专利名称：铁皮石斛多糖在制备减害香烟中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及应用有机物质对烟草制品的处理，具体涉及采用铁皮石斛多糖烟草制品的处理。
背景技术：
烟草危害已成为当今世界最严重的公共问题之一，也是人类健康所面临的最大问题。目前，全球共有11亿吸烟者，每年导致近500万例本可避免的死亡。《中国吸烟危害健康报告》也指出，我国是世界上最大的烟草生产国和消费国，吸烟对人民群众健康的影响尤为严重。我国吸烟人群逾3亿，另有约7.4亿不吸烟人群遭受二手烟的危害，每年因吸烟相关疾病所致死亡人数超过100万。有关医学研究表明，吸烟是心脑血管疾病、癌症、慢性阻塞性肺病等多种疾患的行为危害因素，吸烟已成为继高血压之后的第二号全球杀手。有资料表明，长期吸烟者的肺癌 发病率比不吸烟者高10倍至20倍，流行病学调查表明，吸烟是肺癌的重要致病因素之一，肺癌死亡人数中约85%由吸烟造成，吸烟致癌已经公认。肺癌的发生有很多因素介导，一些研究者以Mus spretus种系的小鼠为研究对象，通过遗传技术定位与炎症、血管发生、细胞复制和肿瘤易感的基因联系起来，结果表明有炎症体质的小鼠更易发生癌症，炎症对促进肿瘤的发生发展起着主要的作用。暴露在香烟中会开启Iki3激酶(IKK β )信号通路，促进肺部炎症的发生。近来研究表明，IKK β /NF-kB信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中处于持续激活状态，并调节基因转录参与NSCLC的发生、发展。IKK β/NF-kB途径在急性炎症和细胞存活中是已被证实的，除炎症外，IKK β /NF-kB途径的特续活化也促进了癌症，可以说IKKβ/NF-kB途径为炎症与肿瘤之间一个重要的分子纽带。基因靶向实验已证明IKK β是激活NF-kB必须的IKK亚基。既往对炎症与肿瘤的联系的认识主要在于各种炎症细胞于炎症介质，而IKK β/NF-kB途径从炎症促进肿瘤发生与发展两方面提供一分子线索，将两者间错综复杂的关系集中到ΙΚΚβ这一信号转导新靶点上。特异地抑制IKK β，为其预防治疗炎症相关性肿瘤提供新的策略和途径。虽然香烟外包装明示吸烟有害健康，政府也高额扣税，但并不能限制吸烟人数的增加。究其原因，吸烟已成为一种社会化文化交流。烟和酒、茶一样，均能协调人际关系。当今社会，尤其是男士，烟已成为其疏通人际关系的关键媒介。“茶交居士”、“酒结侠客”，茶、酒作为中国传统交际之物，但香烟的交际也无处不在，“相逢见面开口笑，递上一支烟”，增加了社交氛围、谈话乐趣，更放松了精神。吸烟不仅仅是吸食之事，更是一种社交化载体。吸烟有害健康已是一个不争的事实。随着国民生活水平的提高，人们保健意识的增强，如何降低烟草的危害，使烟民在享受吸烟乐趣的同时又能最大限度的减少对身体的危害，我国烟草行业已经把“国家利益和消费者利益至上”提到重要议事日程。为了减少吸烟身体健康产生的危害，开发一些功能性减害成分作为烟草添加剂成为研究热点。公开号为CN10275650A的专利申请公开了铁皮石斛多糖在卷烟中的应用，该应用的方法是将铁皮石斛石斛多糖经水溶解，配制成0.08mg/ml-0.8mg/ml的溶液喷到卷烟烟丝上，制备卷烟。上述专利申请还公开了将铁皮石斛多糖应用到卷烟中，可使燃吸卷烟时烟气形态圆润，细腻柔和度增加，干燥感下降，香气量增加。