专利名称：防治白细胞减少症的中药制剂及制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及治疗白细胞减少症的中药制剂及其制备工艺。
当人体周围血液白细胞计数持续低于4×109/L时，称为白细胞减少症。其病因有化学性、放射性、感染性等继发性原因。该症表现为面色无华或萎黄、头晕目眩、乏力、低热盗汗、恶心、食欲不振、机体免疫力低下、易患感冒和诱发多种疾病，严重影响人们的生活质量和健康水平。该症常用西药如鲨肝醇、利血生、维生素B4治疗，效果不太理想，其有效率仅为44.26～66.70％(陈慧珍等，中国中西医杂志，1992年12月第三期；朱忆等，上海中医药杂志，1992年12月；王海等，北京中医，1992年第二期)。应用激素、锂盐治疗，疗效虽有提高，但副作用较大。应用进口药生白能等治疗，疗效较好，但价格昂贵。而应用中医药理论进行辨证施治，常获良效。
本发明的目的是提供一种防治白细胞减少症的中药制剂及制备工艺，该中药制剂有效率高，无副作用。
本发明的防治白细胞减少症的中药，其特征在于是由以下重量份数的中药原料制成当归9～12、黄芪9～30、党参或人参9～15、枸杞子9～15、女贞子9～15、鸡血藤或阿胶10～30、陈皮6～10、大枣9～12、甘草6～12。
所述中药原料最好还包括熟地黄10～30、茯苓9～15、麦芽6～15中的1～3种。
本发明组方以当归、黄芪为君药，当归为补血要药，味甘、辛，性温，既能补血又能行血而利血生；黄芪，甘温益气，升阳固表，二药相须为用，共助气血互生。党参，补气，生津养血善治里虚，以助黄芪补气之力，大补脾肺之气，以资生血之源；熟地黄、鸡血藤为补血要品，熟地黄滋阴养血，生精补髓，鸡血藤既能补血又能行血，补而不滞，以助当归补血之功，更用枸杞子、女贞子以滋肾益肝精足血旺；五药为臣补血力著，佐以云苓健脾益中，麦芽、陈皮消食理气以防重补滋腻；大枣入血分补益心脾，善于和营，甘草补脾益气，且能调和诸药，二药为使，相得益彰。诸药合用共承补气养血、健脾益肾之功。
本发明党参可用人参替代，鸡血藤可用阿胶替代。
以上所述各中药原料可以制成中药上可接受的各种剂型，本发明重点介绍一种口服液剂型。
制备口服液的工艺如下各中药原料加水煎煮，煎煮液经过滤、浓缩得到褐色浓缩液，褐色浓缩液加浓度为55～70％的乙醇进行冷藏，冷藏后过滤，回收乙醇，得到棕红色水液，再经冷藏、过滤、调整容量即得到口服液。
所述冷藏温度为2～10℃。
各中药原料的有效成分多为水溶性成分，因此以水为溶媒最大限度地提取水溶性物质是保证制剂疗效的根本，各中药原料采用水煎煮三次的方式，每次的加水量分别为中药原料总重的8、6、6倍，每次煎煮时间为1～1.5小时。药液过滤后，含有大量的水，所以先浓缩蒸去部分水，浓缩液的重量可以为中药原料总重的2倍。水煎煮时因同时提出了大量的大分子酚类、树脂等无效成分，所以采用将浓缩液加低浓度醇冷藏除去。考虑到诸药的许多有效成分为多糖类，高浓度醇虽能使药液的澄明度更好，但会造成多糖丢失，因此采用低浓度醇冷藏(48小时以上)过滤除杂质，回收乙醇后再次冷藏除杂质的方法，既保证了澄明度，又最大限度地保存了有效成分，使制剂质量稳定，疗效可靠。最后调整容量是使滤液的重量与中药原料的总重相同。
本发明的功能与主治健脾益肾、补气生血，用于防治因化疗、放疗或其他多种原因引起的白细胞减少症，亦可作为滋补强壮剂服用。以口服液为例，一次10～20毫升，每日两次。化疗、放疗或接触可能引起白细胞减少的因素等情况之前服用本药可以起到预防白细胞减少的作用。对已经患有白细胞减少症的患者有治疗作用。
本发明的优点1、本发明为纯中药制剂，不含任何附加剂，服用方便，价格适中。
2、经毒理学研究，安全，无毒副作用。
