1.本发明涉及食品加工领域，具体涉及一种豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法。
背景技术：
2.黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类次级代谢产物，毒性、致癌性、致畸性、致突变性在己知所有真菌毒素中均居首位，其中属afb1污染率高、毒性及致癌性最强，因此在食品卫生监测中通常以afb1为污染指标。豆瓣酱是一种传统的酿造产品，主要利用微生物作用来完成制曲和发酵过程。然而豆瓣酱发酵过程中翻、晒、露都处于一个开放式环境，且由于其制作工序繁琐复杂，故豆瓣在生产加工过程中存在某些食品安全隐患。
3.afb1污染是豆瓣酱加工过程中最主要的问题之一，相关国家标准规定，豆瓣酱中afb1含量不得高于5μg/kg。由于黄曲霉毒素结构稳定，很难通过一般手段去除，若是消费者不慎购买到afb1超标的豆瓣酱制品，仅依靠家庭烹饪无法去除毒素，因此在生产阶段就应当寻求适宜的解毒方法。实际上，如何有效降解黄曲霉毒素以及相应方法的安全性一直是讨论的重点，研究者们已经意识到，afb1污染带来的食品问题是一个长久存在的安全隐患，但在工业上还没有一种行之有效的解决办法。受污染的产品不能食用，弃之又污染环境。因此，寻求一种能有效去除豆瓣酱中afb1的方法，将受污染的产品经处理后再次利用起来显得非常有实际意义。
4.如中国专利文献上公开了：“一种降解花生黄曲霉毒素的方法”，公开号为cn201710978147.1，虽然考虑到使用紫外和电子束协同处理花生粒物料，但对花生粒物料堆叠厚度、水分、温度均有要求，在实际生产中并未很好的发挥工业化生产效用。而本发明所使用的γ射线辐照穿透性强，能瞬间、均匀地到达处理对象内部，科学合理、绿色高效，是一种实现高值化利用的有效途径，对于豆瓣酱这一类产品可以更好实现工业化生产；再如中国专利文献上公开了：“一种去除食用油中黄曲霉毒素的方法”，公开号为cn201410171567.5，使用内壁涂有涂料的装置盛装食用油后，利用紫外光来降解黄曲霉毒素，涂料的存在可能导致化学残留，影响产品品质及安全性。本发明使用的γ辐照操作便捷，对食品原有特性影响小，且fao/iaea/who规定，任何食品总体平均吸收剂量不超过10 kgy时，没有毒理学危险，故此法可作为豆瓣酱中afb1的降解方法，且目前未见相关专利申请。
技术实现要素：
5.本发明的目的在于针对豆瓣酱中出现afb1检测超标现象提供一种安全有效的应急处理方法，以解决现有技术中在处理豆瓣酱产品卫生指标的不足，保持豆瓣酱的营养价值和感官特性，减少afb1对人体的危害。本发明人经过深入研究发现，通过γ射线辐照可以有效去除豆瓣酱中黄曲霉毒素，同时保持豆瓣酱的营养价值和感官特性。
6.本发明的目的还在于提供不同浓度毒素污染后豆瓣酱产品的适宜辐照参数。在对豆瓣酱样品进行不同浓度毒素污染后经辐照处理，结合辐照后的豆瓣酱感官品质和afb1降
解率，可得出最佳辐照参数。
7.为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案。
8.一种针对豆瓣酱中afb1超标的降解处理方法，利用60co产生的γ射线辐照实现脱毒，具体包括如下步骤：（1）购买的afb1标准品用甲醇-水溶液配制成1 mg/l储备液，用甲醇-水溶液稀释储备液，配制成一系列afb1标准工作溶液，4℃低温避光保存，用于绘制标准曲线；（2）取郫县豆瓣样品3g，封袋保存后备用，加入afb1储备液分别配制成afb1初始含量为0-200μg/kg的待测样品；（3）利用60coγ-射线对豆瓣酱进行辐照处理，设定辐照剂量为0-10kgy；（4）对经过辐照的无黄曲霉毒素污染样品进行感官评价，取1g左右样品，用玻璃棒搅拌铺平于培养皿中，观察豆瓣酱的色泽和组织形态，嗅其气味，用玻璃棒蘸取样品，品尝其滋味；（5）对经辐照后的afb1污染豆瓣酱样品进行提取、衍生、检测前处理、hplc检测，计算降解率。
9.进一步地，所述步骤（5）中，提取方法具体为：
①
称取1g研磨后的豆瓣样品，置于10ml试管中；
②
加入正己烷与70％甲醇-水溶液，正己烷与甲醇-水溶液的体积比为1:2-1:10，强力振荡1-30 min，超声波强化提取分离过程，提取时间为1-30 min；
③
静置后取中间清液，用滤纸过滤；
④
取清液加入三氯甲烷萃取，上清液与三氯甲烷的体积比为1:1-1:10，震荡后静置分层，放出并收集下层三氯甲烷；
⑤
取收集的三氯甲烷溶液放入通风橱挥干。
