专利名称：一种治疗更年期综合症药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及大豆异黄酮及其大豆甙元的新用途，即大豆异黄酮及其大豆甙元在制备治疗更年期综合症地药物中的应用。
更年期妇女由于卵巢功能衰退，体内雌激素水平逐渐下降，常常伴有一系列症状，如潮热、盗汗、心慌气短、四肢酸懒、失眠健忘等；同时体重增加、腰围增大、呈中心性肥胖、血甘油三酯与胆固醇增加；性器官萎缩，如阴道变小变窄，分泌粘液减少，严重影响更年期妇女的生活质量。同时由于脂代谢紊乱，致使动脉硬化、脑动脉硬化和冠心病加重加速，明显使心血管病的发病率和死亡率增加，严重时常常影响患者的正常工作和生活。雌激素替代疗法(ERT)是现代医学用来有效治疗更年期疾患的主要方法。补充雌激素可有效预防绝经后雌激素降低所导致的一系列植物神经和中枢神经紊乱。但由于雌激素替代疗法可能引起妇女子宫不规则出血、乳腺胀痛等不适，也有增加乳腺癌和子宫内膜癌发病的危险性。因此，人们力图寻找既具有雌激素作用，又可避免长期应用过强雌激素所导致某些器官和组织毒副作用的药物。
植物雌激素大致可分为三类异黄酮、木质素和香豆素类化合物。目前研究较多的为大豆异黄酮。大豆异黄酮主要包括两种异黄酮甙金雀异黄素和大豆甙。金雀异黄素又名染料木素(英文名genistein)，大豆甙又名黄豆甙(daidzin)。它们在人体肠道内转化为相应的甙元后，才能被机体吸收利用。其中大豆甙被转变为大豆甙元，大豆甙元又名大豆素、黄豆甙元，大豆黄酮(daidzein)。虽然大豆甙元可以工业合成，但本发明所用大豆甙元是从大豆中提取而成。纯度为95％以上，分子结构如下
其中R1＝HR2＝H
发明内容
本发明目的是提供一种大豆异黄酮及大豆甙元的新用途；本发明目的还在于提供一种治疗更年期综合症药物。
本发明药物由大豆异黄酮或大豆甙元制成；本发明药物制成的组合物由下述原料药制成大豆异黄酮或大豆甙元1-3重量份 枸杞提取物1-3重量份；本发明药物可制成任何临床可接受的剂型。
本发明大豆甙元是由如下工艺制成的大豆粕30-95％乙醇加热回流提取2-6次，每次2-8小时，合并醇液，滤过；醇液减压浓缩成浸膏；浸膏加浓盐酸在水浴上搅拌加热回流2-8小时，放冷，滤过；水解液加乙酸乙酯萃取2-10次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯后，加于大孔树脂AB8；依次用水、10-90％乙醇洗脱；可得到大豆甙元部分，70℃下蒸干，残留物用甲醇重结晶2-5次，得纯度在98％以上的单体。
本发明是基于发明人的实验与临床研究而完成的。本发明药物经临床实践证实，日服含50-100mg大豆异黄酮或大豆甙元的药物，临床总有效率达90％。发明人还发现，主要来源于食品的植物雌激素大豆异黄酮及大豆甙元具有极低的毒性，作为植物雌激素受体调节剂，其化学结构与雌激素相似，在动物与人体内有雌激素样作用，而且与雌激素受体有不同程度的结合力，因此可以发挥雌激素受体激活剂或雌激素受体拮抗剂的双重调节作用。
实验例1大豆异黄酮用于治疗更年期综合症的临床观察
1、实验方法
使用双盲、随机、安慰剂对照门诊病人观察的方法研究，28名受试者分为两组大豆异黄酮组每日服用100mg大豆异黄酮，对照组服用淀粉制剂。在治疗期间禁止服用其它豆类食品或雌激素等制剂。
整个观察期2个月，第一次为筛选病人，即称为第一日，之后每月二次共四次进行接诊。第一次给病人按7个症状进行分级打分。(潮热面红、自汗盗汗、心烦不宁、失眠多梦、头晕耳鸣、腰膝酸软、手足心热)，每一症状打分标准为1-3分
3分，症状中最严重者。其严重程度为患者不能忍受，不能坚持正常工作，影响到日常生活，必需去医院就医。
2分，症状中等程度。或者虽有较重症状，但还能忍受，坚持一般的日常工作。