3、药效学研究证明(1)能显著对抗环磷酰胺(CTX)引起的白细胞下降，相对升高白细胞；(2)能改善骨髓细胞的活跃程度，促进骨髓有核细胞的新生，具有保护骨髓细胞，促进骨髓造血的作用；(3)能维护肝脾组织细胞的完整性，增加肝枯否氏细胞，使脾淋巴小结数明显增加，被膜下边缘区白细胞增生。说明该制剂既能保护肝脾组织细胞，又能增强机体的免疫力，还能促进髓外造血灶的产生；(4)能增加胸腺与脾的重量，具有增强机体免疫力的作用；(5)具有促进食欲的作用。
4、经临床研究表明具有健脾益肾、补气生血之功效，能提高白细胞数量，改善白细胞减少症的临床症状，对于因职业因素、化疗及其他原因引起的白细胞减少症具有明显疗效。有效率可达81％以上。
对本发明制成的口服液样品进行的药品检验报告如下检验项目标准规定 检验结果性状 应为棕红色液体，味甘 为棕红色液体，味甘鉴别 应检出黄芪甲甙 检出黄芪甲甙检查PH值4.0～5.0 4.5相对密度应不低于1.060 1.074细菌数 不得过100个/毫升 小于10个/毫升霉菌和酵母菌数 不得过100个/毫升 小于10个/毫升大肠杆菌不得检出 未检出活螨不得检出 未检出含量测定 含当归以阿魏酸计，应不少于 12.3μg/ml10μg/ml以下为急毒实验及升白作用效果的实验一、实验材料动物昆明种小白鼠，体重20+2g，由中国医学科学院动物繁育中心提供。
药物本发明口服液10ml瓶，每毫升含生药1g，临用前浓缩或用新鲜蒸馏水稀释至所需浓度。环磷酰胺(CTX)200mg/瓶，上海第十二制药厂生产，批号921203，临用前用生理盐水溶解并稀释至所需浓度。
二．实验方法与结果(1)急性毒性试验(最大耐受量测定)取80只小白鼠随机分为4组，每组20只，雌雄各半。一日内分别用不同浓度的本发明口服液灌胃3次，详细观察7天，并记录小鼠的反应情况。计算出总给药量以及相当于拟推荐临床用药的倍数，结果见表1。
表1．本发明口服液药物耐受性试验情况(n=20)
该试验最大浓度最大剂量用到330g/kg.d，此剂量相当于临床用药的330倍，试验动物全部存活，无一死亡。说明试验动物对该药的耐受量很大，LD50无法测出，该制剂的用药安全性是可靠的。
(二)．升白试验取雄性小鼠78只，随机分为6组，每组13只，从尾尖取血，显微镜下人工白细胞计数，组间白细胞数无显著性差异。然后逐日给予所试药物，每日灌胃两次，其中对照组与CTX组以生理盐水灌胃处理(0.5ml)，给药第四天，按小鼠实际体重给予腹腔注射CTX 100mg/Kg.d，再继续给药四天后，采血测白细胞数，结果经统计学处理，见表2。
表2．本发明口服液(不同剂量)对白细胞的影(n=13)
表2可见，本发明口服液在对抗CTX的毒性，保护造血功能，相对升高白细胞，具有非常显著的作用，且随剂量的增大而增强。显效剂量组间量效回归方程为Y=4.9011+0.0125X r=0.9896
(三)．免疫功能及食欲试验取雄性小鼠30只，随机分为三组，每组10只，对照组与CTX组以生理盐水每日两次灌胃(0.5ml/次)，试药组用药剂量以25g/kg.d，分两次灌胃，连续十二天，第四、八天分别给CTX组与试药组腹腔注射CTX(100mg/kg)各一次，每日两次投入定量食料，并记录各组动物的存食情况；第十三天眼眶放血处死，剖取脾、胸腺称重，结果经统计学处理，见表3。
表3．本发明口服液对脾、胸腺重量及食欲的影响(n=10)
注与CTX组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001由表3可知，本发明口服液对于CTX的免疫抑制作用，具有显著的对抗作用，能相对增加胸腺重量，提高机体免疫能力，抵消CTX引起的食欲下降，增加脾重及纳食量，说明其补脾作用确切。
三．讨论该实验证实本发明口服液能显著对抗CTX的免疫抑制、胃肠道反应等毒副作用，相对升高白细胞，促进造血功能，提高机体免疫力，促进食欲。所以可认为该制剂具有健脾益肾、补气升血之功效，且该制剂是安全的。因此，可用于防治化疗、放疗及其他原因引起的白细胞减少症，尤其适用于脾肾两虚、气血不足之患者，亦可作为滋补强壮剂服用。
