专利名称：鱼类的生理活化剂及养鱼用饲料添加物的制作方法
技术领域：
本发明涉及鱼类的生理活化剂及养鱼用饲料添加物。已有技术以往，作为鳗鱼、泥鳅、香鱼、比目鱼、真鲷、对虾等养殖鱼类，特别是，作为上述鱼类的鱼苗的饲料添加剂，是添加绿硫细菌，由此，比起不添加该绿硫细菌的饲料来，可有效地提高饲料的利用效率，这一点已被人们确认。发明欲解决的课题但是，在不加处理，直接添加绿硫细菌时，由于该细菌中的蛋白质等，易发生腐败，2-3个月后易导致品质下降。为此，人们希望有一种可消除腐败的原因、改善保存性能的鱼类的生理活化剂及养鱼用饲料添加物。
本发明的目的是，提供一种经济性好、具有优异的保存性能的鱼类的生理化性剂及养鱼用饲料添加物，所述的鱼类的生理活化性剂及养鱼用饲料添加物具有优异的饲料的添加效率，且容易大量培养。解决课题的技术方案本发明者们为了解决上述课题，就如何消除成为腐败原因的菌体本身作了刻意的研究，结果发现比起以往所着眼的绿硫细菌的菌体来，绿硫细菌的代谢产物中含有更多的用于促进生长的有效成分，并发现一个方法，将其提取出，可由此得到具有优异的保存性能的鱼类的生理活化剂及养鱼用饲料添加物。
本发明在于提供了以绿硫细菌产生的代谢产物为有效成分的鱼类的生理活化剂。
为得到绿硫细菌的代谢产物，过滤绿硫细菌的培养液，去除细菌，由此，可取得仅含有代谢产物和培养基成分的过滤液，再从中去除盐类等培养基成分，由此可以得到代谢产物。去除培养基成分的理由可以认为是由于在如冷冻干燥等的干燥过程中，培养基成分大量地作为盐出现，有效成分的回收率变差，又，培养基成分中不含有对生理活性有效的成分。作为去除培养基成分的方法，有，例如用反渗透膜和超滤膜仅去除低分子的培养基成分的方法。由于促进生长有效的代谢产物的成分据推断其平均分子量在200以上，因此，该方法是有效的。然而，本发明并不局限于该方法。另外，本发明中的绿硫细菌，其培养期间短，在24小时之内，即达到109/ml以上的高密度，而且，其培养基的成本低，容易大量生产，经济性好。在连续培养时，不进行灭菌及无菌操作，杂菌的繁殖也较少，稳定性高。再有，本发明的绿硫细菌对鱼类无摄食禁忌和毒性，还可提高摄食功能，具有促进鱼类生长的效果。
由上述可知，绿硫细菌作为鱼类的饲料添加物是最合适的，另外，当分离、提取出该细菌的代谢产物，作为饲料添加物添加时，也具有大致同等的效果，而且具有优异的保存性。
通常，绿硫细菌利用硫化氢、胶体硫、硫代硫酸盐、分子氢作为电子供体，为一类进行厌氧性的光合成的绿色光合成细菌。只有进行光合成才能生活，具有完全不需要生长因子的性质。其细胞内的独立的小胞结构内具备光合成体系，除了绿菌属叶绿素之外，还含有少量的菌叶绿素，在此二种色素之间显示了能量的转移。又在绿菌属的场合，仅在醋酸和H2S共存的条件下发生同化。
本发明发现作为有效成分的绿硫细菌的代谢产物可发挥出的作用优于菌体，由此，将绿硫细菌产生的代谢产物用作生理活化剂，其结果发现，绿硫细菌有助于显著地提高鱼类的摄食能力，可以提高饲料的效率。发明的实施形态本发明中的绿硫细菌可举出Chlorobium limicola DSM245，Chlorobium vibriofome DSM260，Chlorobium phaeobacteroides DSM266，Chlorobium phaeovibrioides DSM269，Prosthecochloris aestualii DSM271，Chlorobium tepidum ATCC49652，Pelodictyon luteolum DSM273，Pelodictyon phaeum DSM728，可利用人工培养的。可人工培养的、且可大量培养的优选的细菌是绿菌属。
细菌培养方法依菌种、培养条件的不同，其培养温度、pH等都有变化，但是，作为较好的培养例，pH在7.5-6.3，培养器皿表面光的照度在2000勒克斯以上即可。有时，理想的是，培养温度在20-30℃，采用完全厌氧的条件，作为有机物添加约0.05％的醋酸钠。
养鱼用饲料有以鱼粉、淀粉等为主要成分的、添加增稠剂、维生素、矿物质等的复合饲料及如磷虾等的活饵饲料等。放饵时，通常是作成拌饵，形成颗粒状等投放。在将绿硫细菌的代谢产物及含此代谢产物的培养过滤液、或菌体、或上述产物、菌体及过滤液的复合物的培养液作为养鱼用饲料添加物添加时，可将这些物质直接加入于拌饵，或用水稀释后添加、混合于拌饵，颗粒饲料可浸渍培养液。
但是，本发明中使用的绿硫细菌及其代谢产物的应用领域并不限于养鱼用饲料添加剂。例如，绿硫细菌及其代谢产物中也含有维生素、矿物质、氨基酸等，也可用作为营养辅助剂。总之，可有效地用作鱼类的生理活化剂。
