专利名称：一种人全血清的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制品的生产方法，特别是一种人全血清的生产方法。
背景技术：
临床上由于手术、创伤后的蛋白质丧失，以及过度分解代谢造成的蛋白质的丧失，需要输注蛋白。目前，市场上提供的蛋白制品为单一蛋白质，其临床适应症的局限性大。由于人全血清中多元成分蛋白质对热的耐受程度不同，给制取完全蛋白成份的人全血清带来很大的困难。现在，国际上只有德国一家公司能够生产这种人全血清，但其生产工艺未被公开，其制品仅作了β-丙内酯病毒灭活，病毒灭活不够彻底。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种病毒灭活更彻底的人全血清生产方法。本发明的技术方案是这样完成的，它包括有冰冻血浆融化步骤和β-丙内酯灭活病毒步骤，其特征在于(1)血浆融化温度为20-25℃，(2)将重量体积比为1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血浆中升温至30±1℃，搅拌4个小时，进行灭活病毒，(3)在上述灭活病毒后的血浆中按体积比的5％加入蓖麻油，在20±1℃下搅拌30分钟，将上述含蓖麻油血浆置于离心机分离后，弃油层，得水相血浆，(4)将上述分离后的水相血浆加入C18树脂中进行层析，(5)将上述层析流出液降温至2-1℃进行离心分离，取其上清液，弃沉淀物，(6)在上清液中按重量/体积比的3％加入AEROSIL吸附材料，温度为2-4℃，(7)在ZETAPlus60LP过滤介质中过滤，得上清液，(8)在上述上清液中按重量/体积比的1％加入Celite503吸附材料，温度为2-4℃，(9)上述液体在ZETAPlusOELIPIO过滤介质中过滤，(10)对上述过滤液进行超滤透析，(11)在超滤透析后的液体中按重量/体积比的10％加入葡萄糖，辛酸钠26.5-27.5克，PH7.0±0.2，温度60±5℃，10小时进行巴氏灭活病毒，(12)加入注射用水稀释后，使蛋白浓度5.3％，按重量/体积比的5％加入葡萄糖，加辛酸钠0.165mmol/g，(13)用孔径为0.2μm的膜进行过滤除菌分装，(14)在温度为30-32℃下存放14天进行放孵处理，得到人全血清制品。可采用2000以上的多人份混浆作制备全血清的原料。本发明由于在S/O病毒灭活的基础上增加了巴氏灭活工艺，针对制品的多元成分蛋白质对热的耐受程度的不同，在保护剂种类、用量、PH值、离子强度的合理选择，使制品既保证了病毒灭活的彻底性，又确保各种有效成分不变性，同时，由于在制备中采用多人份混浆作原料抗A抗B血凝素含量低，本制品在输注时可以不考虑血型问题，因此，本发明与现有技术相比较，具有病毒灭活更彻底，使用更安全和方便的显著优点。
具体实施例方式本发明的人全血清生产方法包括有以下步骤(1)用2000人份的混合冰冻血浆为原料，在融浆罐中融浆，水温20-30℃，浆融化后的温度为23℃，(2)取20L融化后的混浆，加入含磷酸三丁酯224.4ml和200g曲拉通x-100组成的S/O灭活剂母液2L，升温至30±1℃，搅拌4小时进行灭活病毒，(3)在上述S/O灭活病毒后的血浆中加入1.1L蓖麻油，搅拌30分钟，置于离心机中，温度20±1℃，离心转速为25000转/分钟，离心时间20分钟后萃取S/O灭活剂，用泵抽出油层废弃物约1.3L，得水相21.6L，(4)将萃取后血浆置于C18树脂中进行层析，流速为60cm/小时，得层析流出液25L，(5)将上述流出液置于反应罐中降温至1℃然后进行离心分离，离心转速14000转/分钟，得上清液24.5L，弃沉淀物90g，(6)在上述上清液中加入重量/体积比的3％的AEROSIL吸附材料735g，在3℃温度下搅拌2小时进行吸附纤维蛋白原、VIII、IX因子及其它凝血因子，(7)通过ZETAPlus60LP过滤介质进行过滤，过滤速度为6L/分钟，得上清液体积24L，(8)在上述滤后的上清液中加入Celite503吸附剂240g，在3℃温度下搅拌28小时，(9)用ZETAPlusOELIPIO过滤介质过滤，去除血浆中不稳定的脂蛋白，速度9L/分钟，得上清液23.5L，(10)用分子量为8K的膜包超滤透析，透析后体积为18L，蛋白浓度为6.5％(11)在上述液体中加葡萄糖1800g、辛酸钠26.5g，调PH为7.1，升温至60℃，保持10小时进行巴氏灭活病毒，(12)用分子量为8K的膜包进行超滤透析，透析后的体积为16L，蛋白浓度6.2％，葡萄糖含量5.1％，辛酸钠含量0.14mmol/g，(13)加入注射用水2.7L进行稀释，蛋白浓度5.3％，加葡萄糖119g，加辛酸钠4.1g，PH为7.1，(14)用孔径为0.2μm的膜进行过滤除菌后分装，其规格有50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶等，(15)将分装后的制品移到30-32℃的库房中放置14天，进行放孵，得到无菌无毒的人全血清制品。
权利要求
1.一种人全血清的生产方法，它包括有冰冻血浆融化步骤和β-丙内酯灭活病毒步骤，其特征在于(1)血浆融化温度为20-25℃，(2)将重量体积比为1％的磷酸三丁酯和1％的曲拉通-100加入血浆中升温至30±1℃，搅拌4个小时，进行灭活病毒，(3)在上述灭活病毒后的血浆中按体积比的5％加入蓖麻油，在20±1℃下搅拌30分钟，将上述含蓖麻油血浆置于离心机分离后，弃油层，得水相血浆，(4)将上述分离后的水相血浆加入C18树脂中进行层析，(5)将上述层析流出液降温至2-1℃进行离心分离，取其上清液，弃沉淀物，(6)在上清液中按重量/体积比的3％加入AEROSIL吸附材料，温度为2-4℃，(7)在ZETAplus60LP过滤介质中过滤，得上清液，(8)在上述上清液中按重量/体积比的1％加入Celite503吸附材料，温度为2-4℃，(9)上述液体在ZETAPlusOELIPIO过滤介质中过滤，(10)对上述过滤液进行超滤透析，(11)在超滤透析后的液体中按重量/体积比的10％加入葡萄糖，辛酸钠26.5-27.5克，PH7.0±0.2，温度60±5℃，10小时进行巴氏灭活病毒，(12)加入注射用水稀释后，使蛋白浓度5.3％，按重量/体积比的5％加入葡萄糖，加辛酸钠0.165mmol/g，(13)用孔径为0.2μm的膜进行过滤除菌分装，(14)在温度为30-32℃下存放14天进行放孵处理，得到人全血清制品。
2.根据权利要求1所述的一种人全血清的生产方法，其特征在于采用2000以上的多人份混浆作制备全血清的原料。
全文摘要
本发明公开了一种人全血清的生产方法，它包含有以下步骤，以多人份的冰冻混血浆为原料→融浆→S/D灭活病毒→植物油灭活剂→C
文档编号A61K35/16GK1411819SQ02116619
公开日2003年4月23日 申请日期2002年4月15日 优先权日2002年4月15日
发明者安康, 马小伟, 潘若文, 刘文芳, 范蓓 申请人:华兰生物工程股份有限公司