐析纯化。
18.本发明进一步保护一种上述可改善酒精中毒的溶栓酶制品的制备方法，包括以下步骤：
19.步骤1，原料粉碎：将葛根、茯苓、丹参分别粉碎成粉状，备用；
20.步骤2，过筛：将步骤1中的粉状原料过80
‑
100目筛网，不能通过的进行二次粉碎直至全部过筛，备用；
21.步骤3，混合、压片：将步骤2中的粉末、维生素b1、维生素b2、维生素b3、溶栓酶粉按比例混匀，加入葡萄糖粉和蜂蜜，混合均匀后制剂，得到可改善酒精中毒的溶栓酶制品。
22.作为本发明的进一步改进，所述可改善酒精中毒的溶栓酶制品为片剂、颗粒剂或胶囊剂。
23.本发明进一步保护一种上述可改善酒精中毒的溶栓酶制品在制备解酒、改善酒精中毒的食品、保健食品以及药品中的应用。
24.本发明具有如下有益效果：本发明可改善酒精中毒的溶栓酶制品中含有丰富的尿激酶，具有溶解血栓、改善微循环功能，辅以能促进血糖升高，加快血液中酒精代谢的葡萄糖和蜂蜜，以及对肠胃起保护的维生素b族群，另外，葛根、茯苓保肝护肝，通过各组分协同复配，可以起到有效缓解酒精中毒的症状，起到解酒护肝的效果。
具体实施方式
25.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施
例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
26.实施例1
27.原料组成(重量份)：溶栓酶粉20份，葡萄糖粉5份，葛根10份，维生素b15份，维生素b20.5份，维生素b30.1份，丹参10份，茯苓10份，蜂蜜5份。
28.溶栓酶粉为菌种subtilisin
‑
qk接种在培养基中，接种量为3％，在25℃下发酵12h后，将发酵液离心，取上清液，将发酵液的上清液用浓度4mol/l硫酸铵溶液盐析纯化整夜，冷冻干燥，粉碎，得到，经测定含有92.2wt％的尿激酶。
29.培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨10g，牛肉浸粉5g，黄豆酶解物5g，植物蛋白胨2g，氯化钠3g，加水至1000ml，ph调至7.0，110℃灭菌10min，制得，备用。
30.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
31.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
32.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入2wt％菠萝蛋白酶(1000u/g)和1wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，35℃反应3h后，110℃灭酶5min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
33.可改善酒精中毒的溶栓酶制品的制备方法，包括以下步骤：
34.步骤1，原料粉碎：将葛根、茯苓、丹参分别粉碎成粉状，备用；
35.步骤2，过筛：将步骤1中的粉状原料过80目筛网，不能通过的进行二次粉碎直至全部过筛，备用；
36.步骤3，混合、压片：将步骤2中的粉末、维生素b1、维生素b2、维生素b3、溶栓酶粉按比例混匀，加入葡萄糖粉和蜂蜜，混合均匀后制剂，得到可改善酒精中毒的溶栓酶制品。
37.实施例2
38.原料组成(重量份)：溶栓酶粉30份，葡萄糖粉10份，葛根20份，维生素b115份，维生素b21份，维生素b30.5份，丹参20份，茯苓20份，蜂蜜10份。
39.溶栓酶粉为菌种subtilisin
‑
qk接种在培养基中，接种量为5％，在35℃下发酵24h后，将发酵液离心，取上清液，将发酵液的上清液用浓度6mol/l硫酸铵溶液盐析纯化整夜，冷冻干燥，粉碎，得到，经测定含有94.1wt％的尿激酶。
40.培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨20g，牛肉浸粉12g，黄豆酶解物10g，植物蛋白胨8g，氯化钠7g，加水至1000ml，ph调至7.5，125℃灭菌20min，制得，备用。
41.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
42.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
43.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入4wt％菠萝蛋白酶(1000u/g)和3wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，40℃反应3
