用于筛选患者对于变应原的敏化状态的贴片及其使用的制作方法

专利名称：用于筛选患者对于变应原的敏化状态的贴片及其使用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种能将生物活性物质传递到表皮的新型贴片。其特别涉及一种贴片，所述贴片特别用于筛选患者对于变应原的敏化状态。也涉及所述贴片的使用，特别用于筛选患者对于变应原的敏化状态。
下面的描述中，所用的术语“生物活性物质”表示一种物质，其用于诊断，治疗，化妆或预防(例如疫苗)等用途，以个体或聚集的微粒的形式出现。
本发明将更具体地描述变应原，也就是用于筛选患者对于给定变应原的敏化状态的物质，这里所述变应原也被认为是前述所定义的用于诊断目的的物质。
下面的描述中，术语“接触变应原”是指当所述变应原向患者身体接触时，直接接触皮肤可引起反应，而保持一定距离则不会产生任何反应的任何变应原。在一定数量的自然或人造物品中发现有这种类型的变应原，当其与患者皮肤接触时，产生“接触”变态反应，引起皮肤局部不同现象的反应，例如皮疹，搔痒，出现小泡和湿疹。这种变应原已为本领域技术人员所熟悉，并且已经在文献特别是在文献US-A-4836217中有精确记载。已经知道多种接触性变态反应，特别如对例如含于表带中的镍和含于粘固剂中的铬等金属的变态反应，和对香味和对含于化妆品中的羊毛脂的变态反应，以及对例如含于某些药物中的新霉素，黄素等活性物质的变态反应。
本发明不仅涉及接触性变态反应，而且特别涉及所有具有下述变应性表现由于与变应原相接触而不仅仅表现出皮肤反应，而且还包括与变应原的接触地点有一定距离时所表现出来的例如过敏性休克，腹泻，窦炎，哮喘，一般性湿疹，风疹等许多症状。螨，花粉，动物毛发，来自不同的植物或动物的各种食物及物质确会引起变态反应。许多变应原涉及例如螨、花粉、动物毛发或羽毛等等，有时将它们称作“呼吸性”变应原，它们引起鼻炎或哮喘类型的呼吸症状。相类似地，落花生、鸡蛋、乳及小麦等有时被称为“食物”变应原，它们引起例如儿童慢性腹泻，或如在吞咽落花生时所发生的过敏性休克等过敏性病变等消化性病症。胶乳过敏也已完全被了解，其会导致过敏症状，导致病人的潜在危险。在文献EP-A-107832中精确地列出了所述大多数变应原。
诊断变态反应的方法是基于在皮肤反应测验之前的一系列实验。与变应原相接触的皮肤反应表现导致局部炎性皮肤反应，以中度红斑的形式(炎性反应的第一临床表现)，或以丘疹同时也显示出现浮肿的形式(炎性反应的其它表现)。皮肤对于除了接触变应原之外的变应原的反应可以通过免疫成分在血液中的恒定循环来解释，通过呼吸或消化道进入人体的变应原使淋巴细胞致敏，对位于皮肤中的也是如此。
几种皮肤测试现在已经用于检测个体对于接触性变应原及呼吸和食物变应原的敏化状态。
其中，“针刺试验(Prick Test)”已被特别熟知，所述试验涉及所有能够引起速发型对于食物或呼吸变应原的皮肤反应的变应原。在这种试验中，一种包含变应原的溶液沉积到皮肤上，然后使溶液通过针头在皮肤表面扎针的方法使所述变应原与免疫元素接触。针刺试验的结果在真皮与变应原接触后半小时后读取。
换言之，如已经提及的那样，这种试验使检测一种速发型反应成为可能，所述反应通常是免疫球蛋白E依赖性的，也就是要利用E型免疫球蛋白的反应性。通过阳性对照组与阴性对照组比较来读数，例如组织胺，以及利用生理盐水或溶剂来稀释变应原。针刺试验的缺点是，首先，实际上针头在皮肤上扎孔时会产生疼痛感，其次，特别是这种试验仅仅反映速发型反应。