10.进一步地，所述步骤（5）中，衍生方法具体为：向挥干后的试管中加入1ml三氟乙酸衍生1-30 min，吹干后加入2ml 70％甲醇水溶液复溶。
11.进一步地，所述步骤（5）中，检测前处理方法具体为：超纯水和流动相用0.22μm滤膜过滤，样品溶液用0.22μm针头式滤器过滤。将贮液器置于超声波清洗槽中，以水为介质振荡脱气，用超声波振荡脱气1-30min。
12.进一步地，所述步骤（5）中，检测方法具体为：高效液相色谱法。
13.进一步地，所述步骤（5）中，高效液相色谱参数具体为：s1、液相色谱条件：流速0.7ml /min；进样体积30μl；柱温30℃；检测波长：激发波长360 nm，发射波长440 nm；流动相：水，甲醇；s2、梯度洗脱程序：0-6 min，10%甲醇；6-12 min，60%甲醇；12-15 min，85%甲醇；15-18 min，80%甲醇；18-20 min，60%甲醇；20-25 min，10%甲醇。
14.由所述的方法对经过超剂量毒素污染后的豆瓣酱样品进行降解处理后检测，从而解决豆瓣酱中afb1超标情况，既可挽回经济损失，又可保障身体健康。
15.基于上述技术方案，本发明实施例至少可以产生如下技术效果：（1）本发明提供的辐照方法对于降解afb1具有良好的效果，可用于应急处理降解豆瓣酱中afb1超标情况；（2）本发明对辐照后的豆瓣酱样品感官品质影响较小，是降解豆瓣酱中afb1的一
种可行方法；（3）本发明使用的辐照方法无有害物质残留，不污染环境，加工耗能低，自动化程度高，便于产业化应用；（4）本发明使用的辐照剂量在0-10kgy范围，没有毒理学危险。
附图说明
16.图1：a是未经过辐照处理的豆瓣酱样品；b是经2、4、6、8、10kgy辐照后的豆瓣酱样品。
17.图2是本发明实施例1-5不同辐照剂量豆瓣酱样品感官评价对比图。
18.图3是本发明实施例1-5得到的afb1标准品的液相色谱图。
19.图4是本发明实施例1-5得到的afb1浓度与峰面积标准曲线图。
具体实施方式
20.实施例1：一种针对豆瓣酱中afb1超标的辐照降解方法，具体步骤如下：（1）购买的afb1标准品用甲醇-水溶液配制成1mg/l储备液，用甲醇-水溶液稀释储备液，配制成一系列afb1标准工作溶液，4℃低温避光保存，用于绘制标准曲线；（2）取郫县豆瓣样品3g，封袋保存后备用，加入afb1储备液配制成afb1初始含量为0μg/kg的待测样品；（3）利用60coγ-射线对豆瓣酱进行辐照处理，设定辐照剂量为0，2，4，6，8，10kgy；（4）对经过辐照的无黄曲霉毒素污染样品进行感官评价，取1g左右样品，用玻璃棒搅拌铺平于培养皿中，观察豆瓣酱的色泽和组织形态，嗅其气味，用玻璃棒蘸取样品，品尝其滋味。感官评分标准如下表1所示：表1感官评分标准（5）对经辐照后的afb1污染豆瓣酱样品进行提取、衍生、检测前处理、hplc检测，计算降解率。
21.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的提取方法：称取1.5g研磨后的豆瓣样品，置于10ml试管中，加入2ml正己烷与4ml70％甲醇-水
溶液，强力振荡10 min，超声波强化提取分离过程，提取时间为30 min。静置后取中间清液，用滤纸过滤，取2ml清液加入4ml三氯甲烷萃取，震荡后静置分层，放出并收集下层三氯甲烷，取收集的三氯甲烷溶液放入通风橱挥干。
22.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的衍生方法：加入1ml三氟乙酸衍生10 min，吹干后加入2ml 70％甲醇水溶液复溶。
23.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测前处理方法：超纯水用0.22μm水性滤膜过滤，流动相用0.22μm有机滤膜过滤，样品溶液用0.22μm针头式滤器过滤。将贮液器置于超声波清洗槽中，以水为介质，用超声波振荡脱气15min。
24.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测方法：s1、液相色谱条件：流速0.7ml /min；进样体积30μl；柱温30℃；检测波长：激发波长360 nm，发射波长440 nm；流动相：水，甲醇；s2、梯度洗脱程序：0-6 min，10%甲醇；6-12 min，60%甲醇；12-15 min，85%甲醇；15-18 min，80%甲醇；18-20 min，60%甲醇；20-25 min，10%甲醇。