以下为本发明口服液对血细胞再生功能及肝脾组织影响的实验本发明口服液能显著对抗CTX的免疫抑制作用、胃肠道反应等毒副作用，相对升高白细胞，提高机体免抑能力，促进食欲，具有健脾益肾、补气生血之功效。为进一步探讨本发明口服液的药理作用，我们又进行了如下实验。
一．实验材料动物昆明种小白鼠，雄性，体重20±2g，由中国医学科学院动物繁育中心提供。
药物本发明口服液(SBY),10ml/瓶，每毫升含生药1g；环磷酰胺(CTX),200mg瓶，上海第十二制药厂生产，批号921203，临用前用生理盐水稀释至所需浓度。
二．方法与结果(一)．血细胞再生功能试验取小鼠36只，随机分为四组，每组9只。1、2组用生理盐水，3、4组用SBY灌胃，每日两次，每次0.5ml/20g(相当于生药25g/Kg.d)，连续给药十三天，2、3组在给药第八、九、十天的同时，每日腹腔注射CTX一次，剂量为120mg/kg，在第十三天最后一次给药1小时后，使小鼠颈椎脱位处死，剖取一根股骨用3％醋酸液10ml冲出骨髓内细胞，显微镜下人工计骨髓有核细胞数；取另一根股骨做骨髓涂片，瑞氏染色，在显微镜下观察骨髓细胞活跃程度，增生不良记-1，增生活跃记1，明显活跃记2；上述结果经统计学处理，见表4。
(二)．对肝脾组织的影响实验方法同“血细胞再生功能实验”，处死小鼠后剖取肝脾，以10％的福尔马林固定，切片染色，在显微镜下观察，结果见表5。
成氏组织学指出动物骨髓造血功能受到抑制时，其肝脾组织尚具髓外造血功能，小鼠脾的粒系造血灶生成部位靠近脾被膜、小梁或遭受破坏的脾淋巴小结处；肝枯否细胞具有内吞、参加脂蛋白代谢、免疫应答、抗肿瘤等作用。由表5可见，本发明口服液对肝脾具有保护作用，可促进枯否细胞的增生及肝脾的髓外造血，可明显提高脾淋巴小结的数量。结合免疫功能及食欲试验，可进一步证明该制剂具有促进髓外造血、提高机体免疫力的作用。
表4．本发明口服液对骨髓细胞的影响(n=9)组别骨髓有核细胞计数(×107)活跃程度x±s x±s对照组1.8128±0.3643* 0.3331±1.000CTX组 1.3694±0.2700 0.5556±0.8819SBY+CTX组 1.8806±0.3060**1.5556±1.0138*#SBY组 2.1141±0.4542*** 2.0000±0***###注与CTX组比较*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001与对照组比较#p＜0.05 ### p＜0.001
表5．本发明口服液对小鼠肝脾组织的影响
三．讨论该实验证实本发明口服液能对抗CTX的骨髓抑制，使骨髓有核细胞数增多及其活跃程度的提高，改善血细胞的造血功能，促进骨髓造血具有显著作用；亦可提高脾淋巴小结数量，促进枯否细胞的增生，加强肝脾组织的髓外造血功能。说明该制剂升高血中白细胞数、增强机体免疫力的作用是确切的。还证明该制剂能能对抗CTX对肝脏的损坏，具有一定的保肝护肝作用。对调脂、抗肿瘤也似有一定的意义，还有待进一步研究。
以下为本发明口服液治疗白细胞减少症临床疗效观察总结我们应用该药对各种原因引起的白细胞减少症患者进行了临床疗效观察。临床完成病例149例，其中对照组50例，经临床观察该药在症状的改善和白细胞数目的升高方面均具有明显的疗效，取得满意效果，现总结如下一、资料与方法(一)病例来源受试者149例，试验组(本发明口服液)99例，男56例，女43例，年龄16-70岁(平均40.82±12.97)；对照组50例，男32例，女18例，年龄24-69岁(平均42.82±14.06)。
(二)病例标准1．纳入病例标准符合本病诊断且血象检查连续3次WBC＜4.0×109/L者。
2．排除病例标准(1)年龄在16周岁以下或70周岁以上，妊娠期或哺乳期妇女。
