专利名称：一种可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝，本发明还涉及该强化灵芝的制备方法。
研究证明灵芝对试验动物和人体的肿瘤有抑制作用，能在一定程度上缩小瘤重，使病痛得到缓解。另外，在临床实践上，也证明灵芝对延长癌症病人的生存期，减轻病人的痛苦，改善病人的生活质量有一定或显著的疗效。灵芝与化疗、放疗联合使用不但可加强治疗的效果，而且能显著地减少化疗或放疗的副作用。绝大多数有关科学文献认为灵芝对癌症的治疗作用，不是由于灵芝中有某种成分可以直接杀伤癌细胞，而是通过调动了人体内自身的免疫力(包括细胞水平和分子水平的免疫力)，再通过这种增强后的免疫系统可以提升对癌细胞的杀伤水平，另外，在放疗或化疗的情况下，又可保护自身的免疫系统。可是，现有的灵芝菌种，可使产品质量大相径异，加上产地不同，生长发育的生态条件不同，栽培的条件的不同，又造成药用成分的变动。另外，加工的方式不同，如家庭中常用的方法是与其他食品一起沸煮1-4小时，其有效成分更无法得到保护等原因，再加上不同的癌细胞种类不同，其毒性也不尽相同，因而导致治疗效果往往难以持续或不够理想。
现有不少人(特别是外国的医药厂家)理解中医现代化就是要将中药简单的“西药化”，即提纯其单一的某种化学成分，弄清其结构式并弄清其药理及毒理，包括其药物动力学等。但中药(自然药物)的作用是一种有效复合成分的作用背景，虽然对不同的疾病，有的成份是主要有效成分，有的是次要有效成份，另外，药物的各种成份之间可能还存在着相辅相成的作用；故上述简单的将灵芝“西药化”并不能带来理想的治疗效果。
明目的本发明的目的在于提供一种可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝，在以灵芝稳定的、丰富的、多种有效成份作为基础的背景下，有选择性地增加特定的有效成份，以强化药效作用。
本发明的目的另一个目的在于提供该强化灵芝的制备方法。
本发明的目的是这样实现的可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝是由1～3重量份发酵灵芝菌粉和1～2重量份从发酵灵芝菌粉中提取的灵芝多糖混合而成。
将上述组分合成本发明强化灵芝的制备方法，依次包括以下步骤(1)通过原生质体紫外线诱变法选育灵芝新菌种，并由10吨罐大规模灵芝液体深层发酵工艺对选育的灵芝新菌种发酵制得灵芝湿菌丝体，灵芝湿菌丝体在50℃～60℃温度干燥，粉碎成颗粒大小在80目左右的灵芝菌粉；(2)取上述灵芝菌粉，加5～6倍蒸馏水，98-100℃提取5小时，纱粗滤，3000转/分离心，弃去残渣，得清液；再往清液中加3～4倍95％乙醇沉淀，3000转/分离心，弃去清液，得沉淀物；将沉淀物冷冻干燥，得灵芝粗多糖粉；(3)将上述灵芝粗多糖粉重复步骤2中的提取过程三次以上，得纯度为40％～100％的灵芝多糖粉；(4)取步骤1中所得的灵芝菌粉和步骤3中所得的灵芝多糖粉按所述重量比例1～3份比1～2份混合均匀，即得强化灵芝。
使用本发明强化灵芝对实验动物进行预防与治疗肿瘤的实验。为了方便对实验动物的喂食，将本发明强化灵芝配成粉剂型，具体过程为在强化灵芝中加入少量0.1％吐温-80混匀碾磨，逐渐加入0.5％纤维素钠溶液，经充分研细，混合成悬浮液，匀至定量。也可将本发明强化灵芝配成水煎剂型，具体过程为取灵芝菌粉1～3g与提取的灵芝多糖1～2g混合，加入100ml生理盐水，室温浸泡过夜后，加热至80℃15分钟，取滤液制成；每次每个实验鼠给药体积为0.3ml水剂/10g体重。具体实验如下一、给药方法(a)实验动物选用发育期相同、体质尽量相同的清洁级昆明小鼠，小鼠体重18～22kg，每组实验均使用同一性别的雄性小鼠，每次每组实验鼠均为10只。
