一种改善溃疡性结肠炎的发酵物及其制备方法和应用

本发明涉及食品，更具体地，涉及一种改善溃疡性结肠炎的发酵物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，uc)和克罗恩病(crohn's disease，cd)是炎症性肠病(inflammatory bowel disease，ibd)的两种主要形式，溃疡性结肠炎的病因尚不清楚，其是一种结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，病变多位于结肠和直肠。病变的表现为粪便粘稠、便血以及体重减轻等。对于溃疡性结肠炎的药物治疗难以治愈，不仅病程漫长且易常反复发，因此，需要结合饮食或保健品实现病情的长时间调理和控制。

2、生物活性肽是一类有益于机体生命活动或者有特定生理作用的小分子肽类化合物，它们分子量相对较小，易被吸收。常见的生物活性肽的生产方法为酶解乳蛋白，并筛选其中特定的活性肽，但由于酶解蛋白得到的肽种类较多，活性肽在机体内其作用时并非是单独起作用的，因此筛选特定功能活性肽具有较大难度。牛乳中含有丰富的蛋白，由于蛋白种类多因此可能含有较多潜在功能作用的生物活性肽的前体物质，即其肽链结构中存在着具有一定生物活性的氨基酸序列片段，在正常状态下，其功能区肽段隐藏不起作用；当其单独从蛋白质肽链中释放出来，能显示出独特的生物活性。

3、公告号为cn105548531b的中国发明专利公开了利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其在酶解牛乳中发现了调节睡眠功能的提取物；公开号为cn106723077a的中国发明专利公开了一种乳蛋白源性肠道微生态调节肽保健品及其制备方法，通过酶解乳蛋白，得到了一种可调节肠道微生态的保健品。因此，以乳蛋白酶解物来开发针对改善溃疡性结肠炎的产品，来丰富新生物活性肽物质的功能，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的首要目的是以乳蛋白酶解物来开发针对改善溃疡性结肠炎的产品，进而来丰富新生物活性肽物质的功能，而提供一种改善溃疡性结肠炎的发酵物；本发明的第二个目的是提供该发酵物的制备方法；本发明的第三个目的是提供该发酵物制备预防或改善溃疡性结肠炎的药物、食品或保健品中的应用；本发明的最后一个目的是提供一种预防或改善溃疡性结肠炎的药物、食品或保健品。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种改善溃疡性结肠炎的发酵物，是以含乳蛋白水解物为发酵底物，以植物乳杆菌为发酵菌发酵得到；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)bhr4，所述植物乳杆菌已于2023年2月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存地址为北京市北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no.26686。

4、本发明通过实验发现本发酵物具有良好的抗氧化活性且可有效抑制肠道炎症反应，保护肠道上皮的屏障功能；此外可显著改变肠道微生物β多样性，提升肠道微生物中firmicutes门的相对丰度，并降低肠道微生物shigella属的相对丰度，维护肠道健康状态。以含乳蛋白水解物为发酵底物，以新发现的新菌株植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)bhr4为发酵菌发酵得到的发酵物，与乳蛋白水解物或植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)bhr4在mrs发酵培养基发酵得到的发酵物相比，可以显著改善溃疡性结肠炎，维护肠道健康。

5、进一步地，上述发酵物的制备方法，通过如下步骤制备：

6、s1.将质量浓度为20-100g/l的乳蛋白溶液经蛋白酶水解，得到乳蛋白水解物；

7、s2.将去除水分的所述乳蛋白水解物加入培养基配制成乳蛋白水解物发酵培养基，使得乳蛋白水解物发酵培养基中去除水分的乳蛋白水解物的含量为30-50g/l，接种上述的植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)bhr4发酵，得到改善溃疡性结肠炎的发酵物。

8、进一步地，步骤s1所述蛋白酶选自酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶。

9、优选地，步骤s1所述蛋白酶为碱性蛋白酶。

10、进一步地，步骤s1所述蛋白酶水解，其特征在于，水解的酶底比为1000-10000u/g，水解时间为0.5-3h。

11、进一步地，步骤s1所述水解后，还需加热对乳蛋白水解物中的蛋白酶进行灭活并离心将其去除。

12、进一步地，步骤s2所述接种为接种活化的植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)bhr4，接种量为1％-3％。

13、进一步地，所述活化为将植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)bhr4接种在mrs平板，培养24h后挑取单菌落，在mrs液体培养基中活化培养三代，每代活化12h。

14、优选地，所述mrs液体培养基配方为：蛋白胨8-12g/l、牛肉膏8-12g/l、酵母粉4-6g/l、葡萄糖15-25g/l、柠檬酸氢二铵1-3g/l、磷酸氢二钾1.8-2.2g/l、无水乙酸钠4-6g/l、硫酸镁0.1-0.3g/l、硫酸锰0.04-0.06g/l；吐温80 0.8-1.2ml/l；余量水。

15、进一步地，所述mrs固体平板培养基配方为：蛋白胨8-12g/l、牛肉膏8-12g/l、酵母粉4-6g/l、葡萄糖15-25g/l、柠檬酸氢二铵1-3g/l、磷酸氢二钾1.8-2.2g/l、无水乙酸钠4-6g/l、硫酸镁0.1-0.3g/l、硫酸锰0.04-0.06g/l；吐温80 0.8-1.2ml/l；琼脂粉1.5-2％；余量水。

16、进一步地，步骤s2所述发酵为36-38℃发酵6-60h，发酵完成后还需去除菌体。

17、更进一步地，所述去除菌体为将发酵物于5000rpm离心20min，除去沉淀，并经过0.22μm膜过滤。

18、进一步地，步骤s2所述乳蛋白水解物发酵培养基其配方为：乳蛋白水解物30-50g/l、柠檬酸氢二胺1-3g/l、葡萄糖8-12g/l、磷酸氢二钾1-2g/l、乙酸钠1-5g/l、硫酸镁0.4-0.6g/l、硫酸锰0.2-0.3g/l。

19、由于上述发酵物可以显著改善溃疡性结肠炎，因此，本发明还提供了上述发酵物在制备预防或改善溃疡性结肠炎的药物、食品或保健品中的应用。

20、本发明还提供了一种预防或改善溃疡性结肠炎的药物、食品或保健品，所述药物、食品或保健品含有上述发酵物。

21、本发明的有益效果是：

22、(1)本发明以含乳蛋白水解物为发酵底物，以植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)bhr4为发酵菌发酵得到发酵物具有良好的抗氧化活性且可有效抑制肠道炎症反应，保护肠道上皮的屏障功能；此外可显著改变肠道微生物β多样性，提升肠道微生物中firmicutes门的相对丰度，并降低肠道微生物shigella属的相对丰度；可显著改善溃疡性结肠炎，维护肠道健康。

23、(2)本发酵物可用于制备预防或改善溃疡性结肠炎的药物、食品或保健品。