‑
5h后，120℃灭酶10min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
44.可改善酒精中毒的溶栓酶制品的制备方法，包括以下步骤：
45.步骤1，原料粉碎：将葛根、茯苓、丹参分别粉碎成粉状，备用；
46.步骤2，过筛：将步骤1中的粉状原料过100目筛网，不能通过的进行二次粉碎直至全部过筛，备用；
47.步骤3，混合、压片：将步骤2中的粉末、维生素b1、维生素b2、维生素b3、溶栓酶粉按比例混匀，加入葡萄糖粉和蜂蜜，混合均匀后制剂，得到可改善酒精中毒的溶栓酶制品。
48.实施例3
49.原料组成(重量份)：溶栓酶粉22份，葡萄糖粉7份，葛根12份，维生素b17份，维生素b20.6份，维生素b30.2份，丹参12份，茯苓12份，蜂蜜6份。
50.溶栓酶粉为菌种subtilisin
‑
qk接种在培养基中，接种量为3.5％，在27℃下发酵16h后，将发酵液离心，取上清液，将发酵液的上清液用浓度不低于4mol/l硫酸铵溶液盐析纯化整夜，冷冻干燥，粉碎，得到，经测定含有92.7wt％的尿激酶。
51.培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨12g，牛肉浸粉6g，黄豆酶解物6g，植物蛋白胨3g，氯化钠4g，加水至1000ml，ph调至7.1，115℃灭菌12min，制得，备用。
52.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
53.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
54.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入2.5wt％菠萝蛋白酶(1000u/g)和1.5wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，36℃反应3.5h后，112℃灭酶6min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
55.可改善酒精中毒的溶栓酶制品的制备方法，包括以下步骤：
56.步骤1，原料粉碎：将葛根、茯苓、丹参分别粉碎成粉状，备用；
57.步骤2，过筛：将步骤1中的粉状原料过80目筛网，不能通过的进行二次粉碎直至全部过筛，备用；
58.步骤3，混合、压片：将步骤2中的粉末、维生素b1、维生素b2、维生素b3、溶栓酶粉按比例混匀，加入葡萄糖粉和蜂蜜，混合均匀后制剂，得到可改善酒精中毒的溶栓酶制品。
59.实施例4
60.原料组成(重量份)：溶栓酶粉27份，葡萄糖粉9份，葛根18份，维生素b112份，维生素b20.8份，维生素b30.4份，丹参17份，茯苓15份，蜂蜜9份。
61.溶栓酶粉为菌种subtilisin
‑
qk接种在培养基中，接种量为4.5％，在32℃下发酵20h后，将发酵液离心，取上清液，将发酵液的上清液用浓度4mol/l硫酸铵溶液盐析纯化整夜，冷冻干燥，粉碎，得到，经测定含有94.5wt％的尿激酶。
62.培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨18g，牛肉浸粉10g，黄豆酶解物7g，植物蛋白胨6g，氯化钠6g，加水至1000ml，ph调至7.4，122℃灭菌18min，制得，备用。
63.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
64.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
65.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入3.5wt％菠萝蛋白酶(1000u/g)和2.5wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，38℃反应4.5h后，118℃灭酶8min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
66.可改善酒精中毒的溶栓酶制品的制备方法，包括以下步骤：
67.步骤1，原料粉碎：将葛根、茯苓、丹参分别粉碎成粉状，备用；
68.步骤2，过筛：将步骤1中的粉状原料过100目筛网，不能通过的进行二次粉碎直至全部过筛，备用；
69.步骤3，混合、压片：将步骤2中的粉末、维生素b1、维生素b2、维生素b3、溶栓酶粉按比例混匀，加入葡萄糖粉和蜂蜜，混合均匀后制剂，得到可改善酒精中毒的溶栓酶制品。