(b)在实验动物接种癌细胞以前，实验药粉剂型剂量分为低、中、高三种(即1g/kg、2g/kg、3g/kg)，每日灌胃给药1次，连续10天。水煎剂每日灌胃给药1次，给药体积为0.3ml水剂/10g体重，连续10天。
(c)按上述的给药剂量及方式，在小鼠接种癌细胞后，继续给予强化灵芝以加强免疫力，10天后仔细观察强化灵芝的对癌症的预防和治疗的效果。
二、接癌方法采用H22肝癌细胞作为癌源细胞，分别取含生长旺盛的H22肝癌细胞的肿瘤小鼠脱椎处死，用碘酒和酒精腹部皮肤消毒，然后抽取含瘤细胞的腹水，精确计算每毫升中所含癌细胞的数目，再用一定剂量的注射用生理盐水稀释细胞至浓度为9.6×104/ml，分别取0.2ml上述癌细胞接种于每个实验鼠的右腋皮下，再连续灌胃给药10天，停药后次日仔细分析研究其免疫预防及免疫治疗的结果。
三、实验结果按上述给药方法和接癌方法，经三次重复试验(同时设三次生理盐水灌胃对照)，结果证明强化灵芝有较好的预防癌症的作用，每次均有20％以上的接癌小鼠体内没有观察到长癌的病征现象，三次平均其预防患癌率达到22.5％，三次平均其免疫治疗的效果抑癌率达到65.58％，具体见表一、表二、表三。
表一 强化灵芝预防及抑癌效果(第一次试验)
*P＜0.05
表二 强化灵芝预防及抑癌效果(第二次试验)
*P＜0.05**P＜0.01表三不同剂型强化灵芝预防及抑癌效果(第三次试验)
*P＜0.05**P＜0.01四、病理学实验结果1、强化灵芝能显著抑制肿瘤的恶化程度，明显降低肿瘤细胞癌变程度和改善肿瘤细胞的病变水平，表现在以下几点(a)显著降低肿瘤的恶化程度P53是重要的肿瘤抑制因子，P53的基因突变是许多恶性肿瘤的发生原因之一，正常的P53蛋白半衰期很短，突变后半衰期明显延长，易被免疫组织方法检测出来。从表四可见对照组肿瘤P53阳性率随着接种癌细胞时间延长，此比例尚可不断增加，在接种10天后其恶性程度的抑制率可达119.48±7.23％，但经强化灵芝给药接种后20天，其恶化程度的抑制率仍可保留在57.83±4.43％水平，据此，强化灵芝可明显降低肿瘤细胞的恶化程度，也就是可显著抑制肿瘤细胞的浸润和转移的能力。
表四 强化灵芝对P53所致的肿瘤恶化程度的影响
*P＜0.05**P＜0.001(b)强化灵芝能明显降低肿瘤组织和其体内血清中肿瘤标志酶的活性，显示可明显降低癌变的程度从表五、六可见用强化灵芝预防给药后可明显降低肿瘤细胞及其血清中的两种肿瘤标志酶γ-谷胺酰胺转肽酶(γ-BT)及谷胺甘肽-S-转移酶(GST)的活性，再次预示本实验的强化灵芝可明显降低肿瘤细胞癌变程度及可促进癌细胞向正常细胞逆转再分化的可能机率。
表五 强化灵芝对血清和肿瘤组织中r-GT活性的影响
*P＜0.05表六强化灵芝对血清和肿瘤组织中GST活性的影响
*P＜0.05**P＜0.012、强化灵芝预防和治疗给药明显改善肿瘤组织细胞的病变水平将对照组和给药组的肿瘤取出，切成制片，用显微镜观察可见对照组与强化灵芝给药组的肿瘤中的组织学特征有明显差别。从
图1可见，对照组肿瘤的组织易碎，无弹性，边界不规则，中间坏死，空洞大。从图2可见，经用强化灵芝给药后，在其已明显缩小的肿瘤组织中，组织切片较有弹性，不易碎，边界分明，中间无坏死，空洞小或无空洞，部分细胞有细胞核不规则性增大，细胞膜破裂，显示其中有细胞凋亡现象发生。这首次证明强化灵芝不仅能明显抑制肿瘤生长，而且能改善肿瘤组织内部细胞病变的程度。
3、强化灵芝能明显增加机体自身免疫能力，表现在以下方面(a)强化灵芝可明显提高吞噬细胞的吞噬能力利用硫乙醇酸钠刺激小鼠腹腔巨噬细胞，可使其激活并获得应答能力和获得具吞噬功能的巨噬细胞，从表七可见经不同浓度灵芝提取液的作用，可见其吞噬中性红能力较对照组可分别提高10～45％。