在将绿硫细菌直接以其菌体的形式添加时，其细菌添加量，最好为培养液干重0.1％的程度，作为培养液加入时，其浓缩虽有差别，最好是在1-50％的程度范围。如该添加量少于上述范围，则摄食的功能改善效果差，如过多，则不太可能期待得到在其之上的效果。
本发明涉及以绿硫细菌及其代谢产物为有效成分的鱼类的生理活化剂，在将本发明的鱼类生理活化剂作为养鱼用饲料添加物添加于饲料时，可有效地发挥促进生长的作用。而且，特别显著的是，比起其它的细菌来，其培养时间短，在24小时之内即可达到109/ml以上的高密度。另外，其培养基的成本低，容易大量生产，具有优异的经济性。在连续培养时，不进行灭菌及无菌操作，杂菌的繁殖也较少，稳定性高。再有，本发明的绿硫细菌对鱼类无摄食禁忌和毒性，摄食还有促进鱼类生长的效果。然而，如果不加处理地放置，则易腐败，即使保存在4℃以下，在2-3个月后也发生品质劣化，所以，用0.2μm的膜滤器等过滤，仅分离出代谢产物，由此，可去除成为腐败原因的菌体自身，使其长期的保存成为可能。
另外，本发明在特别需考虑保存性的场合，最好是使用以代谢产物为有效成分的生理活化剂及养鱼用饲料添加物；但是在无需特别考虑保存性的用途时，所述生理化性剂及养鱼用饲料添加物也可含有菌体，或不分离代谢产物，将绿硫细菌的培养液作为有效成分。再有，以绿硫细菌的代谢产物和其菌体作为有效成分时，此时利用率的提高在代谢产物单体以上，可以发挥生理活性的协同效果。实施例实施例1(试验方法)在4个水槽(30×30×30cm)中分别饲养金鱼各15尾，饲养至其总体重为77.0g，每日，分别以上述金鱼的体重的5％的比例，对对照区的金鱼仅给予金鱼用饲料(ェンゼル·フロ-ト日本Pet Food株式会社)，对试验区给予其中添加了重量占4％的绿硫细菌Chlorobium limicola培养过滤液(除去菌体)的饲料，按时测得其总体重。再有，作为比较例I，给予添加了重量为4％ 的Chlorobium limicola培养液(过滤液+菌体)的饲料。作为比较例2，给予用0.2μm的膜滤器过滤、洗净与比较例1中所添加的相同量的培养液的菌体。另外，作为比较例3，同样地仅仅添加了绿硫细菌培养用的培养基4％。
试验区仅有过滤液对照区无添加物比较例1菌体+过滤液比较例2仅菌体比较例3仅培养基表1总体重(g)饲养期间 试验区 对照区 比较例1 比较例2 比较例3第0日 77.077.077.0 77.0 77.0第5日 89.282.191.5 84.3 81.6第10日 100.1 88.9102.191.4 87.4第15日 110.9 98.7113.3100.796.9菌体添加区(比较例2)的成长与对照区比较稍有提高，然而，相比之下，Chlorobiumlimicola培养液添加区(比较例1)和Chlorobium limicola培养过滤液添加区(试验区)所见的成长则皆有显著的提高。还有，培养基添加区(比较例3)与对照区比较，因培养基的成长稍微不佳，在培养基上未见到有效性。
表2增加体重(g)饲养期间试验区对照区比较例1 比较例2 比较例3第0日 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0第5日 12.2 5.1 14.5 7.3 4.6第10日23.1 11.9 25.1 14.4 10.4第15日33.9 21.7 36.3 23.7 19.9上表是对饲养期间产生的金鱼的体重增加量(n天后的总体重—初期的总体重77.0g)所作的比较，可以显见Chlorobium limicola培养液添加区(比较例1)和Chlorobium limicola培养过滤液添加区(试验区)中的金鱼的体重增加。
图1是根据表2所作的表示金鱼体重增加量(g)和试验天数之间的关系的坐标图。
实施例2(试验方法)在4个水槽(75×45×45cm)中分别饲养平均体重各为0.2g的真鲷苗各60尾，对照区的真稠给予真稠用复合饲料，对试验区给予其中添加了重量占2％的绿硫细菌Chlorobium limicola培养液(试验区1)的饲料、添加了Chlorobium limicola培养过滤液(试验区2)的饲料及添加了上述培养过滤液中的菌体(试验区3)的饲料，进行为期一个月的饲养试验。又，在试验区2中，使用了经0.2μm的膜滤器过滤的试验区1的绿硫细菌培养液，残留的菌体用蒸馏水洗净，用于试验区3。