70.实施例5
71.原料组成(重量份)：溶栓酶粉25份，葡萄糖粉8份，葛根15份，维生素b110份，维生素b20.7份，维生素b30.3份，丹参15份，茯苓13份，蜂蜜7份。
72.溶栓酶粉为菌种subtilisin
‑
qk接种在培养基中，接种量为4％，在30℃下发酵18h后，将发酵液离心，取上清液，将发酵液的上清液用浓度5mol/l硫酸铵溶液盐析纯化整夜，冷冻干燥，粉碎，得到，经测定含有94.9wt％的尿激酶。
73.培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨15g，牛肉浸粉9g，黄豆酶解物7g，植物蛋白胨6g，氯化钠5g，加水至1000ml，ph调至7.3，115℃灭菌15min，制得，备用。
74.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
75.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
76.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入3wt％菠萝蛋白酶(1000u/g)和2wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，37℃反应4h后，115℃灭酶7min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
77.可改善酒精中毒的溶栓酶制品的制备方法，包括以下步骤：
78.步骤1，原料粉碎：将葛根、茯苓、丹参分别粉碎成粉状，备用；
79.步骤2，过筛：将步骤1中的粉状原料过100目筛网，不能通过的进行二次粉碎直至全部过筛，备用；
80.步骤3，混合、压片：将步骤2中的粉末、维生素b1、维生素b2、维生素b3、溶栓酶粉按比例混匀，加入葡萄糖粉和蜂蜜，混合均匀后制剂，得到可改善酒精中毒的溶栓酶制品。
81.对比例1
82.与实施例5相比，未添加茯苓，其他条件均不改变。
83.原料组成(重量份)：溶栓酶粉25份，葡萄糖粉8份，葛根28份，维生素b110份，维生素b20.7份，维生素b30.3份，丹参15份，蜂蜜7份。
84.对比例2
85.与实施例5相比，未添加葛根，其他条件均不改变。
86.原料组成(重量份)：溶栓酶粉25份，葡萄糖粉8份，维生素b110份，维生素b20.7份，维生素b30.3份，丹参15份，茯苓28份，蜂蜜7份。
87.对比例3
88.与实施例5相比，黄豆酶解物的制备过程中没有添加菠萝蛋白酶，其他条件均不改变。
89.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
90.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
91.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入5wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，37℃反应4h后，115℃灭酶7min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
92.对比例4
93.与实施例5相比，黄豆酶解物的制备过程中没有添加木瓜蛋白酶，其他条件均不改变。
94.黄豆酶解物由以下方法制备而成：
95.s1.将黄豆洗净、干燥、粉碎后，得到黄豆粉；
96.s2.将黄豆粉加入无菌水中，加入5wt％木瓜蛋白酶(1000u/g)进行酶解，37℃反应4h后，115℃灭酶7min，冷冻干燥，得到黄豆酶解物。
97.对比例5
98.与实施例5相比，培养基中未添加黄豆酶解物，其他条件均不改变。
99.培养基为胰蛋胨培养基，制备方法为：取胰蛋白胨22g，牛肉浸粉9g，植物蛋白胨6g，氯化钠5g，加水至1000ml，ph调至7.3，115℃灭菌15min，制得，备用。
100.对比例6
101.与实施例5相比，溶栓酶粉由市售尿激酶替代，其他条件均不改变。
102.测试例1小鼠试验
103.1.材料
104.1.1动物：icr小鼠180只，spf级，雌雄各半，体重19
‑
22g，购自北京维通利华技术有限公司，实验动物使用许可证编号:[scxk(京)2018
‑
0010]。适应性喂养7d后进入实验。
[0105]
1.2药物：
[0106]
将实施例5和对比例1
‑
6制得的可改善酒精中毒的溶栓酶制品用蒸馏水和0.5％羧甲基纤维素配成浓度为0.036g/ml的药液，给药体积为0.1ml/10g体重。