现在，看来一定数量的变应性反应在几小时至几天的时间内以延迟或半延迟的方式发生。而且已注意到皮肤与变应原简单接触会引起全身反应的现象。因此可以由此推测变应原通过皮肤扩散，以与其引起延迟反应一样来引起速发型反应。
基于这种观察，已建议将变应原沉积到打算要与皮肤长时间保持接触的载体上，这样使变应原进入皮肤并由此引起皮肤反应。已经开发出两种主要类型的试验且这两种类型的试验冠名以类属性术语“贴片试验”。
第一种公知的贴片为以FINN CHAMBERS为商标的产品。它包括有粘性载体，其上结合有直径约为一厘米的小型金属杯形器(cupule)。这些杯形器的深度为2到3毫米，这些杯形器接收在与杯形器相独立的纤维素载体上沉积的已经过稀释的变应原，这种混合物是由天然产品或变应原的混悬液即时制备的。纤维素载体放置在杯形器的底部，然后将杯形器贴到患者的皮肤上。试验结果在48小时后读取，在拿掉这些物品后，清洗皮肤并等待一段较短时间，大约为半个小时，以使杯形器边缘对皮肤的压力或粘合剂造成的具体局部现象消失。阳性反应包括在接触点出现的红斑，浮肿及斑疹。将其与阴性对照物(仅仅用水浸湿的纤维素载体)所引起的结果相比较。通常容易作出解释，但反应却很难精确计量。FINN CHAMBERS用于对无论接触性变应原或其它变应原等各种类型的变应原进行试验。具体地，即时制备的变应原/纤维素混合物可以包含例如食物以便寻找食物变态反应，也可以包含花粉以便寻找呼吸变态反应，或者包含染料或金属以便寻找接触变态反应。
虽然这种方法使利用无数种类的变应原成为可能，但它也有难于使用的缺点。特别是，由于一些情况可能出现一定数量的错误，例如●纤维素载体被置于适当位置后发生了移动；●数量太大的变应原混合物污染了邻近腔；●变应原的浓度太低而无法引起过敏反应；●由于所使用变应原的数量是可变的而不允许试验被标准化。
此外，如果试验用来检测多种变应原，在解释时有发生混乱的危险，这是由于以下事实所使用的变应原无法在粘性载体上精确定位。另外特别是，这种类型的试验需要新鲜的或处于混悬液中的变应原，并且在试验施加于皮肤之前，变应原必须即时溶解或分散于溶剂中。
总之，所需的所有操作使这种试验具有随机性，且将这种试验限制用于拥有经过训练的人员的专业部门内。因此，这种类型的试验在常规使用中受到特别限制，特别限制于医院。
按照类似于前面描述的FINN CHAMBERS的原理可制备称为LEUKOTEST的贴片，其区别在于PVC腔室是被包含在粘性载体内的而不是与粘性载体相结合的，且PVC腔室包含不可移动的纤维素，但所述纤维素仍保持与杯形器相连接。
如上所述，使用现成的变应原即时准备试验，所述变应原是新鲜的或在混悬液中。这比使用FINN CHAMBERS更容易，但它包括许多操作失误的风险，因此要注意下列情况●缺乏对引进每个腔室内的变应原数量的控制；●缺乏用于塑料载体的变应原的属性的指示；●并需要具有适合沉积到纤维型载体上的形式的变应原。
第二种公知类型的贴片为以TRUE TEST为商标的产品，在文献US-A-4836217中有对其所进行的更详细描述。TRUE TEST取消了引入变应原的金属杯形器，以胶凝替代金属杯形器，胶凝体被直接施用于胶粘带上。仅包括接触性变应原的变应原可以以不同的形态引入胶凝体中。这样，如果变应原可溶解于包含在胶凝体中的溶剂中，那么变应原就直接引入胶凝体中。另一方面，如果变应原是不溶的，就有必要将其尽可能均匀地直接分散在胶凝体中。这种类型贴片的主要缺点是，它需要能够与变应原发生作用的纤维素载体或胶凝体，而且也没有提供使有机来源的变应原保持其最初的致反应(reactogenic stateof origm)状态的保障。