(2)合并有心血管、肝、肾等严重原发性疾病，精神病患者。
(3)不符合纳入标准，未按规定服药，或资料不全难以进行疗效评价者。
(三)研究方法1．病例分组按2∶1随机分为试验组和对照组，试验组99例，对照组50例。
2．临床疗效观察观察时间1-2个疗程(1个疗程为一个月)。试验组口服本发明口服液，每日2次，每次2支(10ml/支)。对照组口服鲨肝醇(100mg/次，3次/日)及利血生(20mg/次，3次/日)。同时记录临床症状变化。
(四)观测指标采用观察表记录法1．安全性观测(1)一般体检项目；(2)血、尿常规化验；(3)心、肝、肾功能检查。
2．疗效性观测(1)详细询问病史，观察症状和体征；(2)血象(白细胞及分类、血红蛋白、血小板等)检查；(3)肝、肾功能检查。
(五)疗效判定标准显效临床症状显著改善，白细胞升至4.0×109/L以上，随访随访三个月病情稳定或维持进步者。
有效临床症状有一定改善，白细胞升高1.0×109/L以上，但仍低于4.0×109/L。
无效经充分治疗后症状、血象不能达到有效者。
二、结果1．本发明口服液对白细胞数量的影响(表6)2．本发明口服液对血小板数量的影响(表7)3．本发明口服液对血红蛋白数量的影响(表8)4．本发明口服液对红细胞数量的影响(表9)5．本发明口服液临床疗效观察表(表10)6．本发明口服液临床症状观察表(表11)7．治疗组用药前后(分病种)血细胞及血红蛋白变化表(表12)
8．治疗组用药前后(分病种)临床疗效观察表(表13)表6用药前后白细胞变化表
表7用药前后血小板变化表
表8用药前后血红蛋白变化表
表9用药前后红细胞变化表
表10本发明口服液临床疗效观察表
表11用药前后临床症状变化表
表12治疗组用药前后(分病种)血细胞及血红蛋白变化表
表13治疗组用药前后(分病种)临床疗效观察表
三、讨论本研究结果提示本发明口服液在治疗白细胞减少症方面有显著的临床意义，临床结果支持基础实验研究结果，即能升高白细胞数量，促进机体造血功能。同时也显示本发明口服液具有健脾益肾、补气升血之功效，能显著改善白细胞减少症的临床症状和提高外周白细胞数量，对化疗、放疗及其他原因引起的白细胞减少症具有明显疗效。整个临床实验中未发现任何毒副作用。
1．试验组(服用本发明口服液)与对照组(服用鲨甘醇、利血生)治疗白细胞减少症的有效率分别为81.82％和44.00％(见表10)，两组进行卡方检验有极显著差异(p＜0.001)，即试验组临床疗效明显优于对照组。对照组疗效与文献报道的疗效相似(文献报道服用鲨甘醇、利血生的临床疗效为44.26％-66.70％)。
2．临床结果显示本发明口服液对白细胞减少症患者的白细胞、红细胞、血红蛋白及血小板均有明显升高作用(见表6,7,8,9)，治疗前后经T检验有显著差异(白细胞p＜0.001，其他均为p＜0.05)；对照组仅对白细胞有明显升高作用(p＜0.001)，而对其他血细胞及血红蛋白无明显改善作用(p＞0.05)。这与动物实验结果中本发明口服液能改善髓内髓外造血机能相符。
3．动物实验证实该制剂具有相对升高白细胞，促进造血机能，提高机体免疫力，促进食欲等功能。临床证实本发明口服液可明显改善白细胞减少症的临床症状(见表11)，对白细胞减少症患者出现的乏力、头晕、失眠、心悸、头痛症状的改善明显优于对照组(经卡方检验均为p＜0.01)，对睡眠的改善情况与对照组相似(经卡方检验p＞0.05)。
4．本发明口服液对职业因素、放、化疗因素和其他因素引起的白细胞减少均有明显的升高作用(治疗前后T检验p＜0.001)。其有效率分别为85.19％、88.89％和61.11％(见表13)。另外该制剂对职业因素引起的白细胞减少症的血红蛋白和红细胞数量也有明显的升高作用(治疗前后T检验p＜0.05)；对放、化疗患者的血小板(p＜0.01)、血红蛋白(p＜0.05)有升高作用；而对职业因素患者的血小板(p＞0.05)、放、化疗患者的红细胞(p＞0.05)无明显影响，对其他因素患者只对白细胞影响明显，对其他影响较小(见表12)。提示可能与不同因素导致骨髓抑制特点不同有关。有待于进一步探讨。