25.实施例2：一种针对豆瓣酱中afb1超标的辐照降解方法，具体步骤如下：（1）购买的afb1标准品用甲醇-水溶液配制成1mg/l储备液，用甲醇-水溶液稀释储备液，配制成一系列afb1标准工作溶液，4℃低温避光保存，用于绘制标准曲线；（2）取郫县豆瓣样品3g，封袋保存后备用，加入afb1储备液配制成afb1初始含量为5μg/kg的待测样品；（3）利用60coγ-射线对豆瓣酱进行辐照处理，设定辐照剂量为0，2，4，6，8，10kgy；（4）对经过辐照的无黄曲霉毒素污染样品进行感官评价，同实例1中的“感官检测”；（5）对经辐照后的afb1污染豆瓣酱样品进行提取、衍生、检测前处理、hplc检测，计算降解率。
26.称取1g研磨后的豆瓣样品，置于10ml试管中，加入2ml正己烷与5ml70％甲醇-水溶液，强力振荡8 min，超声波强化提取分离过程，提取时间为25 min。静置后取中间清液，用滤纸过滤，取2ml清液加入5ml三氯甲烷萃取，震荡后静置分层，放出并收集下层三氯甲烷，取收集的三氯甲烷溶液放入通风橱挥干。
27.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的衍生方法：加入1ml三氟乙酸衍生20 min，吹干后加入2ml 70％甲醇水溶液复溶。
28.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测前处理方法：超纯水用0.22μm水性滤膜过滤，流动相用0.22μm有机滤膜过滤，样品溶液用0.22μm针头式滤器过滤。将贮液器置于超声波清洗槽中，以水为介质，用超声波振荡脱气15min。
29.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测方法：s1、液相色谱条件：流速0.7ml /min；进样体积30μl；柱温30℃；检测波长：激发波长360 nm，发射波长440 nm；流动相：水，甲醇；s2、梯度洗脱程序：0-6 min，15%甲醇；6-12 min，30%甲醇；12-15 min，60%甲醇；15-18 min，80%甲醇；18-20 min，40%甲醇；20-25 min，20%甲醇。
30.实施例3：
一种针对豆瓣酱中afb1超标的辐照降解方法，具体步骤如下：（1）购买的afb1标准品用甲醇-水溶液配制成1 mg/l储备液，用甲醇-水溶液稀释储备液，配制成一系列afb1标准工作溶液，4℃低温避光保存，用于绘制标准曲线；（2）取郫县豆瓣样品3g，封袋保存后备用，加入afb1储备液配制成afb1初始含量为50μg/kg的待测样品；（3）利用60coγ-射线对豆瓣酱进行辐照处理，设定辐照剂量为0，2，4，6，8，10kgy；（4）对经过辐照的无黄曲霉毒素污染样品进行感官评价，同实例1中的“感官检测”；（5）对经辐照后的afb1污染豆瓣酱样品进行提取、衍生、检测前处理、hplc检测，计算降解率。
31.称取1.5g研磨后的豆瓣样品，置于10ml试管中，加入2ml正己烷与6ml70％甲醇-水溶液，强力振荡8 min，超声波强化提取分离过程，提取时间为25 min。静置后取中间清液，用滤纸过滤，取2ml清液加入4ml三氯甲烷萃取，震荡后静置分层，放出并收集下层三氯甲烷，取收集的三氯甲烷溶液放入通风橱挥干。
32.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的衍生方法：加入1ml三氟乙酸衍生25 min，吹干后加入2ml 70％甲醇水溶液复溶。
33.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测前处理方法：超纯水用0.22μm水性滤膜过滤，流动相用0.22μm有机滤膜过滤，样品溶液用0.22μm针头式滤器过滤。将贮液器置于超声波清洗槽中，以水为介质，用超声波振荡脱气15min。
34.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测方法：s1、液相色谱条件：流速0.7ml/min；进样体积30μl；柱温30℃；检测波长：激发波长360 nm，发射波长440 nm；流动相：水，甲醇；s2、梯度洗脱程序：0-6 min，20%甲醇；6-12 min，35%甲醇；12-15 min，70%甲醇；15-18 min，60%甲醇；18-20 min，40%甲醇；20-25 min，10%甲醇。