1分，症状中最轻者。症状相对比较轻，患者能进行一般工作。注意力转移时，症状相对减轻。
0分，没有任何症状。
上述七个主观症状，重度者总分为3×7＝21分，中度为14分，轻度为5分以下。
2、受试纳入标准所有参加观察者均为已婚健康妇女，并符合以下条件
①有典型的更年期综合症状，综合评分在5以上
②血中雌激素水平下降，而FSH与LH增高
③3个月内未服用过类固醇等激素。
④无乳癌、子宫癌、妊娠、阴道出血、心血管病、肝病、过敏等既往病史。
将受试者随机分为2组，其基本情况见附表。两组患者均进行常规物理检查和实验室检查。
3、疗效判定
按7个症状治疗前后综合评分改变判定疗效，并经统计学处理。
药物安全性分析采用定期血、尿、肝、肾功能常规检查。
4、结果
28例患者随机分为两组，异黄酮组受试者平均年龄为51.5±4.69，更年期症状综合平均分数为14.64±2.58，而安慰组患者平均年龄为50.29±4.66岁，更年期症状综合平均分数为14.79±2.27，详见下表。在服药前两组资料无统计学差异。
服用大豆异黄酮与安慰剂前后更年期症状综合评分比较(X±D)
治疗前后相比*P＜0.05；**p＜0.01
异黄酮组与安慰剂组相比#p＜0.05；##p＜0.01
异黄酮组受试者服药2月后，更年期7项主要主观症状明显好转，症状总分下降为8.71±2.58，与治疗前及安慰组治疗后相比均有显著性差异。而安慰组受试者治疗前后，更年期7项主要主观症状无明显好转，症状总分仍为14.57±1.68
两组受试者服药2月后，无一例检查发现血、尿、肝、肾功能异常。
发明人采用随机、双盲和安慰剂方法观察了异黄酮对更年期综合症的治疗作用。通过上述的临床实验观察，可以发现，大豆异黄酮在治疗更年期综合症方面具有明显的疗效。结果表明两组受试者在服药前各观察资料无统计学差异。异黄酮组受试者服药2月后，更年期7项主要主观症状明显好转；而安慰组受试者治疗前后，更年期7项主要主观症状无明显好转，表明服用异黄酮对改善更年期症状是有益的。
实验例2服用加味异黄酮(大豆异黄酮或大豆甙，枸杞提取物)与安慰剂前后更年期症状综合评分比较(X±SD)
治疗前后相比*P＜0.05；**p＜0.01
加味异黄酮组与安慰剂组相比#p＜0.05；##p＜0.01
异黄酮组受试者服药2月后，更年期7项主要主观症状明显好转，症状总分下降为8.71±2.58，与治疗前及安慰组治疗后相比均有显著性差异。而安慰组受试者治疗前后，更年期7项主要主观症状无明显好转，症状总分仍为14.57±1.68
动物实验也表明大豆甙元组及大豆异黄酮组均不同程度减少去卵巢引起的能量代谢改变，减少切除卵巢后引起的动物进食量增加、体重明显增加、体重系数增加和腹部脂肪堆积。大豆甙元组及大豆异黄酮组表现不同程度降低去势引起的大鼠血清胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、肝组织甘油三脂及胆固醇增高，但大豆多糖无作用。雌二醇虽可有效的减轻去卵巢引起的动物一系列病理改变，但雌二醇却能导致部分动物不规则阴道出血，6周后肝脏病理切片显示，部分肝细胞呈空泡样变性。表明长期使用人工合成的雌激素会导致明显的毒副作用。实验例3大豆甙元对去卵巢大鼠肝脏脂代谢的影响
1、实验材料
实验动物Wister雌性大鼠40只，体重220±10g，购自医学科学院动物研究所实验动物繁育所。适应性喂养1周，饲料为该所提供的固体全价饲料，饮用自来水。实验期间饲养于二级动物室，温度25±1℃。
实验药物大豆甙元，制成浓度为10g/L的悬浊液，放入0～4℃冰箱待用。阳性药物为尼尔雌醇(nilestrioli)，北京四环制药二厂生产制成蒸馏水悬浊液。
主要试剂总胆固醇试剂盒，甘油三酯试剂盒，购自中生生物工程高科技公司。
2、实验方法
分组随机分4组大豆甙元组、雌激素组、模型组、假手术组，每组10只。