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供铁皮石斛多糖的新用途，即铁皮石斛多糖在香烟中的减害用途。本发明人长期研究发现，含铁皮石斛多糖的香烟经研究能显著下调因吸烟引起的细胞炎症因子IKKβ表达，降低肺部炎症率。因此，上述铁皮石斛多糖的新用途具体是，铁皮石斛多糖在制备减害香烟中的应用，其特征在于，所述的减害为降低吸烟导致肺部炎症的风险。本发明所述应用的具体方法是，用水将铁皮石斛多糖溶解，并均匀喷洒在烟丝上，自然晾干，然后按照常规的卷烟技术将烟丝卷制成香烟；其中，所述铁皮石斛多糖的用量为香烟中烟丝质量的0.1% 10%。本发明所述应用中的铁皮石斛多糖的采用水提醇沉法、超声波法或酶解法提取得到。上述的水提醇沉法由以下步骤组成:将铁皮石斛干燥茎粉碎，过50目，得铁皮石斛粉末；向铁皮石斛粉末中加入为粉末质量50倍的水，煎煮提取两次，每次2小时；合并两次提取液，浓缩至原体积的十分之一，向浓缩液中加入4倍体积 的体积浓度为95%的乙醇，静置过夜，离心，取下层沉淀物，冷冻干燥后用适量的水充分溶解，加入Sevage试剂除蛋白6次，每次加入溶解液一半体积量的Sevage试剂，摇匀，静置30min分层，收集下层水相溶液，浓缩，得到铁皮石斛总多糖。上述的超声波法由以下步骤组成:将铁皮石斛干燥茎粉碎，过50目，得铁皮石斛粉末；按1: 30的固液比往铁皮石斛粉末中加水，于50°C下超声提取时间1.5h ；5000r/min离心去渣，得上清液，浓缩至原体积的十分之一，加4倍体积的体积浓度为95%乙醇，静置过夜，离心，取下层沉淀物用适量的蒸懼水溶解，加入Sevage试剂除蛋白6次,每次加入蒸懼水溶解液一半体积量的Sevage试齐U，摇匀，静置30min分层，收集下层水相溶液，浓缩，得到铁皮石斛总多糖。上述水提醇沉法和超声波法所涉及的Sevage试剂是由正丁醇和氯仿按正丁醇:氯仿=3:1的体积比混合制成。上述的酶解法由以下步骤组成:将铁皮石斛干燥茎粉碎，过50目，得铁皮石斛粉末；将铁皮石斛粉末混悬于10倍的石油醚中，加热回流脱脂，过滤，收集滤渣；向滤渣中加入温水，再缓缓加入铁皮石斛质量0.6%的已活化的纤维素酶液，轻轻搅拌，50°C恒温酶解1.5h后立即升温至90°C灭酶，迅速冷却过滤，收集滤渣；往灭酶的滤渣中加入50倍水，在50°C温度下浸提2h，过滤，再往所得滤洛中加入25倍水于50°C温度下浸提2h，过滤；合并加50倍水浸提和加25倍水浸提的二次滤液，浓缩，加入无水乙醇，使体系中乙醇的体积浓度达到80%，在冰箱中静置过夜，过滤，滤渣经真空干燥得石斛多糖。本发明所述减害香烟能降低吸烟诱导的肺部炎症的发生率，下调因吸烟引起的肺组织核因子Kappa B (NF_kB)抑制剂的激酶β (IKKβ )的表达，因此对于降低因吸烟诱导肺癌的发生率具有积极意义。
图1为吸含水提醇沉法提取的铁皮石斛多糖的香烟组小鼠体重变化柱形图。图2为吸含超声波法提取的铁皮石斛多糖的香烟组小鼠体重变化柱形图。图3为吸含酶解法提取的铁皮石斛多糖的香烟组小鼠体重变化柱形图。图4 9为小鼠肺组织切片的显微照片，其中，图4为空白组，图5为吸普通香烟组，图6为吸含0.1%铁皮石斛多糖的香烟组，图7为吸含1%铁皮石斛多糖的香烟组，图8为吸含5%铁皮石斛多糖的香烟组，图9为吸含10%铁皮石斛多糖的香烟组。图10为小鼠肺组织中IKK^mRNA的表达的电泳图，图中，标记a为正常组小鼠，标记b为吸普通香烟组小鼠，标记c为吸添加铁皮石斛多糖香烟组小鼠。