表七强化灵芝对吞噬细胞吞噬作用的影响
(b)强化灵芝能显著改善T淋巴亚群的结构，从而可增强体内的免疫力CD4/CD8(即T淋巴辅助细胞/T淋巴毒细胞)的比例可作为反映细胞免疫能力的一个重要指标。从表八可见，用强化灵芝预防能够显著增加T淋巴辅助细胞的百分率，且同时可降低T淋巴毒细胞的百分率，从而可扭转CD4/CD8细胞的不正常比例，使之接近正常化，由此可增强细胞的免疫能力。
表八强化灵芝对CD4/CD8比例的影响
*P＜0.001**P＜0.001(c)强化灵芝可明显刺激骨髓造血组织中淋巴细胞及其集落的产生从图3、4可见，经优质强化灵芝给药后，可明显刺激骨髓造血组织的生长，可见大量淋巴细胞集落的产生，从而可有效提升机体的免疫能力。
(d)应用强化灵芝能明显减少癌细胞的转移能力，延长患癌机体的生存期对接种癌细胞的鼠体进行解剖和观察分析，发现在对照组中，80％以上的小鼠中有可见的肿瘤组织转移至肺和肝脏，但在强化灵芝给药组中均未发现在肺和肝脏中有可见的转移的肿瘤组织。另外，对一组接种癌细胞的对照组和强化灵芝给药组的小鼠持续观察其死亡速度和存活期，发现在对照组中，在接种后13天开始有鼠体死亡，且个体死亡频度较快，而经灵芝给药组，在16天后才有个体死亡，且个体死亡频度较慢，个别的尚可保持正常小鼠的生存期，由此可见，强化灵芝能不同程度地延长接癌小鼠的存活期。
综上所述，本发明强化灵芝对癌症的预防和治疗都有显著的效果。
取上述灵芝菌粉，加5倍蒸馏水，98℃提取5小时，纱粗滤，3000转/分离心，弃去残渣，得清液；再往清液中加3倍95％乙醇沉淀，3000转/分离心，弃去清液，得沉淀物；将沉淀物冷冻干燥，得灵芝粗多糖粉；再将灵芝粗多糖粉重复上述提取过程五次，得纯度约为60％的灵芝多糖粉。
按重量份1∶1或3∶2或2∶1比例取灵芝菌粉和灵芝多糖粉混合均匀，即得强化灵芝。
权利要求
1.一种可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝，其特征在于由1～3重量份发酵灵芝菌粉和1～2重量份从发酵灵芝菌粉中提取的灵芝多糖混合而成。
2.权利要求1所述的可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝的制备方法，其特征在于依次包括以下步骤(1)通过原生质体紫外线诱变法选育灵芝新菌种，并由10吨罐大规模灵芝液体深层发酵工艺对选育的灵芝新菌种发酵制得灵芝湿菌丝体，灵芝湿菌丝体在50℃～60℃温度干燥，粉碎成颗粒大小在80目左右的灵芝菌粉；(2)取上述灵芝菌粉，加5～6倍蒸馏水，98-100℃提取5小时，纱粗滤，3000转/分离心，弃去残渣，得清液；再往清液中加3～4倍95％乙醇沉淀，3000转/分离心，弃去清液，得沉淀物；将沉淀物冷冻干燥，得灵芝粗多糖粉；(3)将上述灵芝粗多糖粉重复步骤2中的提取过程三次以上，得纯度为40％～100％的灵芝多糖粉；(4)取步骤1中所得的灵芝菌粉和步骤3中所得的灵芝多糖粉按所述重量比例1～3份比1～2份混合均匀，即得强化灵芝。
全文摘要
本发明公开了一种可免疫预防和免疫治疗癌症的强化灵芝，由1～3重量份发酵灵芝菌粉和1～2重量份从发酵灵芝菌粉中提取的灵芝多糖混合而成，在以灵芝稳定的、丰富的、多种有效成分作为基础的背景下，有选择性地增加特定的有效成分，以强化药效作用，动物实验及其病理学实验证明，本发明对癌症的免疫预防和免疫治疗都有更显著的效果。
文档编号A61P35/00GK1425463SQ0215178
公开日2003年6月25日 申请日期2002年12月31日 优先权日2002年12月31日
发明者李宝健, 张擎 申请人:李宝健