造模各组大鼠腹腔注射1.5％戊巴比妥钠溶液麻醉，给药量为0.3ml/100g体重。腹位固定，腋下2cm处剪毛，切开肌层1～1.5cm，用镊子深入切口处，拽出卵巢，切除，止血(假手术组的大鼠不摘除卵巢，仅在卵巢与输卵管连接处夹一下)。在腹腔内撒入青霉素药粉，缝和肌层，缝皮。同样摘除另一侧的卵巢。
给药方法手术后，各组大鼠正常饮食1周，以恢复创伤。术后第2周开始给药，持续5周。模型组和假手术组每日蒸馏水10ml/kg体重灌胃；雌激素组每周一次灌胃尼尔雌醇悬浊液，剂量为1mg/kg体重；大豆甙元组每日100mg/kg体重灌胃。
取材给药五周后，各组大鼠称重、处死，取肝脏、腹部脂肪和子宫，分别称重、部分组织冰冻，保存备用。
脂肪提取及测定方法取出冰冻保存的肝脏样本在碎冰上缓慢解冻，用10倍Tris-盐酸缓冲液(PH＝7.5)快速匀浆；取1ml匀浆液加入3.75ml提取液(氯仿∶甲醇＝1∶2)，旋涡混合3分钟；加入氯仿1.25ml，旋涡混合1分钟；再加入1.25ml蒸馏水，旋涡混合1分钟；3000转/分离心10分钟，取下清液(含提取出的脂肪)，待有机溶剂完全挥发，用2ml溶剂(氯仿∶甲醇＝2∶1)溶解脂肪；用TC试剂盒、TG试剂盒在MD100型半动生化仪上测出相应指标。3、实验结果
3.1大豆甙元对去卵巢大鼠体重增长的影响
结果见表1，模型组体重在术后迅速增长，大豆甙元组与模型组对比有显著延缓体重增加的作用。模型组从给药第一周起体重便远远超过了假手术组。大豆甙元组从给药二、三周起其体重与模型组有显著性差异。但从最终体重来看，大豆甙元可以控制由于去卵巢而引起的体重增长。雌激素组在饲喂过程中发现有阴道不规则出血，消瘦，食欲下降，毛色晦暗的现象，而大豆甙元组未见此类现象。
表1大豆甙元对去卵巢大鼠体重增长的影响(X±S，g)
N 术后 恢复期 第一周 第二周第三周 第四周 第五周大豆甙元10215.5±14.6233.3±15.7 243.0±16.6 250.6±20.3 249.1±16.2* 246.5±19.4* 245.0±17.0*雌激素组10236.5±17.4242.4±21.4 249.5±18.1 247.8±16.3* 239.0±13.9* 247.8±17.9* 239.0±18.7*模型组 8 214.7±14.7232.9±16.9 249.7±16.1 266.2±15.6△ 275.7±15.1△284.4±16.3△268.5±20.4△注*与模型组比较，p＜0.05；△与假手术比较，p＜0.053.2大豆甙元对去卵巢大鼠腹部脂肪的作用
结果见表2，模型组的腹部脂肪明显多于假手术组，雌激素与大豆甙元均能显著抑制因去卵巢而引起的腹部脂肪堆积，脂肪量的平均值仅有模型组的52.10％和64.35％。
表2大豆甙元对腹部脂肪重量和脂肪指数的影响(X±S，g)
腹部脂肪重量相当于模型 相当于模型
n (g)组(％) 脂肪指数(％) 组(％)大豆甙元组 10 8.46±2.49* 64.35 3.67±1.16* 72.10雌激素组10 6.85±3.61* 52.10 3.06±1.55* 60.14模型8 13.15±2.08△ —— 5.09±0.83△——假手术组9 10.57±3.2080.35 4.64±1.22 91.16注*与模型组比较，p＜0.05；△与假手术比较，p＜0.053.3大豆甙元对去卵巢大鼠肝脏中TG和TC含量的作用
结果见表3，模型组肝中TG和TC的含量都大于其它组，分别为118.59±26.44mg/dl和16.43±4.98mg/dl。而假手术组只有64.65±17.84mg/dl和11.35±4.42mg/dl，大豆甙元组与模型组对比有显著性差异。
表3大豆甙元对去卵巢大鼠肝脏TG、TC的作用(X±S，mg/dl)