更具体地应用于变应原的情况，本发明提出要解决的第一个问题是提供一种贴片，所述贴片可以检测所有变应原，另外还要保障使有机变应原保持在其致反应状态。
本发明提出要解决的第二个问题是开发一种现成使用的贴片，也就是一种不需要即时制备变应原的贴片。
本发明提出要解决的第三个问题是提供一种贴片，所述贴片能够容纳且当其与皮肤接触时可传送给定数量的变应原，而且所述给定数量值对各个贴片是保持恒定的，这一点特别确保了试验的可靠性和可重复性。
为了实现上述目的，本发明提供了一种贴片，其特征在于具有静电特性的载体形式，所述载体的周边涂覆有粘性材料，载体的全部或部分非粘性表面直接覆盖有至少一种微粒形式的生物活性物质，所述微粒由于静力的作用而保持与载体非粘性表面相接触。
在一个优选实施例中，生物活性物质为变应原的形式。
本发明的贴片因此可使用提纯态或经转化的微粒形态的变应原，这样可应用于所有的变应原，而不论变应原在原始状态下的黏稠度及其形态如何。而且纯的、天然的、全部或分馏形式的变应原的使用，也就是保持在它们最初的致反应基因状态，而不需附加任何胶凝体、溶剂或载体，不仅可以提供具有下述性能的贴片所述贴片不仅没有改变变应原的保存状态，而且除了在其使用之前对皮肤的准备工作之外就可以现成使用。
此外，在一优秀具体实施方案中，载体具有变应原标记部件，这样就可使使用者在将其应用于皮肤或将贴片移开期间避免任何失误。所述标记部件可以是在载体的背面打印标记的形式，当将贴片移去后在皮肤上会留下暂时性的图案，所述部件或者以设置在载体的粘性部分上的自粘性片的形式出现，当将贴片移去时所述自粘性片会与载体分离开。
处于原始状态的变应原的形态有三种可能的假设。在第一种假设中，天然的变应原呈粉末形态，也就是说，已经是单独微粒的形态，这样就无需转换其形态(例如小麦粉)，除了有时可能需要减小微粒的尺寸。
在第二种假设中，变应原处于不同程度大小的固体形态。这种情况下，有必要将其缩小至独立微粒，任选在转化之后确保其不变性的情况下进行保存。例如，对落花生的食物变态反应情况中的花生就需要进行所述缩小处理。
在第三种假设中，天然变应原处于液态形式。例如乳也涉及一些食物变态反应就属于这种处于液态的情况，在这种情况下必须将它们冻以获得粉末形态。在一定情况下，需要仅使用试验变应原中经过提纯部分中的一部分。属于这种情况的有例如鸡蛋中清蛋白或者乳中的蛋白质部分，或者甚至仅从乳中提取的抗乳血清中的蛋白质。
在液态变应原的情况下，可以利用例如冻干法(冷冻并在真空下升华)或者加热及喷雾等公知技术获得它们的粉末形态，关于这些技术的选择，特别是微粉化程度，就留给本领域技术人员来作为所考虑变应原的物理化学特性的函数来进行评估选择。
为了确保在其包装中贴片的保存，特别是为了避免变应原在周围空气中发生改变微粒需要经过特殊处理，例如低压冻干法，加热杀菌法，或者电离法，以及更具体地为本领域技术人员所公知的任何处理方法。无论包含哪种生物活性物质，贴片的制备和/或保存均是处于真空状态下，在与载体相对的位置设置一个可剥离的且在将贴片用于皮肤之前要将其移去的标签。
本发明的一个实质性特点是本发明的贴片包括具有静电特性的载体。