5．本发明口服液对慢性再障性贫血(CAA)患者的临床效果一般，但具有治疗价值。治疗组中观察8例CAA患者中，有效2例，对照组观察4例均无效。
6．在该临床试验中，所有应用本发明口服液的患者均未出现任何毒副反应，使用安全。
以下实施例为重量份数。
实施例一当归12、黄芪30、党参12、枸杞子12、女贞子12、鸡血藤15、陈皮10、大枣10、甘草6、熟地黄15、茯苓12、麦芽10。
取各药用水煎煮三次，每次加水量分别为中药原料总重的8、6、6倍，每次煎煮1小时，合并药液，过滤，滤液在蒸汽夹层锅中煎煮浓缩，浓缩液为中药原料总重的2倍，然后加浓度为60％的乙醇进行冷藏48小时，然后过滤，回收乙醇，得到棕红色水液，再经冷藏24～48小时、过滤，滤液加新沸蒸馏水调整容量到药液与中药原料总重相同的重量，灌封、消毒即得到本发明的口服液。
实施例二当归9、黄芪20、党参15、枸杞子15、女贞子9、鸡血藤10、陈皮6、大枣9、甘草8、熟地黄25、茯苓15、麦芽6。
实施例三当归10、黄芪9、党参9、枸杞子9、女贞子15、鸡血藤25、陈皮8、大枣12、甘草12、熟地黄30、茯苓9、麦芽12。
实施例四当归11、黄芪15、党参11、枸杞子13、女贞子13、鸡血藤30、陈皮7、大枣11、甘草10、熟地黄10、茯苓13、麦芽8。
实施例五当归12、黄芪30、党参12、枸杞子12、女贞子12、鸡血藤15、陈皮10、大枣10、甘草6。
实施例六当归11、黄芪15、党参11、枸杞子9、女贞子15、鸡血藤25、陈皮8、大枣12、甘草12、熟地黄30。
实施例七当归10、黄芪30、党参12、枸杞子9、女贞子15、鸡血藤15、陈皮6、大枣10、甘草12、茯苓15、麦芽15。
实施例八当归9、黄芪20、党参9、枸杞子15、女贞子13、鸡血藤25、陈皮10、大枣10、甘草6、熟地黄15、麦芽10。
权利要求
1.一种防治白细胞减少症的中药制剂，其特征在于是由以下重量份数的中药原料制成当归9～12、黄芪9～30、党参或人参9～15、枸杞子9～15、女贞子9～15、鸡血藤或阿胶10～30、陈皮6～10、大枣9～12、甘草6～12。
2.根据权利要求1所述的防治白细胞减少症的中药制剂，其特征在于中药原料还包括熟地黄10～30、茯苓9～15、麦芽6～15中的1～3种。
3.根据权利要求1或2所述的防治白细胞减少症的中药制剂，其特征在于为口服液剂型。
4.一种制备权利要求1或2所述防治白细胞减少症的中药口服液的工艺，其特征在于经过如下工艺各中药原料水煎煮，煎煮液经过滤、浓缩得到褐色浓缩液，褐色浓缩液加浓度为55～70％的乙醇进行冷藏，冷藏后过滤，回收乙醇，得到棕红色水液，再经冷藏、过滤、调整容量即得到口服液。
5.根据权利要求4所述的工艺，其特征在于所述冷藏温度为2～10℃。
6.根据权利要求4所述的工艺，其特征在于各中药原料水煎煮三次，每次的加水量分别为中药原料总重的8、6、6倍，每次煎煮时间为1～1.5小时。
全文摘要
本发明的防治白细胞减少症的中药,其特征在于是由以下重量份数的中药原料制成:当归9～12、黄芪9～30、党参9～15、枸杞子9～15、女贞子9～15、鸡血藤10～30、陈皮6～10、大枣9～12、甘草6～12。所述中药原料最好还包括熟地黄10～30、茯苓9～15、麦芽6～15中的1～3种。本发明具有健脾益肾、补气生血的功效,用于防治因化疗、放疗或其他原因引起的白细胞减少症,有效率高,亦可作为滋补强壮剂服用。
文档编号A61P7/00GK1306848SQ0011086
公开日2001年8月8日 申请日期2000年1月26日 优先权日2000年1月26日
发明者刘玉川, 王有刚, 初建设 申请人:中国石化集团齐鲁石油化工公司