具体实施例方式例I (铁皮石斛总多糖的提取)方法一:将铁皮石斛干燥茎粉碎，过50目，得铁皮石斛粉末；向铁皮石斛粉末中加入为粉末质量50倍的水，煎煮提取两次，每次2小时；合并两次提取液，浓缩至原体积的十分之一，向浓缩液中加入4倍体积的体积浓度为95%的乙醇，静置过夜，离心，取下层沉淀物，冷冻干燥后用适量的水充分溶解，加入Sevage试剂除蛋白6次，每次加入溶解液一半体积量的Sevage试剂，摇匀，静置30min分层，收集下层水相溶液，浓缩，得到铁皮石斛总多糖。方法二:
将铁皮石斛干燥茎粉碎，过50目，得铁皮石斛粉末；按1: 30的固液比往铁皮石斛粉末中加水，于50°C下超声提取时间1.5h ；5000r/min离心去渣，得上清液，浓缩至十分之一，加4倍体积的体积浓度为95%乙醇，静置过夜，离心，取下层沉淀物用适量的蒸馏水溶解,加入Sevage试剂除蛋白6次,每次加入蒸懼水溶解液一半体积量的Sevage试剂,摇勻，静置30min分层，收集下层水相溶液，浓缩，得到铁皮石斛总多糖。方法三:将铁皮石斛干燥茎粉碎，过50目，得铁皮石斛粉末；将铁皮石斛粉末混悬于10倍的石油醚中，加热回流脱脂，过滤，收集滤渣；向滤渣中加入温水，再缓缓加入铁皮石斛质量0.6%的已活化的纤维素酶液，轻轻搅拌，50°C恒温酶解1.5h后立即升温至90°C灭酶，迅速冷却过滤，收集滤渣；往灭酶的滤渣中加入50倍水，在50°C温度下浸提2h，过滤，再往所得滤洛中加入25倍水于50°C温度下浸提2h，过滤；合并加50倍水浸提和加25倍水浸提的二次滤液，浓缩，加入无水乙醇，使体系中乙醇的体积浓度达到80%，在冰箱中静置过夜，过滤，滤渣经真空干燥得石斛多糖。例2一、实验样品制作样品I的制作取上述实施例1中方法一所得到的铁皮石斛多糖加水溶解，得铁皮石斛多糖水溶液；然后，分别按铁皮石斛多糖的用量为香烟中烟丝质量的0.1%、1%、5%和10%将所制的铁皮石斛多糖水溶液均匀喷洒在市购的云南玉溪牌香烟烟丝上，自然晾干；最后，按照常规的卷烟技术将烟丝卷制成香烟，得到铁皮石斛多糖的含量分别为0.1%、1%、5%和10%的香烟。
样品2的制作取上述实施例1中方法二所得到的铁皮石斛多糖加水溶解，得铁皮石斛多糖水溶液；然后，分别按铁皮石斛多糖的用量为香烟中烟丝质量的0.1%、1%、5%和10%将所制的铁皮石斛多糖水溶液均匀喷洒在市购的云南玉溪牌香烟烟丝上，自然晾干；最后，按照常规的卷烟技术将烟丝卷制成香烟，得到铁皮石斛多糖的含量分别为0.1%、1%、5%和10%的香烟。样品3的制作取上述实施例1中方法三所得到的铁皮石斛多糖加水溶解，得铁皮石斛多糖水溶液；然后，分别按铁皮石斛多糖的用量为香烟中烟丝质量的0.1%、1%、5%和10%将所制的铁皮石斛多糖水溶液均匀喷洒在市购的云南玉溪牌香烟烟丝上，自然晾干；最后，按照常规的卷烟技术将烟丝卷制成香烟，得到铁皮石斛多糖的含量分别为0.1%、1%、5%和10%的香烟。二、药理、药效实验实验一含铁皮石斛多糖香烟降低吸烟诱导小鼠肺部炎症发生率的作用