在说明书的其它部分以及在权利要求书中，术语“静电载体”指任何由能够聚集并保存静电荷以由此保持力的材料，通过采用特别是摩擦、加热或者电离、或者其它为本领域技术人员所公知的任何技术而制成的载体。出现在载体表面的一侧或另一侧的电荷可以是正电荷或者负电荷，是正电荷还是负电荷取决于组成所述载体的材料以及使电荷出现所采用的方式。在所有的情况下，分布在载体表面上的正或负电荷在导体或非导体材料上产生吸引力；在恰当的情况下，在呈单独或聚集微粒形态的变应原上产生吸引力。也可如此发生以便于是所述微粒被电离，然后在这些微粒与载体之间产生相同类型的静电吸引力。因此，本发明所述贴片的一个优点在于允许精确测量变应原或更广义的生物活性物质的表面质量(surface mass)，其中变应原或生物活性物质沉积且其表面质量在各批贴片之间保持恒定，其表面质量是下述因素的函数—首先，载体的选择及其在其表面存储电荷的能力；—变应原微粒的类型；—以及其次，在变应原在载体的非粘性表面上沉积阶段期间微粒的流动。
实际上，可采用具有所需要的静电特性的任何材料来作载体。特别是，载体由玻璃或者选自纤维素塑料(CA，CP)、聚氯乙稀(PVC)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯(polyacrylics)，特别是聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)、含氟聚合物(例如PTFE)等中的一种聚合体组成。此目录绝不具有限制性。如果想要特别低变应原载体，则玻璃是优秀的。
因此，载体可以是刚性的或柔性的，可以是或可以不是亲水的，可以是或可以不是半透明的，均取决于其组成的材料。在使用玻璃时，可通过将一片塑料结合到玻璃上而将载体制成不碎裂的。
在一个优选具体实施方案中，选择了一种透明载体，这样就可能在适当的情况下不必要移去贴片而直接观察反应现象。
为了进一步改进对炎性反应的检测，贴片在其粘性或非粘性表面上具有一个对由阳性反应引起的局部炎性反应期间皮肤的物理化学反应敏感的部件。所述部件例如可以是对局部在pH值方面所发生的变化敏感的颜色指示器。在这种情况下，这样，就可设想一种便于解释的独立于局部反应的读数系统。
为了恢复在载体表面的静电力以便加强生物活性物质特别是变应原与载体之间在施用之前的结合，载体的背面覆盖有可剥离的且在施用期间将其移去的标签，所述标签也可在黑暗中保存变应原。
由贴片限定区域内的皮肤分泌的汗液保证了贮藏在贴片中的变应原分子的输送，与此相接触的变应原分子负荷于汗液中。因此贴片的效果及其敏感度很大程度上以液体状态的产生为条件，如果变应原处于溶液或悬浮液中，这样就有助于其通过毛孔。因此，贴片一定要具有可以解决下面两个问题的特点●防止汗液的蒸发，
●以及允许汗液的循环。
关于汗液蒸发的问题是这样解决的首先，利用载体的不渗透性，其次，利用外围粘性区域，所述外围粘性区域形成密封连接且在皮肤和载体之间限定出一个密闭空间。
为了解决汗液循环的问题，有益的载体具有一个处于没有涂覆粘性材料的区域内的凹穴(depression)以形成一空洞(hollow)。通过借助热或冷的条件来获得凹穴，这就可将变应原沉积在空洞中，这样所述变应原不压迫皮肤也不改变相关区域的血液循环。凹穴也使变应原不与在贴片施用于皮肤之前将其移去的可剥离层相接触成为可能。有益的是由空洞限定的区域维持在真空状态。
换言之，以原始或改变的方式通过静电力保持在载体上的变应原完全释放进入所获得的腔(cavity)中，且其与汗液相混合，所述汗液由于局部热量的增加以及由此继发的血液流动的增加而更加易于分泌出来。因此促进了变应原通过皮肤毛孔的渗透，血液流速增加也允许免疫活性成分的进入。在塑料载体被移去之后进行读数，且可观察充足的时间，以便于消除由粘性材料所引起的非特异性红斑。
为了可以引发皮肤反应，微粒以取决于相关变应原的数量分布于载体上。如上所述，贴片的优点在于其提供有一个包含有给定数量变应原的部件，这使得贴片标准化成为可能。以乳为例子，微粒以0.001到1g/cm2之间的数量分布于载体上。