[0107]
阳性对照药的制备方法:东宝甘泰片(吉林通化东宝药业股份有限公司，生产批号:180510)。使用时用蒸馏水和0.5％羧甲基纤维素配成浓度为0.036g/ml的药液，给药体积为0.1ml/10g体重。
[0108]
2.方法
[0109]
2.1分组与模型制备
[0110]
将icr小鼠180只，按体重随机分成9组，每组20只，即模型组、阳性对照组、实施例5组、对比例1
‑
6组。
[0111]
模型制备：给小鼠按0.3ml/10g体重灌胃二锅头酒，选取酒后2h小鼠进行后续试验。
[0112]
2.2给药
[0113]
各给药组小鼠按0.1ml/10g体重分别灌服相应组别的药液，模型组小鼠灌胃等体积生理盐水，阳性对照组灌胃等体积0.036g/ml的东宝甘泰液。30min后各组小鼠按0.15ml/10g体重灌胃给予二锅头酒。
[0114]
2.3指标和方法
[0115]
记录小鼠的入睡时间和醒酒时间。入睡时间即从灌酒到翻正反射消失的潜伏时间，醒酒时间即翻正反应恢复的时间。将灌酒后小鼠背朝下方，轻轻放入鼠笼，如果其背部朝下的姿势超过30s，则认为翻正反射消失，即为醉酒。
[0116]
急性酒精中毒在临床最易发生危险的时期为昏睡期，这一时期也最能检验解酒药物有效性。所以选择小鼠醉酒后翻正反射消失的潜伏时间和恢复时间作为重要指标来研究药物的解酒作用。
[0117]
小鼠灌酒后将其放入自主活动仪内，前10min为适应时间，记录适应后5min内的自主活动次数，即在自主活动箱内穿越格子的数量。个数越多则表明药物对乙醇中枢兴奋作用的拮抗能力越差。
[0118]
3.统计学方法
[0119]
以spss13.0统计软件分析实验数据，计量资料以表示，组间比较用单因素方差分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。
[0120]
4.结果
[0121]
结果见表1。
[0122]
表1对急性酒精中毒小鼠翻正反射的影响
[0123][0124]
注:与模型组比较，*p＜0.05。
[0125]
由表可知，与模型组比较，阳性对照组、实施例5组、对比例3
‑
4组和对比例6组均能显著延长小鼠醉倒潜伏时间(p＜0.05)。与模型组比较，阳性对照组、实施例5组和对比例6组均能使小鼠翻正反射消失至恢复时间明显缩短(p＜0.05)。其余组别有缩短醒酒时间的趋势，但差异无统计学意义(p>0.05)。
[0126]
测试例2
[0127]
1.一般资料
[0128]
选取2018年2月至2019年1月济南市人民医院急诊科收治的急性酒精中毒患者100例，按照随机数字表法将患者分为对照组和联合治疗组，每组各50例。
[0129]
2.纳入与排除标准纳入标准:
[0130]
①
符合急性酒精中毒的诊断标准；
②
机体的各脏器功能正常，无器质性病变；
③
年龄为18～60岁；
④
患者在急性酒精中毒之前神经功能正常，无神经功能障碍。排除标准:
①
在饮酒前服用了影响神经功能的药物；
②
患者对本研究中所使用的药物有禁忌证；
③
不配合本研究。
[0131]
3.治疗方法
[0132]
对照组患者给予东宝甘泰片(吉林通化东宝药业股份有限公司，生产批号:180510)，1g/次，每日3次。治疗组患者给于本发明实施例5制得的可改善酒精中毒的溶栓酶制品，1g/次，每日3次。两组患者均在上述治疗的基础之上在给予监测生命体征、利尿、催吐、吸氧、补液等。
[0133]
4.观察指标
[0134]
认知功能和运动功能恢复时间统计患者从治疗开始至认知功能恢复正常的时间以及运动功能恢复正常的时间。认知功能正常：对人物、地点和时间的定向力正常，能准确回答出自己的姓名、年龄、性别、家庭或工作联系地址、个人手机号码(如有)；运动功能正常：能独立正常行走，能准确完成指鼻以及闭眼单腿站立。
[0135]
临床疗效治疗6h后，按照治愈、显效、好转和无效的标准评价临床疗效。治愈：恶心、呕吐、躁动、言语不清、意识障碍、昏睡等临床症状完全消除；显效：言语、意识状态、行走能力等基本恢复正常，有恶心但无呕吐症状，头晕、疲劳等症状显著改善；无效：恶心、呕吐、躁动、言语不清、意识障碍、昏睡等临床症状没有明显改善。总有效＝治愈+显效。
[0136]
5.结果
[0137]
结果见表2。
[0138]
表1
[0139][0140][0141]
由上表可知，本发明实施例5制得的可改善酒精中毒的溶栓酶制品具有明显的改善酒精中毒的效果，治愈率达到54％，显效率达到44％，总有效率达到98％。
[0142]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。