1、实验材料1.1实验动物420只体重为18 22g健康雄性昆明小鼠，由广州中医药大学动物中心提供，合格证号:SCXK (粤)2008-0020。1.2实验试剂和仪器试剂:液氮，甲醛，重铬酸钾、浓硫酸、多聚-L-赖氨酸、苏木精染液、伊红染液。仪器:显微镜数字图像分析处理系统(OLYMPUS);动物熏烟系统为自行研制，包括吸烟机、烟气输送机稀释装置、动物熏烟装置。2、方法2.1受试动物及其分组将420只体重为18 22g健康雄性昆明小鼠，随机分为14组，每组30只。2.2受试动物的组别及其所吸受试样品A组为空白对照组(不烟熏组)。B组为吸普通香烟烟熏实验组(香烟为市购的云南玉溪牌香烟)。Cl、C2和C3组分别吸含0.1%铁皮石斛多糖的香烟样品1、样品2和样品3。Dl、D2和D3组分别吸含1%铁皮石斛多糖的香烟样品1、样品2和样品3。El、E2和E3组分别吸含5%铁皮石斛多糖的香烟样品1、样品2和样品3。F1、F2和F3组分别吸含10%铁皮石斛多糖的香烟样品1、样品2和样品3。2.3实验方法本方法采用仅鼻吸烟的暴露模式，S卩，把小鼠分置于各限制管中，仅鼻子呼吸烟气，避免烟气部分沉积在皮毛上被动物吸收。通过设定烟支数量、空气流量来控制小鼠鼻部的烟气浓度和流量。小鼠以仅鼻暴露方式，在烟气粒相物浓度为400mg/m3，气流速度IOOml/min条件下吸烟。每天早上清理鼠笼(每隔2天用酒精擦洗一次)，清除粪便、垫干木屑，检查小鼠健康状况，同时称量前一天每组小鼠的摄食量及饮水量，并记录，换上新的鼠粮和饮用水，每天的饲喂定时定量的，由小白鼠在实验过程中自由摄取。每5天观察并记录小鼠的体重。上午10:00 11:00和下午15:00 16:00为吸烟时间，每次三支烟。持续5周后，采用快速脱颈椎法处死小白鼠，解剖，取肺组织放入10%中性甲醛中固定，用于制作组织切片，行H-E染色，最后利用显微数字图像分析处理系统观察各器官的组织结构变化，进行常规组织病理学检查，统计各组小鼠肺部炎症发生率。3、结果3.1体重变化将各 组小鼠35天体重变化量绘制出柱形图如图1、2和3所示。分组的时候因为是随机分组，所以各组小鼠平均体重没有出现显著性差异。由图1、2、3可以看出:1、随着时间的延长，吸烟组小鼠体重增长趋势均慢于正常不吸烟组，试验结束后体重均轻于正常不吸烟组，说明吸烟对小鼠体重增长是有影响的；2、吸含铁皮石斛多糖香烟的小鼠体重的增长均快于吸普通香烟组的小鼠，35天后增长的体重更接近于正常组，说明吸含铁皮石斛多糖的香烟对小鼠体重增长影响较普通香烟小；3、吸香烟样品1、2和3的小鼠之间体重增长相近似，没有显著性差异。3.2小鼠肺部炎症率各组小鼠肺组织病理切片统计炎症发生率的结果见表I。数据统计方法为X2检验。表I不同组别小鼠肺部炎症发生率
权利要求
1.铁皮石斛多糖在制备减害香烟中的应用，其特征在于，所述的减害为降低吸烟导致肺部炎症的风险。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的减害香烟的制备方法由以下步骤组成:用水将铁皮石斛多糖溶解，并均匀喷洒在烟丝上，自然晾干，然后按照常规的卷烟技术将烟丝卷制成香烟；其中，所述铁皮石斛多糖的用量为香烟中烟丝质量的0.1% 10%。
全文摘要
本发明涉及铁皮石斛多糖在制备减害香烟中的应用，其特征在于，所述的减害为降低吸烟导致肺部炎症的风险。本应用中所述减害香烟是用水将铁皮石斛多糖溶解，并均匀喷洒在烟丝上，自然晾干，然后按照常规的卷烟技术卷制成的。本发明所述减害香烟能降低吸烟诱导的肺部炎症的发生率，下调因吸烟引起的肺组织核因子Kappa B(NF-kB)抑制剂的激酶β(IKKβ)的表达。
文档编号A24B15/30GK103211298SQ20131014325
公开日2013年7月24日 申请日期2013年4月23日 优先权日2013年4月23日
发明者魏小勇, 陈丹 申请人:广州中医药大学