本发明也涉及一种包括多个上述贴片的贴片包，贴片包中的每个贴片包含有数量逐渐增加的变应原，这样使在脱敏治疗过程中增加变应原剂量成为可能。
采用在干燥状态下将微粒形态的变应原直接附着到载体上的方式还具有下面的优点首先，通过仅仅将所涉及的分子带入以与皮肤相接触，就可能避免可能干扰变应性过程或由此扭曲诊断的任何化学作用或任何反应。而且，微粒形态变应原的采用使将变应原保藏于适当的包装内成为可能，这样就不再需要进行即时制备。最后，微粒与皮肤所分泌汗液的接触使之有可能获得非常浓的溶液，以促进分子快速渗透通过表皮。
当然，本发明的贴片特别能筛选关于一给定变应原正如即将给出的几种变应原的敏化状态。在后面的例子中，载体具有多个有静电特性，有益的是呈空洞形式的区域，其中各个区域覆盖有不同的变应原，各个静电区域被非静电区域所分隔。
按照另外一个具体实施方式
，贴片在同一个区域内具有用于筛选患者相对于一系列给定变应原的敏化状态的几种变应原的混合物。这可能是有益的，例如，用于确定患者相对于一系列食物变应原的敏化状态。在几种变应原组合的情况下，或是排列在分隔的静电载体上，或者混合在相同的载体上，变应原的选择取决于与来源于文献的数据相一致的大多数共同病变所涉及的变应原目录。这种选择这样作出以便于形成适用于各个主要年龄段的各种病理学背景的特定组合。而且这些变应原的目录能够作为饮食习惯及贴片散发地的具体环境条件的函数而改变。在一定情况下，可以从卫生当局所发布的任何目录中选择变应原。
本发明也涉及上述贴片的使用，用于筛选患者相对于一变应原的敏化状态，包括将贴片应用于皮肤上，然后在将其去掉之后，检查是否出现皮肤反应。
在一个优选具体实施方案中，贴片被用于筛选患者对于食物变应原的敏化状态，所述食物变应原含于选自乳，鸡蛋，小麦及花生中选取的产品中。
在另外一具体实施方案中，贴片被用于筛选患者对于含于乳胶中的变应原的敏感性。
而且本发明贴片也用于患者对于一种或多种给定变应原的脱敏。在这种情况下，贴片施用于皮肤上给定时间，所述时间取决于被传输的变应原的数量。可以使用包含增加数量的贴片组。可以有益地预见贴片程式化地释放变应原。
本发明贴片可以用于对接触性变态反应的诊断，通过引入任何接触变应原与皮肤接触，而无需另外的胶凝体、吸取物(blotter)或溶剂。
为了获得治疗的(医药产品)或预防的(疫苗)或化妆的目的，其也可以用于处理任何生物活性物质。
本发明及由其产生的优点将清楚地通过随后的以附图为支持的实施例而得到显示。
附

图1是本发明一优选实施例的图示。
附图2是附图1的断面视图。
实施例1图1表示以附图标记(1)表示的本发明贴片。按照第一个特征，该贴片包含由醋酸纤维(2)制成的载体，涂覆有粘性材料的边缘(3)。载体(2)背部自身还覆盖有可剥离的标签(4)。如该图所示，变应原(5)以粉状散布于醋酸纤维载体(2)的整个非粘性区域(6)上。
如图2所示，醋酸纤维载体(2)在整个非粘性表面上具有一个单独的微粒分布于其中的凹穴(7)。而且贴片具有可剥离的且面向醋酸载体和绝缘涂层(4)组合体的第二标签(8)。当然这层可被剥离的薄片在贴片施用于所考虑区域时是要被移去的。
实施例2在此实施例中，将本发明的贴片效果与已有技术中的FINN CHAMBERS型贴片进行比较。
1.装置与方法本发明贴片施用于15名儿童的背部。这些儿童显现出可疑为对乳蛋白质(CMA)的变态反应迹象。