注*与模型组比较，p＜0.05；△与假手术比较，p＜0.053.4大豆甙元对去卵巢大鼠子宫湿重的影响
结果见表4，去卵巢6周后，模型组子宫严重萎缩，只有假手术组的1/4左右，经过5周给药，雌激素维持子宫重量并超过了假手术组，大豆甙元对维持子宫重量也有一定作用(p＜0.05)。
表4大豆甙元对去卵巢大鼠子宫的作用(X±S，g)
n 子宫(g) 子宫指数(‰)大豆甙元10 0.15±0.3* 0.70±0.10*雌激素 10 0.46±0.34* 2.10±1.50*模型 8 0.11±0.02△ 0.40±0.10△假手术 9 0.39±0.141.70±0.60
注*与模型组比较，p＜0.05；△与假手术比较，p＜0.054结论
从实验结果看，模型组大鼠体重、腹部脂肪、肝脏TC、TG均明显高于假手术组，子宫湿重明显低于假手术组，补充雌激素可以纠正这种改变，因此说明这种脂代谢紊乱是由雌激素降低所引起的。大鼠去卵巢后，补充大豆甙元5周，结果表现大豆甙元在维持体重和降脂方面都有较好的作用，并且可以减轻由于雌激素降低引起的子宫萎缩。本实验证实了大豆甙元的雌激素作用。
实施例1大豆异黄酮2kg，可制成胶囊80000粒，每粒含大豆异黄酮25mg。日服2次，2-4粒/次。
实施例2大豆甙元2kg，可制成胶囊80000粒，每粒含大豆甙元25mg。日服2次，2-4粒/次。
实施例3大豆甙元的制备方法
大豆粕75％乙醇加热回流提取2次，每次4小时，合并醇液，滤过；醇液减压浓缩成浸膏；浸膏加浓盐酸在水浴上搅拌加热回流6小时，放冷，滤过；水解液加乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯后，加于大孔树脂AB8；依次用水、60％乙醇洗脱；可得到大豆甙元部分，70℃下蒸干，残留物用甲醇重结晶2-5次，得纯度在98％以上的单体大豆甙元。
实施例4大豆异黄酮2kg枸杞提取物2kg，制成胶囊80000粒，每粒含大豆异黄酮25mg。日服2次，2-4粒/次。
实施例5大豆甙元2kg枸杞提取物2kg，制成胶囊80000粒，每粒含大豆甙元25mg。日服2次，2-4粒/次。
权利要求
1、大豆异黄酮在制备治疗更年期综合症药物中的应用。
2、大豆甙元在制备治疗更年期综合症药物中的应用。
3、大豆甙元在制备补充雌激素的药物中的应用。
4、大豆甙元的制备方法，其特征在于该方法为大豆粕30-95％乙醇加热回流提取2-6次，每次2-8小时，合并醇液，滤过；醇液减压浓缩成浸膏；浸膏加浓盐酸在水浴上搅拌加热回流2-8小时，放冷，滤过；水解液加乙酸乙酯萃取2-10次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯后，加于大孔树脂AB8；依次用水、10-90％乙醇洗脱；可得到大豆甙元部分，70℃下蒸干，残留物用甲醇重结晶2-5次，得纯度在98％以上的单体。
5、一种治疗更年期综合症的药物，其特征在于该药物是由大豆异黄酮1-3重量份 枸杞提取物1-3重量份制成。
6、一种治疗更年期综合症的药物，其特征在于该药物是由大豆甙元1-3重量份 枸杞提取物1-3重量份制成。
7、如权利要求5所述的药物，其特征在于该药物是由大豆异黄酮2重量份 枸杞提取物2重量份制成。
8、如权利要求6所述的药物，其特征在于该药物是由大豆甙元2重量份 枸杞提取物2重量份制成。
全文摘要
本发明公开了一种大豆异黄酮及大豆甙元治疗更年期综合症的药物新用途；本发明还公开了一种治疗更年期综合症的药物。本发明药物制成的组合物由下述原料药制成大豆异黄酮或大豆甙元1－3重量份，枸杞提取物1－3重量份，本发明药物可制成任何临床可接受的剂型。
文档编号A61P15/12GK1401320SQ02131289
公开日2003年3月12日 申请日期2002年9月24日 优先权日2001年10月26日
发明者牛建昭 申请人:牛建昭