35.实施例4：一种针对豆瓣酱中afb1超标的辐照降解方法，具体步骤如下：（1）购买的afb1标准品用甲醇-水溶液配制成1 mg/l储备液，用甲醇-水溶液稀释储备液，配制成一系列afb1标准工作溶液，4℃低温避光保存，用于绘制标准曲线；（2）取郫县豆瓣样品3g，封袋保存后备用，加入afb1储备液配制成afb1初始含量为100μg/kg的待测样品；（3）利用60coγ-射线对豆瓣酱进行辐照处理，设定辐照剂量为0，2，4，6，8，10kgy；（4）对经过辐照的无黄曲霉毒素污染样品进行感官评价，同实例1中的“感官检测”；（5）对经辐照后的afb1污染豆瓣酱样品进行提取、衍生、检测前处理、hplc检测，计算降解率。
36.称取1 g研磨后的豆瓣样品，置于10ml试管中，加入2ml正己烷与7 ml70％甲醇-水溶液，强力振荡10 min，超声波强化提取分离过程，提取时间为20 min。静置后取中间清液，用滤纸过滤，取2ml清液加入4ml三氯甲烷萃取，震荡后静置分层，放出并收集下层三氯甲烷，取收集的三氯甲烷溶液放入通风橱挥干。
37.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的衍生方法：加入1ml三氟乙酸衍生12 min，吹干后加入2ml 70％甲醇水溶液复溶。
38.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测前处理方法：超纯水用0.22μm水性滤膜过滤，流动相用0.22μm有机滤膜过滤，样品溶液用0.22μm针头式滤器过滤。将贮液器置于超声波清洗槽中，以水为介质，用超声波振荡脱气15min。
39.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测方法：s1、液相色谱条件：流速0.7ml/min；进样体积30μl；柱温30℃；检测波长：激发波长360 nm，发射波长440 nm；流动相：水，甲醇；s2、梯度洗脱程序：0-6 min，20%甲醇；6-12 min，55%甲醇；12-15 min，80%甲醇；15-18 min，60%甲醇；18-20 min，40%甲醇；20-25 min，20%甲醇。
40.实施例5：一种针对豆瓣酱中afb1超标的辐照降解方法，具体步骤如下：（1）购买的afb1标准品用甲醇-水溶液配制成1 mg/l储备液，用甲醇-水溶液稀释储备液，配制成一系列afb1标准工作溶液，4℃低温避光保存，用于绘制标准曲线；（2）取郫县豆瓣样品3g，封袋保存后备用，加入afb1储备液配制成afb1初始含量为200μg/kg的待测样品；（3）利用60coγ-射线对豆瓣酱进行辐照处理，设定辐照剂量为0，2，4，6，8，10kgy；（4）对经过辐照的无黄曲霉毒素污染样品进行感官评价，同实例1中的“感官检测”；（5）对经辐照后的afb1污染豆瓣酱样品进行提取、衍生、检测前处理、hplc检测，计算降解率。
41.称取1.5 g研磨后的豆瓣样品，置于10ml试管中，加入2ml正己烷与7ml70％甲醇-水溶液，强力振荡8 min，超声波强化提取分离过程，提取时间为20 min。静置后取中间清液，用滤纸过滤，取2ml清液加入4ml三氯甲烷萃取，震荡后静置分层，放出并收集下层三氯甲烷，取收集的三氯甲烷溶液放入通风橱挥干。
42.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的衍生方法：加入1ml三氟乙酸衍生18 min，吹干后加入2ml 70％甲醇水溶液复溶。
43.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测前处理方法：超纯水用0.22μm水性滤膜过滤，流动相用0.22μm有机滤膜过滤，样品溶液用0.22μm针头式滤器过滤。将贮液器置于超声波清洗槽中，以水为介质，用超声波振荡脱气15min。
44.进一步地，豆瓣酱中黄曲霉毒素的降解处理方法中的检测方法：s1、液相色谱条件：流速0.7ml/min；进样体积30μl；柱温30℃；检测波长：激发波长360 nm，发射波长440 nm；流动相：水，甲醇；s2、梯度洗脱程序：0-6 min，20%甲醇；6-12 min，60%甲醇；12-15 min，80%甲醇；15-18 min，700%甲醇；18-20 min，60%甲醇；20-25 min，20%甲醇。
[0045] 实施例2-5中辐照处理后豆瓣酱样品中afb1的降解率计算（1）计算方法 afb1的降解率公式为：（1-c/c0）
×
100%其中，c0表示afb1的初始浓度；c表示辐照处理后计算获得的afb1的浓度，计算结
果以平均值
±
标准差表示；（2）检测结果，如下表2所示：表2不同初始含量豆瓣酱中afb1降解率