对照区混合饲料试验区1混合饲料+过滤液+菌体试验区2混合饲料+过滤液试验区3混合饲料+菌体表3饲养期间对照区 试验区1 试验区2 试验区3初期体重(g)12.0 12.0 12.0 12.0试验后体重(g) 264.0300.0289.0266.0增加体重(g)252.0288.0277.0254.0给饵量(g) 239.0239.0239.0239.0饲料效率(％) 105.4120.5115.9106.3增重率(％) 2200 2500 2408 2217存活数 54 59 56 59存活率(％) 90.0 98.3 93.3 98.3(结果)试验结束时的成长促进效果、存活率示于表3、表中，最初体重为试验开始时的鱼的总体重(g)，试验后体重为试验结束时的鱼的总体重(g)，体重的增加量(试验后体重-最初的体重)(g)，给饵量为在试验期间所给予的饲料的总重量(g)，饲料利用效率为(体重增加量/给饵量)×100％，体重增加率为(试验后体重/最初的体重)×100％，存活率为(试验结束时存活的鱼尾数/60)×100％。
从上述结果可以看出，绿硫细菌Chlorobium limicola培养液(试验区1)、Chlorobium limicola培养过滤液(试验区2)的成长良好。另外，在本试验期间，鱼苗的存活率在对照区中为90.0％，而在试验区1中为98.3％，试验区2中为93.3％，在试验区3中为98.3％。显示了较高的数值，存活率得到改善。
此外，在本实施例中所使用的绿硫细菌Chlorobium limicola培养基的组成为
磷酸氢二钾0.5g硫酸胺0.5g硫酸镁0.2g氯化钙0.05g氯化钠0.1g碳酸氢钠 1.0g硫化钠1.0g硫代硫酸钠1.0gEDTA 痕量EDTA-铁盐 痕量EDTA-钴盐 痕量硼酸 痕量硫酸铜痕量硫酸锌痕量钼酸钠痕量氯化镍痕量氯化锰痕量水1000mlpH6.8±0.2照度为5000LX，温度为30℃，培养一天。
在上述的实施例中，是使用了金鱼、真鲷，但是，本发明并不限于这些。总之，鉴于本发明的绿硫细菌对鱼类无摄食禁忌和毒性，还可提高摄食功能，由此产生促进鱼类生长的效果；绿硫细菌如采用一定的条件，培养时间短，另外，有培养基的成本低，容易大量生产，经济性优异；仅以培养过滤液促进鱼类等的生长，也可获得充分的效果；在连续培养时，不进行灭菌及无菌操作，杂菌的繁殖也较少，稳定性高等的优点，本发明不仅适用于淡水鱼，也适用于海水鱼等鱼类。
另外，在实施例中，作为绿硫细菌是列举了Chlorobium limicola，但是，除此之外，Chlorobium vibriofome，Chlorobium phaeobacteroides，Chlorobiumphaeovibrioides，Prosthecochloris aestualii，Chlorobium tepidum，Pelodictyonluteolum，Pelodictyon phaeum，比起空白的对照区，同样能使饲料利用效率得到改善，也能使重量增加率得到改善。发明效果本发明为以绿硫细菌的代谢产物为有效成分的鱼类的生理活化剂，在将本发明的鱼类生理活化剂作为养鱼用饲料添加物添加于饲料时，比起仅在饲料中添加绿硫细菌的菌体的饲料来，其保存性特别优异，可有效地发挥促进生长的作用。而且，绿硫细菌的自身的培养时间特别短，可在短时间内高密度地培养。另外，其培养基的成本低，容极其适于大批量的生产。再有，本发明的绿硫细菌对鱼类无摄食禁忌和毒性，饲料的添加效率特别显著。附图的简单说明图1所示为根据饲料添加物的有无等的不同，相对于自试验开始时起的天数的体重增加量的变化图表。
权利要求
1.一种鱼类的生理活化剂，其特征在于，所述的鱼类生理活化剂以绿硫细菌产生的代谢产物为有效成分。
2.如权利要求1所述的鱼类生理活化剂，其特征在于，所述的鱼类生理活化剂以绿硫细菌的培养液为有效成分。
3.如权利要求1或2所述的鱼类生理活化剂，其特征在于，所述的绿硫细菌属于绿菌属(Chlorobium)。
4.如权利要求1，2或3中之任一项所述的鱼类生理活化剂，其特征在于，所述的绿硫细菌为选自下述细菌的至少一种Chlorobium limicola，Chlorobium vibriofome，Chlorobium phaeobacteroides，Chlorobium phaeovibrioides，Prosthecochloris aestualii，Chlorobium tepidum，Pelodictyon luteoum，Pelodictyon phaeum。
5.一种养鱼用饲料添加物，其特征在于，所述的饲料添加物含有权利要求1，2，3或4中之任一项所述的生理活化剂。
全文摘要
本发明提供了一种经济性好、具有优异的保存性能的、以绿硫细菌的代谢产物为有效成分的鱼类的生理活化剂及养鱼用饲料添加物，所述的鱼类的生理活化剂及养鱼用饲料添加物具有优异的饲料的添加效率，且容易大量培养。
文档编号C12N1/20GK1150524SQ96108248
公开日1997年5月28日 申请日期1996年9月13日 优先权日1995年9月18日
发明者松浦明久 申请人:阿拉亚株式会社