贴片具有两个区域第一上部区域包括粘性载体，其上沉积有一片粉状脱脂乳而不含任何其它与本发明中所述贴片相关的元素；下部区域包含粘性载体，其上沉积有一杯形器，杯形器的底部充满有经稀释的被纤维素载体上FINNCHAMBERS型贴片吸收的脱脂乳。
在移开粘接剂之后的48小时后读取数据。红斑或斑点反应的出现显示为阳性。
2.结果使用双重贴片对15名年龄为5周到11岁零3/12岁的儿童进行了对乳的变态反应的调查研究。在施用贴片48小时后对获得的反应进行了评价。
所有儿童显现出具有对RGO乳蛋白质可能的变态反应的临床表现，耐传统治疗手段的(9例)，湿疹(6例)，呕吐(2例)，慢性腹部疼痛(2例)，慢性腹泻(3例)，未经解释而显示的疼痛(4例)，不舒服的常规感觉(1例)。
两次试验有3例呈阳性，有10例呈阴性，在一例中FINN CHAMBERS呈阳性而贴片呈阴性，相反地，在另一例中FINN CHAMBERS呈阴性而贴片呈阳性。
3.结论在这些被怀疑对乳蛋白质有食物变态反应的15名儿童中，本发明的贴片被证明与FINN CHAMBERS方法一样灵敏。有两例的结果是相矛盾的，不可能区别这两种方法。
权利要求
1.一种贴片，其特征在于其具有静电特性的载体形式，所述载体的周边涂覆有粘性材料，载体的全部或部分非粘性表面被直接覆盖有至少一种微粒形态的生物活性物质，所述微粒由于静电力的作用而保持与载体非粘性表面相接触。
2.如权利要求1所述贴片，其特征在于还具有与载体相对设置的可被剥离的标签，要在将贴片施用到皮肤之前将所述标签移去。
3.如前述任一权利要求所述贴片，其特征在于载体由玻璃或者聚合物构成，其中所述聚合物选自纤维素塑料(CA，CP)，聚氯乙稀(PVC)，聚丙烯，聚苯乙烯，聚碳酸酯及聚丙烯酸酯。
4.如前述任一权利要求所述贴片，其特征在于载体的背面覆盖有可剥离的标签。
5.如前述任一权利要求所述贴片，其特征在于载体在没有涂覆粘性材料的区域内具有形成空洞的凹穴。
6.如前述任一权利要求所述贴片，其特征在于活性物质为变应原的形式。
7.如权利要求6所述贴片，其特征在于所述变应原经冻干法、加热杀菌法或者电离处理。
8.如权利要求6或7所述贴片，其特征在于变应原为经过提纯的变应原部分的形式。
9.如权利要求6至8之一所述贴片，其特征在于载体具有变应原标记部件，所述部件是在载体的背面打印标记的形式，当将贴片移去后在皮肤的表面上会留下暂时性的图案，所述部件或者以设置在载体的粘性部分上的自粘性片的形式出现，当将贴片移去时所述自粘性片会与载体分离开。
10.如权利要求6至9之一所述贴片，其特征在于在粘性区域或非粘性区域内具有对在由阳性反应引起的局部炎性反应阶段皮肤所发生的物理化学反应敏感的部件。
11.如权利要求10所述贴片，其特征在于所述部件为对局部在pH值方面的变化敏感的颜色指示器的形式。
12.如权利要求6至11之一所述贴片，其特征在于载体具有几个有静电特性的区域，其中各个区域中覆盖有不同的变应原，各个静电区域被非静电区域所分隔。
13.包含有多个如权利要求1至12中任一项所述贴片的贴片包，其特征在于每个贴片包含有数量增加的变应原。
全文摘要
一种具有特征为具有静电特性的载体形式的贴片，载体周围涂覆粘性材料，载体的全部或部分非粘性表面被直接覆盖有至少一种微粒形式的生物活性物质，所述微粒由于静电力的作用而保持与载体非粘性表面相接触。
文档编号A61K49/00GK1496239SQ02806323
公开日2004年5月12日 申请日期2002年3月6日 优先权日2001年3月13日
发明者C·杜邦, B·杜邦, P·－Y·瓦尼罗姆, S·本哈穆, P·－H·本哈穆, , C 杜邦, け竟 , ね吣崧弈 申请人:Dbv技术公司